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ADN RECOMBINANTE

Biotecnología

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1.Preparación de lasecuencia del ADN para su

clonaciónEs la parte esencial del proceso,ya que el ADN debe separarse yconcentrarse

2. Preparación de un vector de clonEl vector es el portador de la secuenciase desea clonar. Un vector debe presensiguientes características:

Una pequeña secuencia de ADN fcil depor e"e!plo, un pls!ido.#ontener distintos puntos de ataque arestricción y que sean conocidos.%oder ser incluido en la célula anftriofacilidad.&eplicarse de for!a independiente al A

c'lula an(triona.

ADN recombinante

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 3.Formación del ADNrecombinanteEn esta etapa se produce la uni)ncovalente del vector y el ADN inserto!ediante una ligasa. Así se reali*a el

sellado de la lla!ada +ella, +uesca oNic.

4. ntroducción del ADN

recombinante en la célulaanftriona%ara la clonaci)n -replicaci)n del ADNreco!binante se necesita la!aquinaria celular. %or ello, /ay queintroducir el ADN reco!binante enuna célula anftriona.

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!.Propa"ación del cultivo0e induce la divisi)n de c'lulasan(trionas, de for!a que se producenta!bi'n copias de ADN reco!binantey, por ello, la clonaci)n. %ri!ero seefect1a una sie!bra en placas %etri

con agar co!o !edio de cultivo. 0ede"an crecer las colonias. #ada unade ellas ser seleccionada ytransferida a distintos !edioslíquidos, donde seguir au!entandoel n1!ero de individuos de la colonia.

#.Detección $ selección de lorecombinantesEn los procesos de clonaci)n se gran n1!ero de c'lulas. Al (nal proceso se /ace necesario sepac'lulas que contienen ADN reco!de las que no lo contienen.a detecci)n y la selecci)n de coreali*a en los !edios de cultivo.procesos de clonaci)n se obtienan(trionas que no /an incluido ec'lulas reco!binantes, es decir,incluido el vector con el ADN par

reco!binar, y c'lulas an(trionasvector que no lleva el ADN inser

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 HALLAR GENES

En 3456 douglas pras/er deseaba encontrar ungen especi(co en una !edusa -el gen era el 78%

Esta proteina absorbe energia de la lu* y /aceque partes de la !edusa brillen, %ras/er pensaba

que la 78% se podia usarse para reportar cuandose /an /ec/o una proteina en una celula.

%ras/er estudio la secunacia de a!inocidos .Alco!parar la secuancia con una tabla de codigopudo predecir una secuancia de base de A&N!.

Uso una secuencia de adn co!ple!entario paraatraer un A&N! que concordara con su

prediccion.

%ras/er encontro una secuencia de A&N! que seunia a la perfeccion y a/í encontro el A&N, queproducida el 78%.

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+'todo sout/ern blot: Es un !etodo que per!itedetectar la presencia de una secuencia de adn en un!e*cla co!pleta de acido nucleico. %ara ello e!pleala tecnica de electroforesis en gel de agarosa, con el(n de separar los frag!entos de adn y despu's una

transferencia a una !e!brana en la cual se efectuala /ibridaci)n de la sonda.

El !etodo consta de 6 pasos:

E9tracion del ADN

Digestion del ADN:

Electriforesis:

%reparacion de un ensayo de sout/ern:

ibridacion con una sonda radioactiva:

Deteccion de &8%s:

&eensayar el resultado:

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%ls!idos y +arcadores 7en'ticos   os pls!idos son frag!entos

e9tracro!os)!icos de cidosnucl'icos -ADN o A&N que

aparecen en el citoplas!a dealgunos procariotas.

Un !arcador gen'tico es un gen que /aceposible distinguir las bacterias que llevan elplas!ido de aquellas que no lo portan.

Un tipo de !arcador gen'tico la detecci)n de lossignos clínicos de enfer!edades, tales co!o la

(brosis quística, acondroplasia, ane!iafalcifor!e, fenilquetonuria

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Bibliografia

 http://medmol.e/gloario/!"/

  http://genetica#$%#.&i'ipace.com/(arcadore)Gen*+,*A-tico

  http://&&&.mediterraneo.cl/docmento/catalogo/etracto0-"!1-231##$1,%,12.pdf