Determinacion de glucosa basal y posprandial

Determinación de glucosa basal y posprandial

Universidad Nacional Federico Villarreal Facultad de Tecnología Médica

Escuela Profesional de Laboratorio y Anatomía Patológica

Docente:

Lic. TM. Andrés E. Huarachi Saavedra

Integrantes:

Apaza Delgado , Elizabeth Cárdenas Espinoza, Karen Rabanal Casimiro, Caroline Rodas Cancho, Elsa Sandoval Mallma, Milagros Torres Mora, Carolina

2015

Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II

INTRODUCCIÓN

Los carbohidratos son aldehídos y cetonas que tienen dos o más grupos hidroxilo. Se clasifican como

monosacáridos (que tienen grupo aldehído o cetona), oligosacáridos (algunos monosacáridos enlazados

entre sí) o polisacáridos (muchos monosacáridos enlazados). El monosacárido más abundante e importante

en la naturaleza es el azúcar de seis carbonos D-glucosa.

La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a

través de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en

el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia).

Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda

de la insulina, sustancia producida por el páncreas. Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula

en sangre, y si esta situación se mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos órganos. Esta

es la razón principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y

alteraciones que también la provocan.

Es vital detectar, identificar y cuantificar la glucosa en suero o plasma y orina para el diagnóstico de la

diabetes y para el control de los pacientes diabéticos. Los procedimientos analíticos que se utilizan con

mayor frecuencia son el método enzimático de la glucooxidasa y el método de la hexocinasa, porque son

específicos para la glucosa. Con frecuencia se utiliza la prueba oral de tolerancia


OBJETIVOS

Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relación con diversas patologías.

Determinar la concentración de glucosa en estado basal y posprandial en una muestra biológica mediante el método enzimático colorimétrico.


MARCO TEORICO

I. Glucosa plasmática en ayunas:

Los individuos normales mantienen una concentración de glucosa plasmática tras ayuno de 10 a 16 hrs de

55-110 mg/dl aunque los valores tienden a aumentar con la edad. La elevación de la concentración de

glucosa plasmática en ayunas constituye una indicación de diabetes sacarina. El National Diabetes Data

Group propone que una concentración de glucosa plasmática en ayunas igual o mayor a en más de una

ocasión constituye diagnóstico de diabetes sacarina.

II. Glucosa plasmática poprandial de dos horas:

La prueba de glucosa plasmática posprandial de dos horas es una prueba de carga sencilla en la cual mide

la glucosa plasmática dos horas después de que el paciente consume algún alimento ; por ejemplo: azúcar

de mesa, Frutas, lácteos, dulces, harinas, y cereales, etc. ; que contenga aproximadamente 100g de

carbohidratos, mezclado con otras sustancias. Los niveles por encima de 200 mg/dl indican un diagnóstico

de diabetes mellitus.

Normalmente luego de ingerir alimentos, la glucosa en sangre tiene un aumento moderado. Con la ayuda

de la insulina del cuerpo, la glucosa, ingresa en las células del organismo para que estas puedan

aprovecharla. Y es justamente el examen de glucosa pospandrial la que nos ayudara a medir este moderado

aumento, determinando si hay hiperglucemia pospandrial, para ello se mide la concentración de glucosa

dos horas después de la ingesta de un alimento.

Si el nivel de glucosa está entre 140 y 199 mg/dl dos horas después de haber bebido el líquido, se tiene una forma de pre-diabetes llamada Intolerancia a la glucosa, lo que significa que existe el riesgo de desarrollar diabetes tipo dos pero aún no se tiene.


MATERIALES

a) 5 Tubos de ensaye de 13 X100mm.

b) Micropipetas de 1000 y 10µL.

c) Puntas para micropipeta.

d) Gradilla.

EQUIPOS:

a) Espectrofotómetro o analizador para lecturas de 490-550 nm.

b) Centrifuga.

REACTIVOS:

I. S. Standard: solución de glucosa 100 mg/dl (1 g/l).

II. A.Reactivo A: solución conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona

(4-AF), buffer fosfatos pH 7,0 y 4-hidroxibenzoato

A B C D

A B

I II


FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La enzima glucooxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido de hidrógeno. La

concentración de glucosa es proporcional al H2O2, este puede medirse apareándolo con un indicador de

peroxidasa. La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según las siguientes

reacciones:

PROCEDIMIENTO

I. ANÁLISIS PREANALÍTICO

CONDICIONES PREVIAS A LA PTOG

Dieta sin restricciones los tres días previos ( 150 gr de carbohidratos)

Suspender tratamientos que interfieren con el metabolismo de la glucosa

No cambiar el estilo de vida los tres días previos

No estar cursando por un proceso febril o infecciones

No fumas , no tomar café

Evitar el estrés

Es obligatorio el ayuno de 10 a 12 horas antes de la prueba ( solo tomar agua)

Explicar al paciente, en qué consiste la prueba y el tiempo de duración

El paciente debe acudir puntualmente a la hora indicada.

INDICACIONES EN EL MOMENTO EN QUE SE VA A REALIZAR LA PTOG

Indicar al paciente o familiar que lea cuidadosamente la declaración de consentimiento y luego de

haber entendido lo informado debe de firmar dicho documento

El paciente debe guardar treinta minutos de reposo antes de empezar y permanecer en reposo

durante el tiempo que demora la prueba.

El paciente debe ingerir toda la solución glucosada en el lapso no mayor de 5 minutos

Se invalidaría la prueba si el paciente llegara a vomitar, di fuma o mascara chicles.

POD = Peroxidasa

4-AF = 4-aminofenazona


II. ANÁLISIS ANALÍTICO:

1. Realizamos la venopunción a una compañera, la cual previamente debió de haber cumplido con

las condiciones previas a la PTOG. La persona a la que se le hizo la venopunción estuvo en ayunas

(el ayuno no debe ser menor de 10 horas ni mayor a 12 horas).

2. Luego de realizar la primera venopuncion, dar de comer y beber la carga oral de glucosa (verificar la hora).En este caso fue un plátano, un vaso de leche y tostadas con mermelada.

1ra muestra ( 3ml ):

Esta vendría a ser la

muestra basal,

muestra que se

deberá tomar al

paciente que a estado

en ayuna.

Todos estos alimentos fueron

suministrados a partir de las 9.30 am.

Muy importante la hora para

calcular después de dos horas la

glucosa posprandial.


3. Después de 2 horas, es decir a las 11.30 am , realizamos la última venopunción para la

determinacion de la PTOG (separar el suero o plasma para evitar la glicolisis).

ESQUEMA DE TRABAJO :

Muestra basal I Muestra corresponde a cero minutos.

9.30 a.m. Termina de comer y beber la solución glucosada

Muestra post -pandrial 11:30 a.m.

II Muestra a las 2 horas

4. Luego centrifugamos las dos muestras (muestra basal y post – pandrial ) , por 10 minutos a 1500

rpm.

2da muestra (3ml) :

Esta vendría a ser la

muestra posprandial

, debido a que fue

tomada a los 120

minutos después de

haber ingerido los

alimentos con carga

de glucosa

(desayuno).

10 minutos

a 1500 rpm,

en la

centrifuga.


5. Luego trabajamos de la siguiente forma con la muestra basal , post – pandrial , y la solución estándar

( S) que nos viene con el kit DE WIENER LAB. Esta solución S nos sirve para medir el control de

calidad del procedimiento que vamos a realizar y de su resultado, ya que esta contiene una solución

de glucosa conocida que es de 100 mg/dl (1 g/l).

T1 T2 ST ( 100mg/dl) GLUCOSA ENZIMATICA

MP1 ( 0’) 30 µl - - 3000 µl ( 3ml)

MP2 ( 120’) - 30 µl - 3000 µl( 3ml)

ST - - 30 µl 3000 µl( 3ml)


Cogemos 30 µl de cada uno ( MP1,MP2,ST) , con la pipeta automática, y lo echamos en tres

tubos respectivamente.

Vaciar cada uno en un tubo diferente.

Luego a cada

uno agregar

3ml (3000 µl)

del reactivo A

(glucosa

enzimática)

con la pipeta

automática.


6. Incubar los siguientes

tubos en baño maría, a una

temperatura de 37°C por 5

minutos.

7. Realizar la espectrofotometría de cada uno de los anteriores tubos a una longitud de onda de 505

nmt. MEDIR DE MENOR A MAYOR COLOR DEL TUBO

Aquí tenemos todos los tubos con la muestra

respectiva (MP1, MP2, sol. estándar) más 3

ml de la solución de glucosa enzimática.

A la vez preparamos un tubo blanco*, que

contiene reactivo A.

*también puede ser la misma cantidad de

agua destilada.

Este tubo blanco nos servirá para calibrar

nuestro espectrofotómetro, y obtener un

resultado mucho más específico.

Echamos cada solución de cada

tubo ,para la leida tenemos que

colocarlo en un tubo spectronic ,

los ponemos en el

espectrofotómetro y leemos la

absorbancia que nos da cada uno

a una longitud de onda de 505nm.

M1 : 0,311

M2: 0,213

ST: 0,404


III. POST- ANALÍTICO

1. Luego de realizar el procedimiento en el espectrofotómetro, se van a interpretar los resultados de

la siguiente manera:

* MP 1: Muestra problema 1 ; MP2: muestra problema 2

2. Previamente se halla el Factor de Calibración

Se observa la concentración de la solución estándar de la

glicemia enzimática en la etiqueta del envase de

1 g/L <> 100 mg/dL.

Factor de calibración = 100 = 247.5

0. 404

Absorvancia

MP 1

0.311

MP 2

0.213

Solución Estándar

0.404

Observación...

Al momento de medir con el espectrofotómetro lo

calibramos con ayuda del BLANCO. El cual si se

desea ser exactos se utiliza como blanco el reactivo

de glicemia enzimática pero si dicho reactivo está

muy colorido es porque se ha pasado y en vez de eso

se usa agua destilada como blanco.

Factor de calibración = [ST]

Lº[ST]


3. Luego se determina la concentración de la glucosa o concentración de la muestra problema.

[MP 1] = 247.5 x 0.311 = 76.9 mg/dL

[MP 2] = 247.5 x 0.213 = 52.7 mg/dL

4. CONTROL DE CALIDAD

Se realiza según las indicaciones que vienen con el reactivo.

A

B

Low

50 - 100

50 - 80

High

120 - 140

110 - 130

[MP x] = Factor de calibración x absorción de C/ MPx

Para nuestros resultados se

encuentran dentro del rango

establecido ya que

A(MP 1) : 76.9 mg/dL

B (MP2): 52.7 mg/dL


CUESTIONARIO

1. ¿ Cuál sería la carga de glucosa anhidra indicada para los pacientes pediátricos?

Para la realización de una prueba oral de tolerancia a la glucosa en niños, la OMS recomienda la

administración de 1,75 g/KG de masa corporal (9,7mmol) hasta un máximo de 75g; esta

recomendación era seguida por el 72,2% de los centros. Para la interpretación de la prueba oral de

tolerancia a la glucosa en niños y adultos no gestantes, la OMS utiliza los valores de la concentración

de glucosa en plasma basal y a las 2 horas post sobrecarga.

2. ¿En qué casos el Lic. Tecnólogo medico puede rechazar o invalidar la PTOG?

Prueba de Tolerancia Oral a la Glucosa (PTOG): se requiere que el individuo haya ayunado al menos

ocho horas antes de la prueba. Individuo debe tomar una solución glucosada con 75 gramos de

glucosa disuelta en agua.

Entonces no debe comer ni beber nada después de la medianoche. Sino será rechazada la PTOG.

Si el individuo tiene un nivel de glucosa en la sangre entre 140 y 199 mg/dl, se le diagnostica un pre

diabetes llamada intolerancia a la glucosa, significa que el individuo puede llegar a tener una

diabetes tipo 2.

3. ¿Por qué es importante procesar la primera muestra basal, antes de suministrar al paciente la

solución glucosada?

Como sabemos, que la concentración de glucosa sérica por lo general se vuelve anormal sólo

cuando hay un trastorno grave de esta interacción, el verificar la glucosa sérica ayuda a evaluar la

función e integridad, el equilibrio del sistema.

La prueba de glucosa en ayunas va evaluar de modo aproximado la capacidad del cuerpo para

regular la glucosa y nos va a proporcionar información acerca de la clase de anormalidad, si es que

la hay.

4. ¿Considera usted que debe de existir una declaración de consentimiento de parte del paciente

para poder proceder a realizar la PTOG. Si o No por qué?

Si, considero que una declaración de consentimiento se debería desarrollar desde el primer

momento en que se toma contacto con el paciente y a lo largo de toda su atención. Ya que es

importante reconocer y respetar el derecho y la autonomía de los pacientes, lo que enmarca no

solo una exigencia jurídica, sino, sobre todo una exigencia ética como trabajadores de la salud.

Además se promueve la participación del paciente en su proceso de salud lo que significa que

COMPARTE RESPONSABILIDADES Y ASUME RIESGOS.


5. ¿Explique el comportamiento observado en las concentraciones sanguíneas de PTOG, el

incremento observado y su posterior disminución en la concentración de este carbohidrato en

sangre?

Muestra problema 1: resultado de glucosa plasmática en ayuna, al realizar mis cálculos me salió

como resultado 76.9mg/dl de glucosa en ayuna.

Muestra problema 2: resultado de mi glucosa plasmática posprandial de dos horas, al realizar los

respectivos cálculos, resultó 52,7mg/dl.

En esta persona los valores de glucosa en ayuna están dentro de los valores referenciales, debido a

que existe una buena interacción al momento de regular la glucosa en sangre, ya que no se ha

ingerido ningún alimento; sin embargo el sistema lo regula adecuadamente. Por el contrario nos

indicaría valores anormales si es que el sistema no funcionaría correctamente.

Normalmente luego de ingerir alimentos (como frutas, harinas, dulces, etc), la glucosa en sangre

tiene un aumento moderado. Con la ayuda de la insulina del cuerpo, la glucosa, ingresa en las

células del organismo para que estas puedan aprovecharla. Y es justamente el examen de glucosa

pospandrial la que nos ayudara a medir este moderado aumento, que luego se regularizara por el

propio sistema.


RECOMENDACIONES

Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA, oxalato, heparina o fluoruro no afectan los

resultados.

La hemólisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere.

La muestra es inaceptable si:

Si el suero se obtiene turbio.

Si la identificación es inadecuada.

Si el tubo de recolección no es el adecuado.

Cuando se haya excedido el tiempo máximo de análisis permisible

No usar reactivos fuera de la fecha indicada.

No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con piel y ojos.


CONCLUSIONES

Esta prueba mide la cantidad de glucosa (azúcar) que hay en la sangre. El azúcar es una fuente importante

de energía, especialmente para el cerebro. El sistema endócrino (glandular) controla con exactitud la

cantidad de glucosa en la sangre. Este sistema hace que el azúcar se almacene o se utilice para energía,

según las necesidades de su cuerpo.

Usted puede obtener la glucosa directamente de algunos alimentos, como el azúcar de mesa. El cuerpo

también puede producir glucosa cuando se digieren otros alimentos, como el pan y los cereales. Por lo

general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes mellitus.

La glucosa postprandial los niveles de glucosa en sangre a las dos horas de la ingesta de un alimento. La

determinación de este parámetro se utiliza para el diagnóstico de la diabetes y otras enfermedades del

metabolismo de la glucosa y para el cálculo del índice glucémico de los alimentos. Algunos autores señalan

que la glucosa postprandial es un mejor marcador de la diabetes que la glucosa en ayunas


BIBLIOGRAFÍA

Glicemia enzimática AA para la determinación de glucosa en suero, plasma, orina o liquido

cefalorraquídeo.

Obtenido en:

http://www.wienerlab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/glicemia_enzi

matica_aa_liquida_sp.pdf

Manual practica de bioquímica clínica – UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MEXICO. Facultad de

QUIMICA.

Obtenido en:

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf

Glucosa plasmática en ayunas y glucosa plasmática posprandial .

Obtenido de:

Libro de Quimica clínica . - Shauna C.Anderson,Ph.D ,Susan Cockayne, Ph.D. Mc Graw-

Hill.Intearmericana.

Estado posprandial y el riesgo de enfermedad cardiovascular, declaratoria de posición.

Obtenido en:

http://www.medigraphic.com/pdfs/cardio/h-2003/h032a.pdf

Clases dictadas en la Facultad de Tecnología médica en la UNFV.

http://www.wienerlab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/glicemia_enzimatica_aa_liquida_sp.pdf

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