Interacciones microorganismos - planta PRÁCTICO N° 6 Objetivo: Conocer las técnicas de...
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Interacciones microorganismos - planta
PRÁCTICO N° 6
Objetivo: Conocer las técnicas de laboratorio para el manejo de microorganismos que interactúan con las plantas
Positivas (sinérgicas)
• Simbiosis (micorrizas, rizobios)• Mutualismo (Azozpirillum)
Negativas (antagónicas)
• Competencia• Amensalismo
Interacciones más comunes
Técnicas de laboratorio
Aislamiento de microorganismos Selección de cepasProducción de inoculantes
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Simbiosis: micorrizas
Ectomicorrizas Endomicorrizas
IntercelularesManto externoRaíz modificadaHongos superioresCultivables
Intercelulares e intracelularesSin manto externoSin raíz modificadaHongos inferioresNo cultivables
Actividad: observar micorrizas en raíces de pino
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incubar
estriar en medio YEM
cortar la raíz lavar
seleccionar nódulos turgentes extraer los
nódulos
nódulos
desinfectar con H2O2 (5minutos)
macerar enjuagar con H2O estéril
1 mL de H2O estéril
incubar
repicar (pico de flauta)
colorear (Gram -)
conservar
Aislamiento de microorganismos: rizobios
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Aislamiento de microorganismos: rizobios
Extraer los nódulosRaíz de leguminosa
Desinfectar con H2O2 (20%) 5 minutos
Enjuagar con H2O estéril
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Aislamiento de microorganismos (rizobios)
Colocar los nódulos en un
tubo con 1ml de agua estéril
Extraer una alícuotaEstriar en medio YEM
Macerar con varilla de vidrio
Incubar (28-30° C)
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Cultivo de rizobio Colorear y observar
Repicar a “pico de flauta”
Incubar y conservar
Aislamiento de microorganismos (rizobios)
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Actividades: - realizar macerado de nódulos y colorear
- observar al microscopio bacteroides y bacterias .
Nodulos (A a C) y bacteroides (D a F) deP. sativum cv. (arveja).
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Síntesis de aislamiento de rizobios
incubar
estriar en medio YEM
cortar la raíz lavar
seleccionar nódulos turgentes extraer los
nódulos
nódulos
desinfectar con H2O2 (5minutos)
macerar enjuagar con H2O estéril
1 mL de H2O estéril
incubar
repicar (pico de flauta)
colorear (Gram -)
conservar
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incubar
cortar raíz lavar1 g de raíz
colocar en H2O estéril y agitar
extraer alícuotasembrar en medio NFB semisólido
incubar
crecimiento de Azospirillum
aislamiento en medio NFB sólido
incubar
repicar (pico de flauta)
colorear (Gram -)
conservar
Aislamiento de microorganismos: Azospirillum
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Aislamiento de microorganismos: Azospirillum
Gramínea
Agitar
Suspender en H2O estéril
Cortar raíces
Extraer alícuota
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Sembrar en medio NFB semisólido
Incubar
Halo de crecimiento de Azospirillum
Repicar a “pico de flauta"
Aislamiento de microorganismos: Azospirillum
Incubar y conservar
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Síntesis de aislamiento de Azozpirillum
incubar
cortar raíz lavar1 g de raíz
colocar en H2O estéril y agitar
extraer alícuotasembrar en medio NFB semisólido
incubar
crecimiento de Azospirillum
aislamiento en medio NFB sólido
incubar
repicar (pico de flauta)
colorear (Gram -)
conservar
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Selección de cepas para capacidad fijadora de N
Ensayo de laboratorio: alfalfa
Medio de cultivo: Yensen
Testigo: medio sin N sin inocular
Control: medio sin N inoculado con cepa eficiente
Tratamientos: medio sin N inoculados con cepas a testear
Testigo: medio con N sin inocular
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Síntesis de selección de cepas
Testigo medio sin N sin inocular
Controlmedio sin Ninoculado con cepa eficiente
Tratamientosmedio sin Ninoculados concepas a testear
Testigomedio con Nsin inocular
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Selección de cepas: parámetros de evaluación
• Cantidad de nódulos• Color• Posición en la raíz• Actividad Nasa• N en planta• Peso de raíz
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Síntesis de producción de inoculante
incubar (4-5 días)
filtro de aire
manguera
aireador
cámara de aire 30%
incubar 3 o 4 días
extraer una alícuota de cultivo conservado
cultivar en medio YEM liquido (pie de cuba) colorear
(control del pie de cuba)
• agregar antibiótico
• colocar el pie de cuba
colorear(control del inoculante)
Primera etapa
cultivo de iniciación (pie de cuba)
Segunda etapa
cultivo a gran escala (biodigestor)
50 ml
Medio Ashby(estéril)
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Producción de inoculantes
Aireador
Mechero
Mangueras
Tapones Biodigestores
Filtro de aire
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Producción de inoculantes
Planta Industrial
Actividad: observar un biodigestor