UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELAFACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA DE BIOANÁLISISHOSPTIAL GENERAL “Dr. JOSÉ IGNACIO BALDÓ“

Diagnóstico Micológico

Profa. Yotsabeth Saúl G.

Caracas - 2015

Diagnóstico Micológico• Recolección de muestras:

– Apropiadas.– Oportunas.– Representativas de la lesión.

• Transporte.• Procesamiento inicial:

– Estudio microscópico directo: • KOH 10% Y Tinta china.

– Preparaciones coloreadas:• Gram, Giemsa, Grocott, inmunofluorescencia.

• Aislamiento e identificación del agente causal.• Pruebas de susceptibilidad antifúngica.• Reporte de los resultados.

Fundamentos básicos para el diagnóstico micológico. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 3-1-3-22.

Diagnóstico MicológicoRecomendaciones para la recolección de muestras para estudio micológico:

• Recolectar las muestras asépticamente utilizando contenedores estériles.

• Remitirlas al laboratorio dentro de las primeras 2 horas de su recolección.

• Recolectar las muestras antes de instaurar el tratamiento .

• Evitar el uso de hisopos para la toma de muestras para estudio micológico.

• Las muestras de lesiones cerradas y abscesos deben ser aspiradas con jeringa y transferidas a un contenedor estéril.

• En situaciones que requieran un estudio epidemiológico, debe establecerse la necesidad de una recogida de muestras ambientales, familiares o de animales.

Fundamentos básicos para el diagnóstico micológico. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 3-1 - 3-22.

Micosis Superficiales

Micosis superficiales1. Dermatofitosis oTineas (Tiñas)

Tinea capitis no inflamatoria

Tinea faciei

Tinea corporisM. canis, T. rubrum

T. cruris por:

T. rubrum, E. floccosum

Tinea pedis interdigital. T. rubrum, T.

mentagrophytes, T. interdigitale

Tinea corporis

Subungueal, distal y lateral Blanca superficialDistrófica total

Agentes T. rubrum, E. floccosum, T. mentagrophytes

Micosis superficiales1. Dermatofitosis oTineas (Tiñas) Onicomicosis

Micosis superficiales1. Dermatofitosis o tiñas• Toma de muestra:

Raspado, depilación, cepillo, onicotomía.

• Examen directo: KOH 10% - 40%. Diagnóstico de enfermedad • Cultivo: Lactritmel, Sabouraud. T. Amb. Macroscópicas/ tubo o placa Microscópicas/cultivo en lámina Identificación del agente causal

Identificación de hongos dermatofitos. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 12-1 - 12-11.

Toma de Muestra:

pelos, piel ,uñas.

Hifas hialinas septadas.

Identificación de especie

Cultivos:

(placas/tubos)

Microcultivos

Examen Directo: Pelo Parasitado

Ataque Endotrix. T. tonsurans

Micosis superficiales1. Dermatofitosis oTineas (Tiñas)

Examen Directo (KOH 10%): Pelo parasitado

Tinea capitis

Micosis superficiales1. Dermatofitosis oTineas (Tiñas)

Examen directo (KOH 10%) Artroconidias

Micosis superficiales1. Dermatofitosis oTineas (Tiñas)

Micosis superficiales2. Pitiriasis versicolor

Diagnósticos diferenciales/Clínicos. Lámpara de Wood.

• Toma de muestra: Método de la cinta adhesiva. Escamas

• Examen directo: Acúmulos de levaduras e hifas. Diagnóstico de enfermedad

• Cultivo: Medios de cultivo enriquecidos con lípidos/ Saboraud+ aceite de oliva.

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Micosis superficiales2. Pitiriasis versicolor

Toma de muestra:

método de la cinta adhesiva

Examen directo con Azul de metileno 0,05%:

Levaduras e hifas cortas gruesas de Malassezia spp.

Micosis superficiales2. Pitiriasis versicolor

Candidosis en el área del pañal

Onicomicosis por Candida

Candidosis de la cavidad oral: Muguet

Vaginitis por Cándida

Micosis superficiales3. Candidiasis mucocutánea

Toma de muestra:Examen directo/ KOH al 10%Cultivo: Sabouraud. Aislamiento

Identificación:Caracteristicas macroscópicas de crecimiento en

agar cromogénico.Bilis-agar/Clamidosporas. C. albicans, C.dubliniensisPruebas de asimilación y fermentación de azúcares.

Identificación de levaduras. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 11-1 – 11-20.

Micosis superficiales3. Candidiasis mucocutánea

Examen directo (KOH 10%)

Crecimiento en Sabouraud

Características de crecimiento en agar

cromogénico

Hidrólisis de la úrea

Asimilación de carbohidratos

(Auxonograma)

Bilis- agar, Clamidosporas

Micosis Subcutáneas

Micosis subcutáneas1. Cromoblastomicosis

• Toma de muestra:Escamocostras

• Examen directo: KOH 10% - 40%. Diagnóstico de enfermedad • Cultivo: Lactritmel, Sabouraud. T. Amb. Macroscópicas/ tubo o placa Microscópicas/cultivo en lámina Identificación del agente causal

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Micosis subcutáneas1. Cromoblastomicosis

Toma de Muestra:

escamocostras.

Cuerpos escleróticos.

Identificación de especie

Cultivos:

(placas/tubos)

Microcultivos

Forma cutánea fija Complejo cutáneo linfático

Micosis subcutáneas2. Esporotricosis

• Examen directo KOH 10% . Biopsia Forma levaduriforme

• Cultivo: Agar sabouraud, Temperatura Ambiente Forma Filamentosa

• Inmunodiagnostico: Esporotriquina, Pruebas Serologicas

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Micosis subcutáneas2. Esporotricosis

Examen directo de la muestra clínica

Cultivo de la muestra clínicaIdentificación del agente causal

Cultivo en tubo, T.Amb

Cultivo en lámina

Micosis subcutáneas2. Esporotricosis

Triada del micetoma:• Aumento de volumen y deformidad del miembro

afectado.• Presencia de fístulas.• Emisión de granos “ Formación in vivo de colonias

de los agentes causales”.

Micosis subcutáneas3. Micetoma

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Los granos son microcolonias compactas que constituyen una adaptación parasitaria del

hongo o bacteria.

MICETOMA

Granos: Negros, Claros, Rojos

Micosis subcutáneas3. Micetoma

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Micosis subcutáneas3. Micetoma

• Examen directo KOH10% Biopsia coloracion H&E Presencia de granos

• Cultivo: Medios especiales para hongos y bacterias

Identificacion del agente causal

• Exámenes complementarios Radiologicos

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Micosis Profundas o Sistémicas

HISTOPLASMOSIS DIAGNÓSTICO

Micosis Profundas o Sistémicas1. Histoplasmosis:

• Muestra clínica: Esputo, lavado broncoalveolar, médula ósea, biopsias de tejidos.

• Examen directo: Coloración de Giemsa Levaduras intracelulares

• Cultivo (25 °C) Sabouraud agar, Lactritmel, BHI Micelio y macroconidias tuberculadas

• Inmunodiagnóstico: Intradermorreacción, Inmunodifusión doble.

HISTOPLASMOSIS DIAGNÓSTICO

Micosis Profundas o Sistémicas1. Histoplasmosis

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Examen directo:Levaduras intracelulares

Coloración,Giemsa

Cultivo 24ºCMicelio y macroconidias

Coloración, azul de lactofenol

Micosis Profundas o Sistémicas1. Histoplasmosis

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Micosis Profundas o Sistémicas2. Coccidioidomicosis

• Muestra clínica: Esputo, lavado broncoalveolar, biopsias de tejidos, líquidos corporales (LCR)

• Examen directo: KOH AL 10%, Coloraciones histológicas ( H&E, PAS, plata-metenamina) • Cultivo (25 ºC) Sabouraud agar, Lactritmel • Inmunodiagnóstico: Intradermorreacción, Inmunodifusión doble.

COCCIDIOIDOMICOSIS: DIAGNÓSTICO

Micosis Profundas o Sistémicas2. Coccidioidomicosis

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Coccidiodes spp. Examen directo

37ºCEsférula con endosporas

Cultivo a 25°CMoho: Micelio septadoArtroconidias alternadas Células degenerativas yVacías

Micosis Profundas o Sistémicas3. Paracoccidioidomicosis

DIAGNÓSTICO

• Muestras: Esputo, lavado broncoalveolar, exudado de úlceras en mucosas y en piel, material purulento de nódulos linfáticos, biopsias, LCR, orina.

• Directo KOH 10%: Blastoconidias multigemantes “Timón de Barco”.

• Cultivo: Sabouraud Dimorfismo (temp. amb. y 37 oC)

• Estudio histopatológico: H&E, PAS, Grocott

• Inmunodiagnóstico: Intradermorreacción, Inmunodifusión doble.

Micosis Profundas o Sistémicas3. Paracoccidioidomicosis

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Cultivo:

Temp. Amb.

37 oC

Examen directo:Levaduras multigemantes

Estudio Histopatológico

Micosis Oportunistas

Micosis Oportunistas1. Candidiasis invasoras

Micosis Oportunistas1. Candidiasis invasoras• Muestra: secreciones vaginales, esputo, sedimento urinario,

biopsia, depende de la presentación clínica de la enfermedad.

• Directo: KOH 10%, Si presenta pocas levaduras hay colonización, grandes cantidades de levaduras y presencia de hifas indica parasitismo-enfermedad.

• Identificación: Caracteristicas macroscópicas de crecimiento en agar

cromogénico. Bilis-agar/Clamidosporas. C. albicans, C.dubliniensis Pruebas de asimilación y fermentación de azúcares.

• Estudio inmunológico: Detección de antígenos en candidosis invasora Candidina.

Micosis Oportunistas2. Criptococosis

Criptococosis, Diagnóstico

• Muestra: LCR, secreción respiratoria, piel, orina, etc.

• Directo: (tinta china), biopsia (PAS, Grocott).

• Cultivo: agar Sabouraud, hemocultivo.

• Inmunodiagnóstico: Detección de antígeno capsular, técnica

aglutinación de partículas de latex (LCR)

Micosis Oportunistas2. Criptococosis

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Criptococosis, DiagnósticoMicosis Oportunistas2. Criptococosis

Micosis Oportunistas3. Zigomicosis

Mucormicosis, diagnóstico

• Muestra: según localización de la lesión.

• Histopatología: el diagnóstico definitivo lo da el estudio histológico de biopsia coloreada con H&E, o con tinción de Gomori-Grocott, que evidencia filamentos no septados de diámetro variable y paredes delgadas. INVASIVO

• Directo y cultivo: tienen poca validez, sólo sugieren un diagnóstico presuntivo, ya que los mucorales son los más frecuentes contaminantes de laboratorios.

• Inmunología: No estandarizada.

Micosis Oportunistas3. Zigomicosis

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Histopatología Cultivo en placa

Cultivo en lámina

Micosis Oportunistas4. Aspergilosis

Aspergilosis, diagnóstico:

• Muestra: esputo, secreciones. biopsia, • Directo: KOH 10%.

• Cultivo: agar Sabouraud

• Inmunodiagnóstico: detección de antígenos polisacárido de pared de Aspergillus (galactomanano), con una especificidad de 85%, pero poco sensible (40%). Técnica: aglutinación por látex.

Micosis Oportunistas4. Aspergilosis

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Micosis Oportunistas4. Aspergilosis

Histopatología Examen directo KOH 10/. Esputo

Cultivo en placa Cultivo en lámina. A. fumigatus

AspergilosisDiagnóstico: cultivo en placa y lámina

Muestra: esputo• Esputo inducido, lavado bronquio-alveolar,• Biopsia abierta de pulmónColoraciones:Giemsa, azul de toluidina, Gomori-Groccot

Inmunofluorencia: calcofluorHerramientas moleculares:PCR. Ampliación de ADN

Micosis Oportunistas5. Pneumocistosis

Pneumocystis jirovecii

Col. Gomori-Groccot Metenamina nitrato de plata,

Gracias por su atención