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TEMA 5 LOS LEUCOCITOS

LOS LEUCOCITOS I 1. INTRODUCCIÓN 2. CLASIFICACIÓN Y VALORES DE REFERENCIA 3. GRANULOCITOS 3.1 GRANULOPOYESIS 3.2 NEUTRÓFILO ESTRUCTURA FUNCIÓN. FAGOCITOSIS. INFLAMACIÓN AGUDA 3.3 EOSINÓFILO ESTRUCTURA FUNCIÓN 3.4 BASÓFILO ESTRUCTURA FUNCIÓN LOS LEUCOCITOS II 4. LINFOCITOS 4.1 LINFOPOYESIS 4.2 ESTRUCTURA 4.3 FUNCIÓN: POBLACIONES LINFOCITARIAS LINFOCITOS B LINFOCITOS T. SUBPOBLACIONES LINFOCITOS NULOS Ó DE TERCERA POBLACIÓN 5. MONOCITOS 5.1 MONOPOYESIS 5.2 ESTRUCTURA Y FUNCIÓN

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1. INTRODUCCIÓN Los leucocitos o glóbulos blancos son las únicas células sanguíneas que poseen núcleo. Fueron teñidos por vez primera en el silo XIX por Ehrlich y Pappenheim, clasificándolos por su coloración y sus características nucleares. Según su comportamiento frente al colorante, los clasificaron en: -Acidófilos: leucocitos que mostraban afinidad por la parte ácida del colorante, de modo que los gránulos citoplasmáticos aparecían de color rosa anaranjado. -Basófilos: leucocitos que mostraban afinidad por la parte alcalina del colorante, con gránulos citoplasmáticos de color azul intenso. -Neutrófilos: los gránulos del citoplasma aceptaban los dos tipos de colorante, dando al citoplasma una coloración azul grisáceo. Los tres grupos se incluían dentro de las llamadas <<células granulares>>, y todas ellas tenían núcleos segmentados o polinucleares. Las células <<no granulares>> (linfocitos, monocitos) eran células mononucleares con un núcleo grande y el citoplasma de color azul claro. La terminología actual de los leucocitos sanguíneos es semejante a la clasificación de Ehrlich.

2. CLASIFICACIÓN Y VALORES DE REFERENCIA - Clasificación

GRANULOCITOS O POLINUCLEARES

AGRANULOCITOS O MONONUCLEARES

Neutrófilos Cayados

Eosinófilos Basófilos

Linfocitos Monocitos

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- Valores de referencia El número total de leucocitos oscila dentro de unos márgenes de normalidad: Personas adultas: 4.000-10.000 leucocitos/mm3 ó 4-10x 103/µL ó 4-10x 109/L

Cuando hay menos de 4.000 leucocitos/mm3 existe una Leucopenia Cuando hay más de 10.000 leucocitos/mm3 existe una Leucocitosis Asimismo el porcentaje normal de los distintos tipos de leucocitos, lo que denominamos Fórmula leucocitaria, varía con la edad pudiendo establecerse unos valores de referencia:

Célula Adultos Niños Valores altos

Valores bajos

Neutrófilos segmentados

40-60% 20-40% Neutrofilia Neutropenia

Neutrófilos en banda ó Cayados

0-2% = Desviación a la izquierda

Desviación a la derecha

Eosinófilos 0-3% = Eosinofilia Eosinopenia

Basófilos 0-1% = Basofilia Basopenia

Monocitos 3-10% = Monocitosis Monocitopenia

Linfocitos 20-40% 40-60% Linfocitosis Linfopenia

Hay que tener en cuenta que en la infancia se observa una inversión de la fórmula leucocitaria, es decir que lo normal es que se encuentren en S.P. más linfocitos que neutrófilos (Linfocitosis Fisiológica) Las proporciones de cada tipo de célula con expresión en valores absolutos serían:

Célula Valores Absolutos

Neutrófilos segmentados

1500-5000/mm3 1 = 1,5-5 x 103/ mm3ó µL

ó 1,1 = 1,5-5 x 109 / L Eosinófilos Hasta 500/mm3ó µL

Basófilos Hasta 300/ mm3ó µL

Monocitos Hasta 700/ mm3ó µL

Linfocitos 1000-3000/ mm3ó µL

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3. GRANULOCITOS 3.1GRANULOPOYESIS Se conocen varios tipos de células comprometidas en la línea granulocítica-monocítica. La CFU-GM es el precursor bipotencial que puede desarrollar CFU-G para dar granulocitos y CFU-M para dar monocitos. A partir de la CFU-G se desarrollan las células precursoras de la granulopoyesis reconocibles morfológicamente. La primera célula identificable es el mieloblasto. La granulopoyesis se produce según la siguiente secuencia: CFU-M (mieloide) ----- CFU-GM ----- CFU-G ----- Mieloblasto ----- Promielocito ----- Mielocito ----- Metamielocito ----- Cayado ----- Segmentado - Mieloblasto: célula grande de 15-20µ de diámetro.

Núcleo redondo que ocupa gran parte de la célula, rojizo y de cromatina laxa, delicada, con nucléolos (dos ó más). El escaso citoplasma es moderadamente basófilo y carece de granulaciones.

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- Promielocito: Se origina por división y maduración del mieloblasto. Para algunos autores éste sería el primer elemento de morfología claramente reconocible en M.O.

Célula ligeramente superior a su precursor, entre 16 y 25µ de diámetro. - El citoplasma posee abundante granulación que denominamos granulación primaria, precisamente el mieloblasto se transforma en promielocito cuando forma gránulos netamente visibles. Aquí por tanto, en esta etapa, aparecen los gránulos primarios ó también denominados inespecíficos ó azurófilos. El citoplasma es basófilo y lleno de gránulos primarios de color azul oscuro. - El núcleo es redondo u ovalado, excéntrico, ocupa más del 50% de la célula, con cromatina laxa y generalmente algún nucléolo.

� Esta célula tiene en su granulación un alto contenido en mieloperoxidasa.

� Tiene gran capacidad mitótica. - Mielocito: Se origina por división y maduración del promielocito y sufre a su vez varias divisiones hasta transformarse en un Mielocito final. Es una célula redondeada, de menor tamaño que el promielocito,12-18µ .

- El núcleo es más pequeño, redondeado, ovalado ó achatado por un lado, excéntrico y sin nucléolos. Ocupa el 50% de la célula: relación N/C= 1:2. - Contiene más citoplasma que pierde basofilia y en ésta célula es característico que aparece la granulación secundaria ó específica: neutrófila, eosinófila y basófila. En los mielocitos se van haciendo menos visibles los gránulos primarios oscuros y van predominando los gránulos neutrófilos, eósinófilos ó basófilos respectivamente.

No obstante, debido a que la proporción de eosinófilos y basófilos en las preparaciones de médula ósea y de sangre periférica suele ser baja, la separación rutinaria de los eosinófilos y basófilos en mielocitos y posteriores fases (metamielocitos, cayados y segmentados) no ofrece

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utilidad clínica y nos referimos generalmente a Mielocitos neutrófilos al igual que en las fases siguientes. � Es la última célula de la serie granulocítica con capacidad mitótica.

Son los granulocitos jóvenes que tienen la mayor actividad mitótica. - Metamielocito: Procede de la división y maduración del Mielocito. Son células algo más pequeñas que los Mielocitos, 10-15µ.

- Es característico en ésta célula que se inicia la lobulación del núcleo así que presenta una indentación ó hendidura adoptando la forma de núcleo ligeramente hendido, como de riñón (reniforme) ó judía. El núcleo es más pequeño y de cromatina más densa y grumosa. - En el citoplasma finaliza la síntesis de granulaciones. En el metamielocito neutrófilo es rosado y con gránulos rosados y alguno azulado.

� Esta célula carece de actividad mitótica. - Cayado o banda: procede de la maduración del metamielocito. Su tamaño es similar.

- A medida que van madurando los metamielocitos, la concavidad de su núcleo se hace más pronunciada y se convierte en banda, con el núcleo alargado y curvado en forma de herradura, cayado ó bastón El núcleo presenta cromatina condensada y se va produciendo la formación del filamento entre los lóbulos (cuando un cayado experimenta una estrangulación en su núcleo ya pasa a definirse como segmentado). - El neutrófilo en banda ó cayado tiene el citoplasma rosado con gránulos pequeños uniformemente distribuidos.

� Esta célula no tiene capacidad fagocítica. � Su aumento indica un estímulo sobre la granulopoyesis. La mayor parte

de estas células se encuentran en la MO y sólo aprox. un 2% pasan a la sangre, aunque la proporción aumenta en situaciones patológicas como infecciones y síndromes mieloproliferativos. La aparición de Cayados y formas inmaduras como Metamielocitos constituye “Desviación a la izquierda” en el hemograma.

- Granulocitos segmentados: se originan a partir de los cayados por segmentación nuclear.

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Los más jóvenes tendrán sólo dos lóbulos y un puente de cromatina, posteriormente de 3 a 5 lóbulos. Son los elementos más maduros. Circulan en la sangre periférica y pasan a los tejidos donde ejercen sus funciones. Según el tipo de granulación específica, se habla de Neutrófilos, Eosinófilos y Basófilos. Como hemos dicho anteriormente, debido a su predominio nos referimos habitualmente como segmentados a los Neutrófilos segmentados, aunque los otros también lo sean. Esquemáticamente:

Dinámica de la Granulopoyesis: Las células granulocíticas de la MO se distribuyen en dos compartimentos:

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- Mitótico: mieloblasto, promielocito, mielocito. -Maduración y almacenamiento: metamielocito, cayado, segmentado. El tiempo total de maduración de Mieloblasto a Segmentado es de 7-14 días. Desde la MO, los granulocitos maduros, cayados y segmentados pasan al torrente circulatorio. En la SP (sangre periférica) se distribuyen en dos compartimentos: - Marginal: 50 por 100 de los granulocitos. Son polinucleares que están adheridos a las paredes de los vasos sanguíneos. Se incorporan inmediatamente a la circulación en función de las necesidades. - Circulante: 50 por 100 de los granulocitos, están en la circulación. En el recuento de leucocitos, sólo se reflejan los que están en el compartimiento circulante. Tras un periodo de 7 horas en sangre (de 6 a 10), el neutrófilo emigra por diapédesis a los tejidos donde permanece hasta su destrucción y muerte celular. - Regulación de la granulopoyesis Actualmente se conocen sustancias que estimulan el desarrollo de los granulocitos y monocitos y que se denominan Factores estimulantes de colonias ó CSF. Se han podido identificar con ésta acción a la Interleucina 3 y la 6 (IL-3 e IL-6), así como el CSF-GM, producidos por monocitos, macrófagos y linfocitos T. Asimismo, se han identificado sustancias inhibidoras de la granulopoyesis, como por ejemplo la lactoferrina, producida por los gránulos secundarios de los neutrofilos. También se habla de factores inhibidores producidos por granulocitos llamados “Chalonas” con ese efecto de retroalimentación ó feed back negativo. Los macrófagos también sintetizan Prostaglandina E (PG E) que se opone al efecto de los CSF.

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3.2. NEUTRÓFILO También denominado: Polinuclear(PN) neutrófilo, Neutrófilo segmentado, Segmentado, Polimorfonuclear(PMN) neutrófilo. Son los leucocitos más numerosos en sangre periférica, representan el 60% del total de leucocitos, en valores absolutos 1500-5000/mm3 ó 1,5-5 x 103/µL ó 1,5- 5 x 109 / L

IMAGEN AL MICROSCOPIO ÓPTICO AL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO

[ATLAS DE CÉLULAS SANGUÍNEAS, ZUCKER-FRANKLIN]

Su denominación obedece a las características a la tinción del citoplasma y la granulación, que presentan afinidad intermedia (neutrófila) por colorantes ácidos y básicos y también obedece a características del núcleo que posee varios segmentos o lóbulos de cromatina.

_Estructura���� Tiene un tamaño medio, de unas doce micras de diámetro oscilando entre 12 y 16.Aproximadamente es el doble del tamaño de un hematíe. ● Núcleo: Es de cromatina compacta, condensada y esta formado por lóbulos o segmentos de material nuclear, unidos por filamentos finos o puentes de cromatina. La cifra de lóbulos oscila entre 2 y 5, siendo de media 3.Hay dos posibles alteraciones: = Hipersegmentación: Presencia de neutrófilos con mas de 5 lóbulos. Es característico de las anemias megaloblásticas. El sinónimo de neutrófilo hipersegmentado es el término “Pleocariocito”. = Hiposegmentación: Cuando hay una elevada proporción de neutrófilos con poca

NÚCLEO LOBULADO

GRANULACIÓN NEUTRÓFILA

PUENTE DE CROMATINA

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lobulación, normalmente dos lóbulos, y que no sean cayados, se le llama también anomalía de “Pelger Huet” y puede ser debida a causas variadas como: infecciones, tóxicos ó hemopatías malignas, o bien a una forma congénita. El núcleo presenta a veces un apéndice fino, que se llama en “palillo de tambor” que representa cromatina sexual, y aparece en el sexo femenino ● Membrana: En ella destacan distintos tipos de proteínas � =Proteínas contráctiles: Como la actina (1%) y la miosina (10%), son importantes porque permiten el movimiento ameboide mediante emisión de pseudópodos característico de esta célula, y que le aporta su gran movilidad y capacidad de desplazamiento. =Proteínas selectinas e integrinas: Las selectinas aportan capacidad de adherencia al endotelio vascular. Las integrinas colaboran en la adherencia al endotelio y además permiten el desplazamiento entre las células endoteliales (diapédesis). =Proteínas antígenicas: Son polipéptidos que constituyen antígenos que se denominan HLA (el término procede de Human Leukocite Antigens, ya que fueron identificados en leucocitos humanos).Son antígenos de histocompatibilidad, que también están presentes en otros leucocitos y en la mayoría de células del organismo, con la importante excepción de los hematíes. ● Citoplasma: Posee los orgánulos celulares habituales, lo mas destacado es la presencia de granulación. Estos gránulos citoplasmáticos son numerosos y están regularmente repartidos, los hay de dos tipos. Ambos tipos son, por tanto, orgánulos celulares y representan el equivalente a lisosomas, ya que su contenido es enzimático, lo que resulta muy importante por estar en relación con la función de la célula, los neutrófilos son activamente fagocíticos y necesitan enzimas que produzcan la destrucción y la digestión de los microorganismos fagocitados. =Gránulos primarios o inespecíficos: Son minoritarios, representando aproximadamente el 10-20% de la granulación. Son los primeros en sintetizarse, en la etapa de promielocito. Resultan poco visibles a microscopia óptica porque quedan enmascarados por la granulación secundaria. Lo más característico de su contenido enzimático es:

*Mieloperoxidasa (MPO)� Cataliza reacciones de oxidación, es muy importante

para la acción bactericida. Esencial en la fagocitosis. Es el mejor marcador enzimático de esta granulación, puede utilizarse en tinciones citoquimicas ( por ej. Como marcador en leucemias). Este componente es uno de los factores usado por los autoanalizadores para la identificación y recuento de estas células, el alto contenido en peroxidasa, junto al tamaño celular y el índice de lobulación del núcleo les identifica.

*Lisozima� Estos gránulos contienen 1/3 de la lisozima total de la célula. Es una enzima bactericida, también llamada muramidasa, porque actual alterando la mureína que constituye la base de la pared bacteriana. Explica la acción antibacteriana de ésta célula.

*Hidrolasas ó Enzimas hidrolíticas� Degradan sustancias complejas convirtiéndolas en otras mas sencillas mediante una reacción de hidrólisis. La mas

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característica es la fosfatasa ácida, aunque hay un gran variedad como esterasas, ribonucleasas, desoxiribonucleasas…Intervienen en la fagocitosis.

*Glucógeno y mucopolisacaridos� Estas son sustancias polisacáridas de depósito. *Proteínas cationicas-� Sustancias con acción ó efecto toxico. Intervienen en la fagocitosis. =Gránulos Secundarios o específicos: Son mayoritarios representando el 80-90% de la granulación total. Resultan más evidentes a microscopia óptica por ser más numerosos, aunque mas pequeños, que los anteriores y son los responsables de la tinción característica que da nombre a la célula, neutrófilo, de color rosado hasta azulado. Se sintetizan mas tarde, en la fase de mielocito y su contenido mas destacado es:

*Lisozima� 2/3 del total *Enzimas hidroliticas� La mas característica es la fosfatasa alcalina granulocitaria (FAG), no solo se encuentra en estos gránulos, sino que parece encontrarse también en otras estructuras tubulares y vesiculares situadas bajo la membrana plasmática. *Lactoferrina� Es el mejor marcador de ésta granulación. Tiene acción antibacteriana, porque actúa como quelante del hierro y evita que éste sea utilizado por las bacterias para su supervivencia. Explica también la defensa en las infecciones bacterianas.

En situaciones patológicas, se puede observar neutrófilos que pierden la

granulación ó bien observar granulación intensa denominada granulación tóxica por. Ej en infecciones

_Función ���� Realizan una FUNCIÓN DE DEFENSA, mediante los mecanismos de la FAGOCITOSIS y la intervención en los procesos de INFLAMACIÓN AGUDA. Constituyen una parte importante de los mecanismos de defensa inespecíficos del organismo que representan la 1ª línea de defensa de la que disponemos frente agentes extraños ó agresiones.

Ésta función la realizan en los tejidos. El neutrófilo se encuentra en la sangre de paso durante un tiempo de 6 a 12 horas para dirigirse a los tejidos y allí ejercen su función. Si no se utilizan se eliminan por las secreciones del organismo (bronquial, gastrointestinal…) o son destruidos por los macrófagos del SMF. La función defensiva la realizan frente a microorganismos y otras sustancias extrañas, de forma inespecífica. En relación con los microorganismos, lo que destaca es su acción de defensa frente a bacterias, aunque también actúa contra hongos y protozoos. La acción frente a virus es poco característica. Por eso en las infecciones bacterianas es donde resulta más característica la neutrofilia.

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Interviene en los procesos de inflamación aguda, ya sea por infección, por traumatismo, necrosis. Los polinucleares neutrófilos degenerados que están en el foco inflamatorio se denominan piocitos y en caso de infección, forman junto a restos bacterianos y de tejido, la secreción purulenta (pus). En general las inflamaciones agudas también cursan con neutrofilia. MECANISMO DE LA FAGOCITOSIS: Consiste en incorporar una partícula extraña al citoplasma del fagocito para manipularla y/o destruirla. Se desarrolla en varias etapas: ETAPA 1: RODAMIENTO Y ADHESIÓN AL ENDOTELIO�El neutrófilo de la circulación se desliza por el endotelio del vaso sanguíneo y mediante las selectinas e integrinas se adhiere a las células endoteliales. Hay sustancias (quimiotaxinas) que disminuyen la velocidad de los neutrófilos para favorecer este movimiento. La interleucina 1 (IL-1) del macrógafo regula la aparición de moléculas de adhesión en la superficie de las células endoteliales. ETAPA 2: DIAPÉDESIS� Es el paso del leucocito infiltrándose en las células endoteliales para acceder desde la sangre a los tejidos. Resulta facilitado por las proteínas contráctiles de la membrana y por el fenómeno de vasodilatación que tiene lugar en el foco inflamatorio.

ETAPA 3: QUIMIOTAXIS� Es el fenómeno por el que ciertas sustancias químicas denominadas Quimiotaxinas ó Factores quimiotácticos atraen a los leucocitos al foco de inflamación. Los neutrófilos adaptan su sentido de movimiento desplazándose en línea recta directa hacia donde hay sustancias quimiotácticas. La vasodilatación y el aumento de permeabilidad vascular en el foco inflamatorio favorecen la llegada de sangre y más leucocitos a la zona.

RODAMIENTO ADHESIÓN

ENDOTELIO

DIAPÉDESIS

QUIMIOTAXIS

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Las Sustancias quimiotácticas más destacadas son: *Factores del complemento, son proteínas de complemento procedentes del plasma que al activarse ejercen esta acción. Por ej. Esto lo hacen los factores denominados C3a y C5a, pequeños fragmentos proteícos que resultan de la activación del sistema del C. en el foco inflamatorio. *Factor quimitactico para neutrófilos (FQN) y Leucotrienos, que son producidos por basófilos y mastocitos. Éstas células cuando se produce una lesión en un tejido liberan dichas sustancias que atraen a los PMN. *Interleucinas, producidas por células del sistema inmune activadas *Sustancias procedentes de los microorganismos. Los propios microorganismos liberan compuestos en la zona de inflamación que tienen éste efecto de atraer PMN a dicha zona.

ETAPA 4: FIJACIÓN O ADHERENCIA AL FAGOCITO� El microorganismo o partícula extraña toma contacto y se fija a la membrana del fagocito. Puede fijarse ó bien directamente ó tras el proceso de Opsonizacion, el cual consiste en recubrir o rodear la partícula extraña con unas sustancias llamadas opsoninas que facilitan la fijación de la partícula a la membrana del fagocito y por tanto su fagocitosis. Las opsoninas “señalizan” la partícula y así el fagocito la fija mejor.

La fijación tiene lugar mediante unas moléculas que los fagocitos poseen en su membrana y que actúan como receptores para las opsoninas.

Las más destacadas opsoninas son: *Factores del complemento: Especialmente el factor C3b. En la membrana del fagocito existe un receptor específico para factor C3b y éste se une a él después de rodear la partícula para fijarla. *Anticuerpos: Principalmente de clase IgG, que son las mejores opsoninas. Ésta

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es la forma en que los anticuerpos intervienen en la respuesta inmune en la fase de destrucción de antígenos, es decir que lo que hacen es fijarlos a los fagocitos (neutrófilos ó también macrófagos) para destruirlos por fagocitosis. En la membrana del fagocito hay un receptor para el fragmento Fc de las IgG.

Otros factores intervienen en la fijación como: _ Características de la superficie de la partícula _ Carga superficial de la partícula, etc.… Por ejemplo cuando hablamos de la superficie de la partícula. Una bacteria capsulada presenta unas características de superficie y carga que dificultan la fijación directa, porque la carga que tiene, repele al fagocito y además produce un deslizamiento que impide la fijación. ETAPA 5: INGESTIÓN, ENGLOBAMIENTO Ó ENDOCITOSIS� la fijación activa la membrana del fagocito y esto inicia la fase de ingestión por el mecanismo de endocitosis, la membrana responde con el sistema de Actina-Miosina (contráctil) emitiendo seudópodos , alrededor de la partícula, el citoplasma fluye rodeando la partícula y la membrana se fusiona al otro lado, como consecuencia la partícula queda dentro de una vacuola o vesícula fagocítica llamada fagosoma, cuya membrana es de la de la célula pero volteada del revés. El fagosoma se desplaza hacia el dentro de la célula.

FAGOSOMA

LISOSOMAS (GRÁNULOS)

PARTÍCULA

ENDOCITOSIS

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ENDOCITOSIS:

ETAPA 6: DEGRANULACIÓN� Consiste en que los gránulos citoplasmáticos ó lisosomas se fusionan con el fagosoma y vierten el contenido enzimático que poseen a su interior, así se constituye otra vesícula llamada fagolisosoma que incluye la partícula más las enzimas.

ETAPA 7: FASE DE MUERTE Y DIGESTIÓN INTRACELULAR�

MUERTE Ó INACTIVACIÓN: Se refiere a producir la muerte ó inactivación en el caso de partículas que son microorganismos vivos, como ocurren en el caso de las bacterias. Se lleva a cabo mediante dos procedimientos: a) Mecanismos dependientes de O2: La fagocitosis activa el metabolismo celular y el consumo de oxigeno con la producción de una serie de sustancias con capacidad toxica y bactericida, una de las sustancias fundamentales es el peróxido de hidrogeno ó H2O2 sobre él actúa la enzima mieloperoxidasa generando otros productos tóxicos como radicales hidroxilo que son agentes oxidantes muy potentes responsables de la muerte de muchos microorganismos y también el ión hipoclorito, es una forma toxica con poder bactericida.

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b) Mecanismos independientes del O2: Se refiere a la intervención de otros factores o sustancias, también toxicas y bactericidas como: . acumulación intracelular de acido láctico, con descenso del pH hasta 4,5 en el interior del fagosoma, lo que crea un ambiente toxico para los microorganismos .

· acción de la Lisozima · acción de la Lactoferrina

DIGESTIÓN INTRACELULAR: Se refiere a la degradación de las partículas en partes pequeñas mediante la acción de las enzimas hidrolíticas de los gránulos (fosfatasas, ácidos, fosfatasa alcalina esterasas…) El contenido del fagolisosoma queda reducido mediante la digestión, a productos residuales de degradación contenidos en una vesícula ó vacuola digestiva. ETAPA 8: ELIMINACIÓN Ó EXOCITOSIS� La vesícula con productos residuales se acerca a la membrana, se fusiona con ella (las dos membranas) y los productos de degradación se eliminan al exterior celular por exocitosis.

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3.3 EOSINÓFILO: Son escasos en sangre periférica, representan hasta un 3% de los leucocitos circulantes, en cifras absolutas son unos 500/mm3 ó 0,5 x 103 /mm3 ó 0,5 x 109 /L. Proceden de la célula madre comprometida CFU-Eos cuya proliferación y diferenciación es estimulada por el CSF-Eos (factor estimulante de colonias) producidos por linfocitos T.

_Estructura ���� Su tamaño medio es de unas 13micras de diámetro aunque puede variar de 12 a 17 micras, puede ser un poquito mayor que el neutrófilo. ● Núcleo: Es de cromatina compacta, condensada y tiene generalmente dos lóbulos, generalmente es bilobulado (lentes de Quevedo ó alforja) ● Citoplasma: Posee los orgánulos celulares habituales y lo que destaca es la granulación, contiene gránulos acidófilos o eosinófilos, grandes (mas que los del neutrófilo) regularmente distribuidos y que raramente se disponen sobre el núcleo. La afinidad tintorial de estos gránulos por el colorante acido, la eosina, le da un aspecto de coloración anaranjada que caracteriza a los gránulos y da nombre a la célula. Los gránulos, si se ven a M/E se puede ver, que en realidad son de dos tipos: GRANDES, los cuales poseen en el centro una sustancia proteica de tipo cristaloide y una matriz en la que están las enzimas

EOSINÓFILOS

NEUTRÓFILO

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PEQUEÑOS, los cuales no poseen sustancia cristaloide, solo tiene matriz con enzimas. Ambos son equivalentes a lisosomas y su contenido más destacado es el siguiente: *Proteína principal básica (MPB) y proteínas catiónicas: Que tienen efectos citotóxicos importantes para su acción citotóxica. *Enzimas reguladoras como: Fosfolipasa, Aril-Sulfatasa, histaminasa: actúan como enzimas reguladoras o moduladoras porque inactivan sustancias inflamatorias liberadas pos los basofilos y los mastocitos. *Peroxidasa: diferente a la del neutrófilo *Fosfasa acida. _Función���� Realizan su función en los tejidos, son escasos en sangre periférica, sin embargo son 100 veces más abundantes a nivel de los tejidos. Se localizan preferentemente en los tejidos que ejercen de barreras epiteliales frente al mundo exterior, como por ejemplo el epitelio respiratorio, gastrointestinal, urinario… Las capacidades de esta célula son: _Son células móviles: Realizan diapédesis _Responden a factores quimiotácticos: como el FQE producido por basófilos y mastocitos _Tienen capacidad fagocítica: pero de menor eficacia que los neutrófilos y con menor poder bactericida. _Poseen receptores de membrana que responden a opsoninas: como los neutrófilos ,C3b, Ig, preferentemente IgE y ésta última está en relación con la función de estas células en alergias y parasitosis que son procesos en los que interviene la IgE. _Tienen capacidad citotóxica: Liberan sustancias citotóxicas y destruyen partículas extracelularmente La función de esta célula es importante en dos procesos: 1/ Defensa Contra Parásitos: Los eosinófilos realizan defensa frente a parásitos, no por fagocitosis, sino por adherencia y capacidad citotóxica. Los parásitos se adhieren a la membrana del Eo directamente, o bien opsonizados por el C3b ó IgE. La fijación, activa al eosinófilo para realizar un ataque extracelular, que consiste en la liberación de MBP y proteínas catiónicas que lesionan la membrana del parasito destruyéndolo. Por ejemplo en la Triquinosis, en el Quiste Hidatídico, en la infestación por Ascaris, u Oxiuros(lombrices). Si se diera algunos de estos casos en el hemograma aparecería una Eosinofilia.

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2/ Modulación de Reacciones Alérgicas HS de tipo I o Anafilácticas: Estas reacciones están mediadas por Ac de tipo IgE . La modulación la realizan los Eo., de dos formas: - Por una parte inactivan a los mediadores de la inflamación liberados por basofilos y mastocitos, que intervienen en esta tipo de reacciones. Con las enzimas de tipo histaminasa, fosfolipasa, aril-sulfatasa, degradan a los mediadores inflamatorios controlando la reacción. Con la histaminasa degradan histamina Con la fosfolipasas degradan Factor Activador De Plaquetas (FAQ) Con la aril-sulfatasa se degradan leucotrienos. - Por otra parte, el Eo. realiza fagocitosis de los complejos inmunes Ag-Ac que se corresponden son Alergeno-IgE. Fijan y fagocitan el complejo eliminándolo. Esta acción del eosinófilo interviniendo en el foco de inflamación alérgica y controlando la reacción explica que en el hemograma de pacientes alérgicos aparezca eosinofilia. 3.4. BASÓFILO Son los leucocitos menos abundantes en sangre periférica, representan del 0 al 1% del total, en valores absolutos aproximadamente hasta 300/mm3 ó 0,3x 103/mm3 ó 0,3x 109/ L. Se forman a partir de una célula madre comprometida, CFU-Bas, aunque el proceso de formación y regulación no es del todo bien conocido y se cree que hay un CSF-Bas no bien identificado.

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_Estructura���� Tiene un tamaño promedio de 12 -14 micras de diámetro. Núcleo: Es de cromatina moderadamente densa o compacta, menos picnótico y puede ser en banda o lobulado. Una forma característica es en forma de trébol aunque hay variabilidad. A veces resulta difícil de observar por la superposición de la granulación encima del núcleo, cosa que no suele darse en otras células.

Citoplasma: Además de los orgánulos celulares habituales posee una granulación característica formada por gránulos grandes, intensamente basófilos (azul, púrpura…) irregularmente distribuidos, y con frecuencia superpuestos al núcleo (por encima, por debajo…). La afinidad por colorantes básicos da su nombre característico. Estos gránulos son estructuras hidrosolubles y con una membrana externa delicada, que se altera con facilidad, por eso a veces, hay vacuolas en el citoplasma derivadas de gránulos que se han disuelto al hacer la tinción. Respecto a su contenido, apenas tienen enzimas hidrolíticas, ya que estas células no son fagocíticas .El contenido fundamental son unas sustancias químicas, biológicamente activas denominadas *MEDIADORES DE LA INFLAMACIÓN porque intervienen de forma decisiva en éste mecanismo defensivo y en las alergias.

Los mediadores se clasifican en dos tipos que son:

=Mediadores Primarios: Son aquellos que están preformados y almacenados en los gránulos de basófilos y mastocitos, entre ellos destacan: _Histamina : Importante amina vasoactiva _Heparina: Anticoagulante _FQE: Factor Quimiotactico de Eosinófilos _FQN: Factor Quimitactico de neutrófilos _FAP: Factor activador de plaquetas, las cuales cuando se activan liberan serotonina que es también una sustancia vasoactiva.

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=Mediadores Secundarios: Son los mediadores de síntesis reciente, se forman con la activación celular a partir del metabolismo del acido araquidónico, entre ellos destacan: _Leucotrienos: (LT diversos llamados LTB4, C4,D4….) Son sustancias muy potentes vasoactivas y quimiotacticas. Son de acción algo más lenta que la histamina. Se les ha conocido como SRS-A (Sustancia de Reacción lenta (Slow) de la Anafilaxia) _Prostaglandinas( PG) _Tromboxano(TX)

ACCIONES de los Mediadores Es importante entender que los mediadores, tanto los preformados como los de

nueva formación, tienen cuatro áreas principales de acción y éstas acciones explican el fenómeno inflamatorio y la sintomatología de los pacientes en la Inflamación y en la Alergia. Las acciones son:

* Función de Activación ó F.Vasoactiva significa producir una VD y un

aumento de permeabilidad vascular que son los fenómenos que inician cualquier reacción inflamatoria. Hay salida de plasma de los vasos al tejido y edema. *Función Quimiotáctica, muy importantes para atraer otras células como neutrófilos, más basófilos y particularmente eosinófilos que acuden a modular la reacción. * Acción Espasmogénica, producen una contracción de la musculatura lisa de los órganos donde ocurre la inflamación, esto es importante por ejemplo, en el epitelio bronquial. Es típico saber que esto da lugar a broncoespasmo y a la característica obstrucción bronquial con insuficiencia respiratoria de las crisis asmáticas. * Acción de Hipersecreción de las mucosas: aumenta la producción de mucosidad en el epitelio y la mucosa donde tiene lugar la reacción(respiratoria, intestinal....).Es característico a nivel bronquial que ésta secreción mucosa aumentada colabore en la obstrucción al flujo aéreo en las crisis de asma.

Aplicaremos éstas acciones un poco más adelante a la función de basófilos y mastocitos en la inflamación y la alergia.

_Equivalente tisular del Basófilo: Se denominan células cebadas o MASTOCITOS. Son células del tejido conjuntivo y tiene una similitud estructural y funcional con el basófilo. A microscopia electrónica muestran algunas diferencias ultra estructurales, por

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ejemplo: Tamaño algo mayor, contorno mas poligonal, los gránulos son mas pequeños y mas numerosos y de forma mas esférica. Citoquimicamente son iguales, con un contenido en los gránulos superponibles al basófilo. No se observan en sangre periférica puesto que están en los tejidos y su función es la misma que la del basófilo. _Función del Basófilo (y por extensión del Mastocito )���� La vida media del Bas. en sangre periférica es similar a la del neutrófilo, pasando luego a los tejidos .Lo mas destacado de basófilos y mastocitos, es su actuación como “células glandulares” por su contenido y liberación de mediadores de la inflamación (sustancias biológicamente activas y potentes). Han sido llamados glándulas celulares, porque vacían su contenido allí donde se los necesita Su función es muy importante en dos procesos: 1_INFLAMACIÓN: Inician la inflamación aguda porque ponen en marcha la vasodilatación y el aumento de permeabilidad vascular, fenómenos que desencadenan el desarrollo de un foco inflamatorio.

Cuando se produce una lesión tisular, la agresión al tejido, produce la activación de basofilos y mastocitos, que da lugar al fenómeno de degranulación. En este fenómeno de DEGRANULACIÓN lo que ocurre es que los gránulos del basófilo ó del mastocito, se fusionan con la membrana citoplasmática, vertiendo al exterior celular su contenido en mediadores de la inflamación, (observar que es diferente a la degranulación del neutrófilo en la fagocitosis en la que los gránulos lisosómicos vierten el contenido a un fagosoma ó vesícula citoplasmática y no al exterior celular) Los mediadores dan lugar al foco inflamatorio De esos mediadores, las sustancias vasoactivas, pondrán en marcha la vasodilatacion y el aumento de permeabilidad, con una salida de sustancias plasmáticas, como el complemento que activa también Bas. manteniendo y amplificando la inflamación, y salida también de otras células por diapédesis. Los mediadores quimiotacticos colaboran en la atracción y llegada de células al foco inflamatorio.

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2_ REACCIONES ALERGICAS: HS Tipo I o Anafilácticas: Son los responsables de la hipersensibilidad tipo I o Anafilaxia o HS inmediata. Estas reacciones se dan en personas alérgicas que responden a determinados Ag llamados Alergenos (polen, ácaros, alimentos, fármacos, etc) con la producción de elevadas cantidades de Ac de clase IgE.: ASMA, RINITIS, CONJUNTIVITIS, URTICARIA, ALERGIAS DIGESTIVAS ETC. El mecanismo de la reacción es el siguiente: 1_ El 1º contacto inmunizante con el alergeno tiene lugar la producción elevada de anticuerpos IgE y la <<Sensibilización ó carga de los mastocitos >> La sensibilización ó carga de mastocitos consiste en la fijación de las moléculas de IgE en la membrana. 2_ Al 2º contacto con el alergeno tiene lugar la fijación Ag-Ac de tal manera que el alergeno se una a la IgE de la superficie de los mastocitos y basófilos circulantes , formando un puente entre dos moléculas de IgE .Esto transmite una señal, a través de la membrana, de activación al interior celular, y por ello se produce la degranulación. Hay una salida al exterior celular de histamina y otros mediadores que ejercen las acciones que dijimos tenían éstas sustancias (VD, QTX, ESPASMOGÉNESIS, HIPERSECRECIÓN MUCOSA)

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La clínica de esta reacción se manifiesta de dos maneras: 1_ Anafilaxia local o atopia: Hay síntomas localizados que pueden ser: ^ Respiratorios: Por alergenos inhalados con cuadros de Rinitis , Asma bronquial etc. ^ Digestivos: por alergenos ingeridos ^ Conjuntivales, por ejemplo conjuntivitis alérgica ^ Cutáneos, por ejemplo urticaria, angioedema (q son placas edematosas) ^ Edema de glotis 2_Anafilaxia General: Se produce por contacto de Ag parenterales (inyección, fármacos, picaduras…) Hay una liberación masiva de mediadores como la histamina que produce una vasodilatación generalizada y esto produce un cuadro de hipotensión brusca y shock, esto se puede acompañar de reacciones locales, siendo las mas grave el edema de glotis.