Dr. Carlos Díaz Olachea 2005 Pruebas Inmunológicas en Enfermedades infecciosas.

Dr. Carlos Díaz Olachea

2005

Pruebas Inmunológicas en Enfermedades infecciosas


Termino aplicado en Patología Clínica a la metodología empleada en la detección de enfermedades infecciosas pueden ser:Detección de Antígenos directos Detección de la respuesta inmune (Anticuerpos ó células sensibilizadas) del huésped al antígeno específicoDetección indirecta de respuesta inmune a otros antígenos( Reacción cruzada)

Se describen ejemplos más frecuentes:ASLODiagnóstico de EBVReacciones FebrilesRotavirusH. PyloriOtras que se discutirán en la sección especifica del programa son: Infecciones virales exantemáticas Hepatitis viral TB Hongos Etc.


Antiestreptolisinas O (ASLO)

Son anticuerpos contra estreptococo beta hemolítico del grupo AIndican solo exposición al Estreptococo beta hemolítico del gpo. AAparece a la semana de infección, pico máximo a las 3 semanasUtilidad clínica asociada a complicaciones secundarias del estreptococo como Escarlatina, F. Reumática, Glomérulo nefritis, Endocarditis bacteriana.NO es específico

Inhibición de la hemoaglutinaciónAglutinación látexValores de referencia: Adultos < 160 U/ml Todd < de 2 años < 50 de 2 a 4 años < 160 de 4 a 12 años entre 160 – 300

Alterados por esteroides, uso de antibióticos y beta lipoproteínaSubstituida por pruebas rápidas

Antiestreptolisinas O (ASLO)técnica:

EBV

Manifestación clínica primaria: Faringitis y Linfocitosis, Esplenomegalia ó Hepatitis y Fiebre prolongada.Normalmente en < de 10 años, subclínicaAdolescencia MI (Fiebre glandular) 4-7 semanas de incubación, inicio insidioso, fiebre fluctuante, faringitis, linfadenopatía y hepato esplenomegalia.Dura varias semanas, raro meses.90% de adulto tienen Acs. Contra elReactivación: Eliminación de virus en saliva Linfoproliferación B Inmunosupresión y linfoproliferación Neumonitis y afectación de SNC es raro.

ÉBV Infección Latente

Replicación

LCT

L NK

En inmunodepresión aparece:Mononucleosis InfecciosaLinfomas tipo Hodking, Linfomas InmunoblasticosLinfomas Burkitt´sCUCIEtc.

EBV DiagnósticoCuadro Clínico de presentaciónCitometria hematica con linfocitosis atípicos > 30%, neutropenia y trombocitopenia ocasionalEnzimas hepáticas elevadasAcs. Heterofilos (monotest, mospot) Acs. Que dan reacción cruzada co GR de carnero y caballo.

Especificidad de 95% Positiva en : 30% niños < 2 años y > 2 a 4 años 90% .

Japoneses negativa Falsos positivos en Linfoma y enfermedades autoinmunes.

Títulos de Acs. Específicos IgMPCR

Componentes virales: Antigeno del capside (VCA) IgG e IgM (+) en

enfermedad temprana Antigeno temprano (EA) (+) en enfermedad temprana y

convalecencia Antigeno nuclear (NA) (+) en convalecencia y

reactivación crónica

El VCA es producido por linfos B infectados se encuentra en citoplasma, el IgM se encuentra a las 4 – 7 días de infección a conc. Bajas desaparece a los 2 – mesesIdeal PCR carga viral

EBV Diagnóstico

Las Reacciones FebrilesLas Reacciones FebrilesPruebas de laboratorioPruebas de laboratorio

• Grupo de pruebas de aglutinación de Grupo de pruebas de aglutinación de antígenos bacterianos por anticuerpos antígenos bacterianos por anticuerpos presentes en el suero de pacientes con presentes en el suero de pacientes con enfermedades infecciosas no relacionadas.enfermedades infecciosas no relacionadas.

• Reacción de WidalReacción de Widal

• Reacción de HudlesonReacción de Hudleson

• Reacción de Weil FelixReacción de Weil Felix

• TularemiaTularemia

Reacciones FebrilesReacciones FebrilesMetodologíaMetodología

• Uso de suspensiones de bacterias tratadas (atenuadas) Uso de suspensiones de bacterias tratadas (atenuadas) previamente identificadas.previamente identificadas.

• Suero de pacienteSuero de paciente

• Placas ó tubosPlacas ó tubos

• Observación de aglutinaciónObservación de aglutinación

• Actualmente se agrega a algunas un medio de Actualmente se agrega a algunas un medio de identificación macroscópica como el Rosa de Bengala identificación macroscópica como el Rosa de Bengala

Reacción de WidalReacción de Widal• Diseñadas para infecciones por SalmonellaDiseñadas para infecciones por Salmonella

• S. TiphyS. Tiphy

• S. EnteritidisS. Enteritidis

• Antígenos Antígenos

– Tifico O SomáticoTifico O Somático

– Tifico H FlagelarTifico H Flagelar

– ViVi

– Paratifico AParatifico A

– Paratifico BParatifico B

– Antígeno CAntígeno C

– Antígeno EAntígeno E

– Sin embargo todos los antígenos dan reacciones cruzadas Sin embargo todos los antígenos dan reacciones cruzadas en zonas endemicas.en zonas endemicas.

InterpretaciónInterpretación

• Títulos de Tifico O de 1:160 ó mayoresTítulos de Tifico O de 1:160 ó mayores

• Títulos de Tifico O, H, Paratifico A ó B que Títulos de Tifico O, H, Paratifico A ó B que aumenten 3-4 veces el valor inicial en 2 ó aumenten 3-4 veces el valor inicial en 2 ó más determinaciones en el transcurso de la más determinaciones en el transcurso de la enfermedad, en zonas endémicas.enfermedad, en zonas endémicas.

• Zona NO endémica cualquier título es Zona NO endémica cualquier título es positivo.positivo.

Reacción de WidalReacción de Widal

Falsas positivasFalsas positivas• Inmunización previa con Inmunización previa con

vacuna tifoidicavacuna tifoidica

• Hepatitis aguda y crónica Hepatitis aguda y crónica

• Endocarditis Endocarditis estreptococcicaestreptococcica

• BrucelosisBrucelosis

• Infección por bacterias Infección por bacterias Gram negativasGram negativas

• SalmonelosisSalmonelosis

Falsas NegativasFalsas NegativasFalta de respuesta Falta de respuesta inmune en el 30% de inmune en el 30% de los casoslos casosUso de antibióticos Uso de antibióticos que inhibe la que inhibe la respuesta inmunerespuesta inmuneTiempo inadecuado Tiempo inadecuado para la determinación para la determinación (lo más frecuente)(lo más frecuente)falta de falta de estandarización estandarización comercial de los comercial de los antígenos.antígenos.Error de laboratorio Error de laboratorio ( fenómeno de Zona)( fenómeno de Zona)

Reacción de WidalConclusiones

• No substituye los cultivosNo substituye los cultivos

• No es específicaNo es específica

• No estandarizadaNo estandarizada

• Difícil interpretaciónDifícil interpretación

• La negatividad no descarta la La negatividad no descarta la enfermedadenfermedad

Reacción de HudlesonReacción de Hudleson

• Después del cultivo son las pruebas más Después del cultivo son las pruebas más específicas para el diagnóstico de específicas para el diagnóstico de Brucelosis.Brucelosis.

• De las reacciones febriles son las más útiles De las reacciones febriles son las más útiles y confiablesy confiables

• Se utiliza una suspensión de Brucella Se utiliza una suspensión de Brucella Abortus para la investigación en suero del Abortus para la investigación en suero del paciente anticuerpos contra las tres especies paciente anticuerpos contra las tres especies comunes de Brucella: Suis , Mellitensis y comunes de Brucella: Suis , Mellitensis y Abortus.Abortus.

• Métodos usados son: Aglutinación en placa, Métodos usados son: Aglutinación en placa, tubo, IEA, ELISA.tubo, IEA, ELISA.


• Títulos de 1:160 ó mayores son diagnósticos en Títulos de 1:160 ó mayores son diagnósticos en zonas endémicaszonas endémicas

• Para Banco de sangre en donadores sanguíneos Para Banco de sangre en donadores sanguíneos cualquier título es positivo.cualquier título es positivo.

• Los títulos ascenderán en 2 ó más determinaciones Los títulos ascenderán en 2 ó más determinaciones durante la enfermedad.durante la enfermedad.

• Un resultado negativo no descarta el diagnóstico.Un resultado negativo no descarta el diagnóstico.

Reacción de HudlesonReacción de HudlesonInterpretaciónInterpretación

• Los anticuerpos aparecen en relación a la Los anticuerpos aparecen en relación a la bacteremia y alcanzan títulos altos (miles)bacteremia y alcanzan títulos altos (miles)

• Al alcanzar el nivel máximo puede ocurrir: Al alcanzar el nivel máximo puede ocurrir: – Disminución gradual con desaparición en 6 meses a un Disminución gradual con desaparición en 6 meses a un

año.año.

– Normalizarse y luego ascenderNormalizarse y luego ascender

– Producir espigas intermitentes sin normalizaciónProducir espigas intermitentes sin normalización

– Negativizarse por bloqueo (zona)Negativizarse por bloqueo (zona)



falsas negativasfalsas negativasFalsas positivasFalsas positivas

Memoria Memoria inmunologicainmunologicaReacción cruzada Reacción cruzada con otras con otras enfermedadesenfermedadesIdiopaticaIdiopaticaError de Error de laboratoriolaboratorio

• Respuesta inmune Respuesta inmune inadecuada (30%)inadecuada (30%)

• Fenómeno de zonaFenómeno de zona

• Anticuerpos Anticuerpos bloqueadoresbloqueadores

• Uso de antibióticosUso de antibióticos

• Defectos técnicosDefectos técnicos

Reacción de Weil Felix Reacción de Weil Felix

• Son pruebas de aglutinación catalogadas Son pruebas de aglutinación catalogadas como NO específicas, porque la intención como NO específicas, porque la intención de la prueba es la búsqueda de anticuerpos de la prueba es la búsqueda de anticuerpos contra ciertas cepas de bacterias del tipo contra ciertas cepas de bacterias del tipo del Proteus.del Proteus.

• La reacción clásica utiliza cepas de Proteus La reacción clásica utiliza cepas de Proteus OX19, Proteus OXK, Proteus OX2.OX19, Proteus OXK, Proteus OX2.

• En las Rikettsiosis los anticuerpos En las Rikettsiosis los anticuerpos aumentan en la 2da. Semana y alcanzan su aumentan en la 2da. Semana y alcanzan su máximo en la 3a. Y 5ta semana y máximo en la 3a. Y 5ta semana y desaparecen en 1 a 2 meses.desaparecen en 1 a 2 meses.

• Aumentos de los títulos de 2 a 4 veces en 4 a Aumentos de los títulos de 2 a 4 veces en 4 a 7 días de diferencia es la base del 7 días de diferencia es la base del diagnóstico.diagnóstico.

• Los títulos siempre son altos > 1000Los títulos siempre son altos > 1000


Falsas Negativas

Falta de respuesta Inmune

Uso de Antibióticos

Falsas PositivasFalsas PositivasInfecciones por Infecciones por Proteus, Proteus, predominantes en predominantes en vías urinarias .vías urinarias .Reacción cruzada Reacción cruzada con otras con otras enfermedades enfermedades infecciosas y auto infecciosas y auto inmunes.inmunes.


RotavirusNorwalk virus

Afecta más de 130 millones de niños anualmente en el mundo y produce una mortalidad de 1 millon. (ASM News 64, 1998) La detección de antigenos en heces en niños de 2 meses a 3 años causa más común de diarrea ( 30-40% de las GEV).Contaminación oro-fecalSolo útil en periodo agudo de diarrea inicio de síntomas 4 –48h.Em Mayores de 3 años 90% tienen Acs. IgG.Sensibilidad 100% y VPP amplio de 57.7 93.7 %

Journal of Clinical Microbiology, December 2001, p. 4532-4534, Vol. 39, No. 12MMWR, 3/99, Vol. 48. Pediatric Infectious Disease Journal. 22(9):808-814, September 2003

TABLE 1. Summary of results

Test

No. of results that were:

Sensitivity (%)

Specificity (%)

NPV (%)

PPV

(%) Concordantly

positive

Concordantly

negative

False negative

False positi

ve

EM 14 378 1 0 93.3 100.00

99.73

100.00

Pathfinder rotavirus

15 367 0 11 100.00

79.10 100.00

57.70

Ridascreen rotavirus

15 377 0 1 100.00

99.73 100.00

93.74

Rotavirus

Prueba ( ICG ) inmunocromatografica

Sensilidad 100%Especificidad 97.3%

Positivo

Negativo

Helicobacter Pylori

El Helicobater pylori (H.pylori) es una bacteria microaerófila, espiroidea, El Helicobater pylori (H.pylori) es una bacteria microaerófila, espiroidea, que coloniza primeramente la mucosa gastrica antral, donde produce una que coloniza primeramente la mucosa gastrica antral, donde produce una inflamación aguda y crónica denominada gastritis crónica activa. inflamación aguda y crónica denominada gastritis crónica activa. El nicho ecológico en los seres humanos parece estar restrigido al El nicho ecológico en los seres humanos parece estar restrigido al estómago y al duodeno.estómago y al duodeno.Fue descubierto por Marshall y Warren hace más de 20 años y es Fue descubierto por Marshall y Warren hace más de 20 años y es reconocido como uno de los patógenos más comunes y médicamente más reconocido como uno de los patógenos más comunes y médicamente más importantes de todo el mundo. importantes de todo el mundo. El Helicobacter pylori es una infección común, donde el 50% de los El Helicobacter pylori es una infección común, donde el 50% de los adultos de mediana edad han sido infectados con ella. Tiende a adultos de mediana edad han sido infectados con ella. Tiende a propagarse entre personas que viven juntas, que comparten la comida y propagarse entre personas que viven juntas, que comparten la comida y los baños. los baños. Se diagnostica por exámenes de laboratorio como: * Análisis de sangre.Se diagnostica por exámenes de laboratorio como: * Análisis de sangre.*Análisis de aliento de urea.*Análisis de aliento de urea.*Análisis de heces.*Análisis de heces.*Endoscopía.*Endoscopía.

Después de infectarse con H.pylori la mayoría de las personas desarrolla gastritis, una inflamación del revestimiento del estómago. Sin embargo la mayoría de las personas nunca tienen síntomas o problemas relacionados con la infección, cuando los síntomas estan presentes pueden incluir: Dolor sordoPérdida de peso.Pérdida de apetito.Pesadez de estómago.Eructos.Náuseas.Vómitos

Helicobacter Pylori

Pruebas inmunocromatografica para Suero y heces

Principio de la pruebaConsiste en administrar al paciente una cápsula conteniendo urea marcada con Carbono (C 14) 14; en presencia de H. pylori la urea marcada se convierte en amonio e ión de bicarbonato, el cual lleva el carbono marcado. Más tarde pasa la circulación y es excretada a través de los pulmones.La prueba de aliento con urea implica le recolección de una muestra de aliento 15 minutos después de beber una solución con C 14. si H. pylori está presente, su enzima ureasa hidrolizará la urea en CO2, que finalmente será excretada en el aliento. Pueden presentarse resultados negativos falsos si la prueba se hace dentro de la semana siguiente de haber tomado inhibridos de bomba de protones, bismuto o antibióticos, o después de una cirugía gástrica.

HELICOBACTER PYLORI EN ALIENTO

Comparación de métodos

Espécimen

Sensibilidad %

Especificidad %

VPP%

VPN%

Prevalencia%

Heces 94.87 95.33 69.81 99.39 10.20

Suero 50 82.96 13.88 96.79 5.2

Aliento 9.09 93.42 16.6 87.65 12.64

En Lab del HSJ-2005

Evaluación de Artritis

Pcr ó VSGFactor ReumatoideTipo de HLAANAPruebas para LESAnti DNA y SmComplementoCitometría HematicaQuímica sanguinea

• La AR se caracteriza por ser La AR se caracteriza por ser crónica, bilateral y simétrica, crónica, bilateral y simétrica, erosión articular y periarticular, erosión articular y periarticular, nódulos subcutáneos, vasculitis.nódulos subcutáneos, vasculitis.

• Asociación con DR4 y DR1Asociación con DR4 y DR1• Marcadores:Marcadores:

– Factor reumatoideFactor reumatoide

– Anticuerpo antiqueratinaAnticuerpo antiqueratina

– Factor antiperinuclearFactor antiperinuclear

– Anticuerpos asociados a antígeno Anticuerpos asociados a antígeno nuclear (RANA)nuclear (RANA)

– Anti RA33Anti RA33

Artritis ReumatoideArtritis Reumatoide

Artritis ReumatoideArtritis Reumatoide• Inflamación de tres ó más articulaciones pos > 6 Inflamación de tres ó más articulaciones pos > 6

semanassemanas

• Inflamación de muñecas, cadera ó rodillas por > 6 Inflamación de muñecas, cadera ó rodillas por > 6 semanassemanas

• Dolor e inflamación matutina por una hora y por Dolor e inflamación matutina por una hora y por >6 semanas>6 semanas

• Cambios en manos y radiografías de AR ( erosión Cambios en manos y radiografías de AR ( erosión y descalcificación )y descalcificación )

• Nódulos reumatoidesNódulos reumatoides

• Factor reumatoide positivo ( normal en 5 %)Factor reumatoide positivo ( normal en 5 %)

• Se requieren al menos 4 criterios.Se requieren al menos 4 criterios.

• Arnett et.al. Arth. Rheum 30:S17, 1987)Arnett et.al. Arth. Rheum 30:S17, 1987)

• Ig tipo IgM(IgA ó IgG) anti fracción Fc de Ig tipo IgM(IgA ó IgG) anti fracción Fc de la IgG.la IgG.

• Detección por aglutinación, Elisa, Detección por aglutinación, Elisa, Nefelometría.Nefelometría.

• FR se asemeja la proteína A de FR se asemeja la proteína A de estafilococo aureusestafilococo aureus

• Positivo enPositivo en

– 50-90% de AR50-90% de AR

– 75% de SS75% de SS

– 60% MCTD60% MCTD

– 35% LES35% LES

Artritis ReumatoideArtritis ReumatoideFactor reumatoide (FR):Factor reumatoide (FR):

Factor reumatoide por aglutinaciónFactor reumatoide por aglutinación

Positivo Negativo

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