Guia de Practicas

PRESENTACION

El conocimiento sobre el manejo de plantas es una de las actividades más antiguas que realiza el hombre para poder sobrevivir, y a pesar de toda la tecnología de los últimos tiempos, siempre dependeremos de las plantas para nuestra alimentación.

En los países en vías de desarrollo, como el nuestro, una de las actividades que se compromete con los sectores más pobres es la agricultura, y del manejo que se de en ésta dependerá la economía de sus pobladores. El interés de crecer como país exportador de productos vegetales es un reto que debemos asumir las instituciones de investigación como las universidades, y para esto debemos preparar competitivamente a nuestros alumnos, para que puedan integrarse en estas cadenas de productividad.

La presente Guía de Prácticas le va a permitir al alumno de Biología, reconocer, diferenciar y determinar enfermedades abióticas y bióticas que se presentan en las diferentes plantas de nuestra región, a través de una serie de Técnicas Fitopatológicas, Así mismo, le permitirá familiarizarse con algunos métodos de muestreo y evaluación para los diferentes problemas fitosanitarios. Y, conscientes de que debe mantenerse el medio ambiente, le muestra cómo determinar el momento oportuno y la cantidad adecuada de un producto químico que controle eficazmente un patógeno, la importancia que representa utilizar eficientemente un control biológico, y cómo demostrar su eficiencia.

Esperamos que estos conocimientos y habilidades que pueda adquirir el alumno a través del trabajo llevado a cabo en laboratorio y complementado con campo, le permitan emprender trabajos de investigación dentro de esta especialidad .

Miriam Angela Delgado Manrique Guido Emilio Zumarán Martínez

Guía de Prácticas Fitopatología-Biología-UNSA

INDICE

Práctica Pág.

Técnicas y métodos de lavado, esterilización y asepsia en fitopatología 3

Colección, preparación y envío de material vegetal para la determinación 5 de enfermedades

Síntomas 8

Signos

Diagnóstico de enfermedades 13

Determinación de Bacterias Fitopatógenas 17

Determinación de Virus Fitopatógenos 19 Hongos Fitopatógenos 20

Morfología de Nemátodos Fitoparásitos 21

Enfermedades abióticas 22 Evaluación de enfermedades 23 Control Biológico 25

Control Químico 26 Literatura citada 30

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PRACTICA N° 1

TECNICAS Y METODOS DE LAVADO, ESTERILIZACION Y ASEPSIA EN FITOPATOLOGIA

INTRODUCCION

El estudio de las enfermedades de plantas requiere de técnicas y métodos adecuados que nos permitan diagnosticarlas. Sin embargo, la falta de publicaciones, o si es que las hay están dadas para otras realidades culturales, dificultan el desarrollo de esta materia. Es por esta razón que ha continuación exponemos las técnicas básicas utilizadas en cualquier laboratorio fitopatológico.

OBJETIVOS:

- Conocer las formas de preparar el material de vidrio para esterilizar. - Conocer el funcionamiento adecuado de los aparatos empleados en la esterilización. - Familiarizar al alumno con la preparación y esterilización de medios de cultivo.

Materiales : 1. Alcohol 6. Mecheros. 2. Algodón 7. Morteros 3. Autoclave 8. Pipetas 4. Embudos 9. Tubos de ensayo 5. Erlenmeyers 10. Varillas de vidrio

Lavado

El lavado de la cristalería es muy importante para no alterar los resultados que conlleven a una diagnósis. Lo ideal es el uso de una solución limpiadora normal o fuerte la cual debe usarse con mucha cautela y tener mucho cuidado en su preparación (explosiva si no se siguen correctamente las indicaciones).

Mezcla sulfocrómica normal : Utilice 60 g de Bicromato de potasio, un litro de agua y 60 ml de ác Sulfúrico. Mezcle el Bicromato con el agua en un recipiente de vidrio, el cual estará dentro de una cubeta de agua fría, lentamente agregue el ác. Sulfúrico y agite la solución. Coloque en esta solución material de vidrio como tubos de ensayo, pipetas, varillas de vidrio, etc. Esta solución puede usarse repetidamente hasta que su acción queda anulada.

Esterilización

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Es el medio de eliminar por muerte o separación todo organismo viviente de un material, siendo lo más común el uso de calor seco de la estufa eléctrica, donde comúnmente se esterilizan las placas Petri, frascos, etc. Las temperaturas de 160 a 180ºC por 90 a 120 minutos son eficaces si se deja espacio suficiente para que circule el aire caliente alrededor de todos los materiales.

Puede utilizarse también autoclaves que son esterilizadores a presión de vapor de agua, el modelo más simple es parecido a una olla de presión pero que consta de un manómetro y una válvula de seguridad. El agua destilada se coloca en el fondo hasta un nivel inferior al soporte de la base, sobre el que se coloca una olla en el interior, dentro de la cual se insertan las vasijas que se van a esterilizar. La fuente de calor, que puede ser una hornilla a gas o eléctrica, regula la presión.

Asepsia

Es la aplicación de un conjunto de procedimientos para eliminar o reducir la contaminación por microorganismos, especialmente aquellos propágulos que provienen del aire, material vegetal a diagnosticar, manos o ropas del que realiza la tarea, y de aquellos que puedan transportar o diseminar los ácaros, insectos, etc., sin el empleo de antisépticos. Así debe trabajarse sobre una mesa cubierta con un vidrio , escoger el sitio donde menor sea la corriente de aire y la circulación de personas, limpiar la mesa con una gasa empapada en alcohol etílico al 70% o hipoclorito de sodio al 1%, y con uno o dos mecheros de alcohol encendidos.

El material vegetal, antes de ser desinfectado, debe ser lavado en agua potable corriente cuando esté muy sucio. De igual forma, los bisturís, pinzas, agujas de disección, etc., deben colocarse periódicamente en alcohol al 70% en las zonas que hacen contacto con los tejidos y flamearlos en los mecheros.

Medios de cultivo

Es una sustancia o solución que permite el crecimiento de uno o más organismos. Los medios de cultivo pueden ser sólidos o líquidos. Siendo el más conocido dentro de los sólidos el agar-agua (A-A) y el potato-dextrosa-agar (PDA).

Medio PDA :

Se utilizan 250 g de papa, que se hacen hervir en 500 ml de agua destilada por 30 minutos, aparte derrita 15 g de agar en 500 ml de agua destilada. Filtre el caldo de papa. Mezcle las dos preparaciones, agregue y disuelva 10 g de dextrosa, complete todo preparado a un litro adicionando agua destilada. Distribuya y esterilice el preparado.

Medio AA : Disolver 15 g de agar en un litro de agua destilada. Distribuir en cada placa y esterilizar.

Resultados:

El alumno deberá seguir exactamente las indicaciones del profesor para desarrollar esta práctica, y presentará un informe acompañado de gráficos o fotografías indicando los pasos que

siguió.PRÁCTICA N° 2

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COLECCIÓN, PREPARACION Y ENVIO DE MATERIAL VEGETAL PARA LA DETERMINACION DE ENFERMEDADES

INTRODUCCIÓN

Es muy importante realizar una selección cuidadosa de las plantas que van a servir para diagnosticar enfermedades, ya que de las condiciones en que llegue a un laboratorio de diagnósis dependerá el éxito o fracaso en su determinación. A continuación se ofrece una serie de pautas y recomendaciones útiles para agricultores, técnicos o estudiantes que se preocupen o inicien estudios, respectivamente, en este tópico.

OBJETIVOS:

- Usar adecuadamente los métodos de colección y preparación del material vegetal enfermo para diagnosis en laboratorio.

- Conocer las condiciones de remisión de una muestra fitopatológica / o nematológica. PROCEDIMIENTO :

El alumno deberá coleccionar material de acuerdo a los conceptos brindados en esta guía para la presentación de un herbario fitopatológico.

I. COLECCIÓN DEL MATERIAL PARA DIAGNOSIS DE ENFERMEDADES

Para que una muestra sea útil , es necesario tener en cuenta:

a ) Que la muestra sea bien elegida. b ) Que llegue en perfectas condiciones. c ) Que esté acompañada de datos adecuados.

1. ELECCION DE LA MUESTRA. Una buena elección de material enfermo, depende de:

a) Cantidad : poca cantidad de material bien seleccionado, es mejor que una gran cantidad tomada al azar.

b) Claridad: los síntomas deben ser tan claros como sea posible encontrarlos. c) Fases de la enfermedad : colectar varias fases de la enfermedad es de gran ayuda,

pues esto permite observar más o menos el desarrollo de la enfermedad, es deseable incluir material sano, para compararlo con el material enfermo.

2. COLECCIÓN DEL MATERIAL

A. Plantas que muestran marchitamiento, amarillamiento o decaimiento general: a) Enviar plantas completas mostrando síntomas iniciales, incluyendo raíces o partes de

ellas.

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b)Desenterrar cuidadosamente la planta, no arrancarla. c) Enviar muestras del suelo circundante a la zona radicular en bolsa sellada para evitar

pérdida de humedad.

B. Cancros: a) Seleccionar especímenes de infección reciente. b) Enviar entera la porción cancrosa, con algo de madera sana por encima y por debajo

del cancro. Ramas y ramitas que hayan estado muertas por algunos meses, son inútiles para la identificación o diagnosis.

C. Manchas foliares y Pústulas: a) Colecte hojas mostrando estadíos tempranos y tardíos de infección. b) Es generalmente imposible diagnosticar hojas que muestren quemaduras marginales

porque ellas pueden deberse a condiciones abióticas, enfermedades radiculares o productos químicos.

c) Remita las hojas disponiéndolas entre papel periódico u otro material absorbente como papel secante.

D. Organos frescos (carnosos) : a) Las podredumbres de frutos frescos delicados y verduras (tomate, cebollas, fresas,

etc.), necesitan una atención especial. No se deben enviar estos en estado avanzado de descomposición.

b) Escoja especímenes frescos mostrando síntomas iniciales. c) Envolver individualmente en hojas de papel y acondicionar inmediatamente en caja de

cartón resistente entre aserrín bien seco. No se debe agregar humedad extra, procurando guardarlos en frío hasta su envío.

d) Tener en cuenta que el almacenamiento de material suculento en forma desordenada, trae consigo pudriciones que hacen difícil o imposible la diagnosis.

II. CONDICIONES DE REMISION

Para que una muestra llegue en buenas condiciones la remisión de esta a cualquier centro de estudio o diagnosis debe ser lo más rápido posible y en envase más o menos hermético y si es posible en refrigeración, a fin de evitar que los ejemplares lleguen secos o en estado de descomposición.

1. EMBALAJE, DESPACHO Y DESTINO DE ESPECIMENES

a) Envuelva el paquete en papel fuerte. Tenga cuidado de no apiñar o apretar las plantas. b) Embalar en una caja fuerte para prevenir el aplastado o machacado de las plantas durante

el tránsito. c) Identificar los paquetes con etiquetas externas e internas; no ponga la etiqueta interna en

contacto con la humedad. d) Despache los paquetes de modo que lleguen en días laborables y el tiempo más corto.

III. INFORMACION QUE DEBE ACOMPAÑAR A LA MUESTRA

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Las muestras deben estar acompañadas de datos e información adecuada. De esta manera se facilita la diagnósis ya que la sintomatología se podrá relacionar con los mismos.

Se deberán acompañar entre otros los siguientes datos:

1. Lugar 2. Fecha de colección 3. Hospedero (variedad, clon, etc.). 4. Sintomatología observada 5. Condiciones de clima. 6. Otros datos: aplicaciones de fungicidas, herbicidas, insecticidas, abonos, secuencia de

cultivos, etc. 7. Importancia: tratar de efectuar una apreciación de la intensidad de ataque (referida a

porcentaje) y de la diseminación de la enfermedad.

IV. COLECCIÓN Y REMISION DE MUESTRAS PARA ANALISIS NEMATOLOGICO

Los fitonemátodos pueden ser hallados en el suelo o dentro del hospedante, por lo tanto para efectuar el diagnóstico es necesario tener en cuenta ciertas consideraciones para la elección y remisión de muestras.

1. Elección y Colección de muestra: - Eliminar los primeros cinco centímetros de la superficie del suelo. - Colectar porciones de tierra o planta, tomados al azar dentro de 1 Ha, hasta completar un

Kg. - La profundidad de muestreo es hasta la capa arable, es decir que la muestra debe ser

tomada hasta 20 – 30 cm a partir de la superficie del suelo. - La colección de la muestra puede ser tomada de un terreno sin cultivo o en cualquier época

de desarrollo de la planta en un terreno cultivado. - Para la colección de plantas se extrae aquellas que se sospecha estén atacadas por

nematodos (plantas poco desarrolladas, deformes, marchitas, etc.).

2. Condiciones de Remisión : - El material muestreado será colocado dentro de una bolsa plástica, así mismo, se incluye

una etiqueta conteniendo la información necesaria. - La bolsa con el material colectado debe ser sellado y colocado dentro de otra bolsa, se

colocará otra etiqueta, con los mismos datos que en la anterior. - Colocar las muestras en forma ordenada en una caja . Evite el calentamiento y resecado de

las muestras. - Despache el paquete de modo que llegue en días laborables y lo más pronto posible. Si no

puede enviarlos inmediatamente guarde las muestras de suelo en refrigeración a 4 – 6 °C, hasta el momento del envío.

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PRÁCTICAS N° 3 Y 4

SÍNTOMAS Y SIGNOS

INTRODUCCIÓN

Los síntomas, son manifestaciones de la planta enferma en forma conspicua, los cuales pueden ser detectados a través de la vista, tacto , olfato, etc. Cada enfermedad es expresada a través de una variedad de síntomas, los que pueden combinarse para formar síntomas complejos. Mientras que signo, es la presencia misma del patógeno ocasionando una enfermedad, se presenta bajo la forma de una estructura vegetativa, de reproducción o de conservación.

OBJETIVOS:

-Reconocer y clasificar los diferentes tipos de síntomas que se presentan en las plantas enfermas, de acuerdo a las definiciones que se presentan en ésta guía.

-Identificar y clasificar los diferentes signos que presentan las plantas enfermas, de acuerdo a las definiciones que se presentan en esta guía.

MATERIALES -Material herborizado. - Microscopio estereoscopio -Material fresco

PROCEDIMIENTO:

Clasifique los síntomas de acuerdo a las definiciones que a continuación se presentan.

DEFINICIONES:

A) Síntomas: Los síntomas pueden clasificarse de acuerdo a los siguientes criterios:

I. De acuerdo a su distribución en el hospedante: a) Generales: Comprometen en forma total a la planta. Ej.: Enanismo, marchitez, etc. b) Locales: Se manifiestan en forma de cambios estructurales y/o fisiológicos de un área

limitada del tejido del hospedante. Ej.: Agallas, cancros, manchas, etc..

II. De acuerdo al modo de acción del patógeno: a) Síntomas Primarios: Son el resultado de la acción directa del patógeno sobre el tejido

invadido. Ej.: Acción necrótica de un patógeno radicular. b) Síntomas Secundarios: Son el resultado de efectos fisiológicos originados por el

patógeno en órganos distantes y no invadidos por él. Ej.: Marchitez originada por la necrosis del sistema radicular.

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III. De acuerdo a su tamaño: a) Síntomas microscópicos: Alteraciones que sólo son posible estudiarlas mediante el

uso de técnicas histológicas y con ayuda del microscopio. b) Síntomas macroscópicos: Síntomas que se pueden observar a simple vista y que se

desarrollan en toda la planta o parte de ella. Estos se subdividen en : Prenecróticos, necróticos, atróficos, hipertróficos y complejos o especiales.

Síntomas Prenecróticos: Síntomas que preceden a la muerte del tejido.

1. Amarillamiento: Pérdida del color verde normal, debido a la desorganización protoplasmática que precede a la muerte de los tejidos. Ej.: manchas amarillentas de los mildius.

2. Enrojecimiento: Areas de color rojo o marrón rojizo, que preceden a la necrosis, o bordes de igual coloración que preceden al avance de una necrosis central. Ej.: Sigatoka del plátano.

3. Marchitez: Pérdida de turgencia de las hojas y brotes debido, generalmente a patógenos que afectan el tejido vascular o radicular.

Síntomas Necróticos : Síntomas caracterizados por la muerte de tejidos. 1. Cancros: Lesiones hundidas, de borde generalmente suberificado, que se presenta

en el tejido cortical y adyacente de ramas, tubérculos, raíces y frutos. 2. Chupadera: Lesiones hundidas de color marrón rojizo ubicadas a la altura del

cuello de plántulas, produciendo a menudo el tumbado de las mismas. 3. Muerte regresiva: Necrosis descendente que se inicia en la parte apical de ramas,

ramillas y hojas. 4. Momificación: Deshidratación de los tejidos muertos de órganos carnosos que no es

seguida por ataque de organismos secundarios. 5. Abolladuras: Muerte de tejidos suculentos justo debajo de la epidermis de frutos,

tubérculos u órganos similares, dando como resultado depresiones en su superficie. 6. Pudrición: Condición de desintegración de los tejidos. La pudrición puede ser seca

o húmeda. 7. Escaldaduras: Lesiones necróticas a manera de ampollas en los que el tejido se

muestra generalmente hundido y la epidermis levantada. Son de color blanquecino y se presentan con frecuencia en tejidos delicados de frutos y hojas.

8. Mancha necrótica: Area de tejido necrótico de forma, color y tamaño variable, presentes más comúnmente en hojas. Cuando son limitadas por nervaduras se llaman manchas necróticas angulares.

9. Quemaduras: Manchas necróticas que abarcan áreas más o menos extensas y que son causadas por agentes físicos o químicos. En la mayoría de los casos, abarcan el ápice y los bordes de las hojas.

10. Perforación: Son agujeros que se producen en las hojas como consecuencia del desprendimiento del tejido muerto de las manchas necróticas.

11. Estría necrótica : Manchas necróticas dispuestas en líneas paralelas. 12. Pústula: Protuberancia en forma de ampolla que rompe la epidermis dada la presión

ejercida por el desarrollo de algunos hongos uredinales .

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Síntomas Atróficos: Aquellos que se caracterizan por presentar subdesarrollo de órganos o de un carácter como lo es la subproducción de clorofila.

A. Subproducción de clorofila: Es la falta del color verde normal de los órganos, esta deficiencia toma el nombre genérico de clorosis, pudiendo variar del color verde claro al amarillo y algunas veces blanquecino.

1. Aclareo : Cuando la clorosis se encuentra ubicada entre las nervaduras. 2. Estrías cloróticas : Forma de aclareo en hojas de gramíneas, en donde la

clorosis se presenta en forma longitudinal y paralela a las nervaduras. 3. Mosaico : Manchas cloróticas irregulares distribuidas desunifórmemente en el

área foliar que alternan con el verde normal de la hoja. 4. Amarillamiento : Cuando la clorosis afecta grandes áreas del limbo o afecta

toda la hoja. 5. Aclareo de nervaduras : La clorosis se presenta sólo en las nervaduras. 6. Anillo clorótico : Cuando la clorosis se presenta en forma anular. 7. Mancha clorótica : Cuando la clorosis se presenta en forma de manchas más o

menos circulares.

B. Subdesarrollo de órganos : 1. Enanismo : Falta de desarrollo. Toda la planta o parte de ella no alcanza el

tamaño normal de la especie. 2. Arrosetamiento : Es la disposición de tallos y hojas dando el aspecto de una

roseta, como consecuencia del acortamiento de los entrenudos. 3. Aborto : Caída de flores y frutos en formación. 4. Defoliación : Caída de hojas. No hay que confundir este síntoma con la

característica normal de ciertas plantas caducifolias.

Síntomas Hipertróficos : Se caracterizan por un desarrollo excesivo de tejidos orgánicos y pueden presentarse en la forma de :

1. Encrespamiento : El limbo presenta una conformación arrugada debido a que las células del parénquima de la hoja se hipertrofian, pero las nervaduras conservan su conformación normal.

2. Abarquillamiento : Es lo contrario del caso anterior, el parénquima del limbo crece a ritmo más o menos normal, no así las nervaduras lo que da lugar a que se doblen hacia arriba tomando como base la nervadura central.

3. Escoba de brujas : Es la proliferación anormal de raíces, tallos o pedúnculos florales.

4. Sarna : Son lesiones más o menos circulares, o ligeramente levantadas, resquebrajadas o corchosas, se presentan en la superficie de los frutos, hojas, tallos, tubérculos y raíces.

5. Callo : Tejido de cicatrización generalmente suberificado que se forma al borde de un cancro o herida.

6. Tumor: (Agallas, verrugas, nódulos) Son hinchazones o abultamientos debido a la proliferación y/o aumento del tamaño de las células que conforman los tejidos.

7. Frondescencia : Transformación más o menos completa de las piezas de los verticilos florales, en órganos verdes de estructura y aspecto foliáceo.

8. Fasciación : Anormalidad consistente en la unión de dos o más tallos o pedúnculos los que se sueldan en toda su longitud.

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Síntomas Especiales o Complejos : Cuando debido a su naturaleza no se les puede ubicar dentro de los síntomas prenecróticos , necróticos , atróficos o hiperplásicos ya sea por no estar dentro de uno de ellos o por participar de varios de éstos síntomas.

1. Exudación : Secreción de gomas, resinas o látex por causas parasitarias o no parasitarias. Cuando en el líquido exudado se encuentra el patógeno en suspención constituye un signo

2. Tubérculos aéreos : Producción de tubérculos en la parte aérea debido generalmente a una lesión o estrangulamiento a la altura del cuello, lo que dificulta o impide la translocación de sustancias de reserva a los órganos de almacenamiento que son los tubérculos.

3. Deformación de órganos : Alteración de la forma normal de un órgano y se produce cuando hay la participación simultánea de varios síntomas de un mismo órgano.

4. Antocianescencia ( Cromosis): Coloración anormal violácea o rojiza oscura de órganos tal como hojas y otros, debido a la producción anómala de pigmento antociánico.

5. Enrollamiento : Cuando la hoja teniendo como eje longitudinal la nervadura principal adopta la forma más o menos cilíndrica.

6. Virescencia (Verdeamiento) : Es el desarrollo de color verde en órganos en los que normalmente no se sintetiza la clorofila. Ej. Pétalos, tubérculos de papa, y otros.

7. Descortezamiento : Levantamiento, cuarteamiento y desprendimiento del tejido cortical de troncos y ramas.

B) Signos:

El signo de una enfermedad lo constituye el patógeno causante de la misma, el que puede estar presente en una de las diversas formas que a continuación se enumera :

a) Micelio, estructura vegetativa propia de los hongos. Tiene apariencia algodonosa o en forma de tela de araña y está formada por una serie de filamentos de color blanquecino, plomizo o marrón.

b) Exudaciones, están conformadas por secreciones de la misma planta en la forma de cera o goma y que generalmente se encuentra entremezclada con estructuras propagativas de los hongos (esporas). En el caso de enfermedades provocadas por bacterias las exudaciones son de apariencia cerosa, esta especie de cera posee gran cantidad de células bacterianas.

c) Rhizomorfos, son estructuras de conservación de los hongos en forma de cordones y están formados por hifas paralelas soldadas entre sí, longitudinalmente.

d) Esclerotes, estructuras de conservación de los hongos, tienen forma redondeada o achatada, de consistencia dura, de color negro o marrón y están formadas por hifas cortas frecuentemente soldadas entre sí.

e) Esporas y conidias, son estructuras reproductivas y propagativas que generalmente forman agrupaciones o fructificaciones que tienen características especiales, por ejemplo:

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Las royas presentan comp signo estructuras denominadas pústulas que contienen gran cantidad de esporas y que pueden ser de color amarillo, rojizo-anaranjado o marrón oscuro. Son propias de hongos Uredinales y se les encuentra principalmente sobre hojas y tallos.

El signo de los carbones es una masa pulverulenta de color marrón o negruzco, constituído por masas de esporas y micelio de hongos Ustilaginales. Generalmente el signo se ubica en los órganos de reserva de las plantas, granos de cereales, reeplazando al almidón.

Los mildiús, se manifiestan en la cara inferior de las hojas y tallos en forma de una

pelusilla aterciopelada de color blanco, plomizo o violáceo. Esta pelusilla está constituída por esporangióforos y esporangios de hongos Peronosporales.

El signo del oidium, es una especie de polvillo blanco grisáceo constituído por micelio, oidióforos y oidias de hongos Erysiphales. Se le encuentra en cualquier parte aérea de las plantas y puede hacerse presente en ambas caras de las hojas.

La fumagina presenta como signo una especie de costra de color marrón oscura o negra. Esta costra está constituída por micelio y esporas de hongos de los géneros Capnodium y Fumago, que recubren tallos, hojas, peciolos, pétalos y frutos de plantas que han sido previamente parasitados por áfidos o queresas, porque el hongo en su condición de epífito rara vez vive a expensas de la planta misma y más bien utiliza las secreciones azucaradas de los insectos antes mencionados.

El signo conocido como moho está formado por masas de esporas y micelio de hongos de los Géneros Aspergillus, Penicillium, Rhizopus y Mucor que comprometen especialmente frutos suculentos o secos. El signo se distribuye en forma circular con una coloración azul, verde, o marrón de acuerdo al organismo causante.

Resultados:

El alumno deberá seguir exactamente las indicaciones del profesor para desarrollar esta

práctica, y presentará un informe acompañado de gráficos o fotografías.

PRACTICA N°5

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DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES

INTRODUCCION

El diagnóstico de una enfermedad en plantas resulta más complicado que en el caso de daño por insectos, ya que el conocimiento de una enfermedad está determinado por una serie de síntomas, es por esta razón que se requiere seguir los siguientes pasos: Observación de síntomas, determinación de las circunstancias particulares en que se da el caso ( clima, historial de cultivos, relieve del terreno aplicación de productos químicos), observación de signos y correlación de lo observado con la bibliografía.

OBJETIVOS

- Familiarizar al alumno con técnicas que le permitan diagnosticar una enfermedad . - Utilizar los métodos adecuados de acuerdo a la sintomatología presente.

MATERIALES

- Plantas enfermas con diferentes síntomas. - Hipoclorito de sodio al 0,5 y 1% - Equipo de disección - Azul de metileno al 0,1% - Cámaras de humedad - Mecheros - Alcohol al 70%

PROCEDIMIENTO

El alumno deberá realizar una descripción de los síntomas que observa en su muestra, para poder determinar el tipo de método que utilizará para realizar su diagnosis en laboratorio.

Clave para diagnosis

A1 Manchas y cancros

B1 Señas de patógenos visibles con microscopio estereoscópico. C1 Señas de hongo: realizar preparaciones microscópicas de las estructuras, tinción .............I C2 Señas de bacterias (exudado o manchas húmedas): realizar preparación para observar flujo bacteriano en campo oscuro, luego hacer tinción de Gram rápida............. II B2 Ausencia de señas de patógeno. C1 Incubar la muestra en cámara húmeda y luego regresar a A1.............................................III C2 Mosaicos, encarrujamientos u otros posibles síntomas viróticos (Práctica 7). C3 Decoloraciones y otros síntomas de mal nutrición (Práctica 9). A2 Marchitez

B1 Sistema radicular afectado. C1 Presencia de nematodos o sus síntomas : Consultar Bibliografía. C2 Pudrición radicular, tratar como A1.

B2 Sistema vascular descolorido C1 Prueba de flujo bacteriano en agua, luego tinción de Gram rápido................................. IV

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C2 Ausencia de flujo, realizar cortes para observar hongos...................................................I

A3 Pudriciones

B1 Tallo o raíz, tratar como A1. B2 Organos de reserva (tubérculos, raíces) C1 Realizar preparación microscópica y observar con tinción para hongos........................I C2 Observar preparación en campo oscuro para observar bacterias, luego tinción de Gram rápida...........................................................................................................II C3 Inocular tejidos sanos con los afectados cuando la pudrición es avanzada , luego observar como en C1 y C2................................................................................IV

I. Tinción y preparación microscópica de hongos:

1. Observe las estructuras fungosas con el estereoscopio. 2. Extraiga las estructuras mediante raspajes con su bisturí o aguja de disección. Realice

cortes del tejido con bisturí u hoja de afeitar, lo más fino posible, o mejor utilice micrótomo.

3. Coloque la muestra extraída sobre un porta objeto muy limpio conteniendo una gota de agua o lactofenol, cubra con una laminilla tratando de no formar burbujas.

4. Observe la preparación a través de microscopio, si las estructuras fungosas son hialinas y difícil de observar proceda a la tinción con colorantes como azul de metileno, eosina al 1% o fucsina ácida en ácido láctico. Ayude al teñido, flameando el porta objeto en el mechero.

5. Para el montaje temporal, semi-permanente y permanente utilice lactofenol, glicerina-gelatina, o el hidrato de cloral con goma arábiga. Evite la formación de burbujas.

6. Selle los montajes usando esmalte de uñas, previamente debe eliminar el exceso de líquido alrededor del cubre objeto.

7. Identifique cada montaje colocando una etiqueta con los siguientes datos:

N° ............................

Especie ............................ Cultivo ........................... Fecha ............................

II. Observación de flujo bacteriano

Si bacterias están provocando manchas en hojas , deben observarse por medio de un corte en forma de banda de unos 2-5 mm de ancho, a través de la parte activa de la lesión. Se monta en agua para observar al microscopio de campo oscuro, con aumentos de alrededor de 100x. Se constata que el flujo es bacteriano por tinción y observación a gran aumento.

Si la bacteria está atacando los haces vasculares puede diagnosticarse en un tallo o raíz con marchitez no muy avanzada. Corte un trozo de 1-2 cm de largo, suspéndase éste en posición horizontal y sumérjase en la parte superior de un tubo de ensayo, una probeta o vaso con agua. Inmediatamente o después de unos 5 o 10 minutos, comienza a fluir un hilo de bacterias de uno o más vasos conductores del sistema vascular que desciende dentro del agua

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y se disipa en una nube lechosa. La tinción y observación microscópica son esenciales para la comprobación.

Las pudriciones de frutos carnosos por bacterias, se pueden observar montando un trozo de tejido afectado en una gota de agua, agite el tejido, retírelo y observe la gota en microscopio a campo oscuro, y luego por tinción a 100X.

Tinción para bacterias: Tinción Gram rápida

1. Prepare una suspensión bacteriana no concentrada 2. Coloque una gota e la suspensión en un porta objeto. Utilizando otro porta objeto esparza

la gota. El frotis debe quedar lo más homogéneo posible. Dejar secar.

3. Teñir el frotis de la manera usual para las coloraciones gram+ : utilizando violeta cristal,

bicarbonato de sodio, yodo, alcohol, acetona y fucsina básica en solución saturada en

95% de alcohol , o gram- : con Rojo de congo al 2% y alcohol acidificado (ácido ClH en

alcohol etílico al 95%). 4. Colocar sobre el frotis una gota de aceite de inmersión y observar al microscopio con el

mayor aumento. Las bacterias se tiñen de azul si son Gram+ y de rosado si son Gram

-.

III. Cámara húmeda

Como su nombre lo indica tiene la función de dar condiciones favorables de humedad para el desarrollo rápido de hongos o bacterias que puedan estar ocasionando síntomas de una enfermedad, pero cuya manifestación no es conspicua en la primera observación.

Puede utilizarse placas de Petri, que permiten un grado de aireación adecuada para la respiración, pero que reducen la probabilidad de contaminación. Puede usarse también cámaras de germinación de semillas con tapas transparentes, bandejas de plástico con tapa, cajas de plástico para especímenes “desecadores” de vidrio, cajas de uso en repostería, y hasta bolsas de polietileno.

Lo esencial es mantener separado el material vegetal del agua, ya sea a través de papel toalla, separados por una rejilla de metal, de vidrio o de plástico estériles. El material de la cámara debe ser resistente a esterilización ya sea física o química.

El material enfermo debe estar lo más limpio posible, desinfestado por sumersión en hipoclorito de sodio al 0,5% (Clorox al 10% aproximadamente) por dos minutos. No es necesario enjuagar con agua , pero de hacerlo se usa agua estéril. Introduzca el material vegetal por métodos asépticos.

IV. Inoculación de tejidos sanos con material enfermo Se realiza cuando la descomposición del tejido enfermo es muy avanzada y ya no es posible

aislar al patógeno, en estos caso puede inocularse órganos de plantas sanas con porciones de tejido afectado, y luego hacer los aislamientos a partir de éstos.

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Por ejemplo puede inocularse una suspensión de bacterias obtenidas del tejido de una planta de papa o cualquier solanácea que presente síntomas avanzados de marchitez bacteriana, se inocula en la axila de una hoja bien formada pero tierna (nueva) de una planta de tomate suceptible, de unos 15-25 cm de altura, poniéndole una gota de suspención y punzándola a través de ella con una aguja de disección, tijera o algo similar, para introducirla hasta el sistema vascular del tallo. Mantaner las plantas alrededor de 30°C hasta que se marchiten (unos 5-10 días). Luego se siguen los pasos del diagnostico de bacterias. No se olvide “inocular” testigos con agua.

Resultados: El alumno durante el proceso de diagnosticar, deberá consultar literatura adecuada que le

permita respaldar sus opiniones. Esquematizará o fotografiará y rotulará las estructuras correspondientes, para presentar su informe correspondiente.

Práctica N° 6

Determinación de Bacterias Fitopatógenas: Uso de Pruebas Biológicas

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Muchas veces podemos reconocer plantas afectadas por bacterias por los síntomas específicos que presentan: manchas foliares (tizones, cancros), agallas, marchites, necrosis vasculares, y podredumbres blandas. Pero, muchas veces por la naturaleza misma de la acción bacteriana encontramos plantas en estado de descomposición, ¿Cómo recuperamos a la bacteria causante del daño? La opción es recurrir a inocularlas en tejidos de resreva adecuados, que permitan obtenerlas e identificarlas.

OBJETIVOS:

- Reconocer los principales síntomas que ocasionan las bacterias fitopatógenas en los principales cultivos de la región.

- Determinación de la Prueba de Gram.

- Conocer algunos métodos para su identificación: Pruebas biológicas

MATERIALES

- Material vegetal enfermo - Asa de siembra - Material herborizado - Cámaras de humedad - Microscopio - Papel toalla - Mechero de alcohol - Porta y cubreobjetos - Órganos suculentos sanos - Batería de Gram - Sacabocados - Pipetas - Medio de cultivo PDA

PROCEDIMIENTO (GRAM)

1. Preparar los frotis bacterianos, coger una muestra del flujo bacteriano sobre una gota de agua. 2. Teñir con cristal violeta 1min. 3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante. 4. Cubrir con Lugol 1min. 5. Lavar con agua el exceso de Lugol. 6. Decolorar con alcohol-acetona o solo alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30”) 7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. 8. Teñir con safranina 1min. 9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste. 10. Secar la preparación. 11. Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada preparación.

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Prueba Biológica:

De la planta con pudrición bacteriana avanzada, se toma una pequeña muestra del mucílago, esta porción se coloca en un trozo de papa o zanahoria bien lavadas, secas, y recién cortadas, se agrega una gota de agua destilada esteril para facilitar la movilización de la bacteria. Se coloca en una cámara de humedad, y se evalua después de las 48 horas hasta alcanzar los 7 días. Todo esto se realiza bajo condiciones de asepsia.

Resultados:

El alumno deberá presentar un informe documentado (Gráficos, fotografías, etc.) en el que indique los resultados obtenidos tanto en la tinción de Gram, como en la Prueba biológica.

Práctica N° 7

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Determinación de Virus Fitopatógenos: Uso de Plantas Indicadoras

Los síntomas como mosaicos, clorosis deformaciones foliares y enanismos son fácilmente reconocidos, pero no aseguran que corresponda al daño ocasionado por un virus fitopatógeno. Para el reconocimiento, es muy importante conocer al hospedante sano, determinar la presencia de áfidos o vectores de virus, y la utilización de plantas indicadoras. Esta última, es una de las técnicas más simple, menos costosa y bastante segura, para determinar virus en plantas.

OBJETIVOS:

- Reconocer los principales síntomas que ocasionan los virus fitopatógenas en los principales cultivos de la región.

- Aprender a realizar inoculaciones en plantas indicadoras y observar la manifestación de síntomas

- Conocer algunos métodos para su identificación: Pruebas biológicas

MATERIALES

- Semilla botánica (Quenopodáceas, Solanáceas, etc.) - Suelo preparado - Almacigueras con turba - Plantas o partes de plantas

virósicas - Macetas de 1 Kg de capacidad - Agua destilada - Papel toalla - Jabón desinfectante - Morteros y pistilos - Cámara digital - Carborundum - Hisopos

PROCEDIMIENTO:

Los alumnos que manipulen deberán lavarse las manos antes de cada experimento con abundante agua y jabón desinfectante

1. Preparar las almacigueras una semana antes con las semillas botánicas de plantas indicadoras. 2. Transplantarlas en las macetas con suelo preparado 3. Las muestras virósicas, bien lavadas, trituraralas en el mortero con un poco de agua destilada 4. Frotar las hojas verdaderas de la planta indicadora con carborundum 5. Mojar el hisopo en la savia obtenida, y frotarlo suavemente en las hojas con carborundum 6. Rotular adecuadamente cada maceta. 7. Observar y anotar los síntomas locales y sistémicos, a partir de las 24 horas.

Resultados:

El alumno deberá presentar un informe documentado (Gráficos, fotografías, etc.) en el que indique los resultados obtenidos.

PRACTICA N° 8

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HONGOS FITOPATOGENOS

INTRODUCCION

La mayor parte de enfermedades que se conocen sobre plantas cultivadas están provocadas por hongos, una especie puede atacar a muchas especies de una familia de vegetales superiores, o varias especies pueden estar afectando a un solo hospedante, haciendo mucho más difícil su diagnóstico y control. Los diferentes grupos de hongos fitopatógenos pueden caracterizarse por los síntomas o signos que ocasionan en algunos hospedantes.

OBJETIVOS:

- Reconocer la sintomatología de las principales enfermedades fungosas de nuestra región. - Diferenciar por la sintomatología los diferentes grupos de hongos fitopatógenos.

MATERIALES DE LABORATORIO:

-Muestras herborizadas -Muestras frescas -Montajes permanentes -Microscopio estereoscopio

Resultados:

El alumno deberá presentar un informe documentado (Gráficos, fotografías, etc.) en el que indique las muestras y colocar el nombre del hospedante, el/o los síntomas que observe y el agente causal que podrá observar al microscopio.

PRACTICA N° 9

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MORFOLOGIA DE NEMATODOS FITOPARASITOS

INTRODUCCION

Los nematodos tienen gran importancia en la agricultura por causar pérdidas cuantiosas en diversos cultivos. Para poder observarlos se hace necesario aplicación de técnicas especializadas de extracción a través de tejido vegetal o de suelo. Bajo estereo-microscopio lo primero que se observa es la motilidad que, como norma general en nematodos fitoparásitos, puede decirse es más lento que para los restantes grupos de nematodos de suelo, incluso algunos son prácticamente inmóviles; pero su determinación e identificación se realiza en base a las distintas características morfológicas que presentan los nematodos, y principalmente en lo que se refiere al sistema digestivo, como es la parte del estoma (tipos, presencia o ausencia de estilete) y esófago (tipos), que puede distinguirse a pequeños aumentos y sólo en algunos casos requiere de observación microscópica.

Al microscopio estereoscopio, los nematodos son delgados traslúcidos de forma ahusada. Según la especie y la edad, la hembra varía morfológicamente del macho, pero todos tienen una característica común que es la de presentar un estilete con el cual producen heridas en su hospedante.

OBJETIVOS

- Reconocer las diferentes formas que presentan los nematodos fitoparásitos . - Distinguir las diferentes estructuras que conforman los cuerpos de los nematodos.

MATERIALES DE LABORATORIO.

- Microscopio estereoscopio. - Estiletes - Microscopio. - Caza nematodos - Montajes - Porta objetos - Muestras frescas - Agua.

Resultados:

El alumno deberá presentar un informe documentado (Gráficos, fotografías, etc.) en el que indique las muestras y colocar el nombre del hospedante, el/o los síntomas que observe y el agente causal que podrá observar al microscopio.

PRACTICA N° 10

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ENFERMEDADES ABIOTICAS

INTRODUCCION

Las plantas frente a condiciones extremas de temperatura, humedad, luz, pH, contaminación atmósférica, toxicidad, inadecuado manejo de prácticas agrícolas, etc. manifiestan una serie de síntomas que indican la presencia de una enfermedad fisiológica o abiótica, no contagiosa, pero que puede dañar áreas grandes de tejido y ser visible en una determinada zona geográfica.

Los desordenes fisiológicos pueden manifestarse como quimeras, clorosis, etiolación, alargamiento de entrenudos, caída de flores, etc. en el caso de exceso o falta de luz. Cuando la humedad atmosférica se interrelaciona con altas temperaturas se produce marchitez, siendo las temperaturas muy altas causantes de quemaduras y ampolladuras y las temperaturas muy bajas las que originan formación de cristales de hielo tanto dentro de las células como entre los espacios intercelulares ocasionando el daño conocido como helada.

OBJETIVOS

- Que el alumno reconozca una enfermedad abiótica a través de sintomatología. - Que pueda comparar y diferenciarla de una enfermedad biótica

MATERIALES

- Plantas herborizadas - Muestras frescas - Proyector de slides - Microscopio estereoscopio

PROCEDIMIENTO

Los alumnos reconoceran, identificarán y graficarán los síntomas abióticos presentados en forma herborizada y fresca.

Así mismo observará en diapositivas los principales casos de enfermedades abióticas y los relacionará con aquellos que puedan presentarse en nuestra zona.

PRACTICA N° 11

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EVALUACION DE ENFERMEDADES

INTRODUCCION

El temor hacia las enfermedades de las plantas y la superstición sobre ellas están registradas, desde tiempos antiguos en la Biblia y en los clásicos griegos. Sin embargo, poco se ha hecho hasta la fecha para establecer rutinariamente las pérdidas resultantes de las enfermedades de plantas para ejecutar acciones de control en el grado requerido según la magnitud del problema. Así, la intensidad de un programa de control debe depender primero de la justificación económica, y el gasto no debe superar el valor del incremento resultante. Desafortunadamente, esto es lo que ocurre normalmente en nuestros campos de cultivo, en los que el uso exagerado de productos químicos conlleva a un alto costo , alta contaminación y no se ven compensados con alto rendimiento.

OBJETIVOS

- Que el alumno aprenda a manejar escalas de evaluación de enfermedades. - Que prepare escalas en porcentaje de las enfermedades más importantes en nuestro medio.

MATERIALES

- Material herborizado. - Bibliografía - Material fresco.

PROCEDIMIENTO

Escalas en porcentaje

Para que el alumno establezca una escala de grados de severidad de una enfermedad, esta deberá estimarse según el porcentaje de superficie afectada (sea superficie de hojas, tallos, raíces, tubérculos, frutos). Y acumular evidencia en formas preservadas, dibujos o fotografías de todos los grados de incidencia que ocurren. Determinar que parte de la planta y en que fecha o estado de crecimiento se deben tomar las muestras.

Con todas las muestras, fotografías o dibujos que representen el mayor número posible de grados de severidad observada se procede a preparar una escala que se acomode a los porcentajes escogidos. Se juzga cuales intervalos de esta escala serían útiles y se construye una escala para observaciones futuras. A continuación mostramos dos ejemplos de escalas :

Grado Descripción 0 Sana 1 Síntomas iniciales 2 Hasta el 10 % de área afectada 3 Del 11-25 % de área afectada 4 Del 26-50 % de área afectada 5 Más del 50 % del área afectada.

Grado Porcentaje de ataque

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0 Planta sana 1 25 %2 50 %3 75 %4 100 %

Métodos de muestreo

El muestreo consiste en la operación de acopio de muestras o datos, lo cual depende de la enfermedad , como del tipo de cultivo, los objetivos que se persigan y el área.

La metodología para calcular la cantidad y lugar de las muestras aún es objeto de estudio. Sin embargo, podemos considerar:

a) Area, configuración y relieve del campo. b) Tipo de cultivo. c) Órgano afectado por la enfermedad. d) Síntomas de la enfermedad e) Ciclo biológico, hábitos y biología del patógeno. f) Dispersión o diseminación del patógeno g) Tamaño de la planta.

h) Fenología del cultivo.

Una vez considerados estos aspectos, se recorre el campo evaluando al azar, no es un muestreo dirigido puede ser en zig-zag, formando una diagonal en el campo, etc., se aconseja el sistema de la “regla” donde se usa un regla o una vara se lanza y donde cae se muestrea. En el caso de árboles muestrear las plantas en forma individual, por niveles.

Para poder establecer normas se aconseja tomar 100 plantas (hojas, frutos, etc.) por campo, para observarlas como muestras y poder aplicar fórmulas que nos indiquen en que grado de enfermedad se encuentra el cultivo.

Cuando uno hace una evaluación usando cualquier escala, se realiza con el fín de calcular la intensidad de ataque (I.A.), y esto puede saberse utilizando la siguiente fórmula:

I.A. = de c/grado x N° de plantas x 100 N° de plantas evaluadas x Grado máximo de escala Resultados:

El alumno deberá presentar un informe documentado (Gráficos, fotografías, etc.) en el que esquematizará la escala de evaluación del cultivo que se le designe y encontrar el I.A.

PRACTICA N° 12

CONTROL BIOLOGICO

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INTRODUCCIÓN

El control biológico de los patógenos de plantas, se basa en que el mundo viviente es un sistema complejo en el cual todos los organismos luchan por su existencia, a menudo perjudicándose mutuamente. Este control puede ser biocida (cuando un organismo mata a otro), o biostático ( cuando un organismo inhibe al otro).

OBJETIVOS

- Conocer algunos métodos de aplicación de control biológico, - Interpretar el mecanismo de control que utiliza el agente biocontrolador MATERIALES - Placas con PDA+Trichoderma harzianum - Placas con PDA y hongos fitopatógenos - Placas con PDA - Parafilm - Marcadores - Mascarillas - Mecheros de alcohol

PROCEDIMIENTO Bajo condiciones de asepsia, se abrirán las placas conteniendo a los hongos fitopatógenos y a

Trichoderma harzianum . De cada una, se tomará una pequeña porción y se colocarán dentro de una placa conteniendo PDA, enfrentándolos a una distancia de +/- 1 cm en la parte central de la placa. Se evaluará después de 24 horas, hasta que la placa esté cubierta completamente.

RESULTADOS:

Los alumnos deberán esquematizar o fotografiar los pasos y procedimientos que realizaron durante la práctica, indicando el fitopatógeno y el biocontrolador que utilizaron.

PRACTICA N° 13

CONTROL QUIMICO

La aplicación de sustancias químicas para controlar enfermedades de plantas se conoce desde la antigüedad, pero oficialmente, desde 1934, cuando se reconocen las propiedades fungicidas de

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derivados del ácido ditiocarbámico. Las pruebas de laboratorio evaluarán si un determinado compuesto químico es eficiente para controlar o eliminar un patógeno de plantas y, son finalmente las que decidirán si el producto será recomendado para ser aplicado en campo.

OBJETIVOS - Que el alumno reconozca los principales equipos de aplicación de los productos químicos. - Que el alumno conozca las diferentes formulaciones de los productos químicos. - Que pueda determinar la dosis y aplicación de las diferentes formulaciones. - Evaluar la eficiencia de fungicidas en laboratorio

MATERIALES

- Productos químicos: fungicidas, nematicidas, fumigantes, en sus diferentes presentacione - Proyector - Mochila de aplicación - Placas con medio PDA con hongos fitopatógenos - Placas con medio PDA + fungicida - Placas con PDA PROCEDIMIENTO Los alumnos analizarán cada una de las carácterísticas que se dan en la presentación de los

productos químicos. Así por ejemplo, su dosis letal media (DL50), tipo de formulación, mecanismo de acción, aplicaciones recomendadas para un determinado grupo de patógenos, etc. Así mismo, realizarán una prueba en vacío (con agua) con la mochila de aplicación para poder determinar la cantidad adecuada de producto y de agua.

Para la prueba de laboratorio, los alumnos tomarán dos pequeñas porciones de las placas

conteniendo hongos fitopatógenos, una de ellas la colocarán en lacolocarán en la placa con PDA y la otra en la placa con PDA+fungicida. A partir de las 24 horas medirán coan ayuda de una regla el crecimiento del hongo, hasta que la placa testigo se haya llenado completamente.

Fecha A-B C-D Promedio

Resultados: Los alumnos presentarán un informe detallado (Esquemas, fotografías, etc.) de los diferentes

pesticidas químicos que observó, así como de los resultados que obtuvo en la prueba de laboratorio.

PROBLEMAS CON FUNGICIDAS

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1er CASO: Conocida la concentración de aplicación del ingrediente activo (i.a.), se desea conocer la concentración de aplicación del producto comercial (PC).

Ej.: Para el control de la ”Podredumbre blanca” Sclerotium cepivorum en el cultivo de ajo, se recomienda aplicar Benomil al 0.05 % de i.a. y se dispone de un P.C. BENLATE 50 PM. ¿A que concentración se debe utilizar el P.C. para aplicar dicha dosis de i.a. y que cantidad de P.C. se necesita para ½ hectárea?

% Riqueza Conc. Aplica.

100 __________ 0.05 % Regla de tres RAZONAMIENTO: Si el P.C. 50 __________ X simple inversa estuviera puro (100 %), se aplicaría a la dosis recomendada, pero como el P.C. está X = 100 x 0.05 % = 0.1 % menos concentrado (50 PM), se debe 50 aplicar más de éste.

0.1 Kg ________ 100 L X ________ 200 L

X = 0.2 Kg = 200 g/ cilindro

2do CASO: Conocida la concentración de aplicación de un P.C. se desea conocer la concentración de aplicación del i.a.

Ej.: Para controlar la “Podredumbre gris” Botrytis cinerea , un vinicultor suele aplicar SUMISCLEX 50 PM al 0.1 %. ¿ A que concentración de i.a. (Procymidone) se esta aplicando?

100 partes P.C. _______ 50 partes i.a. Regla de tres RAZONAMIENTO: Debido a que 0.1 % P.C. _______ X simple directa el P.C. está 50 % de riqueza, se esta aplicando menor cantidad de i.a.

0.1 % x 50 = 0.05 % i.a. de Procymidone 100

3er. CASO: Conocida la concentración de aplicación de un P.C. , se desea conocer la concentración de aplicación de otro P.C., sabiendo que ambos tienen el mismo i.a., pero diferente riqueza.

Ej.: La pudrición radicular provocada por Phytophthora capsici en Páprika se controla aplicando RIDOMIL MZ (Mancozeb+Metalaxil) 68 PM al 0.5 % . Sin embargo, se dispone de METARRANCH MZ (Mancozeb+Metalaxil) 58 PM ¿ A que concentración se debe utilizar el segundo para obtener la concentración del primero y cantidad de P.C. se necesita por 3 hectáreas?

Riqueza Conc. Aplic. Regla de tres simple RAZONAMIENTO: Como el P.C. 68 _________ 0.5 % inversa esta menos concentrado, entonces se

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58 _________ X debe aplicar a mayor dosis.

X = 68 x 0.5 % = 0.58 % METARRACH MZ 58 PM 58 0.58 ____________ 100 L X = 0.58 Kg x 200 L = 1. 16 Kg/ Cilindro X ____________ 200 L 100 L

1.16 Kg ________ 0.5 ha X = 1.16 Kg x 3 ha = 6.960 Kgs X ________ 3 ha 0.5 ha

4to. CASO: Conocida la concentración de aplicación de un i.a. se desea conocer la cantidad a emplear de un P.C. de riqueza definida.

Ej.: Para el control foliar del “Quemado y mancha carmelita” (Pyricularia oryzae y Helminthosporium oryzae) en arroz, se recomienda aplicar Tebuconazole (i.a.) al 0.05 ‰ ; pero se dispone de FOLICUR 250 FW (Tebuconazole) . ¿Cuántos litros de este P.C. se deben utilizar para preparar un cilindro de 200 L?

a) Calcular la concentración de aplicación del P.C. (1er. Caso):

1000 ___________ 0.05 % 250 ___________ X X= 1000 x 0.05 % = 0.2 % FOLICUR 250 FW

250 b) Calcular la cantidad de P.C. a utilizar por cilindro :

0.2 L P.C. __________ 100 L X __________ 200 L

X = 0.2 L X 200 L = 0.4 L = 400 ml FOLICUR /cilindro 100 L

PROBLEMAS:

1. Se quiere aplicar PROSPER (Spiroxamina) 500 EC al 0.125 % en un campo de 30 ha de pimiento del cv.: Jonas para el control de “Oidiopsis” (Laveilulla taurica), se dispone de un tractor que presenta un tanque de 300 l de capacidad y un aguilón de 12 boquillas. Cada boquilla tiene un ancho de aplicación de 0.5 m. Durante el proceso de calibrado se ha establecido que arroja una descarga de 400 l/ha . Si el tractor se desplaza a una velocidad de 6 km /hora, calcular:

a) La descarga, en l/min, que arroja cada boquillab) El tiempo que demorará en aplicar las 30 hac) La cantidad de P.C. empleado en cada llenado del tanqued) La cantidad total de P.C. a emplearse

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2. Para el control de enfemedades de la emergencia causadas por Rhizoctonia, Phytitum y Fusarium se recomienda aplicar a las semillas de frijol el Tolclofos metil + Thiram al 1 ppm de i.a. Si se dispone de RHIZOLEX-T 0.02 PW y si se tiene un volumen de 8 TM de semilla, calcular (1ppm=1g ó 1cc/TM):

a) La cantidad de P.C./TMb) La cantidad total de P.C. c) La cantidad total de i.a. a emplearse

LITERATURA CITADA

1. AGRIOS, G.N. 2001. Fitopatología. Edit. LIMUSA. Mexico. 530 pp.

2. AMES DE ICOCHEA, TERESA Y LEONOR MATTOS C. 1989. Prácticas de Fitopatología

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General. Univ. Nac.Agraria La Molina. Perú. 42 pp (mimeografiado).

3. DELGADO, M. y G. ZUMARAN. 2004. Fitopatología (Guía de Prácticas). Universidad Nacional de San Agustín de Arequipa. Departamento de Biología. Arequipa-Perú.

4. FRENCH, EDUARDO R. y TEDDY T. HEBERT. 1982. Métodos de investigación fitopato- lógica. 1ª. Ed., 1ª reimpresión. Sn José. Costa Rica. IICA. 290 pp.

5. INISAV (Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal) Cuba. 1993. Biotecnología Agrícola. Biopreparados de Entomopatógenos. INISAV. Cuba. 6 p.

6. LLÁCER, G., M.M.LÓPEZ, A. TRAPERO y A. BELLO. 2000. Patología Vegetal. Tomo I. Mundi-Prensa. Madrid. España. 695 pp.

7. LLÁCER, G., M.M.LÓPEZ, A. TRAPERO y A. BELLO. 2000. Patología Vegetal. Tomo II. Mundi-Prensa. Madrid. España. 525 pp.

8. MARCHIONATTO, J.B. 1950. Tratado De Fitopatología. Editorial Sudamericana. Bs. As. Argentina. 535 pp.6. MONT KOC, R.M. 1993. Principios del Control de

Enfermedades de las Plantas. Impreso en U. N. A. L.M. Perú. 287 pp.

9. MINISTERIO DE AGRICULTURA PESCA Y ALIMENTACION. 1991. Manual de Laboratorio

Diagnóstico de hongos, Bacterias y nemátodos fitopatógenos. Grafofset. Madrid. España. 486 pp.

10. MONT, RICARDO M. 2002. Manejo Integrado de Enfermedades de las Plantas. Publicado por el Min. de Agricultura SENASA-Lima. Perú. 210 pp.

PRESENTACION

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Uno de los principales problemas que atraviesa el agro en nuestra región, es sin lugar a dudas, la poca e inadecuada información acerca de las enfermedades que afectan a las comunidades vegetales productivas, esto debido a que no existen los suficientes estudios “in situ”, que ayudarían a utilizar un mejor control integrado.

Concientes de que la identificación de un enfermedad, es el paso principal porque de él

depende a menudo el futuro de un cultivo, es que hemos elaborado la presente Guía de Prácticas, dirigida epecialmente a estudiantes de Biología que incursionen en el apasionante mundo de la Fitosanidad.

Se ha hecho una recopilación de las técnicas más utilizadas en este campo ,

adecuándolas a nuestra realidad, resaltando aquellas que permitan elaborar un diagnóstico previo a nivel de campo, como uno definitivo a nivel de laboratorio. Agrupa una serie de recomendaciones para obtener muestras adecuadas e indica las definiciones de los síntomas conocidos así, como de los complejos. Además, incluye las pautas para utilizar y crear algunas escalas de evaluación de enfermedades en campo, y señala como se utilizan algunos métodos de control químico o biológico.

Esperamos que estos conocimientos y habilidades que pueda adquirir el alumno a través del trabajo llevado a cabo en laboratorio y complementado con campo, le permitan emprender trabajos de investigación dentro de esta especialidad .

Miriam A. Delgado M. Guido E. Zumarán M.

SEMINARIOS DE FITOPATOLOGIA

1.- ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE PAPA

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2.- ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE CEBOLLA

3.- ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE AJO

4.- ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE ALFALFA

5.- ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE HABA

6.- ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE ZANAHORIA

7.- ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE CRUCIFERAS

8.- ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE APIO

9.- ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE CLAVEL 10.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE ROSAS

11.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE CAÑA DE AZUCAR

12.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE FRESA

13.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE TOMATE

14.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE PAPRIKA

15.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE AJI

16.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE AROMATICAS

17.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE MAIZ

18.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE ZAPALLO

19.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE VID

20.-ENFERMEDADES DEL CULTIVO DE PAPAYA AREQUIPEÑA

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Guia de Practicas

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