EspectrofotometríaEspectrofotometría

Métodos EspectrofotométricosMétodos Espectrofotométricos

Basados en la medida de la intensidad y lalongitud de onda de la energía radiante

Tipos de espectrosTipos de espectros

• Espectros de absorción.

• Espectros de emisión.

• Espectroscopía Raman.

InfrarrojoInfrarrojo > 800 nm > 800 nmVisibleVisible 400-800 nm400-800 nmUltravioletaUltravioleta 10-400 nm10-400 nmRayos XRayos X 0.1-10 nm0.1-10 nmRayos Rayos 0.001-0.1 nm0.001-0.1 nmRayos cósmicosRayos cósmicos < 0.001 nm< 0.001 nm

Longitudes de ondaLongitudes de onda

Espectros de AbsorciónEspectros de Absorción

• Ultravioleta y visibesUltravioleta y visibes• InfrarojoInfrarojo• Absorción atómicaAbsorción atómica• MicroondasMicroondas• Dicroismo circularDicroismo circular• Absorción de rayos XAbsorción de rayos X• RMNRMN• RSERSE• Mössbauer Mössbauer

AbsorciónAbsorción

Al interaccionar la radiación electromagnética con la materia, tiene lugar una absorción, si la frecuencia de la radiación coincide con la energía necesaria para que el sistema pase a un nivel de energía superior y permitido.

LámparaReceptor

Curvas espectralesCurvas espectrales

Ley de Beer

Absorbancia Concentración

Seleccionar una longitud de onda optima

t

a

Curvas de calibrado para análisis Curvas de calibrado para análisis cuantitativocuantitativo

A

Concentración

PrácticaPráctica

Distribución de los compuestos fenólicos totales en los Distribución de los compuestos fenólicos totales en los diferentes tejidos de la piña diferentes tejidos de la piña

ObjetivoObjetivo

Determinar la distribución de los compuestos Determinar la distribución de los compuestos fenólicos totales en los diferentes tejidos de la fenólicos totales en los diferentes tejidos de la piñapiña

MetodologíaMetodologíaExtracción de Fenoles Totales(Waterman y Mole, 1994)

15 mL Etanol 40% -20ºC

0.25 g Piña

Homogenizar, Sonicar 30 min

Vortex 10 min

Filtro Watman Nº1

Determinación de Fenoles Totales (Waterman y Mole, 1994)

3 mL Extracto

5 mL Folin Ciocalteu’s

15 mL Carbonato de Sodio(20 g en 100 mL)

1 min

15 mL Carbonato de Sodio(20 g en 100 mL)

8 min

Aforar a 50 mL

Absorbancia 755 nm

60 min

DC Estándar

5 mL Folin Ciocalteu’s

15 mL Carbonato de Sodio(20 g en 100 mL)

1 min

15 mL Carbonato de Sodio(20 g en 100 mL)

8 min

Aforar a 50 mL

Absorbancia 755 nm

60 min