INMUNIDAD_CELULAR
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INMUNIDAD CELULAR METODOS DE LABORATORIO Dr. Folch
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INMUNIDAD CELULAR
METODOS DE LABORATORIO
Dr. Folch
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SEPARACION DE POBLACIONESCELULARES
CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL
a) Linfocitos
b) Polimorfonucleares neutrófilos
c) Monocitosd) Eosinófilos y basófilos
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ESTUDIO DE SUBPOBLACIONESLINFOCITARIAS
• Leucocitos totales: CD-45• Linfocitos B: CD-19, Igs de membrana• Linfocitos T: CD-3•
Linfo. Helper / hiper.retardada CD-3, CD-4• Linfo. Citotóxico CD-3, CD-8• Célula NK: CD-56, CD-16• Célula NKT: CD-56, CD-3•
Célula madre: CD-34• Macrófagos: CD-14• Otras: CD-4, CD25, FoxP3
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SEPARACION DEPOBLACIONES CELULARES
• SEPARACION INMUNOMAGNÉTICA
• CITOMETRÍA DE FLUJO (SORTING)
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IMMUNOBEADS
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Perlas magnéticas pueden serseparadas
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SEPARACION DEPOBLACIONES CELULARES
• SEPARACION INMUNOMAGNÉTICA
–CITOMETRÍA DE FLUJO (SORTING)
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Un esquema de citometría
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citómetro
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Células CD-3, CD-4 positivas
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Medicion de subpoblaciones
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Un ejemplo de citometría de flujo
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¿Qué nos pueden decir lassubpoblaciones celulares?
inmunodeficiencias
capacidad de responder enfermos de Ca
cap. de respuesta inmunosuprimidos
en pacientes con linfomas o leucemias
permite su tipificación
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Pruebas funcionales
Proliferción celular
Citotoxicidad
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Activación de linfocitos:una formade evaluar su capacidad funcional
Proliferación
Medición de citoquinas
Medición de Ca intracelularExpresión de IL 2-R
¿CUANDO SE PIDE?
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Citotoxicidad
• Linfocitos T CD-8
• Células NK y NKT
•
Células macrofagicas y otras (ADCC)
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Apoptosis: una forma de morir
• Fragmentacion del DNA
• Medición de anexina V
•
Determinación de caspasas
Significado biológico de la Apóptosis
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Fragmentación DNA nuclear
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Célula apoptótica
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Producción de citoquinas
•
RT-PCR• Microarrays
• Elisa
• Ensayo biológico• Tinción intracelular
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microarray
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Tinción de citoquinasintracitoplasmáticas
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Inmunidad celular natural
• Neutrófilos Fagocitosis
Actividad microbicida
reducción de azul de nitrotetrazolium
quemiluminiscencia
• Eosinófilos generación de LTC4,
ensayo de unión superoxido
•
Monocitos fagocitosisactividad microbicida
producción de citoquinas (monoquinas)
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El neutrofilo
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Neutrofilo y mecanismos de ataquea patógenos
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Reacción de azul deNitrotetrazolium
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Emisión de luz
