PRACTICA NUMERO MS PROBABLE EN MUESTRA DE AGUA

I. OBJETIVO:

Conocer y aplicar la tcnica del Nmero Ms Probable (NMP) para cuantificar organismos coliformes en muestras de agua.

II. MATERIALES Y METODOS:

Aparatos:

Mecheros Bunsen o Fisher IncubadoraMaterial de cristalera y otro:

Recipiente para disponer material contaminado Asa de nicromo Frasco estril para preparacin de muestra Utensilios estriles para muestreo (cuchara, pipeta, probeta). Recipiente para sostener la muestra Tubos de ensayo tapa rosca Campanas Durham Pipetas de 1ml Micropipeta Gradilla Placas Petri.Reactivos (por equipo de 4)

Caldo bilis verde brillante Agua peptonadaMaterial biolgico:

Agua de la llave, de la Universidad Nacional De Trujillo

III. METODOS:Leer los resultados Llevar a la incubadora a 37C de 24-18 horas

Con una micropipeta tomar 1 ml de cada dilucin 10-1 10-2 10-3 y llevarla a los tubos con el caldo bilis Hacer las diluciones correspondientes a 10-1 10-2 10-3 Esterilizar todo el material a utilizar Preparar y servir el agua peptonada Preparar el caldo bilis en tubos de ensayo Formular y pesar el caldo bilis Nmero ms probable

IV. PROCEDIMIENTO:

Primero se desinfecta el cao (se flamea el cao con ayuda del mechero Bunsen).

Se procede a dejar caer el primer chorro, despus se procede tomar la muestra (Nunca se llena todo el frasco)

Se procede a desinfectar el rea de trabajo.

Se procede a hacer 3 disoluciones consecutivas de 0.5ml.

Diluir el nmero de Microorganismos, 0,5mL de agua en el primer frasco y se procede a homogenizar en el primer frasco y as con los otros 5 restantes.

Se toma 1ml del primer frasco y se coloca en los tres primeros tubos de ensayo y esto se vuelve a repetir con el segundo y tercer frasco.

Se incuba entre 35-37c por 24-48horas.

Tcnica de recuentro de placas:

Luego de haber hecho las disoluciones de agua se toma 1ml de cada disolucin y se llev a las cajas Petri estriles. Se verti en la cajas de Petri que contiene la muestra aproximadamente de 15-20 ml de medio de cultivo fundido ( Medio cromogenico para coliformes) que se encontraba a una temperatura inferior a 45C. Se mezcl la muestra y el medio haciendo movimientos rotatorios, una vez solificado el medio se llev a incubar a 35C por 48 horas.

V. RESULTADOS Y DISCUSIN

a) Numero mas probable:Despus de haber pasado las 48 horas se procede a observar la presencia de gas en cada tubo.

La presencia de gas fue de 1-1-1, este resultado se observ en la tabla de nmeros ms probables, el cual nos dio un valor de 6,1 NMP Coliformos totales/100ml.

Se procedi a hacer otra difusin de los tubos positivos y el resultado de presencia de gas fue la siguiente 1-0-0, este resultado se observ en la tabla NMP y nos dio un valor de 2 NMP coliformes totales/100ml.

b) Tcnica de recuento de placas:

Despus de haber incubado las placas por 48 horas, se procedi a realizar el conteo de colonias.

Del conteo realizado se encontr 31 colonias en la segunda placa la cual se multiplic por 100 (31x100= 3100 bacterias/ ml de muestra).

VI. CONCLUSIONES. Aprendimos a realizar pruebas con mtodo de recuento de nmero ms probable y que aspectos nos indican que hay presencia de coliformes totales. Pudimos determinar la inocuidad del producto en lo que refiere a este indicador.

VII BIBLIOGRAFIA: Fernndez Escartn E. 1981. Microbiologa Sanitaria Agua y Alimentos. Vol 1. Universidad de Guadalajara. ANUIES-SEP. Mxico. IPN. Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas. Departamento de Microbiologa. 2004 Manual de Laboratorio de Microbiologa Sanitaria. Pouch Downes F. and Ito K., Ed. 2001. Compendium of methods for the microbiological examination of foods. 4th. Ed. American Public Health Association.

ANEXOSTABLA I: Nmero ms probable de bacterias por 100 g (ml) de material analizado empleando cinco tubos inoculados con 10, 1 y 0.1 ml o g de materialPos*10;1;0,1NMPPos*10;1;0,1MPNPos*10;1;0,1MPNPos*10;1;0,1MPNPos*10;1;0,1MPNPos*10;1;0,1MPN

0001600

* Numero de cultivos (tubos) positivos con cada una de las tres cantidades de muestra usadas como inculo Tomada de: ENUMERATION OF COLIFORMS, FAECAL COLIFORMS AND OF E. COLI IN FOODS USING THE MPN METHOD MFHPB-19 April 2002 por Donna Christensen Crawford y Rick Szabo