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Eurofins/STA Laboratories, Inc.

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Enrollamiento de la Vid(Leafroll), Estrategias para laIdentificación y Control de la

Enfermedad

Judit Monis, Ph.D.

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Enrollamiento (Leafroll)

Enfermedad causada por nueve(tal vez más) diferente especiesde virus

Otros factores o patógenos puedencausar síntomas parecidos

STA Laboratories Leafroll

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Leafroll

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Leafroll

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Leafroll:Variedad de Uva Blanca

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LeafrollChardonnay

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Leafroll Síntomas Foliares

Nervadura amarilla Nervadura verde

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Leafroll Síntomas Foliares

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Leafroll afecta la Salud del Viñedo yla Calidad de Uva

• Hasta un 70% de reducción en rendimiento

• Retardación de maduración de uva, reducción enel contenido de azúcar, y alteración del color de lafruta – en infecciones severas la fruta no madura

• Vides infectadas tienen mayor sensitividad al fríoy otros estreses

• La propagación de la enfermedad ocurre por elmovimiento de cortes de plantas enfermas

• Varias especies de cochinillas transmiten algunasespecies de virus a corta/larga distancia

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Grapevine leafroll-associated viruses

• Al menos nueve diferentes virus están asociados con laenfermedad (GLRaV-1 a GLRaV-9)

• Estos virus pertenecen a la familia, Closteroviridae:Closterovirus, Ampelovirus, and posiblemente Crinivirus

• Un virus anteriormente conocido come Grapevinerootstock stem lesion associated virus (GRSLaV) es unacepa “Red Globe” de GLRaV-2

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Grapevine leafroll-associated viruses

Closteroviridae (Familia)

Ampelovirus (cochinilla):GLRaV-1, -3, -4, -5, -6, -8, -9

Closterovirus (afidos):GLRaV-2 and variants (GLRaV-2RG/BD)

Crinivirus? (moscas blancas):GLRaV-7

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Porque vemos disperción deenfermedad?

• Hasta 1990’s el uso exclusivo de AXR-1

• Una nueva raza de Filoxera rompió laresistencia

• Muchos viñedos plantados con porta-injertos alternativos muestran brotes deinfección (particularmente leafroll)

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Influencia de Virus enIncompatibilidad al Injerto

GLRaV-2 causa incompatibilidad

• 3309C (V. riparia x V. rupestris )

• 101-14 V. riparia x V. rupestris

• Kobber 5BB (V. berlandieri x V. riparia)

• Teleki 5C (V. berlandieri x V. riparia)

• 1103 P (V. berlandieri x V. riparia)

• 1616C V. solonis x V. riparia

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La identificación adecuada esimportante

La expressión de síntomas puedeser causada por otros patógenos

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Fanleaf (GFLV)

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Enfermedad de Shiraz(GVA Australia)

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GVAEnfermedad de Syrah (Merlot ySyrah) Kobber Stem Grooving

• Transmisión por cochinillas

• Reducción calidad y rendimiento de fruta

• Afecta la lignificación de los tallos

• Decaimiento de la vid y envejecimientoprematuro

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Síntomas Causadas por Hongos

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Síntomas Causadas por Hongos

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Síntomas causadas por Hongos

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Fusarium, Phaeoacremonium

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Botryosphaeria, Cladosporium,Fusarium

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Síntomas causadas por Hongos

Cylindrocarpon spp., Botryosphaeria spp.,

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Virus Transmitidos por Cochinilla

• GVA: Enfermedad de Shiraz y KobberStem Grooving

• GVB: Corky Bark

• GLRaV-3/otros Ampelovirus: Enfermedadde Leafroll

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Leafroll: transmisión natural(otros no mostrados : cochinilla de la uva,

harinosa de los citricos, de coloracion oscura)

Cochinilla de la vid Cochinilla de cola larga

(photos by R. J. Gill)

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Diseminación de Virus (leafroll)en California

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Diseminación de Virus (leafroll)en California

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Identificación del Agente Causal

– Inspecciones visuales para monitorearenfermedad (collectar muestras) ypresencia de cochinillas

– Testar en el laboratorio AMBOS porta-injerto y clón ANTES de plantar (conmetodos de muestreo recomendado en laepoca correcta.

– Es util registrar la ubicación de la plantamadre original (origen de estacas)

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Métodos para Testado

TEST DETECTA ESPECIFICIDAD/SENSITIVIDAD

Cultivo Biológico Población de Hongos yBacteria

Alta/baja

Molecular: PCR Acido nucleico delPatógeno

Alta/Alta

Molecular: ELISA Proteinas del Patógeno Moderada/Alta

Note: Se recomienda usar mas de un metodo para obtener resultados de confianza

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Muestreo Estacional

Visita Invierno

Visita Primavera

Visita Otono

Visita Verano

Panel B*

Pierce’s Disease

Panel A*Panel A*

Agrobacterium spp. y Panel de Hongos

DicFeb JulJunMayAbrMar NovOctSepAgoEne

* Panel A incluye 13 virus (más dos variantes), Panel B incluye 4 virus

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Posible Causas de Diseminaciónde Enfermedad

• No es fácil de observar la poblacion deCochinillas

• Hay un incremento en el movimiento decochinillas por trabajadores y maquinaria(viento?)

• Efecto de Porta-Injerto (mas suceptibles avirus)

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Control de Diseminación deEnfermedad

• Empezar con plantas limpias (i.e., testado libre depatógenos)

• Monitorear y controlar constantemente lascochinillas

• Higienización del equipo de campo, ropa detrabajadores, etc.

• Remoción de plantas infectadas, seguidas por unperiodo de berbecho

• Educación y communicación de viticultores

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Estrategia de Remoción de Vides• Testar plantas con síntomas para determinar la

causa (no todos los virus son transmitidos)

• Tratar las vides infectadas con insecticida (matacochinillas y hormigas) y herbicidas (mata lasraices)

• Remoción del sistema radicular

• Remoción de vides adjacentes

• Periodos de Berbecho

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Remoción de Viñedo

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Restos de Vides

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Conclusiones

• Empezar el viñedo con plantas testadas (i.e.,plantas libres de patógenos)

• Proteja su viñedo de infecciones externas

• Conozca a sus vecinos (y la salud de losviñedos vecinos)

• Coordine tratamientos de insecticida conlos viñedos vecinos

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Un Viñedo Productivo duraramás de 100 Años!

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Eurofins/STA Plant HealthServices

Para más informatión contacte:

Judit Monis, Ph.D.

judit.monis@stalabs.com

www.stalabs.com

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Virus Elimination is Beneficial(2006 ICVG, Stellenbosch, South Africa)

Italy (Eliminated GLRaV-1, GVA)– Increased photosynthesis and nutrition, which

translated in higher fruit yield

France (Eliminated GLRaV-1, -2, -3, GFkV,GVB)– Vigor improvement, increased fruit production and

higher sugar content (9% increase)– Improved acidity (3% decrease)

Italy- (Eliminated GLRaV-3)– improved canopy that translated on better ripening– higher soluble solids and lower titratable acids

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Disease EradicationMeristem Tissue Culture

Apical meristems are isolated from a diseased vine and cultured in vitro,regenerated plantlets are subsequently acclimated in the greenhouse forpropagation and grafting

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Biological Indexing

Twig fromsuspecteddiseased plant

Healthyindicator plantwith T-shapedcut

Diseased bud orbark put in cut ofindicator plant

New growth ofindicator plantdevelops typicalsymptoms

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Polymerase Chain Reaction (PCR)

POLYMERASE CHAIN REACTION PCR product of round

Target DNA 1 2 3 4 5…

Melt DNA

Repeat PCR cycles

Anneal Primers

Gel Electrophoresis

(Verify fragment length)

Extend DNA

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Specific PCR Detection of GLRaV-1, -5

LR

5

LR

1

LR

5

LR

5

LR

5

LR

5

LR

1

LR

5

GLRaV-1, - 5GLRaV-5

690 bp

200 bp150 bp

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Enzyme Linked Immuno-Assay (ELISA)

Rootstock and scion grown inthe greenhouse or the field

Extract plant sap(leaf, petioles, and

stems)

1. Specific antibody is adsorbed to plate2. Test sample containing virus is allowed to bind to

specific antibodies3. Enzyme-labeled specific antibody binds to virus-

antibody complex4. Enzyme substrate produces color reaction

ELISA

4.1. 2. 3.

Wash Wash Wash

E

E

E

E

E

E

E

E

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Disease Eradication

• Heat Therapy:Nepovirus: ArMV, GFLV, GRSPaV,

ToRSV,TRSVFoveavirus GRSPaV

• Meristem Tissue Culture:Ampelovirus: GLRaV-1, -3, -4, -5, -6, -8, -9Closterovirus: GLRaV-2 and variant strainsUnassigned: GLRaV-7Vitiviruses: GVA, GVB, GVD?Maculavirus: GFkV