Diagnóstico de Bacterias fitopatógenas

25 de abril de 2012

Ing. Agr. María José Montelongo

Síntomas de enfermedades bacterianas

• Manchas foliares• Manchas en frutos• Cancros• Marchitez• Hiperplasia• Podredumbre• Costras• Necrosis

Lesiones en frutos

Síntomas de enfermedades bacterianas

Pseudomonas syringae pv. papulans

Xanthomonasaxonopodispv. citri

Xanthomonas campestris pv. vesicatoria

Afecciones vasculares

Síntomas de enfermedades bacterianas

Marchitez

Síntomas de enfermedades bacterianas

Síntomas de enfermedades bacterianas

Manchas foliares

Síntomas de enfermedades bacterianas

Manchas angulares, acuosas

Síntomas de enfermedades bacterianas

Manchas foliares

Pantoea stewartii

Síntomas de enfermedades bacterianas

Cribado

PASOS DEL DIAGNOSTICO

Observación del problema

Aceptación o replanteo de hipótesis

Planteo de

hipótesis

Prueba de hipótesis

• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares

Diagnóstico de enfermedades bacterianas

La bibliografía indica que podría ser una bacteria!!

Microcorrida: para hojas

Técnicas para ver el signo de bacterias

Test de flujo: para tallos

Técnicas para ver el signo de bacterias

• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares

Diagnóstico de enfermedades bacterianas

Aislamiento

Podemos utilizar el material observado en la microcorridao test de flujo

Aislamiento

Indirecto

Cultivo trampa

Aislamiento Aislamiento

• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares

Diagnóstico de enfermedades bacterianas

Diagnóstico de enfermedades bacterianas

1. Se realiza una inoculación masiva en el mesófilode una hoja de una planta NO HUESPED

2. Se observa la ocurrencia (o no) de reacción de hipersensibilidad

Hipersensibilidad en no huésped

La aparición de una reacción de hipersensibilidad indica que la bacteria inoculada es patógena.

Hipersensibilidad en no huésped

Prueba de patogenicidad

Inoculación mediante aspersión

Prueba de patogenicidad

Inoculación mediante infiltración

• Patógenos vasculares: inoculación al tallo– axila - pinchar a través

de gota– inyección al tallo

Prueba de patogenicidad

• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares

Diagnóstico de enfermedades bacterianas

Taxonomía

– Morfológicas, – Culturales (forma, bordes,

color de las colonias)– Fisiológicas– Bioquímicas– Patológicas (capacidad

para atacar a determinado huésped)

Características taxonómicas

Morfología de colonia en medio sólido

Forma

Elevación

Borde

Morfología de colonia en medio sólido

Pared celular Prueba de gram indirecta

GRAM (+) GRAM (-)

GRAM (-)– Erwinia– Pseudomonas– Xanthomonas– Xylella– Agrobacterium

GRAM (+)– Clavibacter– Curtobacterium– Streptomyces

Principales géneros de Bacterias fitopatógenas

PseudomonasAgrobacteriumBurkholderiaRalstoniaErwinia

Coloración de la colonia en medio YDC

AmarillaCrema

XanthomonasErwinia

Reacción de oxidación/fermentación o de Hugh & Leifson

La mayoría de las bacterias fitopatógenas tienen metabolismo oxidativo

Características fisiológicas

• Metabolismo oxidativo– Pseudomonas– Xanthomonas– Xylella– Agrobacterium– Clavibacter

• Metabolismo fermentativo– Erwinia

Reacción de o/f

Producción de pigmentos fluorescentes

Pseudomonas fluorescens se caracteriza por producir pigmentos fluorescentes (izq)

Características fisiológicas

• Observación de síntomas y signos• Aislamiento en medios de cultivo• Prueba de hipersensibilidad en no huésped• Pruebas de patogenicidad• Prueba de Gram• Características culturales• Pruebas bioquímicas y fisiológicas• Pruebas serológicos (ELISA)• Técnicas moleculares

Diagnóstico de enfermedades bacterianas

• Serología: ELISA

Otras Técnicas

• Técnicas moleculares– PCR– PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism)

– Real time PCR– Secuenciación

Otras Técnicas

Técnicas moleculares

PCR

PCR-RFLP

Técnicas moleculares

Real time PCR

Técnicas moleculares

Secuenciación

Diagnóstico de enfermedades bacterianas

• AGRIOS, G. 2005. Plant pathology. 5nd. ed. London, Elsevier Academic Press. 922 p.

• KADO, C. 2010.Plant bacteriology. Minessota, APS Press. 336 p.

• TRIGIANO, R.; WINDHAM, M.; WINDHAM, A. 2008. Plant pathology, concepts and laboratory exercises. 2nd. ed. Florida, RC Press. 558 p.

Bibliografía consultada