DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA EN SUERO

1. INTRODUCCIÓN

La bilirrubina es un producto derivado del metabolismo de la hemoglobina en el Sistema Retículo Endotelial. Los hematíes al degradarse liberan la hemoglobina que es metabolizada a dos moléculas el grupo hemo y el grupo globina, el grupo hemo se transforma en biliverdina y esta en bilirrubina a la cual se le llama no conjugada o indirecta. Al pasar por el hígado esta bilirrubina se conjuga con ácido glucurónido transformándose en bilirrubina conjugada o directa.

El hígado segrega esta bilirrubina directa a través de las vías biliares hacia el intestino, al metabolizarse por la flora intestinal se convierte en urobilinas que dan el color marrón a las heces. Parte de estas urobilinas se reabsorben y pueden aparecer en la orina en forma de urobilinógeno.

Cuando se eleva la bilirrubina, la piel y los tejidos toman un color amarillo que se llama ictericia. Según cual sea el origen de la bilirrubina elevada podemos saber si es un problema de hígado (elevación de la bilirrubina no conjugada) o de las vías biliares (elevación de la bilirrubina conjugada).

Cuando se realiza un análisis de rutina se mide la bilirrubina total (directa más indirecta), el 70 al 85 % corresponde a la bilirrubina no conjugada o indirecta.

El Sistema Retículo Endotelial esta formado por la unión de macrófagos (este termino lo asigno Aschoff en el año 1924 a un conjunto de células formado por monocitos , histocitos, fibroblastos, células endoteliales y reticulares) , móviles y tisulares fijos.

Síntesis de Bilirrubina Directa: en el hígado

Síntesis de Bilirrubina Indirecta: en la sangre

2. OBJETIVO

Bilirrubina Indirecta o no Conjugada (unida a la albúmina)

Bilirrubina Directa o Conjugada

Vesícula Biliar

Bilis

Intervención de bacterias saprofíticas

Estercobilinógeno Heces

Orina(urobilina)

Urobilinógeno

+ Ácido Glucurónico

Hb

Grupo Hemo

Globina

Fe 2+

Anillos pirrólicos

Biliverdina Bilirrubina Indirecta

Determinar los valores de bilirrubina directa, total e indirecta en suero sanguíneo. Diferenciar los tipos de bilirrubina según su solubilidad y mediante la reacción de diazotación.

3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La determinación de bilirrubina en suero se realiza mediante un método no enzimático.

Reacción de Diazotación: reacción química que usa al óxido nitroso (N2O) para formar un complejo de color.

Bilirrubina Total + Acelerador + Diazoreactivo Azobilirrubina (en suero) (Benzoato de cafeína) (Cromógeno rosado a

λ= 555nm)

Bilirrubina Directa + Acelerador + Diazoreactivo Azobilirrubina (en suero) (Benzoato de cafeína) (Cromógeno rosado a

λ= 555nm)

Diazoreactivo = NaNO2 (nitrato de sodio) + Ácido Sulfanílico

Bilirrubina Indirecta = Bilirrubina Total – Bilirrubina Directa

4. PROCEDIMIENTO

Tubo Blanco Tubo ProblemaBilirrubina Total 1,5 mL 1,5 mLBilirrubina Directa --- 50 µLMuestra 100 µL 100 µL

Mezclar e incubar a 37º C por 5’. Leer a 555 nm. Repetir el procedimiento para Bilirrubina Total y Directa.

5. CÁLCULOS

F.C = [Standard] /ABS STANDARD F.C = 17,85 mg/dL

[B. Total] = F.C x ABS M.P

[B. Total] = 0.071

[B. Directa] = F.C x ABS M.P

[B. Directa] = 0.535

6. IMPORTANCIA CLÍNICA

Los niveles aumentados de bilirrubina indirecta pueden indicar:

- Anemia hemolítica- Eritroblastosis fetal- Ictericia fisiológica del recién nacido- Problemas en las transfusiones de sangre- Otras anemias

Los niveles aumentados de bilirrubina total pueden indicar:

- Cirrosis- Hepatitis- Obstrucción de vía biliar (colangitis, colelitiasis)- Tumores de vías biliares- Deficiencia enzimática- Ictericia