F1116 Manual de Practicas de Inmunologia

DACA-UJAT Manual de prcticas de Inmunologa

Pgina 1 de 27

UNIVERSIDAD JUAREZ AUTONOMA DE

TABASCO

DIVISION ACADEMICA DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

MANUAL DE PRACTICAS DE INMUNOLOGA

(F1116)

VILLAHERMOSA, TABASCO ENERO DE 2013

ELABORACION:

Gerardo Cansino Arroyo Guadalupe Arjona Jimnez

REVISION:

REVISION: CONSEJO TCNICO

Alma Catalina Berumen Alatorre

APROBACIN


Pgina 2 de 27

Directorio

UNIVERSIDAD JUREZ AUTNOMA DE TABASCO

Dr. Jos Manuel Pia Gutirrez

Rector

Dra. Dora Mara Fras Mrquez Secretaria de Servicios Acadmicos

M.A. Rubicel Cruz Romero Secretario de Servicios Administrativos

DR. Wilfrido Miguel Contreras Sanchez Secretario de Investigacin, Posgrado y Vinculacin

L.C.P. Marina Moreno Tejero

Secretara de Finanzas

M.A. Pnfilo Morales de la Cruz Contralor General

DIVISIN ACADMICA DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

M. A. A. Alma Catalina Berumen Alatorre Directora

Dr. Rodolfo Osorio Osorio Coordinador de Investigacin y Postgrado

Dr. Carlos Corzo Sosa Coordinador de Docencia


Pgina 3 de 27

INDICE

DESCRIPCIN PG

.

PRESENTACIN............................

4

1 PROPSITOS DEL SISTEMA DE PRCTICAS. 5

2

DESCRIPCIN DEL SISTEMA DE PRCTICAS.......

7

3

NORMATIVIDAD..

9

4

RECOMENDACIONES GENERALES DE SEGURIDAD......

12

PRCTICAS

1

CLULAS DEL LINAJE INMUNOLGICO Inmunidad Natural 14

2

CONTEO LEUCOCITARIO Inmunidad Natural. 16

3

FAGOCITOSIS Inmunidad Natural.. 19

4

COMPLEMENTO C3 Inmunidad Natural

21

5


23

6

BRUCELOSIS: Aspectos generales y Serodiagnstico. Prueba

rpida en placa con antgeno Rosa de Bengala ROSA DE

BENGALA (Card Test)

24

BIBLIOGRAFA

27

NUMERO DE ALUMNOS POR PRCTICA: es variado, sin embargo se requiere un

mnimo de 5 alumnos por prctica para su correcta realizacin.


Pgina 4 de 27

PRESENTACIN

La formacin de un estudiante, se complementa con los conocimientos tericos y

prcticos, siendo stos ltimos, los que afirman lo adquirido en el seno de las aulas;

de esta forma, se busca la formacin integral del aprendiz, mediante una serie de

prcticas que refuerzan sus conocimientos.

A travs el complemento del conocimiento, es necesario considerar los aspectos

visuales e intuitivos que estimulan al estudiante en su capacidad inherente de

creatividad, discernimiento, construccin, reconstruccin, organizacin interna y

externa de lo aprendido, considerando as mismo, las limitaciones de cada uno.

En la elaboracin de este Manual, se busca mantener la coherencia con el modelo

educativo vigente, motivando al estudiante a la reflexin de su proceso de desarrollo

y formacin futura, coadyuvando as a la formacin de un individuo crtico,

comprometido con los cambios, reelaborando sus valores y creencias, respetando a

los dems y preservando el medio en el que vive.

Mediante esta visin fue como se estructur este Manual de Prcticas, considerando

en sus aspectos generales, relacin que guarda con el contenido del programa de la

asignatura de inmunologa, impartida en el Programa Educativo de Medicina

Veterinaria y Zootecnia. Incluye 5 prcticas que complementan los conocimientos de

la asignatura.

En la medicina veterinaria una de las asignaturas destacadas y que llevan a un

mayor entendimiento de las enfermedades de los animales es la inmunologa, ya

que al adquirir conocimientos de procesos inflamatorios y las clulas que participan

en la respuesta inmune de un organismo vivo, la realizacin de llevar a cabo las

practicas es para que el alumno relacione la teora, y sea mayor la comprensin de

la asignatura.


Pgina 5 de 27

1. PROPSITOS DEL SISTEMA DE PRCTICAS

La asignatura de inmunologa tiene como objetivo principal proporcionar al

alumno los conocimientos necesarios sobre los temas que en ste manual se

exponen. En cuanto a la competencia profesional de Sistemas de Prcticas el

alumno estar capacitado para tener el fundamento necesario para la

comprensin de materias que le ante-proceden como son la anatoma, biologa

celular, bioqumica y manejo del bienestar animal. Dando como resultado que el

alumno tenga el conocimiento necesario, para desarrollar actividades de

competencia en el campo laboral de su rea profesional de la Licenciatura de

Medicina Veterinaria.

Las prcticas podrn realizarse en el laboratorio multidisciplinario de la esta

institucin. Ya que dicha prctica vista desde este sistema nos ayudar a definir

claramente las destrezas y actitudes que el alumno deber tener para afrontar

cada una de las competencias aqu expuestas.

Las prcticas de la materia sern realizadas en el rea de los laboratorios de la

Divisin Acadmica de Ciencias Agropecuarias; Que se encuentran a disposicin

de los alumnos dentro de las instalaciones de la Universidad Jurez Autnoma

de Tabasco.

Conocimientos tericos requeridos para abordar la prctica.

Se requieren conocimientos previos de Fisiologa, Anatoma, Biologa celular,

Bioqumica.

DESCRIPCIN DEL SISTEMA DE PRCTICAS:

Estructura del sistema de prcticas:

Presenta un informe detallado del nmero, nombre, competencia, tiempo de

duracin de la prctica y fecha.

Las prcticas llevan un orden lgico y el estudiante necesita llevarlas todas para

acreditar el curso.


Pgina 6 de 27

1.1 Niveles de Desempeo

El grado de responsabilidad que lograr el individuo al desarrollar cada una

de las siguientes prcticas.

Nivel 1. Se realizan funciones rutinarias de baja complejidad. Se reciben

instrucciones. Se requiere baja autonoma.

Nivel 2. Se realiza un conjunto de significativo de actividades de trabajo, variadas y

aplicadas en diversos contextos. Algunas actividades son complejas y no

rutinarias. Presenta un bajo grado de responsabilidad y autonoma en las

decisiones. A menudo requiere colaboracin con otros y trabajo en equipo.

Nivel 3. Se requiere un importe nivel de toma de decisiones. Tiene bajo su

responsabilidad recursos materiales con los que opera su rea. As como

control de recursos financieros para adquisicin de insumo.

Nivel 4. Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que

se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se debe

tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo.

Nivel 5. Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en la que

se tiene que mostrar un alto nivel de creatividad, as como buscar y lograr la

cooperacin entre grupos e individuos que participan en la implementacin

de u n problema de magnitud institucional.


Pgina 7 de 27

2. DESCRIPCIN DEL SISTEMA DE PRCTICAS

2.1 Estructura del Sistema de Prcticas

Informa del nmero, nombre y duracin de cada prctica, as como el lugar fsico de

donde se llevar a cabo sta. De la misma manera explica en forma muy

simplificada el criterio de desempeo de cada prctica, esto se refiere

especficamente hasta donde el alumno es competente al trmino de cada prctica.

Cuadro 1. Programacin de prcticas.

N de

prctica

Nombre de la

prctica

Tipo Criterio de desempeo Duracin

1 CLULAS DEL

LINAJE

INMUNOLGICO

Inmunidad Natural

Instalaciones

DACA.

Que el alumno identifique los distintos tipos clulas que intervienen en la inmunidad natural.

4 horas

2 CONTEO

LEUCOCITARIO

Inmunidad Natural

Instalaciones

DACA.

Que el alumno sepa interpretar un

conteo leucocitario, describir el tipo

de respuesta inmune.

4 horas

3 FAGOCITOSIS Inmunida Natural

Instalaciones

DACA.

Que el alumno identifique las

clulas fagocticas y entienda la

importancia de este proceso para

que se implemente una respuesta

adquirida.

4 horas

4 COMPLEMENTO C3 Inmunidad Natural

Instalaciones

DACA.

Que el alumno comprenda la

importancia del sistema del

complemento en un diagnostico,

4 horas

5 COMPLEMENTO C4 Inmunidad Natural

Instalaciones

DACA

Que el alumno adquiera

conocimientos del sistema del

complemento y su importancia en la

respuesta inmune.

4horas

6 BRUCELOSIS:

Aspectos generales y

Instalaciones

DACA.

Que el alumno sea capaz de aplicar

una prueba diagnostico en base a

4horas


Pgina 8 de 27

Serodiagnstico.

Prueba rpida en

placa con antgeno

Rosa de Bengala

ROSA DE BENGALA

(Card Test)

una respuesta inmunolgica.

Cada prctica se evaluar en el momento de hacerla e individualmente, se

tomarn en cuenta:

Desempeo.

Cooperacin.

Competencia.

Limpieza.

Orden.

Presentacin del reporte escrito.

PROGRAMA DE PRCTICAS CON CALENDARIO:

PRACTICA. TEMA. SEMANA.

DINAMICA DE PRESENTACIN.

Practica nmero uno. CLULAS DEL LINAJE

INMUNOLGICO Inmunidad Natural

Semana uno.

Practica nmero dos. CONTEO LEUCOCITARIO

Inmunidad Natural

Semana cuatro.

Prctica nmero tres. FAGOCITOSIS Inmunidad Natural

Semana seis.

Prctica nmero

cuatro.


Semana ocho.

Prctica nmero cinco COMPLEMENTO C4 Inmunidad Natural

Semana doce.

Prctica nmero seis BRUCELOSIS: Aspectos generales y

Serodiagnstico.Prueba rpida en

Semana quince.


Pgina 9 de 27

placa con antgeno Rosa de Bengala

ROSA DE BENGALA (Card Test)

El personal que trabaja en esta rea est expuesto a adquirir enfermedades,

lo cual se debe reducir al mnimo al igual que los riesgos de lesiones y de contagio

asociado a dichas prcticas.

Esto que aparentemente es una debilidad en el sistema acerca al estudiante a

una realidad en la que va actuar la mayora de las veces en el desempeo

profesional.

Requisitos Indispensables:

1.- Deben estar vacunados contra ttanos, etc.

2.- Deben contar con bata o filipina.

3.- Deben usar guantes desechables para la manipulacin de muestras de sangre.

4.-No ingerir alimentos, fumar ni consumir bebidas alcohlicas durante la Prctica.

As como guardar comportamiento adecuado.

5.- Conservar sus equipos de exploracin limpios y desinfectados.

6.- No dejar basura ni equipos utilizados en el lugar de la prctica.

7.- Se debe levantar una hoja de registro de actividades.

8.- Hacer un reporte escrito despus de haber terminado la prctica.

9.-Lavarse las manos y todo el instrumental despus de haber realizado la prctica.

3. NORMATIVIDAD

PRACTICAS GENERALES DE SEGURIDAD

REGLAMENTOS

1.- Requisito indispensable: Antes de realizar cada prctica leer cuidadosamente

el protocolo de la prctica para familiarizarse con el trabajo que va a desarrollar. Al

conocer el protocolo disminuye la posibilidad de que ocurran accidentes y adems

puede aprovechar el tiempo de manera eficaz.


Pgina 10 de 27

2.- Prohibido: Comer, beber, fumar y distraer al Profesor a la hora de la prctica y

el acceso a toda persona ajena al rea.

3.- Proteccin: Llevar el equipo de proteccin personal necesario. Esto garantiza

que cualquier accidente que pueda ocurrir sea de menor gravedad, de no acatar las

reglas no se permitir acceso a la prctica.

4.- Material y Equipo: Aportado por el alumno: Debe llevar aquellos materiales

estrictamente necesarios para la prctica que va a desarrollar.

Aportado por la Institucin: Ser solicitado con tiempo suficiente antes de la

prctica y ser entregado mediante un vale al alumno.

Ser cuidadoso con todo el material y equipo que utilice para evitar accidentes

y deterioro del mismo en las prcticas.

5.- Limpieza: Dentro del rea que se va a trabajar se comienza limpiando el rea de

trabajo y se repite este procedimiento despus de que se haya terminado.

El material de desecho depositarlo en el lugar que corresponde y el material

reutilizable lavarlo y desinfectarlo.

6. Higiene: Durante la sesin de trabajo lavarse las manos con agua y jabn antes

de hacer cualquier procedimiento y al finalizar repita el mismo procedimiento para

mantener buenas condiciones higinicas.

7. Solventes: Si trabaja con sustancias, evite inhalarlo.

8. Desechos: Si utiliza guantes, frascos de medicamentos vacos, jeringas, cubre

bocas, portaobjetos, cubreobjetos, etc., no reciclar y desecharlos.

9. Indisciplina: Se sancionara con la anulacin de la prctica o expulsin parcial o

total del alumno, segn el caso lo requiera.

10. Responsabilidades: En caso de accidente o lesin, avisar inmediatamente al

profesor o responsable de la prctica para que pueda auxiliar con rapidez y eficacia

al alumno.

PROCEDIMIENTOS DE SEGURIDAD INDUSTRIAL:

Reglamento del rea:

El ingreso al rea, estar limitada exclusivamente al personal que demuestre

tener alguna actividad que realizar en el mismo.


Pgina 11 de 27

El personal que deba ingresar al rea de trabajo deber cumplir con las

normas de seguridad y bioseguridad detalladas en el presente manual; respecto del

equipo de proteccin personal requerido y normas de conducta dentro del mismo.

Es responsabilidad de todo usuario que el rea, se mantenga limpia as como

el material utilizado despus de cada actividad y hacer buen uso del equipo e

instalaciones de rea.

Penalizaciones aplicables segn la gravedad de la falta

FALTA SANCIN

Ingreso sin autorizacin. Llamada de atencin y registro del incidente

en la bitcora.

Observar mala conducta dentro

del rea.

Expulsin del rea y registro del incidente en

la bitcora.

Dejar material y las instalaciones

sucias.

Negarle el acceso en ocasiones posteriores

y registro del incidente en la bitcora.

SEALIZACIN SEGN NOMS.

Identificar las NORMAS OFICIALES MEXICANAS que observen equipamiento de

seguridad personal: Indumentaria y condiciones fsicas y de higiene personal

requeridas para el acceso al taller, laboratorio o rea funcional, y su importancia en

consideracin a la proteccin integral del individuo y la proteccin a los procesos

llevados a cabo.

No. DE LA NORMA NOMBRE DE LA NORMA PROCEDENCIA

NOM-017-STPS-1994 Relativa al equipo de

proteccin personal para los

trabajadores en los centros de

trabajo.

Secretara del trabajo, y

Previsin Social (1994).

NOM-020-STPS-1994 Relativa a los medicamentos Secretara del trabajo y

Previsin Social.


Pgina 12 de 27

Identificar las Normas Oficiales que se observen la preservacin y disposicin de

insumos txicos y/o peligrosos: que se estilicen en la unidad productiva, etc. Los

efectos que los hacen peligrosos o txicos y que procedimiento se adoptaran para

su control.


NOM-110-STPS-1994 Relativa a las condiciones de

seguridad.

Secretara del trabajo y

Previsin Social.


NOM-062-ZOO-1999 Especificaciones tcnicas para la Produccin, Cuidado y Uso de los Animales de Laboratorio.

SAGARPA

La funcin de SAGARPA nos indica el cuidado y uso de los animales de

laboratorio mediante la aplicacin de tcnicas tendientes a garantizar la produccin

proteger la salud y favorecer el buen uso de los animales.

4. RECOMENDACIONES GENERALES DE SEGURIDAD

REGLAMENTO DEL REA DE MEDICINA Y PRODUCCIN AVCOLA

REGLAMENTO INTERNO

VILLAHERMOSA, TABASCO ENERO 2013

SOBRE EL PERSONAL.

1. El personal deber usar la ropa adecuada al momento de entrar al

rea de trabajo y laboratorio:

Guantes

Cubre boca

Bata o filipina

Zapatos cerrados


Pgina 13 de 27

2. Los integrantes del equipo debern permanecer dentro del rea durante la

prctica y conocer sus deberes para ejecutarlos en forma conveniente.

3. Los casos clnicos en general se rotaran en los equipos existentes los cuales

debern contar con su equipo propio en caso de alguna necesidad y ajustarse

a las normas de requisicin de material.

4. Cada equipo ser el responsable de cada caso hasta la recuperacin del

paciente y deber informar de esto al profesor.

5. Dentro del rea se debern seguir las siguientes normas: No Fumar, No

Introducir Alimentos, Guardar Silencio y No Manchar las Instalaciones con

materiales ajenos a ellas.

6. En caso de errores o dudas preguntar inmediatamente al profesor.

7. En el interior del rea solo se aceptara la presencia de los miembros del

equipo y el maestro o asesor de la actividad.

8. Al trmino de la actividad el quipo deber dejar limpia el rea de trabajo

(pisos, mobiliario y botes de basura).

DE LA REQUISICIN DEL MATERIAL

1.- Antes de la prctica se deber solicitar:

Hoja de registro numerada

Formato de requisicin del material

2.- La hoja registro se llenara correctamente durante la actividad y se devolver al termino de esta, la hoja de requisicin ser firmada por el Profesor.

3.- Al retirarse del rea debern llenar la bitcora correspondiente.


Pgina 14 de 27

PRACTICA N 1

CLULAS DEL LINAJE INMUNOLGICO Inmunidad Natural

OBJETIVO

Diferenciar el sistema de defensa del organismo humano, desde su origen hasta el

foco de infeccin o el encuentro con el antgeno.

FUNDAMENTO

Los leucocitos (glbulos blancos) son clulas que circulan por la sangre con la

funcin de combatir infecciones o cuerpos extraos. Son parte de las defensas

inmunitarias del organismo, pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales

del cuerpo.

Existen dos grupos de leucocitos: los granulocitos (neutrfilos, basfilos y

Eosinfilos) y los agranulocitos (monocitos y linfocitos).

Los neutrfilos defienden el organismo contra bacterias y otros microorganismos.

Se les puede denominar neutrfilos en banda o segmentados, dependiendo de si

presentan o no divisiones de sus ncleos en 3 a 5 lbulos. Si el nmero es mayor,

se habla de neutrfilos hipersegmentados.

Los basfilos poseen grnulos de heparina e histamina, mediadores de la

inflamacin. Actan en estados de hipersensibilidad retardada. La liberacin masiva

del contenido de sus grnulos puede causar choque anafilctico, mortal si no es

controlado.

Los Eosinfilos poseen actividad fagoctica: se comen los agentes extraos. Sus

grnulos tienen sustancias que degradan lo fagocitado, sobre todo las larvas de

parsitos. Adems, inician y regulan las reacciones alrgicas.

Los monocitos poseen actividad fagoctica bactericida. Ante estmulos qumicos

pueden seguir a los neutrfilos. Pueden fijarse a tejido de bazo, hgado y pulmn,

dando lugar a macrfagos tisulares que forman el sistema retculo-endotelial,

encargado de remover material extrao circulante en sangre.

Los linfocitos B constituyen la memoria del pool linfocitario circulante (10%- 20%).

Maduros, pasan de la mdula sea a la sangre y se dirigen hacia los rganos

linfticos perifricos para ubicarse en los folculos linfoides. Bajo estmulo antignico,


Pgina 15 de 27

se activan y proliferan formando el centro germinal en el interior del folculo linfoide.

Pueden seguir un proceso de estimulacin hasta transformarse en inmunoblastos, y

stos en clulas plasmticas secretoras de inmunoglobulinas. Pueden tambin

regresar al estado pequeo linfocito B con memoria inmunolgica, para pasar a

formar parte del manto o corona.

Los linfocitos T forman una poblacin mayoritaria. En el adulto normal oscilan entre

65% y 75%, con variaciones segn la edad. Ejercen sus efectos mediante la

liberacin de protenas solubles, citocinas, encargadas de la transmisin de seales

a otras clulas, o bien mediante interacciones directas con otras clulas.

MUESTRA

Sangre venosa con anticoagulante EDTA. Tubo morado

MATERIAL

Agujas

Jeringas

Torundas

Torniquete

Alcohol

Microscopio ptico

Portaobjetos

Tincin de Wright

Aceite de inmersin

Papel para microscopio

MTODO

1) Mezclar la sangre durante 3 minutos.

2) Realizar un frotis sanguneo.

Poner una gota de sangre sobre un portaobjetos y con otro portaobjetos limpio, se

deslizara la gota sin hacer presin, pero uniforme. Dejar secar y despus se fija con

metanol, sumergindolo y sacndolo rpidamente, despus se introducir en el


Pgina 16 de 27

colorante de eosina( rojo) por 15 segundos, se enjuaga y luego se introducir en el

colorante azul de policromo por 15 segundos se enjuaga y se deja secar.

3) Leer en el microscopio bajo objetivos 10x y 40x. 4) Identificar las clulas y anotar

los resultados.

PRACTICA N 2

CONTEO LEUCOCITARIO Inmunidad Natural

OBJETIVO

Comprender la importancia de las clulas inmunolgicas con relacin a la presencia

de agentes agresores o lesiones.

FUNDAMENTO

Los leucocitos (glbulos blancos) son clulas que circulan por la sangre con la

funcin de combatir infecciones o cuerpos extraos. Son parte de las defensas

inmunitarias del organismo, pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales

del cuerpo.

Existen dos grupos de leucocitos: los granulocitos (neutrfilos, basfilos y

Eosinfilos) y los agranulocitos (monocitos y linfocitos).

Los neutrfilos defienden el organismo contra bacterias y otros microorganismos.

Se les puede denominar neutrfilos en banda o segmentados, dependiendo de si

presentan o no divisiones de sus ncleos en 3 a 5 lbulos. Si el nmero es mayor,

se habla de neutrfilos hipersegmentados.

Los basfilos poseen grnulos de heparina e histamina, mediadores de la

inflamacin. Actan en estados de hipersensibilidad retardada. La liberacin masiva

del contenido de sus grnulos puede causar choque anafilctico, mortal si no es

controlado.

Los Eosinfilos poseen actividad fagoctica: se comen los agentes extraos. Sus

grnulos tienen sustancias que degradan lo fagocitado, sobre todo las larvas de

parsitos. Adems, inician y regulan las reacciones alrgicas.


Pgina 17 de 27

Los monocitos poseen actividad fagoctica bactericida. Ante estmulos qumicos

pueden seguir a los neutrfilos. Pueden fijarse a tejido de bazo, hgado y pulmn,

dando lugar a macrfagos tisulares que forman el sistema retculo-endotelial,

encargado de remover material extrao circulante en sangre.

Los linfocitos B constituyen la minora del pool linfocitario circulante (10%-20%).

Maduros, pasan de la mdula sea a la sangre y se dirigen hacia los rganos

linfticos perifricos para ubicarse en los folculos linfoides. Bajo estmulo antignico,

se activan y proliferan formando el centro germinal en el interior del folculo linfoide.

Pueden seguir un proceso de estimulacin hasta transformarse en inmunoblastos, y

stos en clulas plasmticas secretoras de inmunoglobulinas. Pueden tambin

regresar al estado quiescente de pequeo linfocito B con memoria inmunolgica,

para pasar a formar parte del manto o corona.

Los linfocitos T forman una poblacin mayoritaria. En el adulto normal oscilan entre

65% y 75%, con variaciones segn la edad. Ejercen sus efectos mediante la

liberacin de protenas solubles, citocinas, encargadas de la transmisin de seales

a otras clulas, o bien mediante interacciones directas con otras clulas.

MUESTRA

Sangre venosa con anticoagulante EDTA.

MATERIAL

Agujas

Jeringas

Torundas

Torniquete

Alcohol

Pipetas de leucocitos

Agitador de pipetas blancos

Boquillas para pipetas

Microscopio ptico


Pgina 18 de 27

Portaobjetos

Cmara de Newbauer

Solucin de Turk

Tincin de Wright

Aceite de inmersin

Contador de leucocitos

Cronmetro


MTODO

1) Mezclar la sangre durante 5 minutos.

2) Tomar una alcuota de sangre con la pipeta de leucocitos.

3) Limpiar la punta de la pipeta sin perder lquido.

4) Llenar la pipeta con solucin de Turk hasta el 1.1.

5) Mezclar el contenido de la pipeta en el agitador de pipetas.

6) Desechar las primeras 3 gotas de la pipeta de blancos.

7) Depositar la cuarta gota de la solucin en la cmara de Newbauer.

8) Leer la cmara en el microscopio bajo objetivos 10x y 40x.

9) Hacer el conteo en los cuadrantes para leucocitos (4 cuadrantes).

10) Multiplicar el total por 100.

Nota: los leucocitos se observan como puntos formes luminosos y oscuros.

a) Realizar un frotis sanguneo. Con la tcnica que se menciono en la prctica

anterior

b) Leer en el microscopio bajo 40x.

c) Contar los leucocitos hasta 100 con ayuda del contador.

Cules son los valores normales del recuento leucocitario? Qu indica un valor

elevado en el recuento?


Pgina 19 de 27

PRACTICA N 3

FAGOCITOSIS Inmunidad Natural

OBJETIVO

Comprender el proceso de fagocitosis in Vitro y aplicar los conocimientos tericos en

casos de dao tisular, traumas o invasin de mltiples microorganismos o

sustancias.

FUNDAMENTO

El sistema fagoctico mononuclear cumple dos funciones principales, cada una

llevada a cabo por un tipo de clula procedente de mdula sea:

Macrfagos profesionales: eliminan partculas antignicas.

Clulas presentadoras de antgeno (CPA): ingieren, procesan y presentan los

antgenos a los linfocitos T. Pertenecen al sistema fagoctico mononuclear tanto los

monocitos (macrfagos) como los granulocitos. Los monocitos estn presentes

en la sangre. Presentan un tamao de 10-18 m de dimetro. Su ncleo tiene

generalmente forma de herradura y suele contener grnulos azurfilos. Poseen

membranas irregulares y muchos lisosomas con peroxidasa e hidrolasas cidas,

importantes en la destruccin intracelular de los microorganismos. Una vez

extravasados son llamados macrfagos. Los granulocitos se dividen a su vez en

neutrfilos, basfilos y eosinfilos, en funcin a la coloracin cida o bsica de sus

grnulos citoplasmticos. Los neutrfilos (polimorfonucleares) son los ms

numerosos. Poseen un ncleo lobulado de forma irregular (polimrfico). Intervienen

en la defensa, destruccin de clulas viejas y regeneracin tisular. Liberan

interleucina 1, un mensajero inmunitario. Realizan un proceso de heterofagia que les

causa la muerte. La fagocitosis constituye una de las principales defensas del

organismo contra infecciones producidas por bacterias y hongos. El proceso

comprende pasos secuenciales: quimiotaxis, adherencia del antgeno a la superficie

de los fagocitos, captacin/ingestin (fagocitosis) y muerte intracelular mediada por

mecanismos oxgeno-dependientes o independientes.

Los fagocitos poseen receptores para el componente C3b del sistema del

complemento, as como para la regin constante de las inmunoglobulinas. Esto

permite que los microorganismos opsonizados puedan adherirse, facilitando la


Pgina 20 de 27

fagocitosis.

MUESTRA

Sangre venosa con anticoagulante heparina. Una cepa pura de Staphylococcus

aureus, coagulasa negativo.

MATERIAL

Agujas

Jeringas

Torundas

Torniquete

Alcohol

Asa de siembra ,mechero de alcohol

Tubos de ensayo de 12 x 75 mm

Pipetas Pasteur con bulbo

Microscopio ptico

Aceite de inmersin

Portaobjetos

Tincin de Wright

Termmetro

Bao Mara a 37oC

Cronmetro


MTODO

1) Identificar 1 tubo de ensayo de 12 x 75 mm;

2) Agregar 2-3 gotas de sangre (MUESTRA) de la cepa Staphylococcus aureus al

tubo.

3) Incubar el tubo preparado en bao Mara por 30 minutos.


Pgina 21 de 27

4) Realizar un frotis sanguneo de la muestra que ser el control negativo.

Y se realizara otro frotis con la muestra del tubo incubado y con la cepa bacteriana

5) Teir los frotis con la tcnica de Wright.

6) Poner una gota de aceite de inmersin a los frotis y distribuirlo homogneamente.

7) Revisar los frotis en el microscopio bajo el objetivo de 100x.

Describa el proceso de la fagocitosis.

Qu papel juega en fagocitosis el complemento C3b y C4b?, Qu defectos

pueden presentar los fagocitos; qu consecuencias traen consigo?

PRACTICA N 4


OBJETIVO

Comprender la importancia del sistema del complemento en el diagnstico.

FUNDAMENTO

El sistema del complemento es un sistema de alrededor de 30 protenas sricas

que interaccionan, formando una cascada enzimtica que amplifica la respuesta

humoral.

El CH50 y CH100 son pruebas de la actividad del sistema del complemento, para

determinar el desarrollo de una enfermedad, para monitorear la gravedad de la

misma o para establecer la eficacia de un tratamiento. Por ejemplo, pacientes con

lupus eritematoso activo pueden tener niveles de C3 y C4 bajos.

La cascada del complemento suele iniciarse por complejos antgeno- anticuerpo.

El producto final es la unidad de ataque a membrana, que crea agujeros en las

membranas bacterianas, induciendo su destruccin.

El C3, componente de la cascada del complemento, se fija a las bacterias y las

destruye directamente.


Pgina 22 de 27

Existen productos secundarios de la cascada del complemento que atraen ciertos

leucocitos y aumentan su capacidad para ingerir y destruir bacterias. Algunas

bacterias no requieren la presencia de anticuerpos especficos para activar el

sistema de complemento.

MUESTRA

Suero. Tubos rojos

MATERIAL

Agujas

Jeringas

Torundas

Torniquete

Alcohol

Kit para complemento C3

centrifuga



Pipetas serolgicas

Micropipetas y puntas

Espectrofotmetro

Cronmetro

MTODO

El descrito en el kit para complemento C3.

Los resultados se deben extrapolar con la curva patrn de Kit de complemento3


Pgina 23 de 27

PRACTICA N 5


OBJETIVO

Comprender la importancia del sistema del complemento en el diagnstico.

FUNDAMENTO

El sistema del complemento es un sistema de alrededor de 30 protenas sricas

que interaccionan, formando una cascada enzimtica que amplifica la respuesta

humoral.

La activacin del sistema del complemento y su fijacin a microorganismos facilita la

eliminacin del antgeno y genera una respuesta inflamatoria. La mayora de los

componentes del sistema se sintetizan en el hgado.

Existen varios receptores especficos para los componentes del sistema, localizados

en distintas poblaciones de leucocitos.

Las consecuencias de la activacin y fijacin del sistema del complemento incluyen:

Lisis del microorganismo o clula diana.

Opsonizacin; facilitacin de la fagocitosis.

Quimiotaxis sobre fagocitos.

Control de la respuesta inflamatoria.

Amplificacin de la respuesta humoral.

Eliminacin de inmunocomplejos.

Va de las lectinas.

Conexin del sistema de inmunidad adaptativa por medio de la va clsica.

Conexin del sistema de inmunidad natural por medio de la va alterna.

La prueba de complemento C4 se realiza para determinar la concentracin de C4,

componente srico del sistema del complemento.

MUESTRA

Suero.


Pgina 24 de 27

MATERIAL

Agujas

Jeringas

Torundas

Torniquete

Alcohol

Kit para complemento C4

centrifuga



Pipetas serolgicas

Micropipetas y puntas

Espectrofotmetro

Cronmetro

MTODO

El descrito en el kit para complemento C4. Se requiere de la curva patrn para

extrapolar los datos de la prctica.

RESULTADOS

Cmo encontrara C4 en caso de lupus eritematoso? Qu indicara un valor bajo

de C4?, Cules son los valores de referencia de C4? Explique la va del

complemento.

PRACTICA N 6

BRUCELOSIS: Aspectos generales y Serodiagnstico

Prueba rpida en placa con antgeno Rosa de Bengala

ROSA DE BENGALA (Card Test)

OBJETIVO

Desarrollar la prueba de tarjeta rosa de bengala como prueba tamiz para diagnstico

de brucelosis.


Pgina 25 de 27

FUNDAMENTO

Esta prueba se basa en la bsqueda de Abs que se ponen de manifiesto para

hacerse reaccionar con los antgenos complementarios que existen en la superficie

bacteriana.

Es una prueba rpida de aglutinacin en la que se emplea una suspensin de

clulas de B. abortus (99S) teidas con colorante Rosa de Bengala y disueltas en

cido lctico a pH 3.6. Esta prueba ha sustituido a la prueba de Huddleson, por ser

ms sensible y especfica.

Se considera como prueba positiva cuando ocurre cualquier tipo de aglutinacin y

negativa cuando no hay aglutinacin al cabo de 4 min.

Cuando esta reaccin es positiva el diagnstico se debe de complementar

desarrollando las pruebas de aglutinacin en tubo y/o microplaca y la prueba de

aglutinacin con 2-mercaptoetanol (2-Me) en tubo y/o microplaca. Anteriormente, se

realizaba la prueba de Huddleson y fue muy utilizada en todo el mundo para

diagnstico de brucelosis, pero segn observaciones de la Universidad de

Minnesota, este mtodo si se utiliza solo debe usarse como prueba de seleccin

porque se han encontrado a menudo reacciones falsamente positivas.

METODOLOGA

1) Centrifugar la sangre y separar el suero del paquete celular (1500 rpm).

2) Antes de utilizar cualquier antgeno se debe llevar a cabo una prueba del antgeno

a utilizar con un suero control positivo y un suero control negativo. Se depositan 0.08

ml de suero positivo en un valo de la placa serolgica y 0.08 ml de suero negativo

en otro valo, se agrega una gota de antgeno en cada uno, se mezcla con aplicador

y se somete a rotacin mecnica o elctrica durante cuatro min.

3) Con una pipeta serolgica (Bang) se extrae suero (a temperatura ambiente)

problema. Manteniendo la pipeta en ngulo de 45 se deposita en una placa de

vidrio serolgica, en el primer valo se depositan 0.08 ml, en el segundo 0.04 ml, en

el tercero 0.02 ml, 0.01 y 0.005 ml.

4) El frasco que contiene el antgeno se homogeniza por agitacin (a temperatura

ambiente) y se deposita una gota (0.03 ml) del antgeno sobre cada una de las

cantidades de suero problema.


Pgina 26 de 27

5) Con un removedor o aplicador de madera se mezclan el antgeno y el suero

(comenzando con la dilucin ms baja a la ms alta), extendindose cada una de las

mezclas en crculos.

6) Agitar la placa manualmente o por rotacin mecnica, durante cuatro min.

7) Observar la placa sobre un fondo bien iluminado.

8) Anotar y registrar el grado de aglutinacin en los primeros cuatro min.

9) Reportar el ttulo del suero como recproco de la ltima dilucin donde se observe

aglutinacin.


Pgina 27 de 27

BIBLIOGRAFIA

http://www.tuotromedico.com/temas/estudio_complemento.html

Manual de Laboratorio de Inmunologa Bsica y Clnica. Secretara de Educacin Pblica del Instituto Nacional. Abril de 2011. REDVET Revista electrnica de Veterinaria. Mosby Company. 8va. edition. Margni (1997). Inmunologa e inmunoqumica. Editorial Panamericana. Pg 290-295.

Roitt, Brostoff, Male. Inmunologa. 5ta edicin. Charles, Janeway. Inmunobiologa: el sistema inmunitario en condiciones de salud y enfermedad. Turgeon (1990). Immunology and serology in laboratory medicine.

F1116 Manual de Practicas de Inmunologia

Documents

Transcript of F1116 Manual de Practicas de Inmunologia