Establecimiento del Cultivo Primario de cardiacas provenientes de una rata

Sprague-Dawley y células embrionarias

Fundamentos del Cultivo de Células Animales, 2013.Álvarez, D.; Arias, S.; Chaves, J.; Des Bouillons, R.

Cultivo primario

Fig 1. Esquema de las etapas de disección y el establecimiento del cultivo primario.Fuente: Freshney, 2005

Fig 2: Esquema del establecimiento del cultivo primario y los subcultivos.Fuente: Argenbio, s.f.

Aplicación• Desarrollo de nuevos productos biomédicos• Investigaciones

Envejecimiento Células madre Cáncer

• Miocitos en cultivo Trasplantarlos a corazón

Resultados y Discusión

Fig 3. Fotografías que muestran el crecimiento celular del cultivo primario de células de corazón de rata. Método del explante: a, b y c. Método enzimático: d,

e, f. De izquierda a derecha: primera, segunda y tercer semana, respectivamente.

d e f

a b c

Resultados y Discusión

Método enzimático Según Oswaldo et al. (2007) se obtienen gran cantidad de

fibroblastos cardiacos y miocitos.

Los fibroblastos presentan un alto grado de adaptación en condiciones in vitro y una rápida división celular, llegan a ser las

células predominantes en cultivo primario. Participan en la síntesis, la secreción y degradación de las proteínas de la matriz extracelular.

Brindan las condiciones apropiadas para que otros tipos de células puedan desarrollarse en conjunto.

Resultados y Discusión

Favorecieron las condiciones

para que otras células también

pudieran proliferar.

Junto con la secreción de

proteínas de la matriz

extracelular.

La gran tasa proliferativa de los fibroblastos.

Resultados y discusión

Explante El cultivo a partir de explante tiene la limitación de que el crecimiento se limita a la periferia del explante y la capacidad

proliferativa de la célula.

Procesos fisiológicos de las células como el ciclo celular, la presencia de factores de crecimiento, las concentraciones de suero agregadas

al medio, así como la densidad celular.

Esta situación se pudo haber debido a condiciones de estrés en las células que impidieron un buen desarrollo de las mismas luego de su establecimiento in vitro. Sin embargo, se logró determinar que

las células cardíacas de rata, crecen mejor cuando el tejido se disocia enzimáticamente.

Fig. 4. Fotografías que muestran los diferentes tipos de morfología celular observados en el cultivo primario de corazón de rata comparados con los que se reporta en la literatura. (a): miocitos. (b): miocitos de rata neonatal, fuente: Grubb et al., 2012. (c): dendríticas. (d): células dendríticas epidérmicas, fuente: Celluzzi y Falo. 1997. (e): fibroblastoide. (f): cultivo mixto de fibroblastos y miocitos, fuente: Hakimata, 2008.

b d f

a c e

Cardiomiocitos

Fiibroblastos

Celulas endoteliales

Mastocitos

Celulas del musculo liso

Macrofagos

Resultados y Discusión

Mio

cito

sCélulas musculares.

Células redondeadas al inicio y posteriormente presentan pseudópodos.

Mesotelio, epicardio.

Resultados y Discusión

Fibr

obla

stos

Células no musculares.

Producir y secretar proteínas de la matriz extracelular ( colageno y fribronectina).

Amplia variedad de estímulos tanto mecánicos como químicos, mediante los cuales pueden migrar, proliferar y diferenciarse a un fenotipo más activo

Amplia variedad de receptores y secretan diversos factores de crecimiento y citoquinas.

Resultados y Discusión

Dend

itríc

asFunciones de inmunovigilancia para antígenos exógenos que son presentados a los linfocitos T.

Intersticio de muchos órganos no linfoides como el corazón, donde pueden capturar los antígenos de microbios que invaden tejidos.

Ensayos de inmunomodulación en procesos infecciosos

Resultados y Discusión

Fig. 5. Fotografías que muestran las células de corazón de rata en los 4 pasajes obtenidos.

Pasaje 1

Pasaje 2

Pasaje 3

Pasaje 4

Resultados y discusión

Método enzimático

Técnica aséptica

Medio de cultivo

Resultados y Discusión

Fig. 6. Fotografías que muestran los tipos celulares predominantes en el cuarto pasaje. (a): dendríticas. (b): fibroblastos.

a b

Resultados y Discusión

Resultados y Discusión

• Fibroblasotide• Dendríticas

Fig 7. Porcentaje según el tipo de células presentes en corazón de rata adulta.

Fuente: Banerjee et al, 2007.

Resultados y Discusión

Figura 8. Funciones de los fibroblastos en el corazón de rata adulta

Fuente: Souders et al, 2013.

Secreción de citoquinas y factores de crecimiento

Diferenciación de Miofibroblastos

Proliferación y Migración

Fig. 9. Fotografías que muestran el cultivo primario de pulmón de embrión de pollo. (a):cultivo primario. (b): pasaje 1.

a b

Resultados y Discusión

Conclusiones

• Los mejores resultados se obtuvieron con el método enzimático

• Se obtuvieron células musculares, fibroblastoides y dendríticas, sin embargo las células más predominantes fueron las de morfología tipo fibroblastoide.

• Las células obtenidas de tejido embrionario tienen una mejor respuesta proliferativa en comparación con células de tejido ya adulto.