“ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DE LA INFUSIÓN DE Eucalyptus …
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“ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DE LA INFUSIÓN DE Eucalyptus globulus OBTENIDAS DE LOS MERCADOS DE ABASTOS DE LIMA, EN TIEMPOS DE PANDEMIA COVID-19 – LIMA 2020”
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“ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DE LA INFUSIÓN DE Eucalyptus globulus
OBTENIDAS DE LOS MERCADOS DE ABASTOS DE LIMA, EN TIEMPOS DE
PANDEMIA COVID-19 – LIMA 2020”
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y
BIOQUÍMICA
TESIS
“Estudio microbiológico de la infusión de Eucalyptus globulus obtenidas de los
mercados de abastos de Lima, en tiempos de pandemia Covid-19, 2020”
TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO
FARMACÉUTICO
Presentado por:
Bach. FERNANDEZ ALMOGUER Mirian Karol
Bach. SUAREZ CRUZ Sheyla Massiel
ASESOR
Mg. IVAR LAVADO MORALES
LINEA DE INVESTIGACIÓN: RECURSOS NATURALES
HUANCAYO - PERÚ
2020
iii
JURADOS
PRESIDENTE:
XXXXXXXX
MIEMBRO SECRETARIA:
XXXXXXXX
MIEMBRO VOCAL:
XXXXXXXX
MIEMBRO SUPLENTE:
XXXXXXXX
iv
Dedicatoria
El presente trabajo es dedicado a Dios, por
darme la fortaleza de seguir luchando por
mis metas.
A mis padres, hermanos y mi pequeña María
claudia por depositar su confianza en mí,
por sus sabios consejos y su apoyo
incondicional, son mis pilares para
enfrentar nuevos retos.
A Edgard, por estar conmigo en todo
momento brindándome la fuerza, cariño y
motivación para no rendirme nunca.
Mirian
El presente trabajo es dedicado a Dios, por
darme la fortaleza de seguir luchando por
mis metas
A mi mamá Linda por depositar su confianza
en mí, por sus sabios consejos y su apoyo
incondicional y a mi Abuelito Fidel Cruz que
desde el cielo me guía.
A mi novio, por estar conmigo en todo
momento brindándome la fuerza para nunca
rendirme.
Sheyla
v
AGRADECIMIENTO
Agradecemos a la Universidad Franklin
Roosevelt, por brindarnos la oportunidad de
desarrollar nuestras capacidades y adquirir
nuevos conocimientos, formarnos
profesionalmente; así mismo a todos los
docentes de la Facultad de Farmacia y
Bioquímica que nos brindaron sus sabios
conocimientos y consejos.
A nuestro asesor de Tesis Mg. Ivar Lavado
Morales por su valioso apoyo, sirviendo de
guía en la orientación, corrección y
contribución para la culminación de este
trabajo.
A todos nuestros amigos y personas
maravillosas que hemos conocido a lo largo
de esta etapa universitaria, gracias por su
amistad y por acompañarnos durante toda la
carrera profesional.
vi
DECLARATORIA DE AUTENTICIDAD
DECLARACION JURADA SIMPLE
Yo, Sheyla Massiel Suarez Cruz de Nacionalidad Peruana, identificado con, DNI
N.º48384549, Tesista de la Universidad Privada de Huancayo Franklin
Roosevelt, Bachiller en Farmacias y Bioquímica, domiciliado en sector: 3
grupo:24 manzana: k lote:15 ,distrito de Villa el Salvador – Lima. DECLARO BAJO
JURAMENTO: QUE TODA LA INFORMACIÓN PRESENTADA ES AUTÉNTICA Y VERAZ.
Me afirmo y me ratifico en lo expresado en señal de lo cual firmo el presente
documento a los 28 días del mes de Octubre del 2020.
………………………………………….
Firma DNI Nº48384549
vii
DECLARACION JURADA SIMPLE
Yo, Mirian Karol Fernandez Almoguer de Nacionalidad Peruana, identificado con,
DNI Nº 40713663, Tesista de la Universidad Privada de Huancayo Franklin
Roosevelt, Bachiller en Farmacias y Bioquímica, domiciliado en Mz. E lote 32 calle
Líbano Sector el Nazareno, distrito de San Juan de Miraflores - Lima. DECLARO
BAJO JURAMENTO: QUE TODA LA INFORMACIÓN PRESENTADA ES AUTÉNTICA Y
VERAZ. Me afirmo y me ratifico en lo expresado en señal de lo cual firmo el
presente documento a los 28 días del mes de Octubre del 2020.
………………………………………….
Firma
DNI Nº 40713663
viii
INDICE
Resumen Pág.
Abstract
I. INTRODUCCION 11
I. METODO 23
2.1. Tipo y diseño de investigación 23
2.2. Operacionalización de variable 24
2.3. Población, muestra y muestreo 24
2.4. Técnicas e instrumentos de recolección de datos, validez y confiabilidad 26
2.5. Procedimiento 29
2.6. Método de análisis de datos 32
2.7. Aspectos éticos. 33
III. RESULTADOS 38
IV. DISCUSIONES 53
V. CONCLUSIONES 55
VI. RECOMENDACIONES 56
REFERENCIAS 57
ANEXOS
ix
RESUMEN
La investigación realizada fue con la finalidad de determinar el estudio microbiológico
de la infusión de Eucalyptus globulus obtenidas de los mercados de abastos de Lima, en
tiempos de pandemia COVID-19 – Lima 2020; La infusión es una solución diluida de
constituyentes fácilmente solubles de la droga cruda. La infusión se realiza sumergiendo
las partes a utilizar de la planta en una cantidad de agua hirviendo, se deja reposar unos
15 minutos y se filtra a continuación mediante un tamiz o papel de filtro; Objetivo:
Determinar si la infusión de Eucalyptus globulus L. posee carga bacteriana estudios in
vitro Metodología: Sera un estudio de tipo cualitativo, observacional y descriptivo La
muestra de estudio estuvo conformada por la infusión de Eucalyptus globulus (Eucalipto)
que serán analizadas mediante exámenes: screening fitoquímico y método de Kirby Bauer
con infusión a diferentes de las muestras de diferentes mercados de Lima: Caquetá, La
Parada, Unicachi y Surquillo respectivamente. Resultados: Se encontrara que la
infusiones de las muestras del mercado de Caquetá y La Parada presentan cargas
bacterianas elevadas >100,000 UFC y las muestras del mercado de Unicachi y Surquillo
no presentan cargas bacterianas elevadas <10%UFC de E. coli Conclusiones: La
presencia de carga bacteriana elevada de la infusión de Eucalyptus globulus en los
mercados de Caquetá y La Parada fue >100,000 UFC y no son aptas para consumo
humano y la infusión de Eucalyptus globulus en los mercados de Unicachi y Surquillo
fue baja <10% UFC y son aptas para consumo humano.
Palabras Clave: Eucalyptus globulus. “Eucalipto”; carga bacteriana; Unidad formadora
de colonia (UFC).
x
ABSTRACT
The research carried out was with the purpose of determining the microbiological study
of the infusion of Eucalyptus globulus obtained from the supply markets of Lima, in times
of pandemic COVID-19 - Lima 2020; The infusion is a diluted solution of easily soluble
constituents of the crude drug. The infusion is made by submerging the parts of the plant
to be used in a quantity of boiling water, allowing it to stand for about 15 minutes and
then filtering it through a sieve or filter paper; Objective: To determine whether the
infusion of Eucalyptus globulus L. The study sample consisted of the infusion of
Eucalyptus globulus (Eucalyptus) that will be analyzed by phytochemical screening and
Kirby Bauer's method with infusion to different samples from different markets in Lima:
Caquetá, La Parada, Unicachi and Surquillo, respectively. Results: It was found that the
infusions of the samples from Caquetá and La Parada markets presented high bacterial
loads >100,000 CFU and the samples from Unicachi and Surquillo markets did not
present high bacterial loads <10% CFU of E. coli: The presence of high bacterial load of
Eucalyptus globulus infusion in Caquetá and La Parada markets was >100,000 CFU and
they are not suitable for human consumption and Eucalyptus globulus infusion in
Unicachi and Surquillo markets was low <10% CFU and they are suitable for human
consumption.
Key words: Eucalyptus globulus. "Eucalyptus"; bacterial load; colony forming unit
(CFU).
11
I. INTRODUCCIÓN
Desde tiempos pasados de nuestra historia las plantas han sido utilizadas por nuestros
ancestros con fines medicinales. En nuestra actualidad las especies de las plantas
promisorias de uso etnofarmacológico son informaciones valiosas para el descubrimiento
de posibles sustancias con importante actividad antibacteriana. Las plantas tienen unas
sustancias curativas que al pasar de los años han ido descubriendo sus metabolitos. Al
pasar el tiempo las bacterias han demostrado resistencia bacteriana así generando nuevos
intereses en la búsqueda de medicamentos con poder antibacteriano, actualmente hay
muchas publicaciones, relacionando actividad antimicrobiana y productos naturales,
siendo de importancia en las investigaciones los productos naturales.1
El Perú es un país rico en recursos naturales y sustenta esa riqueza en su gran
biodiversidad; las bacterias se han vuelto resistente a causa de la proliferación y casos de
resistencia bacteriana de microorganismos que sufren cambios al verse expuestos a los
antimicrobianos (antibióticos, anti fúngicos, antivíricos) como consecuencia, los
fármacos se tornan ineficaces y las infecciones perduran en el organismo, lo que eleva el
riesgo de contagio. Los pacientes farmacorresistentes corren mayor riesgo clínico hasta
el punto de producir la muerte .2
Dentro de los recursos naturales existen presencia de microorganismos, la problemática
es por la presencia de cepas microbianas como: Staphylococcus aureus, coliformes
fecales, Escherichia coli, salmonella, shigella, yersinia y otros. La mayoría con frecuencia
causan infecciones representando un serio problema para el área de la salud.
Para el presente trabajo se tomó como referencia las investigaciones internacionales como
Arum K. et al (2010), realizó un estudio en Moradabad (India) de tipo experimental,
siendo su objetivo identificar los metabolitos presentes en la especie vegetal y demostrar
la capacidad antioxidante del aceite esencial. Llegaron a la conclusión que los
componentes fitoquímicos que contiene esta especie vegetal en su territorio geográfico
son los flavonoides, terpenos, saponinas y azúcares reductores; por lo cual si lograr
encontrar que esta especie vegetal si tiene una actividad de reducción de radicales libres
por la presencia de flavonoides. Las cortezas, raíces, frutos, brotes, hojas y otras partes
de la planta se consideran una fuente de aceites aromáticos esenciales para curar varias
12
dolencias. Se ha demostrado que la propiedad antioxidante es importante en la
recuperación de varias enfermedades. El aceite esencial extraído de las hojas de eucalipto
se probó para análisis fitoquímicos y actividades antioxidantes. El aceite de eucalipto
extraído de las hojas de la familia Myrtaceae de Eucalyptus globulus se seleccionó para
detectar la presencia de fitoquímicos y su efecto sobre el radical 2, 2-difenil-1-picril-
hidrazilo (DPPH) y el radical libre óxido nítrico. El cribado fitoquímico de las plantas
mostró la presencia de flavonoides, terpenoides, saponinas y azúcares reductores.
Eucalyptus globulus no contiene glucósidos cardíacos ni antraquinonas. La actividad
captadora de radicales libres de las diferentes concentraciones del aceite de hoja (10, 20,
40, 60 y 80% (v / v) en DMSO) de E. globulus aumentó de manera dependiente de la
concentración. En el método DPPH, el aceite en una concentración del 80% (v / v) exhibió
79,55 ± 0,82%. En el método de ensayo de eliminación de radicales de óxido nítrico, se
encontró que la concentración del 80% (v / v) exhibía una inhibición del 81,54 ± 0,94%.
Se concluyó que el aceite de hoja es una potente inhibición de los radicales libres.3
Mervat E. et al (2017) mediante extracto fitoquímicos de Eucalyptus buscaron que
componentes fitoquímicos puede tener su especie vegetal recolectada en México puede
evitar el crecimiento de bacterias; en su investigación se llegó a la conclusión que esta
especie vegetal si cuenta con metabolitos que puedan contribuir a este fin científico, como
lo fueron las Cumarinas, saponinas, flavonoides, azúcares reductores, triterpenos, y
aminoácidos. Se aislaron tres aislamientos bacterianos de tubérculos de papa infectados
que mostraban síntomas de podredumbre suave y marrón, así como un aislado de
melocotonero infectado que mostraba síntomas de agallas en la corona. Los ensayos
morfológicos, bioquímicos y moleculares demostraron que los aislados bacterianos
pertenecientes a Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum, Ralstonia
solanacearum, Dickeya spp. y Agrobacterium tumefaciens. Los extractos de acetona
(AcE) y n-butanol (ButE) de flores de Callistemon viminalis y aceite esencial de partes
aéreas de Conyza dioscoridis así como ButE de corteza de Eucalyptus camaldulensis se
evalúan a diferentes concentraciones contra el crecimiento de las bacterias aisladas. Se
comparan el diámetro de la zona de inhibición (IZ) y las concentraciones inhibitorias
mínimas (MIC). Los resultados indicaron que los valores más altos de IZ fueron 20,0 mm
y 18,3 mm para E. camaldulensis corteza ButE y C. viminalis flor ButE, respectivamente,
contra P. carotovorum; 16,3 mm y 16,0 mm para la corteza de E. camaldulensis ButE y
13
flor de C. viminalis ButE, respectivamente, contra R. solanacearum; 18,5 mm para C.
viminalis flor AcE y C. dioscoridis partes aéreas EO contra Dickeya spp .; y 15,0 mm
para la flor de C. viminalis AcE contra A. tumefaciens. Las CIM variaron de <16 μg / mL
para D. solani a> 4000 μg / mL para A. tumefaciens. Se comprobó que las flores de C.
viminalis AcE contienen principalmente 5-hidroximetilfurfural (20,6%), ácido palmítico
(18,5%) y pirogalol (16,4%); mientras que la flor de C. viminalis ButE contiene ácido
palmítico (36,3%), ácido 2-hidroximirístico (9,4%), 5-hidroximetilfurfural (7,2%) y
ácido shikímico (6,6%); mientras que el ButE de corteza de E. camaldulensis contiene
éster metílico del ácido 8-noninoico (45,6), alcanfor (30,9%), mentol (8,8%) y 1,8-cineol
(eucaliptol) (8,2%), mientras que el EO de C. dioscoridis Las partes aéreas comprenden
acetato de Z- (13,14-epoxi) tetradec-11-en-1-ol (11,6%), γ-elemene (10,2%), tau.-
muurolol (7,1%) y cadina-3,9. -dieno (4,7%). Se puede concluir que los extractos
fitoquímicos de C. viminalis, E. camaldulensis y C. dioscoridis demostraron efectos
antibacterianos de fuertes a moderados contra los patógenos bacterianos vegetales
estudiados.4
Torres M. et. al. (2007). Evaluó La utilización de plantas curativas constituye una de las
terapias médicas más antiguas y extendidas que se remonta a los tiempos prehistóricos
(Wust, 2003). Cada cultura ha desarrollado sus tradiciones de medicina popular, con
remedios y ritos que utilizan plantas locales. La Organización Mundial de la Salud,
mediante varios comunicados ha expresado su posición con respecto a la necesidad de
revalorar la utilización de las plantas medicinales dentro del ámbito sanitario, teniendo en
cuenta que el 80 % de la población mundial depende de estas en lo referente a la atención
primaria de salud (Alonso, 1998). Frente a esta necesidad y a la preocupación que genera
ofrecer productos de alta calidad, la investigación realizada permitió evaluar algunas de
las materias primas, como: Boldo (Peumus boldus), Caléndula (Caléndula officinalis),
Sen (Casia angustifolia Vahl), Fucus (Fucus vesiculosas L) y Spirulina (Spirulina
maxima), que son importantes por la gran oferta que estas tienen en el mercado. El
objetivo de este estudio fue evaluar la calidad microbiológica y establecer si el proceso
de esterilización con óxido de etileno tenía un efecto eficaz sobre la materia prima,
propuesta a evaluar. Se realizó el recuento de microorganismos mesófilos aerobios,
hongos, levaduras y pruebas de ausencia/presencia para microorganismos patógenos
como: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella s.p, Clostridium perfringes
14
y Staphylococcus aureus. Estas pruebas se realizaron con la utilización de medios de
cultivo específicos: TSN, EMB, CETRIMIDE, XLD, B.P, OGY (hongos y levaduras) y
Plate Count (mesófilos aerobios). Los resultados obtenidos a partir de las muestras
analizadas permitieron obtener datos significativos relacionados con la
ausencia/presencia de microorganismos patógenos antes y después del proceso de
esterilización, así como el recuento de mesófilos, hongos y levaduras. En las muestras
analizadas antes de la esterilización se encontraron microorganismos como: Citrobacter,
Serrratia, Klebsiella, Staphylococcus, Clostridium y Pseudomonas. Algunos de ellos
fueron encontrados en las muestras de Caléndula y después de la esterilización con óxido
de etileno.5
También consideramos las investigaciones con antecedentes nacionales, como Méndez
K. (2016), evaluó el efecto sinérgico antibacteriano in vitro de los aceites esenciales de
Eucalyptus globulus y Origanum vulgare sobre Escherichia coli. Para este trabajo empleó
el método de destilación por arrastre de vapor para obtener los aceites esenciales de
Eucalyptus globulus y Origanum vulgare. Una cepa silvestre de Escherichia coli fue
expuesta a estos aceites esenciales al 5%, 25%, 50%, 75%, 100% para obtener la
concentración mínima bactericida (CMB) de los mismos. Posteriormente evaluó la
interacción sinérgica de ambos aceites a concentraciones mínimas bactericidas mediante
el método de difusión de discos modificado, utilizando a Ciprofloxacino como control
positivo y a Tween 80 como control negativo; realizó cinco repeticiones para cada caso.
Como resultado obtuvo que la CMB es de 75% tanto para el aceite de Eucalyptus globulus
como de Origanum vulgare (equivalente a una concentración de 0.69 g/ml y 0.71 g/ml
para cada uno de ellos respectivamente); sin embargo, pudo demostrar que todas las
concentraciones de los aceites esenciales ensayadas tuvieron un notable efecto
antibacteriano. Según la escala de Duraffourd, la cepa de E. coli en estudio es muy
sensible a la combinación de ambos aceites a concentraciones mínimas bactericidas.
Concluyó su trabajo manifestando que existe un efecto sinérgico antibacteriano in vitro
de los aceites esenciales de Eucalyptus globulus y Origanum vulgare sobre Escherichia
coli.6
Saguma M. (2016), se evaluó la sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas
aeruginosa frente a concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial de
15
Eucalyptus globulus, el cual se obtuvo a partir de las hojas de este, por el método de
destilación por arrastre con vapor de agua. La sensibilidad de estos microorganismos se
determinó por el método de difusión en agar, utilizando Vancomicina y Ciprofloxacina
como controles para Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa respectivamente,
realizó ensayos por triplicado y con cuatro repeticiones. Aunque todas las
concentraciones tuvieron efecto inhibitorio en ambas bacterias; determinó que
Staphylococcus aureus presentó mayor sensibilidad, estadísticamente; significativa (p <
0.05) a las concentraciones de 75 y 100% del aceite esencial en relación a la Vancomicina,
mientras que Pseudomonas aeruginosa frente a la concentración de 100% en relación a
la Ciprofloxacina.7
Kareru P. et. al. Los extractos acuosos de plantas medicinales comúnmente utilizados por
los herbolarios en los distritos de Mbeere y Embu de la provincia oriental de Kenia se
probaron para determinar su actividad inhibidora contra tres cepas seleccionadas de
bacterias. Todos los extractos de plantas seleccionados (infusiones: 1,0 g de muestra en
100 ml de agua) investigados mostraron actividad contra Escherichia coli con diámetros
de zona de inhibición que oscilaban entre 5,8 y 18,0 mm. Terminalia brownii dio las zonas
de inhibición más grandes contra E. coli y Staphylococcus aureus. Vernonia lasiopus y
Tithonia diversifolia fueron inactivas para S. aureus y Bacillus subtilis, respectivamente.
Dieciocho y dieciséis plantas mostraron una sensibilidad superior a 10 mm frente a S.
aureus y B. subtilis, respectivamente. Todos los discos de control dieron zonas de
inhibición de 12-24 mm, que eran más grandes que las de los extractos. El presente
estudio validó el uso de las plantas medicinales seleccionadas por los herbolarios en el
tratamiento de dolencias bacterianas causadas por las cepas de bacterias investigadas. Las
plantas medicinales utilizadas para enfermedades no bacterianas también mostraron
sensibilidad hacia las cepas bacterianas probadas. Esto implicaba que podrían usarse
como plantas medicinales de usos múltiples.8
En cuanto a las bases teóricas de la investigación hemos considerado importante los
problemas Relacionados al Medicamento como Concepto y evolución consideramos el
problema a nivel mundial, cada año el 40% de los enfermos que han visitado en un primer
momento a un médico tradicional, acaban probando la medicina natural; la salud en los
últimos años y la tendencia naturista ha hecho que muchas personas y empresas privadas
16
vuelquen sus ojos hacia productos que pueden ser rentables en términos de mercados; Los
tratamientos de marcas sofisticadas cada día están por las nubes y si se valorara su
composición, tiene una variedad de elementos naturales y orgánicos, además no son
accesibles a la comunidad en general por su alto costo.9
Eucalyptus globulus L. es un árbol de 70 a 90 m de altura, hojas con capa cerosa blanca.
Se caracteriza por un importante polimorfismo, de jóvenes son opuestas, oblongas de 7 a
15 cm de largo; cuando son adultas son alternas. Inflorescencia axilar, solitaria, botones
sésiles, flores de 4 cm de ancho, masa proveniente de estambres, fruto cónico de 2 a 3 cm
de ancho y numerosas semillas. Tronco largo generalmente liso.10
La clasificación Taxonómica ha sido estudiada y clasificada como Eucalyptus globulus
L. y tiene la siguiente posición taxonómica, según el sistema de clasificación de Cronquist
(1988).
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Orden: Myrtales
Familia: Myrtaceae
Género: Eucalyptus globulus L.
Especie: Eucalipto
Nombre Vulgar: “eucalipto”. Sinonimia: Eucalyptus globulus, Eucalyptus globulus L.
La descripción botánica: es la especie de eucalipto más conocida y plantada en el mayor
número de países del mundo. Es fácil de establecer, de rápido crecimiento y resiste los
vientos y heladas. Es un árbol de buen porte y forma, usado como ornamental por su
follaje plateado, fácilmente reconocibles por el penetrante olor a alcanfor de las hojas al
estrujarlas. Corteza de 3 cm. de grosor que desprende en tiras a1 madurar dejando una
segunda corteza lisa dando a1 árbol un aspecto característico en ocasiones expulsa
resina.11
Figura I: Eucalyptus globulus L.
17
Fuente: Scribd, 2019
Su hábitat está dado por el tipo árbol, de la subespecie globulus, se encuentra confinado
más que nada a la costa sureste de Tasmania, pero crece también en pequeños bolsones
de la costa oeste de Tasmania, en ciertas islas en el estrecho de Bass al norte de Tasmania
y en el Cabo Otway y el Promontorio de Wilson al sur de Victoria, en Australia.
Eucalyptus deriva del griego que significa “bien cubierto”, por el opérculo que cubre a
las flores y globulus, indica la forma del fruto.12
La distribución estacional de la precipitación no es de importancia crítica para la especie.
A pesar de que por lo general crece bien en los países con un máximo de precipitación
mediterráneo o durante la estación fría, también crece bien en los climas con una
precipitación veranera en Etiopía y Argentina.13
Su composición química podemos mencionar que destaca su contenido en aceite esencial,
cuyo principal constituyente es el cineol o eucaliptol (éter óxido terpénico). Contiene
también: terpineol, carburos terpénicos (alfapineno), alcoholes alifáticos y
sesquiterpénicos (eudesmol), aldehídos (butírico, valeriánico, capróico) y cetonas.14
La preparación de la infusión es una solución diluida de constituyentes fácilmente
solubles de la droga cruda. Es adecuada para las drogas aromáticas, para evitar que los
aceites volátiles se evaporen a otras temperaturas La infusión se realiza sumergiendo las
partes a utilizar de la planta en una cantidad de agua hirviendo, se deja reposar unos 15
minutos y se filtra a continuación mediante un tamiz o papel de filtro.15
El efecto antibacteriano es la sustancia cuya propiedad es capaz de erradicar agentes
bacterianos, inhibe su crecimiento e impide su proliferación sin ocasionar daño del
huésped.16
Figura III: Tipos de AB y su blanco.
18
Fuente: Brock, 1999
Escherichia Coli: Es una bacteria habitual en el intestino del ser humano y de otros
animales de sangre caliente. Aunque la mayoría de las cepas son inofensivas, algunas
pueden causar una grave enfermedad de transmisión alimentaria. La infección por E. coli
se transmite generalmente por consumo de agua o alimentos contaminados, como
productos cárnicos poco cocidos y leche cruda.17
Clasificación Científica
Reino: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gamma Proteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Género: Escherichia
Especie: Escherichia coli
Figura IV: Escherichia coli
Fuente: Journal of Medical Microbiology 18
Definición de Términos describimos como concentración:
19
Efecto Antibacteriano: Se clasifican e dos grupos bacteriostático, son aquellas sustancias
que bloquean el desarrollo y la multiplicación de las bacterias, pero no las destruyen y
bactericidas, que provocan la muerte bacteriana.19
Metabolitos primarios: Son importantes para la vida del vegetal como proteínas, lípidos,
carbohidratos, vitaminas, hormonas.20
Metabolitos secundarios: No cumplen ningún rol fisiológico en los vegetales: alcaloides,
glucósidos, aceites esenciales, resinas, etc. Sirven para comparar perfiles químicos y
diferenciar entre las diferentes especies vegetales.20
UFC: Unidad formadora de colonias.21
Solvente: Usualmente el componente en mayor proporción se denomina solvente.22
Infusiones: Es una bebida que se prepara a partir de agua muy caliente, pero sin hervir.
Libres de Teína (cafeína). Obtenida de las hojas secas, partes de las flores o de los frutos
de diversas hojas aromáticas. Se les vierte en agua a una temperatura mayor al ambiente,
pero sin llegar a hervir.23
Mercado de abasto: Del latín mercātus. Área abierta o edificación destinada a recibir al
por mayor y ofertar principalmente productos agrícolas, pecuarios y de pesca, pero
también por lo regular medios de uso personal y otros artículos.24
Pandemia Covid 19: Los coronavirus (CoV) son una gran familia de virus que causan
enfermedades que van desde el resfriado común hasta enfermedades más graves. La
epidemia de COVID-19 fue declarada por la OMS una emergencia de salud pública de
preocupación internacional el 30 de enero de 2020.El Director General de la
Organización Mundial de la Salud (OMS), el doctor Tedros Adhanom Ghebreyesus,
anunció el 11 de marzo de 2020 que la nueva enfermedad por el coronavirus 2019
(COVID-19) puede caracterizarse como una pandemia. La caracterización de pandemia
significa que la epidemia se ha extendido por varios países, continentes o todo el mundo,
y que afecta a un gran número de personas.25
Agar Muller Hinton: medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarrollo
microbiano. Por su composición, ha sido recomendado por el Clinical and Laboratory
Standards Institute (CLSI) antiguamente llamado National Committee for Clinical
Laboratory Standards (NCCLS), para ser utilizado en forma rutinaria en la realización del
antibiograma en medio sólido, debido a que se presenta buena reproducibilidad lote a lote
en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima
20
y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos microbianos crece satisfactoriamente
y una cantidad de datos adicionales que han evaluado y avalados usando este medio de
cultivo.26
Clasificación de las Bacterias
Por su forma y agrupación:
- Cuando las células microbianas como los cocos se dividen, pueden permanecer unidas
unas con otras, formando arreglos característicos.
- Los bacilos se dividen únicamente en un plano, pero en algunas ocasiones pueden
encontrarse células unidas por los extremos o por los lados debido a la etapa del
desarrollo en que se encuentren o a las condiciones del cultivo.
- Las bacterias en espiral generalmente no se agrupan, crecen individuales y aisladas.
En la siguiente tabla (Tabla I) se resumen algunos de los aspectos fundamentales en la
clasificación de las bacterias.
Tabla I. Clasificación Bacteriana
Por su
forma Por ordenamiento Representación
Por composición de la
pared celular que
reacciona
a la tinción de Gram
Coco Coco único o micrococo
(esférico) Cuando los cocos se dividen en un
solo plano
Gram
vertical, se separan y negativas no
conservan su retienen el cristal
individualidad. Violeta
conservan el
Diplococo cuando las células hijas se
presentan en parejas
colorante rojo
por ejemplo
safranina son susceptibles a
las
Estreptococo en cadena Cuando las
células hijas forman cadenas
cefalosporinas Diplococo
en parejas
21
Estafilococo
las células permanecen unidas pero
después de una división celular en dos
o más planos y los cocos forman
grupos irregulares en ocasiones
de gran volumen similares a racimos
de uvas.
Gram positivas absorben y
conservan el colorante
cristal violeta son
susceptibles a la penicilina
y estreptomicina
Sarcina grupo de ocho cocos
La división celular se
produce formando paquetes de ocho
células
Tetracoco
La división celular se produce en dos
o tres planos perpendiculares
formando grupos de
cuatro células.
Espirilos
En forma de espiral
Bacilos
En forma de bastón
Fuente: Carmen Eugenia Piña López.27
En cuanto a la descripción del problema se ha llegado concretizar a la siguiente pregunta
¿Cuál es la carga bacteriana en la infusión de Eucalyptus globulus obtenidas en los
principales mercados de abastos de Lima, en tiempos de pandemia covid-19, mediante el
método de Kirby Bauver, lima 2020?, teniendo como problemas específicos: 1. ¿Cuáles
son los principales metabolitos secundarios del estudio microbiológico de infusión de
Eucalyptus globulus obtenidas en los principales mercados de abastos de Lima, en
tiempos de pandemia covid-19, mediante el método de Kirby Bauver lima 2020?; 2. ¿Cuál
es la técnica adecuada de recolección y transporte de Eucalyptus globulus para el uso de
las infusiones obtenidas de los principales mercados de abastos de Lima, en tiempos de
pandemia covid-19, mediante el método de Kirby Bauver, lima 2020? 3. ¿Cuáles serán
los efectos de la carga bacteriana en la población que consume Eucalyptus globulus de
los principales mercados de abasto de Lima en tiempos de pandemia covid-19, lima
22
2020?; la justificación de la presente investigación es de gran interés y utilidad para la
sociedad, hoy que se vive una crisis sanitaria mundial y el Perú no es la excepción de este
problema, observamos que gran parte de la población veía como una alternativa a la
infusión de eucalipto como tratamiento coadyuvante para el COVID 19; e incluso el
gobierno peruano se atrevió anunciar que importaría hojas de eucalipto de Argentina.
Sabemos que la E. Coli es una bacteria que produce una toxina que daña el recubrimiento
del intestino delgado, lo que puede causar diarrea con sangre. Este estudio contribuirá a
mejorar el uso de las plantas medicinales en infusión y convertirse en un producto
beneficioso y accesible para la población en general y así mejorar la salud contra el
COVID-19 de la población peruana. Objetivo general como: determinar cuál es la carga
bacteriana en la infusión de Eucalyptus globulus obtenidas de los principales mercados
de abastos de Lima, en tiempos de pandemia Covid - 19, mediante el método de Kirby
Bauver, Lima 2020 y como objetivos específicos: 1. Conocer los principales metabolitos
secundarios de la infusión de Eucalyptus globulus obtenidas de los principales mercados
de abastos de Lima, en tiempos de pandemia Covid- 19, mediante el método de Kirby
Bauver, lima 2020. 2. Describir la presencia de la carga bacteriana en la infusión de
Eucalyptus globulus obtenidas de los principales mercados de abastos de Lima, en
tiempos de pandemia Covid- 19, mediante el método de Kirby Bauver, Lima 2020. 3.
Conocer cuáles son los probables efectos de la carga bacteriana producidos por el
consumo como infusión del Eucalyptus globulus en la población obtenidos en los
principales mercados de abasto de Lima en tiempos de pandemia covid-19, lima 2020.
Hipótesis general: Existirá altas cargas bacterianas en las hojas de Eucalyptus globulus
obtenidas de los principales mercados de abastos de Lima. Hipótesis nula: Todas las hojas
de los mercados tienen la misma carga bacteriana. Hipótesis alternativa: Las hojas de los
mercados tienen diferentes cargas bacterianas.
23
II. METODO
2.1 Tipo y diseño de investigación
Para esta investigación se desarrolló el método científico experimental, donde se realizó
la verificación y el desarrollo de las variables de acuerdo al método de Kirby Bauer del
cultivo in vitro, para el análisis de la infusión de la hoja de Eucalyptus globulus
(Eucalipto).
Básico. Porque la finalidad es formular nuevas teorías o modificar las existencias e
incrementar los conocimientos científicos.
Por sus objetivos es analítico y por su intervención es observacional porque se midieron
los datos en un solo momento y nivel cuantitativo en relación con los objetivos
planteados.
Diseño de investigación
Se realizó el diseño transeccional. Por qué se recopilan en un momento único. Se
describen variables y se analizan su interrelación en un momento dado.
X O
X = Condición experimental
O = medición (análisis) de la Observación
Se realizó un control de variable de acuerdo al protocolo de estudio, con la finalidad de
identificar las posibles relaciones entre causa y efecto. La infusión se obtendrá por
maceración, posteriormente se realizó la presencia bacteriana in vitro y la identificación
de metabolitos secundarios (Tamizaje fitoquímico). La presencia bacteriana se
determinará por el método de Kirby Bauer cultivo in vitro, se analizó la infusión de la
hoja de Eucalyptus globulus (Eucalipto). Se determinó la presencia de la carga bacteriana
y se realizó un reporte de ella respectivamente de los principales mercados de abastos de
Lima Metropolitana, en tiempos de pandemia COVID-19, se determinó los metabolitos
24
secundarios a aquellos extractos con que cargas bacterianas moderadamente activa se
encuentran en las hojas del Eucalyptus globulus (eucalipto).48
2.2. Operacionalización de variables
Ver Anexo
Tipos de variables.
- Variable Independiente
Infusión Eucalyptus globulus L.
- Variable Dependiente
Carga bacteriana en la infusión Eucalyptus globulus L.
- Dimensiones:
Análisis de la planta.
Análisis microbiológico
- Indicadores:
VI:
Metabolitos secundarios
Carga bacteriana
Tiempo
VD:
Carga bacteriana
UFC
- Escala:
Vi: Carga Bacteriana
Vd: Observación de unidad formadora de colonia.
Lectura de carga bacteriana
2.3. Población, muestra y muestreo
2.3.1. Población de estudio31
En nuestra Investigación la población corresponde a 4 muestras de Eucalyptus globulus
de los diferentes mercados de Lima y su análisis microbiológico por el método de Kirby
Bauer.
25
Población bacteriana
El estudio se realizó reconociendo las diferentes cepas bacterianas que proliferarán la
placa bacteriana del análisis que realizamos a la infusión de la especie vegetal Eucalyptus
globulus L. “Eucalipto”.
Población vegetal
Constituida por la especie vegetal Eucalyptus globulus L. “Eucalipto”.
Muestra.
Muestra bacteriana
Está conformado por el número de colonias que proliferaran en el análisis del método de
Kirby Bauer de la especie vegetal Eucalyptus globulus L.
Muestra vegetal
Se emplearon 500 gramos de hojas de Eucalyptus globulus L. “Eucalipto”, que fueron
recolectadas en los principales mercados de abastos de Lima: mercado de Santa Anita,
mayorista de la Victoria, Caquetá y Unicachi de Villa el Salvador de forma aleatoria;
cumpliendo con los criterios de inclusión y exclusión.
Muestreo32
La muestra del estudio se realizó mediante el método Kirby Bauer y se reportó la ufc de
cada muestra analizada, como medidas de tendencia central, el método de Análisis
estadístico de datos en Excel, por Windows 10, de tal forma que al muestreo se define
como el conjunto de observaciones necesarias para estudiar la distribución de
determinadas características en la totalidad de una población, a partir de la observación
de una parte o subconjunto de una población, denominada muestra.
Criterios de Inclusión
- Recolección de las hojas de los mercados indicados en la muestra vegetal.
- Hojas verdes y de buen aspecto organoléptico de Eucalyptus globulus.
Criterios de exclusión.
- Hojas muy deterioradas y con presencia de hongos.
26
- Hojas secas
2.4. Técnicas e instrumentos de recolección de datos, validez y confiabilidad
Materiales de bioseguridad:
Guantes Quirúrgicos
Gafas protectora
Mascarilla
Gorros desechables
Mandil
Botas descartables (protector de zapatos)
Materiales de laboratorio
- Vasos de precipitado 50 ml,
200 ml
- Matraces 500 ml, 1000 ml
- Probetas 50 ml, 100 ml
- Pipetas volumétricas 1 ml, 2
ml, 5 ml, 10 ml
- Embudos
- Frascos de vidrio pequeños
- Placas de Petri
- Tubos de ensayo
- Tubos con tapa rosca
- Lunas de reloj
- Pliegos de papel fieltro
- Gradillas
- Goteros
- Mortero
- Pinzas de madera
- Frascos de gotero
- Escobillones estériles
- Frascos ámbar de 1000 ml
- Papel kraf
- Bagueta
- Asa de siembra
- Hisopos
Medios de cultivo
Agar Mueller Hinton
Caldo Tripticasa soya
Recolección y autenticación botánica
Las muestras fueron recolectadas en los distintos mercados de Lima metropolitana
departamento de Lima, de forma aleatoria distrito de Lima, en los distritos de la Victoria,
Surquillo, Villa el Salvador y San Martin de Porres. Observamos las mejores especies
27
para su recolección (tallos, hojas) con y lo guardamos en un saquillo con orificios grandes
para evitar el exceso de sudoración.
Método Kirby Bauer
Existen diversos métodos para determinar in vitro la susceptibilidad de bacterias ante
agentes bacterianos. Sin embargo, los resultados pueden estar influenciados por el
método, cepas utilizadas y el grado de solubilidad de cada compuesto evaluado.35 El
método de Kirby Bauer es cualitativo, nos permite evaluar extractos de plantas con
actividad antibacteriana, sus resultados son altamente reproducibles. Este método se basa
en la relación entre la Muestra necesaria. La infusión para inhibir una cepa bacteriana y
el diámetro de la carga bacteriana de inhibición. Este método se puede realizar en pozo
impregnado con una cantidad conocida de la sustancia o en disco.33
Tamizaje fitoquímico
Se realizó reacciones de identificación basado en la aplicación de pruebas de coloración
y precipitación para determinar la presencia o ausencia de metabolitos activos en la
planta, haciendo uso de reactivos específicos.30
Ensayo microbiológico
Se utilizó el método de Kirby Bauer, consiste en la difusión de una muestra a través de
una capa de agar solidificado, en una extensión tal que el crecimiento de microorganismos
sensibles es inhibido en zonas alrededor del área que contiene los discos de papel secante
impregnados con el antibiótico y la muestra La infusión de Eucalyptus globulus L.62
Controles
Como control negativo se utilizó agua destilada estéril y como control positivo siguiendo
lo establecido por el INS.8
Medio de cultivo
Los medios de cultivo utilizados fueron el agar Mueller Hinton y caldo Tripticasa soya.
El Agar Mueller-Hinton se adicionó en placas de Petri para ensayo de sensibilidad
antibacteriana.
Recuento sistema automatizado: distintos autores han validado una lectura del recuento
de colonias para PREVI™ Isola, dado que el volumen y el método de siembra es
28
diferente1,7,10. Esta se realiza en base al número de cuadrantes con desarrollo de colonias,
como se observa en la Figura 12. Los rangos obtenidos con esta metodología son: <
10.000 ufc/ml, 10.000 a 50.000 ufc/ml, 50.000-100.000 ufc/ml y > 100.000 ufc/ml.
Figura V: Clasificación de la actividad antimicrobiana según el porcentaje de inhibición.
Fuente: Scielo, 2001
Figura V. Siembra obtenida y recuento para placas sembradas con PREVI™
Isola. El recuento semi cuantitativo se realiza dividiendo la placa en ocho
zonas y observando las áreas con crecimiento de colonias. La zona de
inoculación corresponde a la línea entre las áreas 8 y 1, a partir del
cual se distribuye la muestra. La interpretación del recuento semi cuantitativo
se realiza observando hasta que zona hubo desarrollo de colonias, en el
ejemplo de la foto el crecimiento correspondía a > 1 00.000 ufc/mL.29
2.5. Procedimiento
Preparación del material vegetal
Se empleó 500 gr de Eucalyptus globulus L., tal cual realizamos un hisopado para su
1er análisis
Se empleó 500 gr de Eucalyptus globulus L. Separamos las hojas y tallos de la planta,
limpiamos cuidadosamente con alcohol de 96º. Una vez limpio se extendió en una
fuente para secar a temperatura ambiente por 5 días esto se aplicó para el segundo
análisis.
29
Se llevó la muestra a estufa en una temperatura menor de 40º C durante un periodo
de 72 horas.
Una vez seca se trituró la muestra, se obtuvo 250 gr de muestra seca.
Obtención de la infusión de Eucalyptus globulus L.
Se pesó 50 gr de Eucalyptus globulus L
Se adicionó agua a 80 ˚C.
Tabla II: Método de clasificación de ausencia o presencia de bacterias en la muestra
Crecimiento Microbiano Especificación Crecimiento
- Ausencia
+/- Escaso
+ Moderado
++ Abundante
+++ Muy abundante
Fuente: Elaboración propia 2020
Examen fitoquímico del eucalipto
Procedimiento de la marcha fitoquímica29
Se pesó 0.1 g de extracto de Eucaliptus globulus L. Y se disolvió en 10 mL de
etanol. Luego se vertió 0.5 mL de esta solución en 14 tubos de ensayo rotulados
como tubo 2 – 13.
Se vertió 20 mg de extracto de Eucaliptus globulus L. en los tubos etiquetados
como 1 y 14.
Luego se procedió ejecutar el tamizaje fitoquímico en el orden y según el
procedimiento descrito en la siguiente tabla.
30
Tubo
N°
Metabolito Procedimiento Ensayo Reacción
positiva
1 Quinonas 3 gts de reactivo
Borntrager
Borntrager Rojo fase
acuosa
2 Comp. Fenólicos II gts de reactivo FeCl3 FeCl3 Azul o verde
3 Flavonoides 3 gts de reactivo
Shinoda
Shinoda Rojos-naranja
4 Antocianinas II gts de NaOH 10% NaOH Verde-morado
5 Taninos II gts de getatina Gelatina-sal Ppdo
blanquesino
6 Alcaloides II gts de reactivo
Drangendorff
Drangendorff Ppdo rojo
7 Alcaloides II de reactivo
Mayer
Mayer Ppdo marrón
8 Alcaloides II de reactivo
Wagner
Wagner Ppdo blanco
9 Triterpenos
esteroides
II de reactivo
Liebermann-burchard
Liebermann-
burchard
Verde - azul
10 Lactona α, β
insaturadas
II gts de reactivo
Baljet
Baljet Rojo
11 Azúcares
reductores
II gts de reactivo
Fehling
Fehling Ppdo rojo
12 Azúcares
reductores
III gts reactivo
Benedict
Benedict Ppdo rojo
13 Carbohidratos III gts reactive
Molish
Molish Anillo violáceo
14 Saponinas V gts de agua destilada y
agitación enérgica
Espuma Espuma
Preparación de agar Mueller Hinton: se utilizó el medio de cultivo Mueller
Hinton. Se preparó el medio de cultivo de acuerdo con las instrucciones del
fabricante. se pesó 10,88 gr del agar y se disolvió en 320 ml de agua destilada, pH
a 7.2-7.4 con solución de NaOH 0.1N. Se esterilizó en autoclave a una temperatura
de 121º C por 15 minutos. Se llevó a baño maría para enfriar a temperatura 48-
50°C.Se distribuyó el medio en las placas de Petri hasta un nivel aproximado de
4 UFC. Esto corresponde a 20 ml de medio en placas Petri de 15 x 100 ml de
diámetro interno. Se dejó solidificar el medio de cultivo durante 30 minutos.
Dilución de las diferentes infusiones
Muestra del mercado Caquetá = infusión de Eucalyptus globulus L.
Muestra del mercado de La Parada= infusión de Eucalyptus globulus L.
31
Muestra del mercado Unicachi = infusión de Eucalyptus globulus L.
Muestra del mercado de # 2 de Surquillo=. Infusión de Eucalyptus globulus L.
Preparación de hisopos de sensibilidad con las muestras analizar
Los hisopos estériles se empleando para realizar:
El estriado de las hojas de Eucalyptus globulus L. se realizó con hisopos estériles,
así como también de la infusión de Eucalyptus globulus L. Estos hisopos fueron
esterilizados en autoclave a 121ºC durante 15 minutos. Luego se procedió a
agregar a cada uno de los discos 20 μl de las hojas de eucalipto y la infusión de
Eucalyptus globulus L.
Preparación del inoculo
Se transfirió las hojas de Eucalyptus globulus L. a un tubo que contiene de 4 a 5
mL de caldo Tripticasa soya.
Se transfirió la infusión de Eucalyptus globulus L. a un tubo que contiene de 4 a
5 mL de caldo Tripticasa soya.
Se incubó el caldo a una temperatura entre 35°C a 37°C por 24 hrs, hasta que
alcance o exceda la turbidez.
Inoculación de las placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inóculo, se realizó
hisopado estéril en la planta de la hoja de Eucalyptus globulus L, respectivamente.
Se inoculó la superficie seca de la placa, estriando con el hisopo en tres
direcciones para asegurar una distribución uniforme del inóculo ver Figura VI.
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inóculo, se
sumergió un hisopo estéril en la suspensión de la infusión, respectivamente.
Se inoculó la superficie seca de la placa, estriando con el hisopo en tres
direcciones para asegurar una distribución uniforme del inóculo ver Figura VI.
Figura VI: Direcciones en el sembrado del inóculo sobre la superficie del agar.
32
Fuente: INS, 2012
Incubación
Después de 15 minutos de aplicar los discos, se incubaron las placas en posición
invertida a 35°C durante 18 horas. Después del tiempo recomendado de
incubación, se examinó cada placa, donde se procedió a medir los diámetros de
las cargas bacteriana de inhibición alrededor de cada disco.
Medición del crecimiento de carga bacteriana
Se midió la zona de inhibición de cada bacteria contra una superficie oscura bajo
luz reflejada.
Medimos el diámetro de la zona incluyendo las UFC de la bacteria, con una regla
o vernier sobre el respaldo de la placa Petri sin remover la placa.
2.6. Método de análisis de datos29
Se calculó la estadística descriptiva de los diámetros de proliferación bacteriana,
obtenidas de la infusión de Eucalyptus globulus (eucalipto), que son presentados en tablas
y gráficos. Los resultados se evaluaron mediante el método de Análisis estadístico de datos
en Excel, por Windows 10, con el fin que tenga consistencia la información levantada de
la ejecución del instrumento de investigación. Empleamos este método ya que permite
comparar varias medias en diversas situaciones; muy ligado, por tanto, al diseño
experimental. Las diferencias entre medidas de grupos fueron analizadas mediante el test
de comparaciones múltiples. Los resultados muestrales fueron inferidos mediante
estimación por intervalo en cuadros de %.Se calculará la media y desviación estándar de
los diámetros de inhibición, como medidas de tendencia central, obtenidas del hisopado
de la planta de Eucalyptus globulus L. “Eucalipto” y de la infusión de Eucalyptus globulus
L. “Eucalipto”, que son presentados en tablas y gráficos, mediante el método de Análisis
estadístico de datos en Excel, por Windows 10, con el fin que tenga consistencia la
información levantada de la ejecución del instrumento de investigación. Empleamos este
método ya que permite comparar varias medias en diversas situaciones; muy ligado, por
tanto, al diseño experimental. Las diferencias entre medidas de grupos fueron analizadas
33
mediante el test de comparaciones múltiples.Análisis de procedimiento estadístico nos
sirve para medir la variación total de las observaciones, la que se divide para sus
componentes, quedando el residuo como error experimental. Este análisis nos indica la
relación entre una variable dependiente (El crecimiento bacteriano in vitro de la hoja y la
infusión de Eucalyptus globulus L.) y los factores independientes (la hoja y la infusión
de Eucalyptus globulus L.).Se calculó el porcentaje de inhibición de la hoja y la infusión
de Eucalyptus globulus L., en la prueba de actividad antibacteriana por el método de
Difusión en agar (Kirby Bauer), estos valores son presentados en tablas y gráficos,
clasificados de acuerdo a las especificaciones.
2.7. Aspectos éticos
Se procede de acuerdo la normatividad de las investigaciones científico.
38
III. RESULTADOS
TAMIZAJE FITOQUÍMICO
Tabla 01: Resumen de la marcha fitoquímica del eucalipto
Metabolito secundario Reactivo Presencia
Flavonoides Shinoda (+++)
Pb (CH3COO)2 (++)
Compuestos Fenólicos FeCl3 (++)
Camarinas NaOH 10% (+++)
Taninos Gelatina salada (++)
Alcaloides
Reacción Dragendorff (+++)
Reacción Mayer (-)
Reacción Wagner (++)
Aminoácidos Reacción con Ninhidrina (++)
Saponinas Reacción con agua (+)
Triterpenos Lieberman- Burchard (+)
En la presente investigación del estudio microbiológico de la infusión de Eucalyptus globulus
obtenidas de los mercados de abastos de Lima, en tiempos de pandemia covid-19 – Lima 2020,
se realizó la evaluación fitoquímica del eucalipto donde se puede apreciar en la tabla N° 01 que
los metabolitos encontrados predominan los flavonoides, cumarinas y alcaloides teniendo la
misma característica de reacción, luego seguido por compuestos fenólicos y aminoácidos y por
último se ha observado la reacción positiva de saponinas y triterpenos.
EVALUACIÓN DE LA PRESENCIA BACTERIANA IN VITRO DE LA HOJA DEL
Eucaliptus globulus L.
TABLA 02: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de hojas de Eucaliptus
globulus a las 24 hrs.
39
Mercado
Tamaño de la
muestra en
(g)
Bacterias de E.
coli (UFC/g)
(UFC/mL)
Número máximo
permitido
(UFC/g),
(UFC/mL)
Observaciones
Surquillo 10 1,1 x 101 103 Aceptable
Unicachi 10 1,5 x 104 103 Inaceptable
La Parada 10 1,7 x 104 103 Inaceptable
Caquetá 10 1,9 x 104 103 Inaceptable
Fuente: Elaboración propia 2020
Figura N° 01: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de hojas del Eucaliptus
globulus L. a las 24 hrs.
Fuente: Elaboración propia 2020
En el presente trabajo de investigación en la tabla N° 02, figura N° 01 se observa que la
presencia de bacterias en las hojas a las 24 horas que se hizo la siembra, fue muy alta en los
mercados de Unicachi, Caquetá y la Parada incluso sobrepasando su límite máximo permitido,
en cambio en el mercado de Surquillo fue escaso.
1,1x10
1,5x10
1,7x10
1,9x10
Bacteria E. coli en hojas de eucalipto
Surquillo Unicachi La Parada Caqueta
40
TABLA 03: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de hojas de Eucaliptus
globulus a las 48 hrs.
Mercado
Tamaño de
la muestra
en (g)
Bacterias de
Escherichia
coli (UFC/g),
(UFC/mL)*
Número máximo
permitido
(UFC/g),
(UFC/m)*
Observaciones
Surquillo 10 1,2 x 101 103 Aceptable
Unicachi 10 2,5 x 104 103 Inaceptable
La Parada 10 2,7 x 104 103 Inaceptable
Caquetá 10 2,9 x 104 103 Inaceptable
Fuente: Elaboración propia 2020
Figura N° 02: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de hojas del Eucaliptus
globulus L. a las 48 hrs.
Fuente: Elaboración propia 2020
En la tabla N° 03, figura N° 02 se observa que la presencia de bacterias en las hojas a las 48
horas que se hizo la siembra, fue muy alta en los mercados de Unicachi, Caquetá y la Parada
incluso sobrepasando su límite máximo permitido, en cambio en el mercado de Surquillo fue
escaso.
1,2x10
2,5x10
2,7x10
2,9x10
Bacteria E.coli en hojas de eucalipto
Surquillo Unicachi La Parada Caqueta
41
Tabla 04: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de hojas del Eucaliptus
globulus L. a las 72 hrs
Mercado
Tamaño de
la muestra
en (g)
Bacterias de
Escherichia
coli (UFC/g),
(UFC/mL)
Número
máximo
permitido
(UFC/g),
(UFC/m)
Observaciones
Surquillo 10 1,2 x 101 103 Aceptable
Unicachi 10 3,5 x 104 103 Inaceptable
La Parada 10 3,7 x 104 103 Inaceptable
Caquetá 10 3,9 x 104 103 Inaceptable
Fuente: Elaboración propia 2020
Figura N° 03: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de hojas del Eucaliptus
globulus L. a las 72 horas.
Fuente: Elaboración propia 2020
En la tabla N° 04, figura N° 03 se observa que la presencia de bacterias en las hojas a las 72
horas que se hizo la siembra, fue muy alta en los mercados de Unicachi,Caquetá y la Parada
incluso sobrepasando su límite permitido, en cambio en el mercado de Surquillo fue escaso.
1,2x10
3,5 x10
3,7x10
3,9x10
Bacteria E.coli en hojas de eucalipto
Surquillo Unicachi La Parada Caqueta
42
Tabla N° 05: Lectura de formación de la carga bacteriana según el análisis microbiológico de las hojas de Eucaliptus globulus L.
expresado en UFC.
Concentración
del extracto
Lectura
24 horas 48 horas 72 horas Promedio
Lectura 1
(ufc/ml)
Lectura 2
(ufc/ml)
Lectura 3
(ufc/ml)
Lectura 1
(ufc/ml)
Lectura 2
(ufc/ml)
Lectur3
(ufc/ml)
Lectura1
(ufc/ml)
Lectura 2
(ufc/ml)
Lectura 3
(ufc/ml)
(ufc)
Mercado de
Surquillo <10,000 <10,000 <10,000 < 10,000 <10,000 < 10,000 < 10,000 <10,000 <10,000 <10,000
Mercado
Unicachi >100,000 >100,000 >100,000 >100,000 >100,000 >100,000 >100,000 >100,000 >100,000 >100,000
Mercado de la
Parada >100,000 >100,000 >100,000 > 100,000 > 100,000 >100,000 >100,000 >100,000 >100,000 >100,000
Mercado de
Caquetá >100,000 > 100,000 >100,000
>100,00
0 > 100,000
>100,00
0
>100,00
0
>100,
000
>100,00
0 >100,000
Agua
Destilada 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
43
Tabla N° 06: Lectura de formación de la carga bacteriana según el análisis microbiológico de las hojas de Eucaliptus globulus L.
expresados en porcentajes.
Concentración
del extracto
Lectura
24 horas 48 horas 72 horas Promedio
(ufc) Lectura 1
(ufc)
Lectura 2
(ufc)
Lectura 3
(ufc)
Lectura 1
(ufc)
Lectura
2
(ufc)
Lectura 3
(ufc)
Lectura 1
(ufc)
Lectura 2
(ufc)
Lectura 3
(ufc)
Mercado de
Surquilo <10% <10%
<10
% <10% <10% <10% <10% <10% <10% <10%
Mercado
Unicachi > 100% > 100%
>100
% > 100% > 100% > 100% > 100% > 100% > 100% > 100%
Mercado de
La Parada >100
% > 100%
>100
% >100% >100% >100% >100% >100% >100% >100%
Mercado de
Caqueta
>100
% >100%
>100
% >100% >100% >100%
>
100% >100% >100% >100%
Agua
Destilada 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
44
EVALUACIÓN DE LA PRESENCIA BACTERIANA IN VITRO DE LA
INFUSION DEL Eucaliptus globulus L.
Tabla 07: Lectura del cultivo bacteriano de presencia o ausencia en el Eucalyptus
globulus L. en la infusión a 24, 48 y 72 horas.
Fuente: Elaboración propia 2020
En el presente trabajo de investigación en la tabla N° 07 se observa que la presencia de
bacterias, fue muy alta en los mercados de Caquetá y La Parada, en cambio en los
mercados de Unicachi y Surquillo fueron escasos.
TABLA 08: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de infusión de
Eucalyptus globulus L. a las 24 horas.
Mercado
Tamaño de
la muestra
en (g)
Bacterias de
Escherichia
coli (UFC/g),
(UFC/mL)
Número máximo
permitido
(UFC/g),
(UFC/m)
Observaciones
Surquillo 10 1,1 x 101 103 Aceptable
Unicachi 10 1,2 x 101 103 Aceptable
La Parada 10 1,7 x 104 103 Inaceptable
Muestra Placa Petri
Tiempo (horas)
24h 48h 72h
Mercado Caquetá 1 +++ +++ +++
Mercado La Parada 1 ++ +++ +++
Mercado Unicachi 1 +/- +/- +/-
Mercado de Surquillo 1 +/- +/- +/-
Agua Destilada 1 - - -
45
Caqueta 10 1,9 x 104 103 Inaceptable
Fuente: Elaboración propia 2020
Figura N° 04: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de la infusión del
Eucaliptus globulus L. a las 24 hrs.
Fuente: Elaboración propia 2020
En el presente trabajo de investigación en la tabla N° 08, figura N° 04 se observa que la
presencia de bacterias en las hojas a las 24 horas que se hizo la siembra, fue muy alta en
los mercados de Caquetá y la Parada incluso sobrepasando su límite máximo permitido,
en cambio en los mercados de Surquillo y Unicachi fue escaso.
TABLA 09: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de infusión de
Eucalyptus globulus L. a las 48 horas.
1,1x10 1,2x10
1,7x10
1,9x10
BACTERIAS E.Coli EN LA INFUSION DE EUCALIPTO
Surquillo Unicachi La parada Caqueta
46
Mercado
Tamaño de
la muestra
en (g)
Bacterias de
Escherichia
coli (UFC/g),
(UFC/mL)*
Número máximo
permitido
(UFC/g),
(UFC/m)*
Observaciones
Surquillo 10 1,2 x 101 103 Aceptable
Unicachi 10 1,2 x 101 103 Aceptable
La Parada 10 2,7 x 104 103 Inaceptable
Caquetá 10 2,9 x 104 103 Inaceptable
Fuente: Elaboración propia 2020
Figura N° 05: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de la infusión del
Eucaliptus globulus L. a las 48 horas.
Fuente: Elaboración propia 2020
En la tabla N° 09, figura N° 05 se observa que la presencia de bacterias en las hojas a las
48 horas que se hizo la siembra, fue muy alta en los mercados de Caquetá y la Parada
1,2x10
1,2x10
2,7x102,9x10
BACTERIAS E. COLI EN INFUSION DE EUCALIPTO
Surquillo Unicachi La Parada Caqueta
47
incluso sobrepasando su límite máximo permitido, en cambio en los mercados de
Surquillo y Unicachi fue escaso.
TABLA 10: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de infusión de
Eucalyptus globulus L. a las 72 horas.
Mercado
Tamaño de
la muestra
en (g)
Bacterias de
Escherichia
coli (UFC/g),
(UFC/mL)*
Número
máximo
permitido
(UFC/g),
(UFC/m)*
Observaciones
Surquillo 10 1,2 x 101 103 Aceptable
Unicachi 10 1,2 x 102 103 Aceptable
La Parada 10 3,7 x 104 103 Inaceptable
Caquetá 10 3,9 x 104 103 Inaceptable
Fuente: Elaboración propia 2020
Figura N° 06: Resultados obtenidos de los análisis microbiológicos de la infusión del
Eucaliptus globulus L. a las 72 horas.
48
Fuente: Elaboración propia 2020
En la tabla N° 10, figura N° 06 se observa que la presencia de bacterias en las hojas a las
72 horas que se hizo la siembra, fue muy alta en los mercados de Caquetá y la Parada
incluso sobrepasando su límite máximo permitido, en cambio en los mercados de
Surquillo y Unicachi fue escaso.
1,2x10
1,2x10
3,7x103,9x10
BACTERIAS E. COLI EN INFUSION DE EUCALIPTO
Surquillo Unicachi La Parada Caqueta
49
Tabla N° 11: Lectura de formación de la carga bacteriana según el análisis microbiológico de la infusión de Eucaliptus globulus L.
expresados en UFC.
Concentración del
extracto
Lectura
24 horas 48 horas 72 horas Promedio
Lectura 1
(ufc/ml
)
Lectura
2
(ufc/ml)
Lectura3
(ufc/ml)
Lectura1
(ufc/ml)
Lectura 2
(ufc/ml)
Lectura 3
(ufc/ml
)
Lectura 1
(ufc/ml
)
Lectura 2
(ufc/ml
)
Lectura 3
(ufc/ml
)
(ufc)
Mercado de
Surquillo <10,000 <10,000 <10,000 < 10,000 <10,000 < 10,000 < 10,000 <10,000 <10,000 <10,000
Mercado
Unicachi <10,000 <10,000 <10,000 <10,000 <10,000 < 10,000 <10,000 <10,000 <10,000 <10,000
Mercado de la
Parada
>100,0
00 >100,000
>100,00
0 > 100,000 > 100,000 >100,000 >100,000 >100,000 >100,000
>100,00
0
Mercado de
Caquetá
>100,0
00 > 100,000
>100,00
0
>100,00
0 > 100,000
>100,00
0
>100,00
0
>100,00
0
>100,0
0
>100,00
0
Agua
Destilada 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
50
Tabla N° 12: Lectura de formación de la carga bacteriana según el análisis microbiológico de la infusión de Eucaliptus globulus L.
expresados en porcentajes.
Concentración del
extracto
Lectura
24 horas 48 horas 72 horas
Promedio
(ufc) Lectura 1
(ufc)
Lectura 2
(ufc)
Lectura 3
(ufc)
Lectura 1
(ufc)
Lectura 2
(ufc)
Lectura 3
(ufc)
Lectura 1
(ufc)
Lectura 2
(ufc)
Lectura 3
(ufc)
Mercado de
Surquilo <10% <10% <10% <10% <10% <10% <10% <10% <10% <10%
Mercado
Unicachi <10% <10% <10% <10% <10% <10% <10% <10% <10% <10%
Mercado de la
Parada
>100
% > 100% >100% >100% >100% >100% >100% >100% >100% >100%
Mercado de
Caquetá
>100
% >100% >100% >100% >100% >100% >100% >100% >100% >100%
Agua
Destilada 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0% 0%
51
Figura N° 08: Análisis de mercado de Surquillo
24 horas 48 horas 72 horas
La infusión de Eucalyptus globulus L. del mercado de Surquillo a las 24 horas, 48 horas
y 72 horas no presentan formación elevada <10% de carga bacteriana, por lo tanto, a dicha
muestra del mercado de Surquillo no posee elevada carga bacteriana de E. Coli.
Figura N° 09: Análisis del mercado de Unicachi
24 horas 48 horas 72 horas
La infusión de Eucalyptus globulus L. a las 24 horas, 48 horas y 72 horas no presentan
formación elevada <10% de carga bacteriana, por lo tanto, a dicha muestra del mercado
de Unicachi no posee elevada carga bacteriana de E. Coli.
52
Figura N° 10: Análisis del mercado de la Parada
24 horas 48 horas 72 horas
La infusión de Eucalyptus globulus L. a las 24 horas, 48 horas y 72 horas sí presentaron
formación elevada >100% de carga bacteriana, por lo tanto, a dicha muestra del mercado
de la Parada sí posee elevada carga bacteriana de E. Coli superando la carga máxima
permitida.
Figura N° 11: Análisis del mercado de Caquetá
24 horas 48 horas 72 horas
La infusión de Eucalyptus globulus L. a las 24 horas, 48 horas y 72 horas sí presentaron
formación elevada >100% de carga bacteriana, por lo tanto, a dicha muestra del mercado
de Caquetá sí posee elevada carga bacteriana de E. Coli superando la carga máxima
permitida.
53
IV. DISCUSIÓN
En el presente trabajo de investigación en la tabla N° 07 se observa que la presencia de bacterias,
fue muy alta en los mercados de Caquetá y La Parada, en cambio en los mercados de Unicachi y
Surquillo fueron escasos. Coincidiendo con M. Torres et al (2007), evaluaron
microbiológicamente algunas plantas: Boldo (Peumus boldus), Caléndula (Caléndula officinalis),
Sen (Casia angustifolia Vahl), Fucus (Fucus vesiculosas L) y Spirulina (Spirulina maxima). Se
realizó el recuento de microorganismos mesófilos aerobios, hongos, levaduras y pruebas de
ausencia/presencia para microorganismos patógenos como: Escherichia coli, Pseudomonas
aeruginosa, Salmonella s.p, Clostridium perfringes y Staphylococcus aureus.
En la presente trabajo de investigación en la tabla N° 01 se observa el estudio microbiológico de
la infusión de Eucalyptus globulus obtenidas de los mercados de abastos de Lima, en tiempos de
pandemia covid-19 – Lima 2020, se realizó la evaluación fitoquímica del eucalipto donde se
puede apreciar en la tabla N° 01 que los metabolitos encontrados predominan los flavonoides,
Cumarinas y alcaloides teniendo la misma característica de reacción, luego seguido por
compuestos fenólicos y aminoácidos y por último se ha observado la reacción positiva de
saponinas y triterpenos. Coincide con Mervat E. et al (2017) mediante extracto fitoquímicos de
Eucalyptus buscaron que componentes fitoquímicos puede tener su especie vegetal recolectada
en México puede evitar el crecimiento de bacterias; en su investigación se llegó a la conclusión
que esta especie vegetal si cuenta con metabolitos que puedan contribuir a este fin científico,
como lo fueron las Cumarinas, saponinas, flavonoides, azúcares reductores, triterpenos, y
aminoácidos.
En la presente investigación en la tabla N° 06 del estudio microbiológico de la infusión de
Eucalyptus globulus obtenidas de los mercados de abastos de Lima, en tiempos de pandemia
covid-19 – Lima 2020, La infusión de Eucalyptus globulus L. a las 24 hrs, 48 hrs y 72 hrs% se
visualizó la presencia de la carga bacteriana del eucalipto es e. coli, presentan formación elevada
>100% de carga bacteriana los mercados de Caquetá y la Parada y no presentan formación
elevada <10% de carga bacteriana los mercados de surquillo y Unicachi. Coincidiendo con M.
Torres et al (2007), evaluaron microbiológicamente algunas plantas: Boldo (Peumus boldus),
Caléndula (Caléndula officinalis), Sen (Casia angustifolia Vahl), Fucus (Fucus vesiculosas L) y
Spirulina (Spirulina máxima). Se realizó el recuento de microorganismos mesófilos aerobios,
54
hongos, levaduras y pruebas de ausencia/presencia para microorganismos patógenos como:
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella s.p, Clostridium perfringes y
Staphylococcus aureus.
En la presente investigación en la Figura N° 10 y Figura N° 11, muestra que la infusión de
Eucalyptus globulus L. a las 24, 48 y 72 horas sí presentaron formación elevada >100% de carga
bacteriana, por lo tanto, a dicha muestra del mercado de la Parada y Caquetá sí posee elevada
carga bacteriana de E. Coli superando la carga máxima permitida. Coincidiendo con P. Kareru et
al, evaluaron la Actividad antimicrobiana de algunas plantas medicinales utilizadas por los
herbolarios en la provincia oriental de Kenia. Los extractos acuosos de plantas medicinales
comúnmente utilizados por los herbolarios los extractos de plantas seleccionados (infusiones:
1,0 g de muestra en 100 ml de agua) investigados mostraron actividad contra Escherichia coli
con diámetros de zona de inhibición que oscilaban entre 5,8 y 18,0 mm. Terminalia brownii dio
las zonas de inhibición más grandes contra E. coli y Staphylococcus aureus.
55
V. CONCLUSIONES
La carga bacteriana en la infusión de Eucalyptus globulus, Escherichia coli presenta formación
>100% de carga bacteriana las muestras del en mercado Caquetá y la parada, mientras que en
los mercados de surquillo y Unicachi la carga bacteriana es <10%.
Los principales metabolitos secundarios de la infusión de Eucalyptus globulus obtenidas de los
principales mercados de abastos de Lima, en tiempos de pandemia Covid- 19, se realizó la
evaluación fitoquímica del eucalipto donde se puede apreciar que metabolitos encontrados
predominan los flavonoides, Cumarinas y alcaloides teniendo la misma característica de
reacción, luego seguido por compuestos fenólicos y aminoácidos y por último se ha observado
la reacción positiva de saponinas y triterpenos.
La carga bacteriana en la infusión del Eucalyptus globulus, se observa que la presencia de
bacterias como la E. coli, fue muy alta en los mercados de Caquetá y La Parada, en cambio en
los mercados de Unicachi y Surquillo fueron escasos.
Los probables efectos de la carga bacteriana producidos por el consumo de infusión del
Eucalyptus globulus, donde se observa que la presencia de bacterias Escherichia coli, puede
llegar a producir a la persona la toxina que daña el recubrimiento del intestino delgado, lo
que puede causar diarrea con sangre e incluso síntomas como náuseas o vómitos, fuertes
cólicos abdominales, diarrea liquida o con mucha sangre, cansancio, fiebre incluso llevando
a la confusión de ser diagnosticado como COVID 19.
56
VI. RECOMENDACIONES
Se recomienda hacer muestreos más frecuentes a los mercados de Lima metropolitana para
garantizar su inocuidad de la infusión de Eucalyptus globulus.
Promover el estudio de Eucaliptus globulus, ya que posee un gran potencial para futuras
investigaciones. Pues por los metabolitos secundarios que presenta se puede determinar que
posea otras propiedades biológicas para lo cual se deberá realizar un monitoreo para detectar
la mayor cantidad de compuestos con posibilidad de actividad farmacológica.
Se recomienda realizar un estudio de alimentos (eucalipto) mucho más amplio, la cual incluya
evaluación microbiológica, a fin de determinar si estas cumplen con los limites dados según
DIGESA.
Se recomendamos estudiar con más detalle la resistencia de E. coli y tomar las medidas
necesarias para evitar su diseminación y es necesario que el Departamento de Microbiología
realice una vigilancia permanente de la resistencia a bacteriana a los alimentos de los mercados
de Lima metropolitana y ante la aparición de cepas multiresistentes estas sean enviadas a un
laboratorio de referencia para su análisis microbiológico.
57
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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antibacteriana de compuestos de origen vegetal.2009 Disponible en:
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Profesional de Biólogo Microbiólogo]. Tacna: Universidad Nacional Jorge
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que-bacteria-e-coli-cistitis-urinarias/
61
ANEXOS
62
Anexo N° 01: Operacionalización de las variables
VARIABLE DIMENSIÓN INDICADOR ESCALA
VI:
Infusión de
Eucalyptus globulus
L. (eucalipto)
Análisis
Fitoquímico
VI:
-Carga bacteriana.
-tiempo
-Análisis de hojas de eucalipto
-Bacterias
VD:
Carga bacteriana en
la infusión
Eucalyptus globulus
Estudio
microbiológico
VD:
-Carga bacteriana
- UFC
-Observación de unidad
formadora de colonia.
-Lectura de cepa bacteriano
Fuente: Elaboración propia 2020
63
Anexo N° 02: Matriz de consistencia
Estudio microbiológico de la infusión de Eucalyptus globulus obtenidas de los
principales mercados de abastos de Lima, en tiempos de pandemia covid-19 –
Lima 2020
PROBLEMA
GENERAL OBJETIVO GENERAL
OPERACIONALIACIÓN
DE VARIABLES
METODOLOGÍ
A INTRUMENTOS
VARIABLE
INDEPENDIE
NTE
INDICA
DORES
Alcance de la
Investigación
TÉCNICA:
Observación de
unidad formadora de
colonia
¿Cuál es la carga
bacteriana en la infusión
de Eucalyptus globulus
obtenidas en los
principales mercados de
abastos de Lima, Lima
2020?
Determinar cuál es la carga
bacteriana en la infusión de
Eucalyptus globulus
obtenidas de los principales
mercados de abastos de
Lima, en tiempos de
pandemia covid- 19, Lima
2020
Infusión
Eucalyptus
globulus
eucalipto ´
Carga
bacteriana
. Explicativo -
Descriptivo
INSTRUMENTO:
Tiempo
Ficha de recolección
de datos
Método de
Investigación
Técnicas de
procesamiento de
información:
Tablas y gráficos
analizados por el
programa estadístico
SPSS
Cuantitativo -
comparativo
PROBLEMAS
ESPECÍFICOS OBJETIVOS ESPECÍFICOS
VARIABLE
DEPENDIENT
E
INDICA
DORES
Diseño de la
investigación
¿Cuáles son los
principales metabolitos
secundarios del estudio
microbiológico de
infusión de Eucalyptus
globulus obtenidas en
los principales
mercados de abastos de
Lima, en tiempos de
pandemia covid-19,
Lima 2020?
Conocer los principales
metabolitos secundarios de
la infusión de Eucalyptus
globulus obtenidas de los
principales mercados de
abastos de Lima, en tiempos
de pandemia covid- 19, Lima
2020.
Carga
bacteriana en la
infusión
Eucalyptus
globulus
Carga
bacteriana
Experimental
¿Cuál es la técnica
adecuada de
recolección y transporte
de Eucalyptus globulus
para el uso de las
infusiones obtenidas de
los principales
mercados de abastos de
Lima, en tiempos de
pandemia covid-19,
Lima 2020?
Describir la presencia de la
carga bacteriana en la
infusión de Eucalyptus
globulus obtenidas de los
principales mercados de
abastos de Lima, en tiempos
de pandemia covid- 19
Población
Población
microbiológica:
Carga bacteriana
(UFC) Muestra:
12 placas Petri
¿Cuáles serán los
efectos de la carga
bacteriana en la
población que consume
Eucalyptus globulus de
los principales
mercados de abasto de
Lima en tiempos de
pandemia covid-19,
Lima 2020?
Conocer cuáles son los
probables efectos de la carga
bacteriana producidos por el
consumo como infusión del
Eucalyptus globulus en la
población obtenidos en los
principales mercados de
abasto de Lima en tiempos de
pandemia covid-19, Lima
2020
64
Anexo N° 03: Ficha de validación por juicio de expertos
65
66
67
Anexo N° 04: Recolección del a Eucaliptus globulus L. obtenida en los mercados de
abastos.
Mercado Unicachi
Mercado Surquillo
Mercado Caquetá
68
Anexo N° 05: Inicio de la Marcha Fitoquímica
69
