EVIDENCIA EVIDENCIA EX VIVOEX VIVO E E IN VIVOIN VIVO DEL DEL

EFECTO PROLIFERADOR DE LA EFECTO PROLIFERADOR DE LA

1,25(OH)2D3 SOBRE LAS CMLV. PAPEL 1,25(OH)2D3 SOBRE LAS CMLV. PAPEL

MEDIADOR DEL VEGFMEDIADOR DEL VEGF

MétodosMétodos

CMLV de aorta de rata Sprague-Dawley

calcitriolcalcitriolConcentraciones

diferentes

CMLVCMLV Cultivo primario

+

Factor trófico:FGF

Efecto del calcitriol en la expresión Efecto del calcitriol en la expresión de VDRde VDR

0

100

200

300

400

500

0h 16h 24h

control 1,25(OH)2D3

VD

R e

xpre

ssio

n (

%)0 h 12 h 16 h 24 h

- - - -+ + +1,25(OH)2D3 (100nM)

51 kD

**

Efecto del calcitriol en la Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV proliferación de las CMLV in vitroin vitro

0

100

200

300

100 20 10 5 0

*#

#

0

50

100

150

200

250

100 20 10 5 0 0

% o

ver

cont

rol

% o

ver

cont

rol

1,25(OH)2D3 (nM) 1,25(OH)2D3 (nM)

bFGF (ng/mL) 0 0 0 0 0 bFGF (ng/mL) 20 20 20 20 20 0

6.9%IN S PHASE

11.1%IN S PHASE

27.9%IN S PHASE

6.7%IN S PHASE

24.9%IN S PHASE

55.2%IN S PHASE

0 16 22TIME (HOURS)

WITHOUT 1,25(OH)2D3

WITH 100nM 1,25(OH)2D3

Efecto del calcitriol en la progresión Efecto del calcitriol en la progresión del ciclo celular de las CMLV del ciclo celular de las CMLV in vitroin vitro

0

5

10

15

20

25

30

1,25(OH)2D3 control

Efecto del calcitriol en la expresión Efecto del calcitriol en la expresión de VEGF en las CMLV de VEGF en las CMLV in vitroin vitro

0

40

80

120

160

0h 16h 24h

control with 1,25(OH)2D3

VE

GF

exp

ress

ion

%

**

pm

ols

/40

00

ce

lls

*

Efecto del VGA1102 en la proliferación Efecto del VGA1102 en la proliferación de CMLV inducida por calcitriolde CMLV inducida por calcitriol

0,0

50,0

100,0

150,0

VGA1102 1μM control

% o

ver

cont

rol

0

50

100

150

200

250

300

350

% o

ver

cont

rol

1,25(OH)2D3 (100nM)

VGA1102 (1M)

+ +

+ +-

- -

-

*

MTT Assay

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

% o

ver

con

tro

l

1,25(OH)2D3 (100nM) + + - -

+ + --Anti VEGF (0.6 g/mL)

*

Efecto de anticuerpos anti-VEGF en la Efecto de anticuerpos anti-VEGF en la proliferación de CMLV inducida por proliferación de CMLV inducida por

calcitriolcalcitriol

PosiblePosible VDRE en el gen del VEGF VDRE en el gen del VEGF

9721 CCTGGAGAAGCCGGGGCCCGAGAAGAGAGGGGAGAAAGAGAAGGAAGAGGAGAGGGGGCC 9780 9781 GCAGTGGGCGCTCGGCTCTCGGGAGCCGGGCTCATGGACGGGTGAGGCGGCGGTGTGCGC 9840 9841 AGACAGTGCTCCAGCCGCGCGCGCGCCCCAGGCCCCGGCCCGGGCCTCGGTTCCAGAAGG 9900 9901 GAGAGGAGCCCGCCAAGGCGCGCAAGAGAGCGGGCTGCCTCGCAGTCCGAGCCGGAGAGG 9960 9961 GAGCGCGAGCCGCGCCGGCCCCGGACGGGCCTCTGAAACCATGAACTTTCTGCTCTCTTG 1002010021 GGTGCACTGGACCCTGGCTTTACTGCTGTACCTCCACCATGCCAAGGTAAGCGGTCGTGC 10080

7201 CTGGGCCCGTAAGCATTTACTAACTACTCTCCCTGCTAAAAGAGAGCCATCCGGGAGGTG 7260 7261 ACTCAGGGCAGCTATGATAGGCCAGATGGGATGGGGTGGCTTTTTTCCTCATAAGATCCT 7320 7321 CATAACATTGCTCCATTGAAATTGGGGTTCCCAACAGGTACCAGCATCCCACGGAGCCTC 7380 7381 AGTACTGTGTGCAGAGGGATGGAGATGGTGGAGTAACCTTTTCGGGGGACCAGTAGGAAG 7440 7441 ACTGTTGGCTCCCTTTCTCAGAAGCTCAGCAGACCTGGGTGAGGGCTGGGACTGGTTGGT 7500 7501 CCCTCTCTTCCCACAGGTATCAGAGCCCCCTCTTGTTCCCAGGGGAGCCTAGGAGCAGCT 7560 7561 GGGCCAAAGCCCAACCAGGAATTTTTCCAGGCTGGTTCCTATATCCAAGGGTGGGCTGGA 7620 7621 GGTGGGGGCTTTGGGGAGCTCTTAAGGAAGACACGAGGAGGTGAAGGGGACTTTGTGGAA 7680

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

MétodosMétodos

Anillos de aorta de rata Sprague-Dawley

calcitriolcalcitriol

CMLVCMLV Ex vivo

Efecto del calcitriol en la Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV proliferación de las CMLV ex vivoex vivo

A1

A2

B1

B20,0

10,0

20,0

30,0

vitd 100nM control

% o

f p

osi

tive

nu

cle

us *

MétodosMétodos

Rata Sprague-DawleyCon 5/6 de reducción de

masa renal

8 semanas

calcitriolcalcitriol

CMLVCMLV in vivo

Efecto del calcitriol en la Efecto del calcitriol en la proliferación de las CMLV proliferación de las CMLV in vivoin vivo

B

A1

A2

B1

B20,00

0,20

0,40

0,60

0,80

1,00

1,20

1,40

1,60

1,80

2,00

Controlvit D 1 g/kg

*

% o

f p

osi

tive

nu

cle

us

Efecto del calcitriol en la Efecto del calcitriol en la arquitectura de la aortaarquitectura de la aorta

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

No treatment No treatment

mm2

Area of the media Media/lumen ratio

*

Calcitriol1 g/kg

Calcitriol1 g/kg

ConclusiónConclusión

El El calcitriol induce un aumento en la calcitriol induce un aumento en la proliferación de las CMLV proliferación de las CMLV in vitroin vitro e e in in vivo. vivo. Este efecto está mediado por un Este efecto está mediado por un

aumento en la expresiónaumento en la expresión de VEGF de VEGF..

El aumento de proliferación de las El aumento de proliferación de las CMLV CMLV in vivoin vivo produce un cambio en produce un cambio en

la arquitectura vascular.la arquitectura vascular.