In-situ PCR

In-situ PCR

DefinicinLa PCR in-situ es un mtodo en el cual la reaccin en cadena de la polimerasa, toma lugar en un sitio de la clula, y el producto puede ser visualizado de la misma forma que en el mtodo tradicionalEs realizada sobre preparaciones fijas en un portaobjetos.Tiene la sensibilidad de la PCR y la resolucin espacial de hibridacin in situ.

Fundamento de PCR In situ.Reaccin de PCR en secciones histolgicas o clulas.Los productos pueden visualizarse en el sitio de amplificacin.

Se realiza sobre preparaciones fijas en un portaobjetos.

Pueden detectarse cantidades pequeas de genoma.

Esta tecnologa es de gran alcance en la capacidad de amplificar especficamente una poblacin de secuencias de menor representacin.

AplicacionesEstudiar la evolucin de las secuencias de un gen y los efectos de variabilidad de la secuencia en la funcin del cromosoma. Amplificar e identificar las secuencias blanco in situ.Pre diagnostico de enfermedadesDiagnostico de enfermedadesAmplificacin de regiones ipervariables Investigaciones forenses Aplicaciones en estudios evolutivos

Ventajas La principal ventaja de esta tcnica se basa en la especificidad por clulas individuales manteniendo la morfologa del tejido.Lo cual la convierte en un procedimiento ideal para investigacinla HIS de ADN aporta informacin acerca de la organizacin, localizacin, distribucin, nmero de copias, cambios evolutivos y mezclas con otras secuencias de cidos nucleicos.

Desventajas La HIS es una prueba mucho ms sensible que otras. Sin embargo, es una tcnica costosa que requiere de espacio, infraestructura y equipos adecuados para el trabajo con biologa molecular, el personal debe ser capacitado y entrenado para realizar esta tcnica y el tiempo de estandarizacin puede ser prolongado.

DiferenciasDescripcin: Amplificacin intracelular de PCR y deteccin de secuencias por hibridacin de una sonda marcada o deteccin inmunohistoqumica de nucletidos marcados.Puede llevarse acabo con clulas o tejidos fijados en solucin.Permite la deteccin de ADN en el mismo lugar de la muestra, sin tener que procesarla primero con tcnicas de laboratorio. Se suele utilizar para biopsias o raspados de clulas.