INTRODUCCIÓN

• Enfermedad de Chagas.• La infección congénita puede

producirse por la vía transplacental, causando la enfermedad de Chagas congénita.

• La arquitectura de la placenta humana permite una asociación entre la circulación materna y fetal.

Arquitectura placentaria

• El STB es la barrera materno-fetal más importante y se forma por la fusión de las células del CTB.

• El STB sufre daños, se produce una perturbación en su renovación, esto se asocia a embarazos anormales.

• Estos daños pueden ser causados por parásitos protozoarios como Plasmodium sp y Tripanosoma cruzi.

• STB es muy importante en el desarrollo fetal, una alteración del mismo puede originar bajo peso en los RN, partos prematuros o abortos.

• T. cruzi afecta la proliferación del CTB y/o diferenciación a STB.

Hipótesis planteada

Propuesta

• Analizar la proliferación del CTB en vellosidades coriónicas denudadas de su sinciciotrofoblasto en presencia de T.cruzi.

• Determinar la influencia del parásito en la maduración de CTB a STB, midiendo en los medios de cultivo la producción de hCG, FAP y expresión de eNOS y FAP.

PLACENTAS:

• n=3, serología negativa para infecciones.• Se obtuvieron explantos de vellosidades

coriónicas libres de membrana y se utilizaron para cultivos.

PARÁSITOS: Tripomastigotes de T. cruzi de las cepas Tulahuen y Lucky.

MATERIALES Y MÉTODOS

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CULTIVO DE EXPLANTOS:

• Denudados del STB con tripsina al 0,125% y se co-cultivaron con 106 tripomastigotes de la cepa Tulahuen y Lucky; en medio RPMI, pH 7,35, SBF al 10% y antibióticos, en atmósfera al 5% CO2 a 37ºC por 72 hs.

• Control: co-cultivos de explantos denudados sin infectar.

ANÁLISIS DE PROLIFERACIÓN DEL CTB Y RE-SINCIALIZACIÓN POR INMUNOHISTOQUÍMICA:

• Células de CTB fueron localizadas por la localización de Cadherina E.

• Zonas diferenciación a STB fueron localizadas por la expresión de eNOS y FAP.

• La proliferación del CTB fue determinada por Ki67.

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ANÁLISIS MORFOMÉTRICO:

• Se obtuvo el porcentaje de área de tejido ocupada por células de CTB relacionadas con el área total analizada.

• Las mediciones se realizaron en 10 imágenes digitales por corte.

• Se contaron los núcleos CTB positivos para el marcador Ki67.

DETERMINACIÓN DE -hCG:

• Para determinar la diferenciación de CTB a STB se midió la producción de la hormona -hCG, mediante el método de quimioluminiscencia inmunométrico.

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DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ESPECÍFICA DE FAP:

• Los medios se precalentaron a 60ºC durante 15 minutos.

• Luego se determinó la actividad de la FAP siguiendo la técnica de Messer, usando como sustrato p-nitrofenol fosfato.

• La cuantificación de proteínas se realizó según Lowry.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO:

• Diferencias entre grupos fueron testeadas usados Student’s test. Una probabilidad de p<0,05 fue considerada estadísticamente significativo.

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RESULTADOS Y DISCUSIÓN

INMUNOHISTOQUÍMICA PARA CADHERINA E – A) Co-cultivo con cepa Lucky. B) Co-cultivo con cepa Tulahuen. La flecha señala los grupos de CTB.

H/E – C) Co-cultivo con cepa Lucky. D) Co-cultivo con cepa Tulahuen. La flecha señala los grupos de células CTB.

TABLA 1

Tipo de cultivo Área total medida m2

Área ocupada por grupos de CTB m2

% del área ocupada por grupos de CTB

Explantos – Tulahuen 51412,78 2381,29 4,63%

Explantos - Lucky 65662,79 184,33 0,28%

Explantos sin T. cruzi 48587,62 1572,13 3,23%

Tipo de cultivo Área total medida m2 Número de núcleos de CTB en proliferación (Ki67 +)

Explantos – Tulahuen 53660,59 4

Explantos - Lucky 52479,86 18

Explantos sin T. cruzi 60749,29 10

TABLA 2

Inmunohistoquímica para detectar la expresión de Ki67 – E) Co-cultivo con cepa Lucky. F) Co-cultivo con cepa Tulahuen. La flecha señala los grupos de células CTB. Fechas: núcleos marcados positivamente.

Inmunohistoquímica para la marcación de FAP – G) Co-cultivo con cepa Tulahuen. H) Co-cultivo con cepa Lucky.

CONCLUSIÓN

• Los resultados muestran que el T. cruzi modifica el recambio del trofoblasto in vitro en un modelo de vellosidades coriónicas denudadas de su capa sincicial.

• El efecto de T. cruzi sobre el trofoblasto es dependiente de la cepa y puede reflejar la variedad de formas clínicas que se han descripto de la enfermedad congénita de Chagas.

• Los resultados pueden explicar algunos de los signos clínicos que están asociados al Chagas congénito, tales como, bajo peso al nacer, restricción del crecimiento fetal y embarazos prematuros.

• Es necesario realizar más estudios para establecer el exacto mecanismo por el cual el T. cruzi altera el recambio del trofoblasto.