8/16/2019 Informe N 67

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OBJETIVOS

Cromatografía en columna:

-Separación de una mezcla de Azul de metileno-Anaranjado de metilo

Cromatografía en capa fina y sobre papel:

-Separar los colores en capa fina y columna abierta, y hallar la relación de frente.

INTRODUCCIÓN

a cromatografía en columna nos permite separar !identificar" componentes de unamezcla a la #es purificar estos componentes a tra#$s de una serie de procesos o m$todosya sea cromatografía en columna, en capa fina o en columna% con esto podemos hacerun an&lisis cuantitati#o y cualitati#o de los componentes de la mezcla

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CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

a cromatografía en capa fina es una t$cnica )ue consiste en la separación de loscomponentes de una mezcla. s una deri#ación de la cromatografía en columna, pero enla )ue se utiliza un lecho abierto formado por la capa fina !fase estacionaria", la eluciónse consigue por el mo#imiento capilar ascendente del sol#ente !fase mó#il"./

a fase estacionaria normalmente utilizada est& hecha de al'mina, gel de sílice ocelulosa.sta fase es una capa delgada )ue tiene como soporte una superficie de #idrio o pl&stico,los espesores de esta fase son 0,12mm. 3 1mm. n aplicaciones analíticas y superiores a1mm. en aplicaciones preparati#as.

a mezcla a analizar se deposita a una pe)ue+a distancia del borde inferior de la placa yse introduce en una cubeta )ue contiene la fase mó#il, )ue asciende a lo largo de la

 placa por capilaridad, desplazando a los componentes de la mezcla a diferentes#elocidades, lo )ue pro#oca su separación. Cuando el frente del disol#ente se encuentra

 pró4imo al e4tremo superior de la placa esta se saca para un secado, re#elación y unc&lculo de 5elación de 6rente !5f" y la 5elación respecto a un patrón !54".2

n la re#elación de los compuestos, si estos son coloreados se podr&n distinguir#isualmente, pero si no son incoloros, se suele iluminarla con luz ultra#ioleta para su

distinción.

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n esta t$cnica se puede obtener algunas contantes )ue pueden ser#ir para laidentificación de alg'n compuesto, ya )ue el desplazamiento de una sustancia hacia elfrente es constante y característico de cada compuesto.

APLICACIONES ANALITICAS:

5elación de 6rente !5f":

s la relación )ue e4iste entre la distancia recorrida de la sustancia desde el origen hastael donde llego su rastro y la distancia recorrida del sol#ente desde el origen hasta elfrente del sol#ente.

 Rf = Distanciarecorrida por la sustancia

 Distanciarecorrida por el solvente

5elación respecto a un patrón !54":

Cabe se+alar )ue esta constante es usada en el caso de )ue el frente de sol#ente salefuera del cromatograma por lo tanto habr& dificultad al analizar el 5f, es entonces )ue secoloca al lado una sustancia de composición similar a modo de comparación. aconstante se da al relacionar las distancias recorridas de las muestras desde el origen.

 Rx= Distancia recorrida por la muestra

 Distanciarecorrida por el patrón

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APLICAIONES PREPARITIVAS:

Se lle#a acabo con el fin de e4traer los componentes de la sustancia pero en pocascantidades entre los /00- 700mg.Se trabaja de manera similar )ue en la capa fina normal con las diferencias de )ue la

siembra se hace a modo de banda, es decir a lo largo de la placa. uego del secado, elre#elado se hace a luz ultra#ioleta !m$todo no destructi#o" o pul#erización en uno de loslados laterales del cromatograma )ue ser#ir& como guía para la posición de las bandas!m$todo destructi#o". a recuperación de las muestras se realiza por raspado de la faseestacionaria y la e4tracción con alg'n disol#ente adecuado.

CROMATOGRAFIA EN PAPEL

s la m&s sencilla de las t$cnicas, pero sólo nos dar& resultados cualitati#os. st& casien desuso. l m$todo se basa en un mecanismo de reparto, y consiste en depositar una

 pe)ue+a cantidad de muestra !sembrado" en el e4tremo de una tira de papel de filtro,)ue se deja e#aporar. uego se introduce la tira en una cubeta )ue contenga el sol#ente,de manera )ue $ste suba por la tira por capilaridad.

Cuando el disol#ente deja de ascender o ha llegado al e4tremo, se retira el papel y seca.Si el disol#ente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se #er&n lasmanchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el

 papel se somete a procesos de re#elado.

a t$cnica es muy similar a la de la cromatografía en capa fina, tambi$n se puede medirla constante de 5elación de 6rente !5f".a cubeta puede colocarse en la parte inferior de tal manera )ue el sol#ente subir& porotro lado tambi$n se puede colocar la cubeta en la parte superior haciendo )ue elsol#ente baje.a cromatografía en papel es muy usada para separar amino&cidos, &cidos nucleicos yazucares.8

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RESULTADOS

Cromatografía ! "a#a f$!a

M%"&a

(istancia recorrida por la fase mó#il: 2./ cm

(istancia recorrida por la sustancia azul: 9.9 cm

(istancia recorrida por la sustancia roja: 9.8 cm

(istancia recorrida por la sustancia amarilla: 2cm

Co&ora!t

(istancia recorrida por la fase mó#il: 2./ cm

(istancia recorrida por el colorante: 0.12 cm

Cromatografía ! #a#&

M%"&a

(istancia recorrida por la fase mó#il: /0.7 cm

(istancia recorrida por la mezcla: 0.22 cm

Co&ora!t

(istancia recorrida por la fase mó#il: /0.7 cm(istancia recorrida por el colorante: 0.92 cm

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DISCUSIONES

Cromatografía ! "a#a f$!a

M%"&a

• (istancia recorrida por la sustancia azul (istancia recorrida por la fase mó#il

 56: 9.9 cm 2./ cm 0.;<

• (istancia recorrida por la sustancia roja (istancia recorrida por la fase mó#il

56: 9.8 cm 2./ cm 0.=1

• (istancia recorrida por la sustancia amarilla(istancia recorrida por la fasemó#il

56: 2 cm 2./ cm 0.=;

Co&ora!t

• (istancia recorrida por el colorante (istancia recorrida por la fase mó#il

56: 0.12 cm 2./ cm 0./

Cromatografía ! #a#&

M%"&a

(istancia recorrida por la fase mó#il (istancia recorrida por la mezcla

56: 0.22 cm /0.7 cm 0.027

Co&ora!t

(istancia recorrida por la fase mó#il (istancia recorrida por el colorante

56: 0.92 cm /0.7 cm

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CONCLUSIONES

Cromatografía en capa fina y papel:

l 5f de los colores de la mezcla son #alores apro4imados )ue #arían seg'n las

condiciones e4perimentales, pero constantes a condiciones controladas.

l 54 tiene menos margen de error en cuanto a identificación de sustancias.

BIBLIOGRAFÍA:

/>ntoduccion a la ciencia de ?ateriales, @. ?. Albella A.?. Cintas . ?iranda @.?.Serratoga, ditorial: bcomp S.A., aís: spa+a, aginas:

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CUESTIONARIO 'COLUMNA(:

)* +C,-& . &a #r$!"$#a& ,t$&$/a/ / &a "romatografía ! "o&,m!a0

a utilidad de la cromatografía en columna se basa en el an&lisis, la separación o purificación de sustancias o mezcla de $stas a tra#$s de ciertas t$cnicas y m$todos muyeficientes usados en los actuales laboratorios de )uímica.

1* +2,3 f!4m!o. fí.$"o. $!tr5$!! ! ,!a "o&,m!a "romatogr-f$"a 6, ,t$&$".$&$"a g& "omo fa. f$7a0

os fenómenos físicos presentes son la adsorción y desorción, el primero consiste en)ue las mol$culas de una sustancia !adsorbato" se adhieren en la superficie de un sólido

finamente di#idido !adsorbente, Silica Jel" y el segundo es la separación de lasmol$culas adsorbidas en la superficie del sólido.

8* +C,-&. .o! &a. #r$!"$#a&. /$fr!"$a. !tr ,! 9PLC ,!a "o&,m!a"romatogr-f$"a .$m#&0

a IC es capaz de separar macromol$culas y especies iónicas, productos naturalesl&biles, materiales polim$ricos y una gran #ariedad de otros grupos polifuncionales dealto peso molecular. Con una fase mó#il lí)uida interacti#a, otro par&metro se encuentradisponible para la selecti#idad, en adición a una fase estacionaria acti#a. frece unamayor #ariedad de fases estacionarias, lo )ue permite una mayor gama de estasinteracciones selecti#as y m&s posibilidades para la separación.

a cromatografía en capa fina !CC6 o C" es una t$cnica r&pida y efecti#a. Se utilizacom'nmente para seguir el desarrollo de una reacción, para analizar el n'meroapro4imado de componentes de una muestra, y por su #alor como criterio de pureza.

a polaridad es la base de esta t$cnica. a fase estacionaria formada por gel de sílice es polar y los analitos a separar presentar&n diferentes polaridades. Buedar&n m&sretenidos por la fase estacionaria los m&s polares y, la elección del disol#ente en funciónde su polaridad, har& )ue los analitos sean arrastrados m&s r&pido o m&s despacio, oincluso )uedar completamente retenidos en la fase estacionaria, consiguiendo suseparación.

;* +C,-& . & #r$!"$#a& fa"tor 6,

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=* E.tamo. o#ra!/o ,!a "o&,m!a "romatografía ,.a!/o "omo a/.or>!t.$&$"ag& "a.$ to/o. &o. "om#,.to. . $o. $!tro/,"$ría #ara #o/r &,$r&o0

Se tiene )ue cambiar de absorbente ya )ue la mezcla de dos o m&s absorbentes de

distinta polaridad resultan m&s eficientes )ue absorbentes puros.

* +C4mo . #,/ tra>a7ar "o! .,.ta!"$a. $!"o&ora. ! ,!a "o&,m!a"romatogr-f$"a? .$ !o . #o.$>& &o"a&$%ar &a. .,.ta!"$a. /!tro / &a "o&,m!a0

Si se desea detectar las sustancias dentro de la columna y estas son incoloras, puede ser)ue tenga absorción en la región ultra#ioleta del espectro, de esa manera se la detectara.

* +2,3 t$#o / "romatografía ,t$&$%aría #ara &$m$!ar &a. .a&. m$!ra&. 6, .t-!"o!tam$!a!/o ,!a m,.tra / "afí!a0

ara eliminar las sales de una muestra de cafeína sería muy efecti#o hacer uso de lat$cnica Cromatografia de >ntercambio >ónico, ya )ue la muestra al pasar por las resinascatiónicas y aniónicas intercambiaran los iones de las sales, )uedando al final unasolución de cafeína y agua.

* +2,3 . ,! "o&"tor / fra""$o!. ",-& . ., #r$!"$#a& ,t$&$/a/0

 l colector de 6racciones es un instrumento complementario a la t$cnica decromatografía en columna, )ue ayuda a recolectar los restos del eluyente.l control de la elusión se hace generalmente mediante la cromatografía en papel o capa

fina, pero el control puede retrasar el proceso, suele recibirse en tubos de ensayo omatraces. ara ello se hace uso del colector de fracciones )ue permite hacerlo demanera casi autom&tica.

* +2,3 /$fr!"$a. !",!tra ,.t/ !tr &a "romatografía / ga.. &a"romatografía ! "o&,m!a0

 as diferencias entre las t$cnicas de cromatografía de gases y columna son: la C.C.tiene ambas fases li)uidas, pero en la C.J. tiene como fase mó#il a un gas y a la faseestacionaria a un lí)uido o gas. a infraestructura de la Cromatografia de Jases re)uiere

de aparatos y sistemas m&s costosos )ue la de Columna.

)* +2,3 .o! &a. R.$!a. / I!tr"am>$o Io!$"o ",-& . ., ,t$&$/a/0

 as resinas de intercambio iónico, son sustancias insolubles )ue tienen grupos iónicos.ueden ser de 1 tipos: catiónicas y aniónicas. stas resinas en contacto con unasustancia )ue tenga sales, cambian sus iones IO por los cationes de las sales !resinacatiónica" y sus iones I- por los aniones de las sales. ste m$todo es 'til para laobtención de agua pura, es decir sin iones.

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(>65FC>ASC5?AJ5A6>A F CAA 6>FA:

Se utiliza una superficie de un soporteinerte rigido !lamina de #idrio, plastico o

aluminio"

Se uliza adsorbente eficientes como

alumina o silicagel.la muestra a analizar o separar se siembracerca del borde inferiory no es necesario

airear,

s util para el reparto , adsorcion, elintercambio ionico o una combinacion de

estos.

s un metodo #ersati, sencible, rapido yeficiente.

 

C5?AJ5A6>A SD5 A:

Se utiliza el pael de filtro !fibras decelulosa", como soporte inerte.

a fase fija puede ser el agua u otro

li)uido.a muestra a analizar o separar se siembracerca del borde inferior y luego se airea.

articularmente es util en la separacion decompuestos muy polares.

Solo se puede trabajar con pe)ue+ascantidades de muestra.

CUESTIONARIO 'CAPA FINA H PAPEL(:

)* +2,3 !t$!/ #or R@0

 a 5elación respecto a un patrón o 54, es la constante )ue se suele utilizar en los casos

en )ue el frente de sol#ente sale fuera del cromatograma, por lo cual no se puede medirel 5f, en tal caso es con#eniente colocar junto a la muestra una sustancia patrón decomposición similar.l 54 es la relación entre las distancias recorridas de la sustancia desconocida y el

 patrón.

1* +C,-&. .o! &a. /$fr!"$a. !tr &a "*"*f* &a / #a#&0

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8* C$t a&g,!a. a#&$"a"$o!. / &a "romatografía ! ., .#"$a&$/a/*

∗ ecnología de alimentos y roductos Faturales.- uede realizarse lacaracterización de Aceites senciales y Aromas, los cuales sonempleados en la elaboración de saborizantes, aromatizantes, licores,

 perfumes, artículos de aseo, y como materias primas para productosfarmac$uticos. or ejemplo:- Separación e identificación de az'cares de forma cualitati#a y cuantitati#a despu$s deuna con#ersión a deri#ados #ol&tiles termoestables.-(eterminación r&pida y precisa de la composición los Hcidos grasos en los aceites ylas grasas. -(eterminación del contenido de isómeros trans en aceites, grasas y alimentosgrasos.

∗ Control Ambiental.- (entro de los contaminantes posibles de ser estudiados est&n: los hidrocarburos arom&ticos, DP, pesticidasorganoclorados y órgano-fosforados en muestras de aguas superficiales,

subterr&neas, suelos y lodos.∗ Buímica 6orense.- s posible la aplicación de la cromatografía de gases

y la espectrometría de masas en la detección y cuantificación de analitosde inter$s en la )uímica forense. or ejemplo la determinación,cuantificación de alcohol en sangre, an&lisis de licores, entre otros.

 ;* $!tr#rt &o. 5a&or. / Rf ?= ? ?*

∗ 0,02: la distancia recorrida por la sustancia es de 2 cm mientras )ue la distancia

recorrida por el disol#ente es de /00 cm.∗ 0,$o ",a!/o . t$! ,! Rf / ?=? +Por 6,3Q

Si debido )ue en la cromatografía de capa fina el 5f en el color azul fue 0.;

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* +2,3 . &a &"trofor.$. ",-& . ., #r$!"$#a& a#&$"a"$4! ! &o. "om#,.to.>$o&4g$"o.0

a electroforesis esuna t$cnica )ue se utiliza para

la separación

de mol$culas seg'n la

mo#ilidad de estas en un

campo el$ctrico y esta se

 puede realizar mediante la

separación puede realizarse

sobre la superficie hidratada

de un soporte sólido, a tra#$s

de una matriz porosa, o

tambi$n en una disolución.

∗  Aplicación en los compuestos biológicos

a electroforesis se usa en una gran mayoría en la materia del A(F recombinante ya

)ue esta nos permite saber la carga )ue poseen los polip$ptidos, y separar los diferentes polip$ptidos resultantes de las #ariaciones del e4perimento del A(F recombinante.

a #ariante de uso m&s com'n para el an&lisis de mezclas de proteínas o de &cidos

nucleicos utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida.

 os &cidos nucleicos ya disponen de una carga el$ctrica negati#a, )ue los dirigir& al

 polo positi#o, mientras )ue las proteínas se cargan al unirse con sustancias como

el S(S !detergente" )ue incorpora cargas negati#as de una manera dependiente de la

masa molecular de la proteína. Al poner la mezcla de mol$culas y aplicar un campoel$ctrico, $stas se mo#er&n y deber&n ir pasando por la malla del gel !una red

tridimensional de fibras cruzadas", por lo )ue las pe)ue+as se mo#er&n mejor, m&s

r&pidamente. Así, las m&s pe)ue+as a#anzar&n m&s y las m&s grandes )uedar&n cerca

del lugar de partida.

http://es.wikipedia.org/wiki/Metodos_electroanal%C3%ADticoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Metodos_electroanal%C3%ADticoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Mol%C3%A9culahttp://es.wikipedia.org/wiki/Mol%C3%A9culahttp://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADnahttp://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_nucleicohttp://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_nucleicohttp://es.wikipedia.org/wiki/Gelhttp://es.wikipedia.org/wiki/Agarosahttp://es.wikipedia.org/wiki/Poliacrilamidahttp://es.wikipedia.org/wiki/Dodecilsulfato_s%C3%B3dicohttp://es.wikipedia.org/wiki/Detergentehttp://es.wikipedia.org/wiki/Mol%C3%A9culahttp://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADnahttp://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_nucleicohttp://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_nucleicohttp://es.wikipedia.org/wiki/Gelhttp://es.wikipedia.org/wiki/Agarosahttp://es.wikipedia.org/wiki/Poliacrilamidahttp://es.wikipedia.org/wiki/Dodecilsulfato_s%C3%B3dicohttp://es.wikipedia.org/wiki/Detergentehttp://es.wikipedia.org/wiki/Metodos_electroanal%C3%ADticos

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