DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD TÓXICA O REPELENTE DE ...
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DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD TÓXICA O REPELENTE DE ESENCIAS OBTENIDAS A PARTIR DE ALGUNAS PLANTAS MEDICINALES RAMÓN BARROS ALGARRA TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial para optar al título de BIÓLOGO PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE BIOLOGÍA Bogotá, D. C. Enero 22 de 2002 10
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DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD TÓXICA O REPELENTE DE
ESENCIAS OBTENIDAS A PARTIR DE ALGUNAS PLANTAS
MEDICINALES
RAMÓN BARROS ALGARRA
TRABAJO DE GRADOPresentado como requisito parcial para optar al título de
BIÓLOGO
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANAFACULTAD DE CIENCIASCARRERA DE BIOLOGÍA
Bogotá, D. C.Enero 22 de 2002
10
NOTA DE ADVERTENCIA
Artículo 23 de la Resolución N° 13 de Julio de 1946: “La Universidad no se hace
responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus tesis de grado”.
11
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD TÓXICA O REPELENTE DE
ESENCIAS OBTENIDAS A PARTIR DE ALGUNAS PLANTAS
MEDICINALES
RAMÓN BARROS ALGARRA
APROBADO
Director: Jorge Robles Campos. Ph.D.
Jurado: Elizabeth Hodson de Jaramillo. Ph.D.
Jurado: Cecilia Espíndola Díaz. M.Sc.
Decano Académico: Carlos Corredor Pereira. Ph.D.
Director Carrera: Luz Mercedes Santamaría. M.Sc
Agradecimientos
12
Agradezco al Doctor Jorge Robles, Investigador del Departamento de
Fitoquímica de la Pontificia Universidad Javeriana por haberme
inducido en el mundo de la Fitoquímica, así como por su apoyo técnico
y logístico. A Patricia Mora gerente de producción del laboratorio
RYEGA quien aporto valiosas ideas para la realización de este trabajo.
A la empresa KISKA S.A. por la donación de las plantas estudiadas. A
Edgar Linares, Curador General del Herbario Nacional Colombiano por
su oportuna ayuda en la determinación de las especies vegetales. A mis
Padres por su apoyo incondicional.
TABLA DE CONTENIDOS.
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1. Introducción 10
2. Marco teórico y revisión de literatura 11
2.1 Plantas aromáticas utilizadas como insecticidas 12
2.2 Principios activos en las plantas medicinales 12
2.3 El Aprovechamiento Tradicional De Esta Flora y Antecedentes Históricos 15
2.4 Introducción A Las Plantas Estudiadas 18
2.4.1 Salvia 18
2.4.2 Toronjil 21
2.4.3 Yerbabuena 24
2.4.4 Eucalipto 27
2.5 Introducción a las especies blanco 30
2.5.1 Artemia salina 30
2.5.2 Macrosiphum rosae 32
2.5.3 Ctenocephalides canis. 34
3. Formulación del problema 35
4. Justificación de la Investigación 35
5. Preguntas de investigación 36
6. Objetivos 36
6.1 Objetivo General 36
6.2 Objetivos Específicos 36
7. Hipótesis 37
7.1 Predicción 38
8. Materiales Y Métodos 39
8.1 Lugar de realización 39
8.2 Material vegetal 39
8.3 Extracción 40
8.4 Bioensayo general de toxicidad en Artemia salina 41
8.5 Bioensayo de respuesta olfatométrica en áfidos y pulgas 42
8.6 Metodología para las cromatografías de capa delgada C.C.D y
14
Bidimensionales 44
8.7 Análisis De la Información 47
9. Resultados 50
9.1 Extracción 50
9.1.1 Resultados de la extracción 50
9.1.2 Comparación entre el rendimiento teórico y el obtenido 50
9.2. Resultados para el bioensayo general de toxicidad 51
9.2.1 Porcentajes de mortalidad con Salvia officinalis 53
9.2.2 Porcentajes de mortalidad con Melissa officinalis. 54
9.2.3 Porcentajes de mortalidad con Mentha x piperita 55
9.2.4 Porcentajes de mortalidad con Eucaliptus globulus 56
9.2.5 Porcentajes de mortalidad con el Testigo 57
9.2.6 Porcentajes de mortalidad promedio con todos los extractos
con sus tratamientos y réplicas. 58
9.3 Bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae 59
9.3.1 Respuesta olfatométrica con el extracto de Salvia officinalis. 59
9.3.2 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum
rosae con el extracto de Melissa officinalis. 60
9.3.3 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum
rosae con el extracto de Mentha x piperita. 61
9.3.4 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum
rosae con el extracto de Eucaliptus globulus. 62
9.3.5 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum
rosae con el testigo. 63
9.3.6 Porcentaje de respuesta de Macrosiphum rosae con cada extracto. 64
9.4 Bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides canis. 65
9.4.1 Resultado del Bioensayo con el extracto de Salvia officinalis. 65
9.4.2 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en
15
Ctenocephalides canis con el extracto de Melissa officinalis. 66
9.4.3 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en
Ctenocephalides canis con el extracto de Mentha x piperita. 67
9.4.4 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en
Ctenocephalides canis con el extracto de Eucaliptus globulus. 68
9.4.5 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en
Ctenocephalides canis con el testigo. 69
9.4.6 Porcentaje de respuesta de Ctenocephalides canis con cada extracto. 70
9.4.7 Comparación de respuesta repelente entre Mentha x piperita
y Eucaliptus globulus, para áfidos y pulgas. 71
9.5 Ensayos cromatográficos. 72
9.5.1 Ensayo cromatográfico con éter de petróleo: acetato de etilo. 72
9.5.2 Ensayo cromatográfico con Diclorometano. 73
9.5.3 Ensayo cromatográfico con Diclorometano: Metanol. 74
9.5.4 Relaciones entre los extractos por medio del Rf con Éter de Petróleo:
Acetato de Etilo (8:2). 75
9.5.5 Relaciones entre los extractos por medio del Rf con Diclorometano. 76
9.5.6 Relaciones entre los extractos por medio del Rf con Diclorometano:
Metanol (9.5:0.5). 77
9.5.7 Resultados del cromatograma bidimensional para Salvia officinalis. 78
9.5.8 Resultados del cromatograma bidimensional para Melissa officinalis. 79
9.5.9 Resultados del cromatograma bidimensional para Mentha x piperita. 80
9.5.10 Resultados del cromatograma bidimensional para Eucaliptus globulus. 81
9.5.11Relaciones entre los extractos por cromatografías bidimensionales. 82
10. Discusión. 83
11. Conclusiones. 85
11. Recomendaciones. 85
12. Referencias. 86
13. Anexos 93
13.1 Anexo 1. Componentes químicos aislados en el toronjil. 93
16
13.2 Anexo 2. Componentes químicos aislados de la Yerbabuena. 97
13.3 Anexo 3. Componentes químicos aislados del eucalipto. 107
12.4 Anexo 4. identificaciones taxonómicas. 110
12.5 Anexo 5. Identificaciones taxonómicas. 111
Resumen.
17
Se realizó un estudio piloto para buscar actividad biológica de tipo insecticida o
repelente en 4 plantas medicinales, ampliamente reconocidas como aromáticas:
Salvia officinalis, Melissa officinalis, Mentha x piperita, y Eucaliptus globulus. Para
realizar este plan se obtuvieron los extractos concretos etanólicos de las especies
estudiadas, con los cuales se realizaron 2 tipos básicos de bioensayos para probar el
objetivo principal del trabajo. El primer bioensayo fue el de toxicidad en Artemia
salina. El segundo bioensayo fue el de olfatometría, con el objeto de conocer las
respuestas olfativas de insectos ante el aroma de los extractos. Para conocer esta
respuesta, se escogieron dos insectos reconocidos como plagas: Macrosiphum rosae
y Ctenocephalides canis. Los resultados mostraron mayor acción tóxica y repelente
en el extracto concreto de Mentha x piperita.
1.Introducción.
18
Tradicionalmente se han aprovechado las actividades biológicas de numerosas plantas
para su aplicación como insecticidas botánicos, por lo que se les denomina
fitoinsecticidas (Simon et al. 1984). Debido al mal uso que se le ha dado a los
pesticidas sintéticos, conllevando a la contaminación ambiental y a la resistencia que
han venido adquiriendo los insectos ante estos, los productos naturales se plantean
como soluciones pesticidas o repelentes, ecológicamente amigables
(http://www.semillassilvestres.com/repelentes . htm ).
A partir del conocimiento etnobotánico, se hace referencia a cuatro especies de
plantas tradicionalmente reconocidas como medicinales: la Salvia, Salvia officinalis
(Linnaeus 1753)
, el Toronjil, Melissa officinalis (Linnaeus 1753), la Yerbabuena, Mentha x piperita
(Linnaeus 1753), y el Eucalipto, Eucaliptus globulus (Labillardière 1799)
. Debido a que las cuatro plantas estudiadas presentan metabolitos secundarios como
monoterpenos, ampliamente reconocidos por presentar actividad toxica y repelente en
insectos (Taiz & Zeiger 1998), en el presente trabajo se planteó la posibilidad de
encontrar actividades biológicas de tipo tóxicas y repelentes. Para la realización de tal
fin se hicieron las extracciones concretas de cada planta, con las cuales se evaluaron
las dos actividades biológicas mencionadas. Para evaluar la toxicidad se utilizó el
bioensayo de mortalidad estandarizado en Artemia salina (Meyer et al. 1982, Mc
Laughlin 1991, Solís et al. 1993 y Arango 1994) y para evaluar la repelencia se
utilizó el bioensayo estandarizado de olfatometría en pulgones de rosa Macrosiphum
rosae y pulgas de perro Ctenocephalides canis (Pettersson 1970, Cerda et al. 1994,
Arango 1994), ambos insectos reconocidos como plagas (Davies 1989).
El presente trabajo se plantea como un aporte mas en la investigación y el desarrollo
de alternativas repelentes o plaguicidas ecológicamente amigables.
2. Marco Teórico y Revisión de Literatura.
19
Existen diversos mecanismos de defensa que presentan los vegetales en respuesta a
sus enemigos, entre los cuales se encuentran características físicas y numerosas
sustancias químicas con variados efectos sobre el comportamiento de los organismos
plaga. Algunas de las sustancias actúan como: atrayentes en el proceso de
alimentación (Belles et al.1985, Schoonhoven 1992), repelentes (Adytiachaudhury et
al.1985), antialimentarios (Escoubas et al. 1990), quimioesterilizantes, inhibidores
de crecimiento (Elliger & Waiss 1989, Adytiachaudhury et al.1985), bioestáticos o
biocidas (Champagne et al. 1989).
Entre las sustancias de origen vegetal que producen repelencia a los insectos se
encuentran principalmente los metabolitos secundarios. Estos metabolitos son
compuestos de distribución limitada entre los vegetales y de los cuales no se conoce
que tengan influencia ni en el crecimiento, ni en el desarrollo de las plantas
(http://fai.unne.edu.ar/biologia/alelopatia/alelopatia.htm). Lo anterior significa que
mientras la función fisiológica de los metabolitos secundarios en la planta es en gran
medida desconocida, su función ecológica es ampliamente reconocida.
(http://www.webcolombia.com/alelopatia/Plantas%20Insecti d as%20P%20Z.htm ).
Entre las toxinas vegetales de mas amplia distribución se encuentran los esteroides y
los alcaloides presentes en familias como las Solanáceas, las Berberidáceas, las
Menispermáceas y otras; de las cuales sobresalen la nicotina y sus derivados,
alcaloides protoberberínicos, aporfínicos, esparteína y alcaloides isoquinolínicos y
glicoalcaloides (Wink 1993).
Las metodologías utilizadas corrientemente para el estudio de los metabolitos
secundarios incluyen métodos químicos y físicos, como extracción por percolación en
frío, extracción en soxhlet en solventes de diferente polaridad, y extracción por
arrastre con vapor para la obtención de componentes volátiles
(http://www.chromadex.com). Para su purificación se utilizan la cromatografía de
20
columna, la cromatografía de capa delgada, y la cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC). Para la elucidación estructural se cuenta con equipos de alta
tecnología como la resonancia magnética nuclear protónica (RMN - H), y de Carbono
13 (RMN-13C), la espectrometría de masas (EM), la cromatografía de gases (CG), C
G - E M, HPLC - E M, el infrarrojo (IR), y el ultravioleta (UV)
(http://www.chromadex.com). Mediante la utilización de estas tecnologías es posible
obtener productos naturales químicamente puros y estructuralmente elucidados,
ventajas que permiten profundizar sobre su naturaleza e impacto biológico; sin
embargo por su elevado costo y condiciones especializadas de manejo, las hacen de
difícil acceso para trabajos exploratorios como el presente.
2.1 Plantas Aromáticas Utilizadas Como Insecticidas.
Se ha comprobado que los metabolitos secundarios en las plantas medicinales son los
responsables de las actividades biológicas de tipo tóxicas y repelentes en insectos.
Pueden actuar como inhibidores de la alimentación, perturbadores del crecimiento,
desarrollo, reproducción, diapausa y en el comportamiento (Muñoz
1987).Tradicionalmente se ha aprovechado esta actividad biológica de algunas
plantas aromático-medicinales, para su aplicación como insecticidas botánicos, por lo
que se les denomina fitoinsecticidas (Muñoz 1987).
2.2 Principios Activos en las Plantas Medicinales.
Entre los diferentes principios activos de las plantas medicinales, se encuentran los
heterósidos, los cuales son compuestos formados por la asociación de un glúcido y de
un cuerpo activo no azucarado, llamado genina (Piñeros et al. 1988). Las geninas son
productos de secreción, y su asociación con un glúcido permite al vegetal
neutralizarlas, formando compuestos no tóxicos (Ody 1993). Muchos de los
heterósidos tienen utilización en la medicina, por ejemplo la digitalina es un potente
21
cardiotónico y el salicósido es el precursor de la aspirina (Simon et al 1984). Los
heterósidos se clasifican según la naturaleza de su genina en: sulfurados, cianógenos,
fenólicos flavonoicos, cumarínicos, esteródicos, etc (Gros et al. 1985).
Otro tipo de principios activos son los alcaloides, los cuales son componentes
nitrogenados cuya función en la planta no está bien determinada; su química es
compleja y se les clasifica, según la composición de su núcleo, en una quincena de
grupos diferentes (Simon et al 1984). Los alcaloides aparecen en diversos órganos
según la especie vegetal; la nicotina se sintetiza en las raíces del tabaco pero se
acumula únicamente en sus hojas. Los alcaloides de la adormidera se encuentran en
las flores; la quinina se localiza en la corteza de la planta; la semilla concentra los
alcaloides del café (Ody 1993).
Apartir de 1804, año en que Derosme aisló la morfina del opio; los alcaloides que
entonces se llamaban álcalis vegetales han despertado el interés de la medicina
porque presentan acción en el sistema nervioso humano aún en bajas dosis. Hoy en
día se conocen más de 1.000 clases de alcaloides y se cree que entre un 14 y 20 % de
las plantas con flores los contienen. Sólo el látex que segrega la cápsula inmadura de
la amapola u opio, contiene más de 25 diferentes. De la estricnina a la efedrina, de la
teofilina a la emetina, los alcaloides constituyen la fuente más importante de nuestros
medicamentos (Gros et al. 1985).
En las plantas medicinales los aceites esenciales son unos de los principales
subproductos del metabolismo de la planta. Comprenden las esencias vegetales y las
resinas que se presentan en emulsiones que forman gotas, las cuales se vierten al
exterior, por medio de canales excretores. Las esencias vegetales que son volátiles, se
difunden a través de la epidermis de las hojas y de las flores; expanden a menudo un
olor muy pronunciado y son los compuestos que dan perfume a los vegetales
( Robinson 1975).
22
Las esencias, son compuestos terpénicos formados por largas cadenas de un
hidrocarburo dietilénico: el isopreno. Como los isoprenos pueden unirse entre sí de
muchas formas, el número de esencias es muy alto (Gros et al. 1985). Por otra parte,
las resinas están disueltas en esencias y aparecen como residuos viscosos o sólidos
cuando las esencias se evaporan (Ody 1993).
Otros de los subproductos vegetales importantes son los taninos, que son compuestos
fenólicos de gran diversidad y también son excretados por las plantas. Algunas
especies los acumulan en gran cantidad. Los taninos son utilizados generalmente en la
industria del cuero porque tienen la propiedad de hacer imputrescibles las pieles de
los animales. Los taninos también se utilizan como reactivos químicos, astringentes y
como contravenenos (Robinson 1975).
Los terpenos o isoprenoides constituyen otro de los grandes y más importantes grupos
de compuestos secundarios ampliamente presentes en el reino vegetal. En las plantas,
al igual que en los mamíferos, los isoprenoides se sintetizan a partir del compuesto C5
isopentenil pirofosfato (IpPP) que se puede considerar como el isopreno activo. Los
isoprenoides se clasifican según el número de unidades de isopreno que contengan:
monoterpenos (2 unidades); sesquiterpenos (3 unidades); diterpenos (4 unidades);
triterpenos (6 unidades); tetraterpenos (8 unidades) y politerpenos (más de 8
unidades) (Piñol et al. 2000). Muchos de los terpenos se acumulan en estructuras
vegetales y constituyen las esencias naturales. Un primer tipo de terpenos son los
monoterpenos, que presentan funciones oxigenadas, como aldehídos y alcoholes, y
las reacciones de oxidación tienen lugar en el citoplasma celular. Algunos de los
monoterpenos están implicados en relaciones ecológicas de las plantas que los
producen ya que, debido a sus propiedades organolépticas, atraen insectos y otros
animales que favorecen la polinización (Piñol et al. 2000). El segundo tipo de
terpenos son los sesquiterpenos, que son compuestos lipófilos y volátiles que se
localizan en glándulas de esencias junto con monoterpenos. Ejemplos de los
sesquiterpenos son el farnesol, la fitohormona ácido abscícico y feromonas (Piñol et
23
al. 2000). Otro de los principales terpenos son los diterpenos que se pueden
encontrar en forma de cadena abierta como el fitol, que constituye la cadena lipófila
de la clorofila. Otros ejemplos son el ácido resínico abiético y agático constituyentes
de las resinas localizadas en depósitos o canales de las gimnospermas (Piñol et al.
2000). Los triterpenos comprenden gran variedad de compuestos, incluyendo los
esteroides que son constituyentes de membranas biológicas en animales y presentan
acción hormonal (Piñol et al. 2000). Por último, los politerpenos son moléculas de
alto peso molecular, el mejor ejemplo de los politerpenoides el caucho, encontrado en
Hevea brasiliensis, formado por miles de unidades de isopreno (Piñol et al. 2000).
Como se ha mostrado, existe una amplia y diversa cantidad de compuestos orgánicos
denominada metabolitos secundarios, productos secundarios o productos naturales,
pero principalmente son los monoterpenos y los diterpenos, las moléculas
responsables de la actividad biológica tanto tóxica como olfativa, que presentan las
plantas medicinales en insectos.
2.3 El Aprovechamiento Tradicional y Antecedentes Históricos de las Plantas
Medicinales.
El aprovechamiento por el hombre de las plantas aromático-medicinales hay que
buscarla en la más remota antigüedad, según consta en diversos testimonios históricos
pertenecientes a distintas civilizaciones y culturas, que han ido sucediéndose en
nuestro planeta (http://www.semillassilvestres.com/repelentes.htm). Por ejemplo, en
el Papiro de Ebers (2278 a.C.) y en el de Smith (2263 a.C.) se citan productos
medicinales como es el caso de la extraída de la adormidera, su uso y cultivo. Por
otra parte los indios peruanos cultivan la planta de la coca desde hace mas de 1000
años(Ody 1993).
El hombre utilizó inicialmente, las plantas aromático-medicinales a imitación de los
animales guiado por su instinto. Después, empíricamente y de forma más racional
24
conoció sus propiedades terapéuticas con ayuda de los avances tecnológicos en
química analítica (http://www.semillassilvestres.com/repelentes.htm).
Algo similar puede decirse de las esencias, cuya extracción y uso es muy remoto. En
China, India y Persia la destilación de plantas se practica desde hace milenios.
Babilonia, encrucijada del comercio entre Oriente y Occidente fue sede de la
perfumería fabricando toda suerte de extractos, lociones, aceites para baño, rojo de
labios, fijador de cabello, etc ( Domínguez 1985). Por otra parte, la Biblia dice, que
bajo los reyes babilónicos los perfumes valían tanto como el oro, la plata y las armas.
Pero las primeras fuentes históricas de las esencias proceden de Egipto, donde 30
siglos antes de Jesucristo ya preparaban esencia de cedros. En bajorrelieves
procedentes también de Egipto, se han encontrado detalles de destilerías; el primer
alambique de piedra conocido se remonta al año 3000 a. de C (Ody 1993).
En la Edad Media los árabes perfeccionaron la destilación de las plantas aromáticas,
favoreciendo así el desarrollo de la naciente y rudimentaria farmacia. En el siglo XIII
los maestros alquimistas vendían aceites esenciales siendo la esencia de romero una
de las primeramente aisladas denominada “agua húngara”, a la que en Italia se
añadieron otras esencias, obteniéndose así el “agua de la Reina”, la cual después se
conoció como “acqua mirabile” (http://fai.unne.edu.ar/biologia/alelopatia/
alelopatia.htm).
Durante los siglos XII al XIII en la Escuela Árabe célebre por sus grandes médicos,
así como en la de Salerno, se prescribían numerosas drogas a partir de vegetales, de
las cuales muchas de estas son utilizadas actualmente
(http://fai.unne.edu.ar/biologia/alelopatia/alelopatia.htm). En esta época vivió el
famoso médico árabe Ibn Wafid, nacido en Toledo en el año 1008 y muerto en esta
ciudad en el año 1074. Fue autor de “El libro de la almohada”, famoso recetario
médico en el mundo del siglo XI. Sus recetas casi todas originales comprendían toda
clase de remedios según la tradición de la medicina árabe y en ellas empleaba
25
numerosas plantas casi todas procedentes de España y del norte de África
(Domínguez 1985). En el siglo XV eran conocidas las esencias de almendras
amargas, espliego, canela, ginebra, rosa, salvia, lavanda, entre otras. Un siglo
después, más de sesenta esencias nuevas se añadían a éstas. Para 1511 se publicó en
Barcelona la “Concordia Pharmacopolarum” que es la primera farmacopea
territorial del mundo. En el siglo XVII, prácticamente estaban aisladas todas las
esencias de Europa y del próximo Oriente. En el siglo XVIII se controlan y mezclan
las esencias y aparecen el agua de colonia, inventada por Feminis y divulgada en
París por Farina ( http://www.uca.es/dept/quimica_organica/alelo.htm). Después en el
siglo XIX, se practican los primeros análisis químicos de esencias y otros principios
activos de los vegetales, con la aplicación del microscopio y la química analítica nace
la farmacoquímica y uno de los primeros avances en esta área es el aislamiento de la
morfina a partir del opio en 1811. Entonces se desarrolla un movimiento de
investigación a escala mundial para conocer la composición química y las
propiedades de los vegetales y se inicia la base de la industria farmacéutica,
perfumera y condimentária actual
( http://www.uca.es/dept/quimica_organica/alelo.htm).
26
2.4 Introducción a las Plantas Estudiadas
2.4.1 Salvia
Figura 1. Salvia officinalis.
Nombre científico: Salvia officinalis L. (Fam. Lamiaceae)
Nombres vulgares: Sage, salvia.
Descripción
Es una planta leñosa subarbustiva, con numerosas ramas tomentosas que pueden
alcanzar los 60 cm y mas de altura. Las hojas son gruesas, rugosas, tomentosas,
opuestas, pecioladas, oval-lanceoladas, verde algo grisáceo por el haz y con
pubescencia blanquecina por el envés. Flores agrupadas en 2,4 y rara vez en 6, 10
verticilios dispuestos en espigas terminales con cáliz pubescente y glandular. La
corola es 2 a 3 veces más larga que el cáliz y hasta 35 mm de longitud con anillo
peloso dentro del tubo de color azul-violáceo a veces blanco o rosáceo. Los frutos son
aquenios ovoideos (http://leda.lycaeum.org/Taxonomy/salvia_officinalis.
2910.shtml).
Parte útil: Hojas (Muñoz 1987).
Ecología
Hábitat: originaria de los países del Mediterráneo oriental, Grecia, Yugoslavia; se ha
introducido y aclimatado en Italia, sur de Francia, norte, centro y sur de la Península
Ibérica y norte de Marruecos. En España, en las llanuras áridas de Cataluña, Aragón,
Castilla, montes calizos de Valencia, sur de Aragón, hasta Castilla-Mancha y en
Andalucía oriental. Se cultiva en Inglaterra, Francia, Italia, Yugoslavia, Grecia,
Albania, Asía y en toda América (http://leda.lycaeum.org/Taxonomy/Salvia_
officinalis.2910.shtml).
Altitud: hasta 1.800 m.
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Clima:templado y templado-cálido; resiste las sequías y algo las heladas, que la
afectan si son persistentes o intensas.
Suelo: como planta rústica se adapta a gran variedad de suelos, ácidos y básicos, con
una escala muy amplia de su pH, de 5 a 9, soportando gran concentración de cal,
arcilla e incluso yeso, pero prefiere los suelos de consistencia media, algo ligeros y
calcáreos y de exposición sur (http://leda.lycaeum.org/Taxonomy/Salvia_
officinalis.2910.shtml).
Recolección
El corte debe hacerse a 15 cm del suelo para evitar la desaparición de los pies; en
caso de recolección manual, es preciso evitar que se mueva la planta pues se
provocaría su muerte. Para el aprovechamiento de las hojas en el primer año, se
realiza solo un corte y en los años siguientes se lleva a cabo antes de la floración; en
junio y en septiembre. Para destilación el corte se hará en plena floración, un mes más
tarde que en el primer caso. La recolección de semillas puede hacerse con la segadora
o trilladora (http://leda.lycaeum.org/Taxonomy/Salvia_officinalis.2910.shtml).
Procesado de la cosecha
Si la planta se destina a extraer su aceite esencial, la recolección debe hacerse dos
días, antes de destilarla ( Simon et al. 1984).Si se aprovecha la hoja, es preciso secar
la planta en secadero o en cobertizo bien ventilado, oscuro y a una temperatura
inferior a 40° C. Posteriormente se separan las hojas de las ramillas, manualmente,
por vareo, o mecánicamente, mediante trillado y cribado (Simon et al. 1984).
Rendimientos
El rendimiento es de aproximadamente 6.000 kg/ha de planta fresca, que una vez
secada se reduce a 1.500 kg. A partir del segundo año y hasta el cuarto, va
aumentando la producción y es posible alcanzar una medida de 4.000 kg/ha de planta
seca, en las dos cortas del año. A partir del quinto año empieza a disminuir la
producción, por lo que conviene renovar el cultivo. La separación de hojas y tallos se
hace fácilmente después del secado para lo que se cortan los ramilletes de salvia, a
28
nivel de los entrenudos con la ayuda de un machete. Los rendimientos de hojas
secadas varían de 900 a 2.100 kg/ha. Los rendimientos de la esencia oscilan entre 1 y
2,5 % sobre material seco (http://www-
ang.kfunigraz.ac.at/~katzer/engl/generic_frame.html?Salv_off.html)
Principales componentes químicos
De las hojas: ácido ursólico 1 a 2 %; flavonoides, glucósidos de la luteolina y de la
apigenina; ácidos: rosmarínico, 2 a 3 %, caféico y clorogénico; un principio amargo
diterpénico, la picrosalvina o carnasol, 0,35 %, que es la forma lactónica de la
salvina, un ácido diterpénico, contenido en la flor, y su éter monometílico. Taninos
catéquicos. (Muñoz 1987).
Del aceite esencial: del 1 al 2.5% es en su mayoría compuesto por tuyona (35 al
60%), 1,8-cineol (15%), camfor (18%), borneol (16%), alfa y beta pineno, y salvina
(http://www.mobot.org/hort/plantfinder/Code/M/M26.htm).
Propiedades y aplicaciones
De las hojas: son tónicas, coleréticas, antisudorales, antisépticas, hipogluceminantes,
emenagogas, astringentes, antisépticas, cicatrizantes, estrógenas, antioxidantes
( Simon et al. 1984). En uso interno, en forma de infusión, extracto fluido y tintura,
para combatir los sudores nocturnos, asma, catarros, como estimulante tónico,
emenagoga, como conservante de alimentos e industrias cárnicas, charcutería, en
culinaria, como condimentos de carnes, sopas, salsas, etc
(http://leda.lycaeum.org/Taxonomy/Salvia_officinalis.2910.shtml). En uso externo, la
infusión en gargarismos, contra las anginas y en cicatrización de llagas y heridas y en
alcoholatura, como vulneraria y astringente (Muñoz, 1987).
Del aceite esencial: en preparados farmacéuticos con propiedades derivadas de la
tuyona. El aceite también tiene propiedades antisudorales, emenagogas, germicidas y
cicatrizantes. En alimentación se utiliza como condimento y bactericida. Esta planta
también es utilizada en perfumería, jabonería y cosmética (Simon et al. 1984).
29
2.4.2 Toronjil
Figura 2. Melissa officinalis.
Nombre científico: Melissa officinalis L. (Fam. Lamiaceae)
Nombres vulgares: Toronjil, Lemon balm y Melissa.
Descripción
Es una planta herbácea de altura variable entre 30 y 90 cm. Sus tallos cuadrangulares
son ramificados y derechos. Las hojas son opuestas, ovales, cordiformes, pecioladas,
suavemente dentadas, de color verde oscuro por el haz, verde claro y pubescentes por
el envés. Las flores son blancas o rosadas, amarillas antes de abrirse, dispuestas en
verticilos de 6 a 12 en las axilas de las hojas. El fruto es un tetraquenio. Las hojas
desprenden un olor agradable que recuerda al del limón y un sabor cálido y amargo.
Florece desde el mes de mayo en adelante (Muñoz 1987).
Parte Útil: Los tallos frescos y las hojas secas; rara vez las sumidades floridas
(Muñoz 1987).
Ecología
Hábitat: Centro, este y sur de Europa, en lugares frescos y umbrosos, frecuentemente
asilvestrada. En España, y en casi toda América.
Altitud: de 0 a 1.600 m.
Clima: Templado o templado cálido; no resiste las heladas.
Suelo: No es muy exigente en el tipo de suelo, pero prefiere los de consistencia
media, profundos, frescos, permeables, así como los de aluvión, fértiles y con buen
drenaje.
Recolección
30
Debe efectuarse en tiempo seco, con el fin de evitar el ennegrecimiento del material
vegetal, cuando se seque. Únicamente se recolecta la parte aérea de la planta un poco
antes de la floración. El primer año solamente se da una corte en Agosto. A partir del
segundo año se hacen dos cortes (Muñoz 1987).
Procesado de la cosecha
El material verde pasa al secadero o bien se trocea antes, a nivel de los entrenudos
con machete eliminando las bases de los tallos lo que permite un tipo de deshojado,
que facilita el secado y revaloriza el producto (Muñoz 1987). El secado debe hacerse
en secadero a una temperatura de 35° C, o en cobertizo seco ventilado y a la sombra
para evitar el ennegrecimiento de las hojas. En la conservación deben usarse envases
opacos, impermeables, que no sean de plástico (Muñoz 1987). En lugar de la infusión
de toronjil es más adecuado el alcoholato, que se prepara por destilación, porque
contiene mayor cantidad de esencia (Ody 1993).
Rendimientos
El rendimiento se encuentra entre los 4.000 kg/ha de planta fresca.. A partir del
segundo año se obtienen 8.000 kg/ha de planta fresca. Debido al secado, se pierde el
75 al 80% del peso. (Muñoz 1987). La destilación de la planta permite obtener de 25
a 30 Kg/ha de aceite esencial por año, lo que supone el 0,10% de aceite esencial de
planta fresca o del 0,10% de hojas secas (Muñoz 1987).
Principales componentes químicos.
Las hojas contienen del 10 al 12 % de elementos minerales, taninos catéquicos,
ácidos fenólicos (caféico, clorogénico, rosmarínico), ácido succínico, un principio
amargo, mucílagos, resina y 0,10% de aceite esencial (Muñoz 1987). El aceite
esencial de color amarillo claro contiene terpenos, pineno, limoneno, alcoholes
(geraniol, linalol) y, en mayor cantidad, aldehídos (citral, citronelal) (Muñoz 1987).
Los componentes químicos aislados de esta planta se encuentran en el anexo 1.
31
Propiedades y aplicaciones
Las hojas y sumidades floridas son antiespasmódicas, sedantes, braquicárdicas, algo
somníferas, estomáquicas, carminativas, diaforéticas, cicatrizantes, antivirales,
germicidas y utilizadas como antioxidantes de alimentos (Muñoz 1987).
Se usan en forma de infusión, extracto, decocción, en herboristería y en licorería. Las
hojas son utilizadas como componentes del “Agua del Carmen” o “Melisiana”,
también en la preparación del “Chartreuse”, “Benedictine” y otros licores (Muñoz
1987). La esencia se usa en perfumería, cosmética, en la preparación de aguas y
extractos (Simon et al.1984).
2.4.3 Yerbabuena
Figura 3. Mentha x piperita.
Nombre científico: Mentha x piperita L. (Fam. Lamiaceae).
Nombres vulgares: Yerbabuena, menta.
Descripción
La Mentha x piperita es un híbrido natural entre M. spicata L. y M. aquatica L. Es
nativa de la región mediterránea pero hoy en día es cultivada en casi todo el mundo
(Wijesekera 1984).
Es una especie herbácea, vivaz de 30 cm a 65 cm de altura, de tallos erguidos
cuadrangulares de color café y violeta. Las hojas son opuestas, pecioladas, pequeñas,
opuestas, oval-lanceoladas, brevemente pediceladas, con algunos dientes en la base.
Las flores se encuentran agrupadas en verticilios, interrumpidos en las axilas de las
hojas superiores del tallo y de las ramas, las hojas son pequeñas y de color lila o rosa
pálido, a veces blancas; desde el cáliz, hasta la garganta pelosa hay 2 a 3 mm de
largo, tienen 5 dientes, 3 de forma triangular y 2 estrechos y agudos; la corola es de
32
una pieza, dividida en 4 lóbulos, casi iguales, uno separado y enfrente de los otros
tres. Por último, las flores tienen 4 estambres divergentes. La floración es de junio
hasta octubre (Wijesekera 1984).
Parte útil: Hojas (Muñoz 1987).
Ecología
Hábitat: Originaria de Europa meridional y del norte de África. Hoy en día cultivada
en la mayoría de países con climas templados (Wijesekera 1984).
Altitud: hasta los 1500 m.
Clima:templado y templado-cálido, aunque resiste las heladas y fríos.
Suelo: vive en los silíceos y en los calizos, pero prefiere los ligeros, ricos en materia
orgánica, que sean frescos y los de regadío.
Recolección
El momento adecuado para la cosecha, es después de los 100 a 120 días de haber sido
plantados los estolones o las partes vegetativas. El tiempo ideal es cuando las hojas se
comienzan a tornar amarillas. La planta se corta a unos 10 cm del suelo con hoz o
guadaña en las pequeñas plantaciones ó con la barra de corte en los cultivos de gran
extensión. También pueden utilizarse máquinas segadoras especiales provistas de
aspas, cizalla, cinta transportadora y remolque (Simon et al. 1984).
Procesado de la cosecha
El secado de la planta debe hacerse rápidamente en cobertizo bien ventilado, en
bandejas de secado o mejor en secaderos de aire caliente, a una temperatura media de
35° C. Una vez seca la planta se separa la hoja mediante vareo o trilla, cribado o
aventado (Muñoz 1987).
Rendimientos
En planta fresca: el primer año 10.000 kg/ha; en años sucesivos 27.000 kg/ha.
33
En planta seca: el primer año 2.000 kg/ha; en años sucesivos 5.400 kg/ha.
En aceite esencial: las hojas frescas contienen hasta 4.6% de aceite. Por supuesto esto
depende de la eficiencia del equipo de destilación (Wijesekera 1984).
Principales componente químicos
Los principales componentes químicos son: azulenos, carotenos, colina; el aceite
esencial contiene alfa y beta pineno, cineol, jasmona, isomenthol, leedlo, limoneno,
menthofurano, mentol, menthyl acetato, neomentol, piperitona, pulegona; flavonoides
como menthosido y rutina; ácido rosmarínico y taninos (Wijesekera 1984). Los
componentes químicos aislados de esta planta se encuentran en el anexo 2.
Propiedades y aplicaciones
Es antiespasmódica, colagoga, estomáquica, antiséptica, carminativa. Se emplea en
infusión como digestiva, colagoga y tónica (Muñoz 1987). En uso externo la esencia
en solución alcohólica se utiliza como linimento, para lavar heridas y en fricciones
estimulantes (Wijesekera 1984). También es utilizada en culinaria y en licorería
(Muñoz 1987). Las hojas finamente trituradas y secas de la menta son uno de los
remedios más efectivos, ya que esta infusión controla gorgojos del arroz y de la
harina, áfidos, pulgones, piojos, ácaros y garrapatas de los animales domésticos. Se
aplica espolvoreando la piel del animal y las zonas donde este descansa (Ody 1993).
2.4.4 Eucalipto
Figura 4. Eucaliptus globulus.
Nombre científico: Eucaliptus globulus L. (Fam. Myrtaceae).
Nombres vulgares: Eucalyptus, eucalipto y eucalito.
Descripción
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El eucalipto es un árbol de gran porte, que puede rebasar los 10 m. de altura, verde
todo el año. Cuando joven o cuando se corta el árbol éste se renueva con vástagos que
brotan de su cepa. Tiene tallos cuadrados, con aristas prominentes que forman sendas
agudas aletas en sus cuatro esquinas. Los cuatro costados del tallo tienen color
glauco, porque están recubiertos de pruina y de muchas asperezas o irregularidades en
la superficie; a menudo, el filo de los cantos tiene color purpúreo. Las hojas de estos
vástagos jóvenes se disponen acopladas una frente a otra; tienen figura
prolongadamente aovada y el ápice obtuso pero con un pequeño mucrón agudísimo y
carecen de rabillo y de toda clase de vello; sus bordes son enteros y su consistencia
ligeramente coriácea. Tienen verde el haz y color glauco en el envés, con la misma
pruina del tallo y numerosos puntos translúcidos de desiguales dimensiones, que
corresponden a otras tantas bolsitas de esencia (Simon et al. 1984).
En las ramas del árbol adulto, las hojas son largas y estrechas, ligeramente curvadas,
a manera de guadaña, puntiagudas y de bordes enteros, lampiñas, endurecidas y
coriáceas, sostenidas por un rabillo de 1,5 a 2,5 cm., y con la lámina colocada
verticalmente; una vena de color más claro la recorre de la base al ápice y por
transparencia, se ven otras venas secundarias que arrancando de la principal se
dirigen a los bordes. Esas hojas se hallan esparcidas en las ramas no opuestas y de dos
en dos y a contraluz muestran asimismo numerosos lunarcillos pálidos que
corresponden a otros tantos pequeños depósitos de esencia (Wijesekera 1984).
Las flores se forman y se abren en las sumidades de las ramitas del año anterior; cada
una de ellas nace en el encuentro de una hoja con la rama y está sostenida por un
corto cabillo de 0,5 cm. La flor está constituida por una especie de urna durísima con
su tapadera la cual cada urna tiene figura cónica truncada, el borde redondo, y en los
flancos, cuatro cantos muy manifiestos de manera que se forman otras tantas caras
casi planas; entre esos cantos se ven otros filetes realzados, irregulares y menos
manifiestos. Al abrirse la flor salta la tapadera que cierra la urna la cual es deprimida
y tiene un mamelón en el centro. Tanto la urna como la tapadera muestran la
superficie granujienta y color verde, pero también están cubiertas de una espesa
pruina, de tal manera, que parecen enharinadas. Desprendida la tapadera el borde de
35
la urna deja ver un rodete interior también circular, del que surgen centenares de
estambres de largos filamentos blancos con anteras pequeñitas y de color crema
(Wijesekera 1984).
Parte útil: Hojas (Muñoz 1987).
Ecología
Hábitat: Este árbol es natural de Australia y Tasmania, donde fue descubierto por
Labillardière a fines del siglo XVIII. Dícese que fue introducida en Argelia en 1854 y
en Europa, en 1856. En menos de un siglo se ha difundido su cultivo por toda la
Península, y existen grandes plantaciones de ella en el Norte y en Portugal. Hoy en
día cultivado en países con climas templados (Muñoz 1987).
Altitud: hasta los 3000 m.
Clima: resiste climas fríos y templados.
Suelo: de consistencia media, profundos, permeables, que sean frescos y los de
regadío.
Recolección
Se recolectan exclusivamente las hojas falciformes de las ramas adultas cuando están
perfectamente formadas y se desecan en sitio ventilado (Wijesekera 1984).
Rendimientos
El rendimiento de la esencia es de 1,2 hasta el 3 % de la planta en fresco (Nishimura
& Calvin 1979). Esta esencia se compone principalmente de cineol (80%) y de
eucaliptol.
Procesado de la cosecha
Las hojas verdes son troceadas al nivel de los entrenudos o pasadas al secadero
directamente. La temperatura de secado es de 30° c a la sombra, para evitar que se
deterioren las hojas (Muñoz 1987).
36
Principales componentes químicos
Los principales componentes químicos son: tanino, resina, ácidos grasos, pineno,
aldehído valeriánico, aldehído butílico, aldehído caproico; alcohol etílico, alcohol
amílico, ácido fórmico y ácido acético (Nishimura & Calvin 1979).
Propiedades y aplicaciones
La introducción del eucalipto se hizo para sanear terrenos bajos y pantanosos con el
objeto de erradicar los mosquitos transmisores del paludismo (Ody 1993) ya que el
rápido desarrollo de este árbol y la absorción de grandes cantidades de agua del suelo
pueden llegar a desecar el terreno y a impedir que se formen charcos donde se
desarrollan las larvas. (Wijesekera 1984). Las hojas de eucalipto son anticatarrales,
útiles contra las inflamaciones de las vías respiratorias y utilizada en enfermedades
gastrointestinales. También son recomendadas contra la diabetes (Ody 1993). Sin
embargo rebasar las dosis moderadas, puede provocar gastroenteritis, hematuria y
dificultades respiratorias (Téllez 1990). La infusión de eucalipto se prepara a partir de
las hojas en agua hirviendo. Esta infusión se utiliza contra la bronquitis y los
catarros de las vías respiratorias(Wijesekera 1984).
2.5 Introducción a las especies blanco.
2.5.1 Artemia salina Leach.
La clasificación sistemática de la Artemia salina hasta el nivel de género es dado por
Flössner en1972.
37
Clase : Crustacea
Subclase : Branchiopoda
Súper Orden : Anostraca
Familia : Artemiidae
Género : Artemia
La Artemia salina o comúnmente llamado el camarón salmuera (figura 5), es un
crustáceo de lagos salinos de todo el mundo.
La Artemia salina, es una especie que tolera rangos de salinidad, desde aguas dulces
hasta saturadas. Este camarón es un filtrador no selectivo que generalmente se
alimenta de detritus orgánico, así como de bacterias y algas microscópicas
(http://library.kcc.hawaii.edu/CTSA/publications/Artemia.htm).
Figura 5. Artemia salina.
El camarón salmuera posee la propiedad de reproducirse de dos maneras diferentes,
dependiendo de las condiciones ambientales. Primero, puede producir larvas de libre
natación (ovovipariedad), o puede producir huevos latentes (ovipariedad), donde el
desarrollo del embrión es detenido en el útero, en la etapa de gástrula. En esta etapa,
el embrión es rodeado por una capa quitinosa y de una reserva de carbohidratos. Es
de esta manera, en que los huevos de las artemias se mantienen en letargo, hasta
cuando las condiciones ambientales son óptimas para su incubación. Estos huevos
pueden durar en letargo hasta 100 años, lo que los hace ideales como alimento para
peces de acuarios, o como en este caso para ser utilizados en laboratorio
(http://www.cenaim.espol.edu.ec/publicaciones/artemia/). Estos huevos se
38
encuentran disponibles en tiendas para mascotas, como comida para peces tropicales
(http://library.kcc.hawaii.edu/CTSA/publications/Artemia.htm).
La Artemia salina ha sido utilizada en bioensayos para analizar residuos de
pesticidas, actividad de micotoxinas, anestésicos, toxinas de dinoflagelados,
compuestos similares a la morfina, toxicidad de dispersantes de aceites y tóxicos en
ambientes marinos, ya que las artemias han mostrado gran sensibilidad expresada en
mortalidad, ante la presencia de tóxicos
(http://www.cenaim.espol.edu.ec/publicaciones/artemia/). Por ejemplo, bioensayos de
toxicidad en artemias, con extractos etanólicos de semillas de las familias
Euphorbiaceae (Meyer et al. 1982) y Fagaceae (Arango 1994).
Para este experimento se utilizaron larvas con 48 horas, debido a que este es el
tiempo cuando el 90% de los quistes viables han eclosionado (Meyer et al. 1982, Mc
Laughlin 1991).
2.5.2 Macrosiphum rosae (Linnaeus, 1758).
Clase : Hexápoda
Subclase : Ectognata
Orden : Homóptera
Familia : Aphididae
Género : Macrosiphum
Son insectos herbívoros relacionados con los hemípteros pero con el pico situado en
la parte posterior de la cabeza. Alas anteriores generalmente membranosas sobre el
abdomen y presentan metamorfosis gradual (figura 6).
39
Figura 6. Macrosiphum rosae.
Estos insectos son fitófagos e introducen la savia en el intestino por medio de una
bomba muscular cibarial; a continuación pasa a la faringe y después al intestino
medio. Como consecuencia de su forma de alimentarse, estos insectos causan daños
directos e indirectos a las plantas cultivadas. Además de esto causan enfermedades
víricas como en la patata, el maíz, el tabaco y la caña de azúcar (Arango 1994).
Las áfidos llevan tubos o sifones sobre el abdomen, a través de los cuales pueden
exudar una Feromona de alarma. En esta familia las generaciones partenogenéticas
son vivíparas. El invierno lo pasan generalmente en forma de huevo, que
comúnmente está depositado en una planta que se denomina huésped primario. En la
primavera una hembra áptera agámica (fundadora) produce otras similares
(fundatrigenias), pero rápidamente se desarrollan hembras agámicas aladas
(emigrantes) que vuelan a otras plantas o huésped secundario. A lo largo del verano
se producen nuevas generaciones aladas y ápteras de hembras agámicas (alienícolas)
en el huésped secundario. Las formas aladas evitan la superpoblación emigrando a
otras plantas. Al comienzo del otoño, las aladas regresan al huésped primario y
producen machos y hembras. Después de que ellos se apareen, ponen los huevos y se
completa el ciclo (Davies 1989).
Los áfidos han sido utilizados en bioensayos de respuesta olfatométrica debido a que
presentan respuestas olfativas ante diversos aromas, específicamente cuando son
repelidos ante sustancias que presentan toxinas (Mc Laughlin 1991).
2.5.3 Ctenocephalides canis (Curtis, 1826).
Clase : Hexápoda
Subclase : Ectognata
Orden : Siphonaptera
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Familia : Pulicidae
Género : Ctenocephalides
Estos insectos son holometábolos, pequeños, ápteros, comprimidos lateralmente,
ectoparásitos de perros, con piezas bucales preparadas para picar. Las larvas son
vermiformes de vida libre (Davies 1989).
La pulga de perro, Ctenocephalides canis, se diferencia de otros géneros debido a la
presencia de ctenidios en la cabeza. Además la pulga de perro se diferencia de la de
gato por la presencia de 3 o mas setas en el metepisterno (Davies 1989) (figura 7).
Figura 7. Ctenocephalides canis.
Todas las pulgas son ectoparásitos chupadores de sangre de aves y mamíferos, y
raramente miden mas de 4 mm. Usualmente cada especie tiene su huésped en
particular. Los huevos de las pulgas son depositados en los nidos o lugares de cobijo
de los huéspedes. Las larvas son blanquecinas con la cabeza bien desarrollada que
porta las piezas bucales masticadoras (Davies 1989).
La pulga de perro transmite el parásito intestinal Dipylidium caninum y también es
responsable de la dermatitis alérgica (FAD) en perros, lo cual genera gastos por 3
billones de dólares al año en tratamientos médicos
(http://www3.unileon.es/dp/dmv/texto-alergias.htm#dapp).
3. Formulación del problema.
El uso indiscriminado de plaguicidas basados en sustancias químicas de origen
sintético tiene un fuerte impacto ambiental. Situación que ha venido causando graves
trastornos al entorno reflejados en contaminación de fuentes de agua, acidificación de
suelos, residualidad de sustancias tóxicas en los alimentos, la aparición de resistencias
41
de las plagas a los plaguicidas y la disminución en la producción agrícola.
Adicionalmente, los mercados internacionales han venido implementando obstáculos
y barreras para el comercio cada vez mas exigentes en relación con productos que
contengan residuos de plaguicidas químicos.
4. Justificación de la Investigación.
Este trabajo se realizó, como una posible respuesta, a la búsqueda mundial de
alternativas fitotóxicas o fitorepelentes que sean ecológicamente amigables.
5. Preguntas de Investigación.
¿Los extractos concretos de las plantas estudiadas presentarán actividad tóxica en
contra de Artemia salina?
¿Los extractos concretos obtenidos a partir de las plantas estudiadas presentarán
actividad biológica de tipo olfativa en contra del áfido Macrosiphum rosae?
¿Los extractos concretos obtenidos a partir de las plantas estudiadas presentarán
actividad biológica de tipo olfativa frente a pulgas de perro Ctenocephalides canis?
6. Objetivos.
6.1 Objetivo General.
Realizar estudios dirigidos hacia la obtención e identificación de plaguicidas o
repelentes con origen vegetal.
42
6.2 Objetivos Específicos.
Determinar si existe actividad biológica de tipo tóxica, por parte de los extractos
concretos de Salvia officinalis, Melissa officinalis, Mentha x piperita y Eucaliptus
globulus, en contra de Artemia salina.
Determinar si existe actividad biológica de tipo olfativa (atracción o repelencia), por
parte de los extractos de Salvia officinalis, Melissa officinalis, Mentha x piperita y
Eucaliptus globulus, en áfidos Macrosiphum rosae y en pulgas de perro
Ctenocephalides canis.
7. Hipótesis.
Prueba de toxicidad.
Ho: no habrá toxicidad por parte del extracto de Salvia officinalis ante las artemias.
H1: si habrá toxicidad por parte del extracto de Salvia officinalis ante las artemias.
Ho: no habrá toxicidad por parte del extracto de Melissa officinalis ante las artemias.
H1: si habrá toxicidad por parte del extracto de Melissa officinalis ante las artemias.
Ho: no habrá toxicidad por parte del extracto de Mentha x piperita ante las artemias.
H1: si habrá toxicidad por parte del extracto de Mentha x piperita ante las artemias.
Ho: no habrá toxicidad por parte del extracto de Eucaliptus globulus ante las artemias.
H1: si habrá toxicidad por parte del extracto de Eucaliptus globulus ante las artemias.
Prueba olfatométrica para áfidos.
43
Ho: el extracto concreto de Salvia officinalis no repelerá a áfidos.
H1: el extracto concreto de Salvia officinalis si repelerá a áfidos.
Ho: el extracto concreto de Melissa officinalis no repelerá a áfidos.
H1: el extracto concreto de Melissa officinalis si repelerá a áfidos.
Ho: el extracto concreto de Mentha x piperita no repelerá a áfidos.
H1: el extracto concreto de Mentha x piperita si repelerá a áfidos.
Ho: el extracto concreto de Eucaliptus globulus no repelerá a áfidos.
H1: el extracto concreto de Eucaliptus globulus si repelerá a áfidos.
Prueba olfatométrica para pulgas.
Ho: el extracto concreto de Salvia officinalis no repelerá a pulgas.
H1: el extracto concreto de Salvia officinalis si repelerá a pulgas.
Ho: el extracto concreto de Melissa officinalis no repelerá a pulgas.
H1: el extracto concreto de Melissa officinalis si repelerá a pulgas.
Ho: el extracto concreto de Mentha x piperita no repelerá a pulgas.
H1: el extracto concreto de Mentha x piperita si repelerá a pulgas.
Ho: el extracto concreto de Eucaliptus globulus no repelerá a pulgas.
H1: el extracto concreto de Eucaliptus globulus si repelerá a pulgas.
7.1 Predicción.
44
Debido a la información recopilada de las especies vegetales estudiadas; Salvia
officinalis, Melissa officinalis, Mentha x piperita y Eucaliptus globulus, se espera que
los extractos obtenidos en laboratorio tendrán acción biológica de tipo tóxica en
contra de Artemia salina y repelente en Macrosiphum rosae y Ctenocephalides canis.
Esta predicción se basa en el hecho de que las cuatro plantas estudiadas pertenecen al
grupo de las que producen metabolitos secundarios y que muchos de estos, presentan
actividad biológica tóxica y repelente (Taiz & Zeiger 1998).
8. Materiales y Métodos.
8.1 Lugar de realización.
Tanto la primera parte del estudio, que correspondió a la extracción de las esencias
concretas de Salvia officinalis, Melissa officinalis, Mentha x piperita y Eucaliptus
globulus, como la segunda que correspondió a los ensayos cromatográficos, se
realizaron en los Laboratorios de Fitoquímica del Departamento de Química de la
Pontificia Universidad Javeriana.
La segunda parte del estudio, que fue la determinación de la actividad tóxica por parte
de los extractos en Artemia salina, y la determinación de la actividad olfativa por
parte de los extractos ante Macrosiphum rosae y Ctenocephalides canis, se llevo
acabo en los laboratorios de la empresa RYEGA, ubicados en la calle 122 N° 8-32.
8.2 Material vegetal.
45
La empresa KISKA, por medio del laboratorio RYEGA fue la encargada de
suministrar los especimenes botánicos. De cada especies se entregaron 500g de partes
aéreas frescas, que después de ser lavadas, cortadas y seleccionadas se tuvieron los
siguientes pesos: 377g de Salvia officinalis, 492g de Melissa officinalis, 405g de
Mentha x piperita y 373g de Eucaliptus globulus.
La determinación botánica de la salvia, toronjil y menta fue realizada por el Doctor
Edgar Linares curador general del Herbario Nacional Colombiano (COL) (anexo 4).
Estos ejemplares fueron donados al Herbario de la Pontificia Universidad Javeriana y
presentan los siguientes números de colección: Salvia officinalis N° HPUJ. 012024.,
Melissa officinalis N° HPUJ. 012025., y Mentha x piperita N° HPUJ. 012026.
El Eucaliptus globulus fue determinado por C. Parra del Herbario Nacional
Colombiano (COL) y presenta el número COL. 468619 (anexo 5).
8.3 Extracción.
Después de haber limpiado y picado el material vegetal se procedió a hacer la
extracción.
La extracción de la esencia concreta se hizo por medio de alcohol etílico, previa a su
destilación en rotavapor para aumentar la pureza, ya que es el solvente mas apto para
la extracción de material vegetal fresco (Wijesekera 1984).
El primer paso de esta extracción consiste en la maceración, la cual es la trituración
mecánica del material vegetal y el contacto de este con el solvente frío; el disolvente
penetra rápidamente los órganos vegetales y disuelve junto con las ceras, algunos
colorantes y la mayoría de las sustancias odoríferas naturales. Se deja que el solvente
actué con el macerado 2 semanas, en un frasco hermético de color ámbar. Para cada
planta se utilizaron 4000 ml de solvente. Este ese el método más recomendable para
extraer sustancias termolábiles (Wijesekera 1984).
46
Posteriormente, se procedió a filtrar cada macerado por medio de filtros de papel No.
41 Whatman, para luego eliminar el disolvente de la solución alcohólica por medio
de concentración a presión reducida en rotavapor, a 175 mba/hpa. Seguido este
procedimiento se obtuvieron aceites concentrados llamados “concretos” o absolutos
libre de alcohol. Para obtener la variable de estudio de la extracción, los aceites se
dejaron secar por un periodo de 48 horas en horno a 20°C, para que finalmente fuesen
pesados en una balanza analítica Sartorius, BASIC BA – 160P.
8.4 Bioensayo general de toxicidad en Artemia salina.
Se siguió la metodología descrita en Meyer et al. 1982, Mc Laughlin 1991, Solís et
al. 1993 y Arango 1994.
Los huevos de Artemia salina (San Francisco Bay Brand, Inc., 8239 Enterprice Drive,
Newark, CA 94560, U.S.A.), fueron incubados en una pecera rectangular (22 x 32
cm), la cual fue llenada con agua marina artificial la cual fue preparada con una
mezcla de sal comercial (Instant Oceans, Aquarium System, Inc.) y agua doblemente
destilada en una proporción de 38g/l. Se puso una división plástica perforada
(radiografía), con hoyos de 2 mm, que se fijó desigualmente en la pecera, para hacer
dos compartimientos de distinto tamaño. Los huevos fueron rociados en el
compartimiento mas grande, que estaba oscuro, mientras que el compartimiento
pequeño estaba iluminado. Después de 48 horas las larvas fototrópicas fueron
colectadas mediante pipetas del lado iluminado en el acuario (Mc Laughlin 1991).
Para cada extracto concreto se probaron concentraciones de 1000, 100 y 10 μg/ml
para obtener un alto rango de prueba. Además que diluciones menores de 10 μg/ml
47
solo se utilizan para sustancias muy tóxicas (Mc Laughlin 1991). Para hacer estas
diluciones se prepararon 3 viales para cada concentración, para un total de 9 viales
por extracto. Seguidamente se pesaron 20 mg de cada extracto y se les adicionaron 2
ml de metanol (20 mg/2ml), de esta solución se transfirieron 500, 50 y 5 μl a los
viales correspondientes a 1000, 100 o 10 μg/ml respectivamente (Meyer et al. 1982).
Se esperó 48 horas, ya que es el tiempo cuando el 90% de las artemias han
eclosionado, se contaron 10 artemias por vial (30 por disolución) y se le adicionó a
cada vial 5 ml de agua marina, para obtener las diluciones planteadas. Como control
se utilizó tanto metanol como agua marina (Meyer et al. 1982).
Después de 24 horas se evaluó la variable de estudio, en este caso mortalidad, y los
resultados se expresaron como porcentaje de mortalidad (%M) (Meyer et al. 1982,
Mc Laughlin 1991, Arango 1994).
8.5 Bioensayo de respuesta olfatométrica en áfidos y pulgas.
Este bioensayo se basa en la determinación semicuantitativa de la preferencia de los
insectos bajo estudio, por su permanencia en ciertas zonas previamente definidas en
una cámara de observación u OLFATÓMETRO (Pettersson 1970, Cerda et al. 1994,
Arango 1994, Cerda et al. 1995, Cerda et al. 1996).
Para la realización del experimento, se necesitó una población de 750 áfidos,
Macrosiphum rosae, la cual fue suministrada por el laboratorio RYEGA, y era
proveniente de cultivos de rosas de la sabana de Bogotá. Por otro lado, la población
de pulgas fue recolectada en el laboratorio de parasitología adscrito al laboratorio de
histología de la Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U.D.C.A.
Con la finalidad de evaluar si existía alguna clase de respuesta olfativa, por parte de
adultos de áfidos y de pulgas ante los aromas originados de los extractos concretos de
las plantas estudiadas, se realizó un estudio, a través de un olfatómetro de dos
elecciones (Jaffe & Sánchez 1991, Cerda et al. 1994), para lo cual, se adaptó el
dispositivo experimental descrito en Jaffe y Sánchez (1991), basado en la idea
original de Pettersson (1970), que se muestra en la figura 8. En este dispositivo, los
48
aromas llegan a la cámara de observación u “olfatómetro”mediante una tubería
plástica. Seguidamente, el aire es interceptado por una trampa de agua, que
uniformiza la presión y la humedad. Posteriormente, el aire es forzado a pasar por
unas llaves, donde se calibra el flujo en aproximadamente 6 ml / seg. Cada
experimento constó de 10 minutos de observación, con alternancia en la posición de
los aromas cada vez que se iniciaba una sesión experimental (Pettersson 1970, Jaffe
& Sánchez 1991, Cerda et al. 1994)
La experimentación se inició con la retención de los insectos durante 5 minutos, sin
exposición a ningún aroma, para luego dejarlos libres en el dispositivo. En ese
momento se inició el paso de aire con los respectivos aromas (Jaffe & Sánchez 1991,
Cerda et al. 1994). Por medio de esta evaluación olfatométrica, se permite discriminar
cuatro conductas: primero, los individuos que eligen la fuente aromática A (extracto),
segundo, los que eligen la fuente aromática B (aire), tercero, los individuos indecisos,
y por último los que no responden. Los individuos sin decisión son aquellos que
durante los 10 minutos de observación cambiaron más de una vez la elección de la
fuente aromática y como individuos que no responden a los que permanecieron
inmóviles en el área de aclimatación o explorando cerca de ella con movimientos
lentos (Jaffe & Sánchez 1991, Cerda et al. 1994).
Figura 8. Cámara Olfatométrica Utilizada en el Bioensayo.
Los bioensayos se realizaron durante los periodos de 9:30 – 12:00 –y 14:00 – 15:30
h., en un cuarto cerrado, sin iluminación externa con una temperatura de 19 – 23° C y
50 – 75% de humedad relativa (Pettersson 1970, Jaffe & Sánchez 1991, Cerda et al.
1994). Para cada ensayo se utilizaron 10 individuos, lo que significó , que se
utilizaran 150 áfidos y 150 pulgas por cada extracto.
Para evitar que las repuestas olfativas de los individuos fueran interferidas por el
estímulo luminoso, las observaciones se realizaron con luz roja uniforme (Jaffe &
Sánchez 1991, Cerda et al. 1994). No se consideró el efecto sexo ni edad, dado que
los caracteres sexuales morfológicos son muy parecidos, lo cual pudiera generar
49
confusión al sexar, además no hay una metodología descrita para estas especies que
permita conocer la edad de los adultos. Para estar seguro de los resultados, se
efectuaron 15 réplicas para cada experimento, debido a que en la bibliografía se
recomiendan 10. (Cerda et al. 1994). Por último, al concluir cada sesión experimental
se limpió la plataforma de vidrio con acetona para eliminar los olores presentes y
evitar interferencia en la siguiente sesión experimental. Como control del método se
estimuló los insectos por las dos fuentes con aire limpio (sin aroma) (Jaffe & Sánchez
1991, Cerda et al. 1994).
Fuentes de aromas.
Debido a que para los bioensayos de olfatometría no existe una metodología exacta
en cuanto al peso que se debe utilizar, se usaron arbitrariamente como fuentes de
aromas 1,5 gramos de cada extracto concreto de las plantas medicinales estudiadas.
8.6 Metodología para las cromatografías de capa delgada C.C.D y
Bidimensionales.
La separación de mezclas de moléculas mediante la cromatografía de capa fina se
basa en el principio del reparto entre dos fases. En general, una cromatografía se
realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea separar (muestra)
interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un
segundo medio (la fase móvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir
a través de ésta para "lavar" (eluír) a las moléculas en la muestra. Debido a que las
distintas moléculas en la muestra presentan diferente coeficiente de reparto, la fase
móvil "lavará" a los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que
50
aquellos que "prefieren disolverse" en la fase móvil serán eluídos más rápido que los
que sean preferencialmente solubles en la fase estacionaria (Gros et al. 1985).
En este tipo de cromatografías, la fase estacionaria es una delgada capa de un soporte
sólido granulado, como en este caso gel de sílica, que se deposita sobre una placa de
acetato, para que adquiera firmeza y no se desmorone. La capa de la fase estacionaria
se aglutina con una pequeña cantidad de sulfato de calcio u otro agente cementante.
Las muestras se aplican añadiendo pequeñas gotas de solución en un pequeño circulo
cerca del extremo inferior de la placa y se dejan secar (Stahl 1969). La placa seca se
sumerge en un pequeño volumen de fase móvil (mezcla de solventes). La polaridad
de la mezcla de solventes se elige de acuerdo a la mezcla de compuestos que se desea
separar (Wagner et al. 1984). En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria está
hidratada, por lo que se le considera como la fase polar (Stahl 1969). Debido a que la
placa queda sumergida, el solvente comienza a mojar la fase estacionaria y asciende
por medio de capilaridad. Al recorrer la placa la fase móvil va arrastrando a las
substancias apolares y aquellas más polares son retenidas por la fase estacionaria
dando lugar a la separación (Wagner et al. 1984). Luego, la placa desarrollada se deja
secar y se revela con un reactivo que tiña a las substancias de interés. A las diferentes
manchas que quedan reveladas sobre las placas se les toma la movilidad relativa o Rf,
que es la relación entre la distancia recorrida por la mancha de un compuesto,
dividida por la distancia recorrida por el frente de solvente al momento de sacar la
placa del solvente (Gros et al. 1985). En el caso de los cromatogramas
bidimensionales, a las placas se les trazaron rayas perpendiculares a 2.5 cm en los
cuatro lados. Las placas, primero se dejan correr en un sentido con un solvente y
luego hacia otro sentido con otro de los solventes escogidos. Es esta la diferencia
metodológica con los cromatogramas en un sentido (Valenzuela 1986).
Ensayo cromatográfico.
51
El primer paso para realizar el ensayo cromatográfico fue la disolución de 1g. de cada
extracto, en 50ml de etanol al 95%. Para el ensayo fueron utilizadas cromatoplacas de
acetato y se utilizaron tres sistemas de solventes: éter de petróleo: acetato de etilo
(8:2); diclorometano, y diclorometano: metanol (9.5:0.5). Sobre la placa fueron
colocados las muestras de los extractos diluidos y se dejaron correr. La placa fue
secada, observada bajo luz ultravioleta y revelada mediante vainillina disuelta en
ácido sulfúrico, que es un revelador universal y se secó nuevamente.
Debido a que fueron los dos primeros sistemas de solventes, los que presentaron más
número de manchas, estos solventes fueron los escogidos, para realizar las
cromatografías bidimensionales. En el primer sentido se corrieron las placas en éter
de petróleo: acetato de etilo (8:2), y luego se corrieron en diclorometano. Estas placas
se secaron y se revelaron con vainillina disuelta en ácido sulfúrico.
Además de tomar el dato del índice de movilidad relativa dependiendo el color que
presentara cada mancha, se colocó la inicial que correspondiera y al lado el tipo de
posible compuesto (Tabla 1) (Valenzuela 1986).
Tabla 1. Equivalencia de la manchas.
Color Inicial CompuestoCafé C DiterpenoRoja R Diterpeno
Café Azul Ca DiterpenoCafé Rojizo Cr Diterpeno
Violeta V TriperpenoAmarillo A Flavonoide
8.7 Análisis De la Información.
Extracción. La información del peso de cada extracto se compara con el rendimiento
teórico del aceite esencial de cada planta.
52
Bioensayo general de toxicidad. Los datos se registraron directamente en una tabla
diseñada para este fin (Tabla 2). Los resultados se expresaron en porcentaje de
mortalidad (%M).
Bioensayo de respuesta olfatométrica. Después de haber recolectado los datos,
correspondientes a las posiciones de los insectos, en una tabla diseñada para tal fin
(Tabla 3), se realizó el análisis estadístico. Primero se concibió el nivel de
significancía o α= 0.05. El estadístico de prueba planteado fue CHI-CUADRADO. Se
tomaron 2 grados de libertad para grupo debido a que la categoría de indecisos
presento resultados cercanos a la nulidad y fue eliminada de la prueba. La regla de
decisión fue diferente (pero muy semejante) para cada grupo, debido a que el tamaño
de la muestra o (n) varió cuando se eliminó el grupo de los indecisos. Con estos
resultados se examinó si existía o no preferencia por alguno de los estímulos (Steel &
Torrie 1988). Para el análisis estadístico de los extractos con mayor acción repelente
se compararon las proporciones de atracción entre los dos extractos con resultados
mas significativos y se les aplicó la prueba Z que compara las proporciones estimadas
entre dos muestras. El valor α utilizado fue de 0.05. (McCall 1990).
Cromatografías de capa delgada C.C.D. los datos del índice de movilidad relativa
o Rf y del color de las manchas, fueron los utilizados para determinar los posibles
compuestos que se encontraron en los extractos concretos, y las posibles relaciones
entre las plantas.
Tabla 2. Tabla de recolección de datos en el bioensayo de toxicidad.
53
Tabla 3. Tabla de recolección de datos en el bioensayo de respuesta olfatométrica.
BIOENSAYO DE RESPUESTA OLFATOMETRICA
Extracto Aroma (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1
BIOENSAYO GENERAL DE TOXICIDAD CON Artemia salinaTratamientos Vs Réplicas
1 2 3Salvia officinalis Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos Muertos1000 μg/ml100 μg/ml
10 μg/ml 1 2 3
Melissa officinalis Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos Muertos1000 μg/ml100 μg/ml10 μg/ml
1 2 3Mentha x piperita Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos Muertos1000 μg/ml100 μg/ml10 μg/ml
1 2 3Eucaliptus
globulus Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos Muertos1000 μg/ml100 μg/ml
10 μg/ml 1 2 3
Testigo Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos MuertosMetanolSolución salina
54
23456789101112131415
9. Resultados
9.1 Extracción
9.1.1 Resultados de la extracción
Después de haber obtenido el absoluto libre de alcohol o extracto concreto, se
procedió a pesar cada extracto. El rendimiento de cada extracto concreto se
determinó haciendo la relación entre el peso inicial de las plantas, y los pesos finales
de los extractos, expresados en porcentaje (Tabla 4).
Tabla 4. Peso del extracto con su rendimiento.
55
Extracto Peso RendimientoSalvia officinalis 8.38g. 2.22%
Melissa officinalis 7.6g. 1.54%Mentha x piperita 8.4g. 2.07%
Eucaliptus globulus 7.2g. 1.93%
9.1.2 Comparación entre el rendimiento teórico y el obtenido.
Con la fin de evaluar el rendimiento en la extracción de las diferentes esencias por
medio de etanol, se realizó una comparación entre el rendimiento que presentó cada
extracto y el rendimiento que presentan teóricamente las mismas plantas con la
extracción por medio de hidrodestilación.
Los rendimientos presentados por los extractos de Salvia officinalis y Eucaliptus
globulus fueron similares a los teóricos, encontrándose entre el 2.3% para salvia y el
1.8% para eucalipto. Por otra parte, los rendimientos que presentaron los extractos de
Melissa officinalis y Mentha x piperita fueron muy distintos a los teóricos; el de
Melissa officinalis fue mucho mas alto (1,5% / 0,10%) y el de Mentha x piperita
mucho mas bajo (2,5% / 4,5%); lo que significa que aunque existen diferencias de
rendimiento según el método, la extracción con etanol es mas apta para el trabajo con
diferentes plantas, debido a que presenta un rendimiento mas uniforme. (Figura 9).
56
0,00%
0,50%
1,00%
1,50%
2,00%
2,50%
3,00%
3,50%
4,00%
4,50%
5,00%
Porcentaje
Salviaofficinalis
Melissaofficinalis
Mentha xpiperita
Eucaliptusglobulus
Rendimientos de los Extractos
Rendimientos Teóricos y Obtenidos
Obtenido
Teórico
Figura 9. Comparación entre rendimientos.
9.2 Resultados para el bioensayo general de toxicidad en Artemia salina.
El bioensayo general de toxicidad en Artemia salina mostró que el extracto de Salvia
fue el que mayor actividad toxica presentó, seguido por el de Yerbabuena y el de
Eucaliptus, que solo presento actividad con 100μg/ml. Por otra parte el extracto de
Melisa no presentó ninguna actividad toxica en contra de las artemias (tabla 5).
57
Tabla 5. Bioensayo de actividad tóxica.
BIOENSAYO GENERAL DE TOXICIDAD EN Artemia salina Fecha de conteo Junio 29 de 2001 Tratamientos
Vs Réplicas
1 2 3Salvia
officinalis Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos Muertos1000 μg/ml 0 10 0 10 0 10100 μg/ml 7 3 7 3 6 410 μg/ml 8 2 9 1 8 2
1 2 3
Melissa officinalis Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos Muertos1000 μg/ml 10 0 10 0 10 0100 μg/ml 10 0 10 0 10 010 μg/ml 10 0 10 0 10 0
1 2 3
Mentha x piperita Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos Muertos
1000 μg/ml 0 10 0 10 0 10100 μg/ml 8 2 7 3 5 510 μg/ml 10 0 10 0 10 0
1 2 3
Eucaliptus globulus Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos Muertos
1000 μg/ml 0 10 0 10 0 10100 μg/ml 9 1 10 0 9 110 μg/ml 10 0 10 0 10 0
1 2 3
Testigo Vivos Muertos Vivos Muertos Vivos MuertosMetanol 0 10 0 10 0 10
Solución salina 10 0 10 0 10 0
58
9.2.1 Porcentajes de mortalidad de Artemia salina con Salvia officinalis.
El primer bioensayo realizado fue el de toxicidad del extracto concreto de Salvia
(Figura 10), donde las artemias mostraron 100% de mortalidad para concentraciones
de 1000 μ/ml, 31% de mortalidad para concentraciones de 100 μg/ml, y 15% de
mortalidad para concentraciones de 10 μg/ml. Indicando así que en altas
concentraciones este extracto es tóxico para las artemias.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Porcentaje de Mortalidad (%M)
1. 2. 3. Tratamientos y Réplicas.
Porcentajes de Mortalidad con Salvia officinalis.
1000 μg/ml100 μg/ml 10 μg/ml
Figura 10. Mortalidad con el extracto de Salvia.
59
9.2.2 Porcentajes de mortalidad de Artemia salina con Melissa officinalis.
El segundo bioensayo realizado fue el de toxicidad con el extracto concreto de
Toronjil (Figura 11), donde las artemias mostraron 0% de mortalidad para
concentraciones de 1000μ/ml, 0% de mortalidad para concentraciones de 100 μg/ml,
y 0% de mortalidad para concentraciones de 10 μg/ml. Indicando así que este extracto
no tuvo ningún efecto tóxico sobre las artemias.
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1
Porcentaje de Mortalidad
(%M)
1. 2. 3.
Tratamientos y Réplicas
Porcentajes de mortalidad con Melissa officinalis.
Figura 11. Mortalidad con el extracto de Toronjil.
60
1000 μg/ml100 μg/ml 10 μg/ml
9.2.3 Porcentajes de mortalidad de Artemia salina con Mentha x piperita.
El tercer bioensayo realizado fue el de toxicidad con el extracto concreto de
Yerbabuena (Figura 12), donde las artemias mostraron 100% de mortalidad para
concentraciones de 1000μ/ml, 31% de mortalidad para concentraciones de 100
μg/ml, y 0% de mortalidad para concentraciones de 10 μg/ml. Indicando así que en
altas concentraciones este extracto, es tóxico para las artemias.
0102030405060708090
100
Porcentaje de
Mortalidad (%M)
1. 2. 3.
Tratamientos y Réplicas
Porcentajes de Mortalidad con Mentha x piperita .
Figura 12. Mortalidad con el extracto de Yerbabuena.
61
1000 μg/ml100 μg/ml 10 μg/ml
9.2.4 Porcentajes de mortalidad de Artemia salina con Eucaliptus globulus.
En el bioensayo de toxicidad con el extracto concreto de Eucalipto (Figura 13), las
artemias mostraron 100% de mortalidad para concentraciones de 1000μ/ml, 0% de
mortalidad para concentraciones de 100 μg/ml, y 0% de mortalidad para
concentraciones de 10 μg/ml. Indicando así que solamente en altas concentraciones,
este extracto es tóxico para las artemias.
62
0102030405060708090
100
Porcentaje de
Mortalidad (%M)
1. 2. 3.
Tratamientos y réplicas
Porcentajes de Mortalidad con Eucaliptus globulus .
Figura 13. Mortalidad con el extracto de Eucalipto.
9.2.5 Porcentajes de mortalidad de Artemia salina con el Testigo.
Los resultados de la mortalidad de las artemias en el testigo (Figura 14), fue del 100%
en los individuos expuestos al metanol, y del 0 % M de los individuos puestos en
agua marina, indicando así que en condiciones no tóxicas las artemias viven.
63
1000 μg/ml100 μg/ml 10 μg/ml
0102030405060708090
100
Porcentaje de
Mortalidad (%M)
1. 2. 3.
Tratamientos y Réplicas
Porcentaje de Mortalidad con el Testigo.
MetanolSolución salina
Figura 14. Mortalidad en los Testigos.
9.2.6 Porcentajes de mortalidad promedio de Artemia salina para todos los
extractos con sus tratamientos y réplicas.
Al comparar los resultados de los bioensayos de toxicidad en las artemias con los
extractos, se evidenció que el extracto de Salvia, es el que mayor toxicidad presentó,
64
seguido por el de Yerbabuena, y luego Eucalipto. El extracto de Toronjil no mostró
ninguna actividad tóxica en contra de las artemias (Figura 15).
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
(%M)
Salviaofficinalis
Melissaofficinalis
Mentha xpiperita
Eucaliptusglobulus
Extractos y Tratamientos
Porcentajes de Mortalidad Promedio
Figura 15. Mortalidad promedio comparada.
9.3 Bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae
9.3.1 Respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae con el extracto de Salvia
officinalis.
En el bioensayo de respuesta olfatométrica realizado en áfidos, con el extracto de
salvia, (Tabla 6), se observa que no hay diferencia significativa entre las posibles
65
1000 μg/ml100 μg/ml 10 μg/ml
posiciones de los insectos en la cámara. Lo cual representa que los áfidos no exhiben
alguna respuesta olfativa hacia el extracto concreto de Salvia, aceptando la hipótesis
nula.
Tabla 6. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae.
Salvia
officinalis (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1 1 6 3 02 3 4 3 03 3 3 4 04 3 4 3 05 2 2 6 06 2 3 5 07 2 2 6 08 3 2 5 09 2 4 4 0
10 2 3 5 011 4 2 3 112 3 4 2 113 1 5 4 014 4 4 2 0
15 3 2 4 1Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) Α
38 50 59 147 2 0,0549 49 49
PRUEBA CHI-CUADRADO 4,530612245VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
9.3.2 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae
con el extracto de Melissa officinalis.
El segundo bioensayo de respuesta olfatométrica, fue realizado con el extracto de
toronjil, (Tabla 7), en el que se observa que hay diferencia significativa entre las
posibles posiciones de los insectos en la cámara. Lo que además de aceptar la
hipótesis nula, significa que los áfidos presentaron atracción hacia el extracto
concreto de Toronjil.
66
Tabla 7. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae.
Melisa
officinalis (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1 6 3 1 02 5 3 2 03 3 3 4 04 5 2 3 05 4 3 2 16 3 4 3 07 5 2 3 08 4 2 2 29 6 3 1 0
10 4 2 4 011 6 2 2 012 5 2 2 113 4 3 2 114 4 2 3 115 6 3 1 0
9.3.3 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae
con el extracto de Mentha x piperita.
Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) α70 39 35 144 2 0,0548 48 48
PRUEBA CHI-CUADRADO 15,29166667VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
67
El bioensayo de respuesta olfativa con Yerbabuena, (Tabla 8), muestra que hay
diferencia significativa entre las posibles posiciones de los insectos en la cámara. Lo
que además de aceptar la hipótesis alterna, muestra que los áfidos fueron fuertemente
repelidos por el extracto concreto de Yerbabuena. Los conteos pertenecientes al
grupo de los indecisos no son representativos estadísticamente.
Tabla 8. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae
Mentha x
piperita (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1 0 10 0 02 0 10 0 03 0 9 1 04 0 10 0 05 0 10 0 06 0 7 3 07 1 5 4 08 0 4 6 09 0 8 2 010 0 7 3 011 2 6 2 012 0 10 0 013 0 6 2 214 0 5 5 015 1 7 2 0
Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) α4 114 30 148 2 0,05
49,3333333 49,3333333 49,33333333PRUEBA CHI-CUADRADO 134VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
68
9.3.4 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae
con el extracto de Eucaliptus globulus.
En el bioensayo de olfatometría con eucalipto, (Tabla 9), se observa, que hay
diferencia significativa entre las posibles posiciones de los áfidos en la cámara, dada
por que los insectos repelieron el aroma de Eucalipto. Por lo cual se acepta la
hipótesis alterna.. Los conteos pertenecientes al grupo de los indecisos no son
representativos estadísticamente, por lo cual no entran en el análisis.
Tabla 9. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae.
Eucaliptus globulus (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1 0 7 3 02 0 6 4 03 0 6 4 04 0 7 3 05 0 6 4 06 0 7 3 07 0 5 5 08 0 3 7 09 0 6 4 0
10 0 3 7 011 0 6 4 012 0 7 2 113 0 5 4 114 0 4 4 215 0 7 3 0
Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) Α0 85 61 146 2 0,05
48,6666667 48,6666667 48,66666667PRUEBA CHI-CUADRADO 78,91780822VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
69
9.3.5 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae
con el testigo.
La prueba de olfatometría en el testigo mostró, que no hay diferencia significativa
entre las posibles posiciones de los insectos en la cámara (Tabla 10). Entonces, se
acepta la hipótesis nula, de que no hay una respuesta olfativa por parte de los áfidos,
debido que no hay aroma. Los conteos pertenecientes al grupo de los indecisos no son
representativos estadísticamente, por lo cual no entran en el análisis.
Tabla 10. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Macrosiphum rosae
Testigo (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos 1 4 2 4 02 3 4 3 03 2 6 2 04 3 5 2 05 0 6 4 06 4 2 4 07 3 3 3 18 4 3 3 09 5 3 2 010 3 4 3 011 3 4 2 112 5 2 2 113 3 5 2 014 3 5 1 115 4 3 3 0
70
9.3.6 Porcentaje de respuesta de Macrosiphum rosae con cada extracto.
Al comparar los porcentajes de respuesta olfativa en áfidos, se observa que la Salvia
no generó ningún tipo de respuesta. El Toronjil generó atracción, y tanto la
Yerbabuena como el Eucalipto generaron repelencia. Los testigos no mostraron
orientación definida a causa de que no existía algún estimulo (Figura 16).
Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) α49 57 40 146 2 0,05
48,6666667 48,6666667 48,66666667PRUEBA CHI-CUADRADO 2,97260274VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
71
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
Porcentajes de Respuesta
Salviaofficinalis
Melissaofficinalis
Mentha xpiperita
Eucaliptusglobulus
Testigo
Respuesta de Macrosiphum rosae con los Extractos
Porcentaje de Respuesta con los Extractos
Extracto(A)Aire(B)Sin respuestaIndecisos
Figura 16. Porcentaje de respuesta de Macrosiphum rosae con cada extracto.
9.4 Bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides canis
9.4.1 Resultado del bioensayo con el extracto de Salvia officinalis.
En el bioensayo olfatométrico en pulgas, con salvia, (Tabla 11), se observó que no
hay diferencia significativa entre las posibles posiciones de los insectos en la cámara.
Lo cual representa que las pulgas no exhiben alguna respuesta olfativa hacia el
extracto concreto de Salvia, aceptando la hipótesis nula.
Tabla 11. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides canis.
72
Salvia officinalis (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1 4 2 4 02 3 2 5 03 2 2 5 14 7 2 1 05 3 4 3 06 3 2 4 17 3 2 3 28 4 5 1 09 3 6 1 010 3 4 2 111 5 4 1 012 2 4 4 013 1 5 4 014 3 4 3 015 3 5 2 0
9.4.2 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides
canis con el extracto de Melissa officinalis.
En el bioensayo olfatométrico con toronjil en pulgas, se observó que hay diferencia
significativa entre las posibles posiciones de los insectos en la cámara (Tabla 12), lo
que además de aceptar la hipótesis nula, muestra, que las pulgas presentaron
atracción hacia el extracto concreto de Toronjil.
Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) α49 53 43 145 2 0,05
48,3333333 48,333333 48,33333333PRUEBA CHI-CUADRADO 1,048275862VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
73
Tabla 12. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides canis.
Melissa
officinalis (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1 6 3 1 02 5 3 2 03 5 3 2 04 6 2 2 05 4 2 4 06 7 2 1 07 5 2 2 18 5 3 2 09 7 2 1 010 6 3 1 011 5 3 1 112 6 3 1 013 7 2 1 014 5 2 2 115 7 1 2 0
9.4.3 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides
canis con el extracto de Mentha x piperita.
Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) α86 36 25 147 2 0,0549 49 49
PRUEBA CHI-CUADRADO 43,14285714VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
74
En el bioensayo de respuesta olfatométrica con Yerbabuena en pulgas, se observó
que hay gran diferencia significativa entre las posibles posiciones de los insectos en la
cámara (Tabla 13), lo que además de aceptar la hipótesis alterna, mostró que las
pulgas fueron fuertemente repelidas por el extracto concreto de Yerbabuena
Tabla 13. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides canis.
Mentha x piperita (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1 3 4 3 02 3 7 0 03 2 7 1 04 2 6 1 15 1 5 3 16 2 6 2 07 2 8 0 08 1 9 0 09 3 7 0 010 2 6 1 111 2 7 1 012 1 8 1 013 3 7 0 014 1 8 1 015 2 8 0 0
Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) α30 103 14 147 2 0,0549 49 49
PRUEBA CHI-CUADRADO 91,87755102VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
75
9.4.4 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides
canis con el extracto de Eucaliptus globulus.
Para el bioensayo olfatométrico con eucalipto, en pulgas, se observó, que hay
diferencia significativa entre las posibles posiciones de las pulgas en la cámara (Tabla
14), dada por que los insectos repelieron el aroma de Eucalipto, por lo cual se aceptó
la hipótesis alterna.
Tabla 14. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides canis.
E. globulus (A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1 1 9 0 02 0 10 0 03 1 8 1 04 2 8 0 05 1 7 2 06 1 9 0 07 1 8 1 08 2 7 1 09 3 7 0 010 1 9 0 011 2 8 0 012 1 7 1 113 2 6 2 014 1 7 1 115 1 9 0 0
Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) α20 119 9 148 2 0,05
49,3333333 49,33333333 49,33333333PRUEBA CHI-CUADRADO 148,7972973VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
76
9.4.5 Resultado del bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides
canis con el testigo.
En el bioensayo del testigo, con pulgas, se observó que no hay diferencia
significativa entre las posibles posiciones de los insectos en la cámara (Tabla 15). Se
aceptó la hipótesis nula, de que no hay una respuesta olfativa por parte de las pulgas,
debido a que no hay aroma. Los conteos pertenecientes al grupo de los indecisos no
son representativos estadísticamente, por lo cual no entran en el análisis.
Tabla 15. Bioensayo de respuesta olfatométrica en Ctenocephalides canis.
Testigo Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta Indecisos1 3 3 3 12 4 2 3 13 3 3 4 04 5 3 1 15 3 3 2 26 2 1 4 37 2 3 2 38 3 4 1 29 2 4 3 110 4 3 2 111 2 2 4 212 1 1 5 313 3 3 4 014 4 3 1 215 3 3 1 3
77
9.4.6 Porcentaje de respuesta de Ctenocephalides canis con cada extracto.
Al igual que en el bioensayo con áfidos, en pulgas se observó que la Salvia no generó
ningún tipo de respuesta olfativa. El Toronjil generó atracción, y tanto la Yerbabuena
como el Eucalipto generaron repelencia en estos insectos. Tampoco en este caso, los
testigos mostraron orientación definida a causa de la falta de estimulo (Figura 17).
Atracción(A) Aire(B) Sin respuesta (n) (gl) α44 41 40 125 2 0,05
41,6666667 41,66666667 41,66666667PRUEBA CHI-CUADRADO 0,208VALOR CHI-CUADRADO 5,991476357
78
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
Porcentajes de Respuesta
Salviaofficinalis
Melissaofficinalis
Mentha xpiperita
Eucaliptusglobulus
Testigo
Respuesta de Ctenocephalides canis con los Extractos
Porcentaje de Respuesta con cada Extracto
Ext racto(A)
Aire(B)
Sin respuest a
Indecisos
Figura 17. Porcentaje de respuesta de Ctenocephalides canis con cada extracto.
9.4.7 Comparación de respuesta repelente entre Mentha x piperita y Eucaliptus
globulus, para áfidos y pulgas.
Con la finalidad de encontrar el extracto que presentó mayor acción repelente ante
áfidos y pulgas, se analizaron las proporciones de atracción de Mentha x piperita y
de Eucaliptus globulus (Tabla 16). Mediante el estadístico Z (Tabla 17), el cual
analiza proporciones bajo una distribución normal. Para realizar este procedimiento,
se utilizo un α=0.05, y debido a que la categoría de indecisos no es representativa
estadísticamente se trabajó con 2 grados de libertad. La Yerbabuena resultó ser mas
79
repelente que el Eucalipto para los áfidos, a causa de la proporción de atracción que
generó la Yerbabuena. Para la prueba estadística en pulgas, se percibe que el valor de
Z también está fuera de su valor normal, debido a la pequeña diferencia en la
proporción de atracción que genera el eucalipto. Esto significa que el eucalipto
resultó ser mas repelente que la Yerbabuena.
Tabla 16.
Proporción de atracción al
aire en ÁFIDOS
Proporción de atracción al
aire en PULGASMentha x piperita 0.77 0.70Eucaliptus globulus 0.58 0.80
Tabla 17.
ÁFIDOS PULGASPRUEBA"Z" 3,48 1,99VALOR NORMAL 1,96 1,96
9.5 Ensayos cromatográficos
9.5.1 Ensayo cromatográfico con éter de petróleo: acetato de etilo.
En la cromatografía de capa delgada comparativa, con éter de petróleo: acetato de
etilo (8:2), se obtuvieron las siguientes manchas con los siguientes valores de Rf
(Figura. 18).
Muestras: 1. Salvia officinalis, 2. Melissa officinalis, 3. Mentha, 4. Eucaliptus.
Figura 18. Cromatografía en capa delgada para los extractos concretos, con éter de
petróleo: acetato de etilo (8:2).
80
Para Salvia officinalis, se observaron 7 manchas con valores de Rf de 0.09, 0.25, 0.39,
0.52, 0.66, 0.80 y 0.98 cm.
Para Melissa officinalis, se observaron 4 manchas con valores de Rf de 0.07, 0.52,
0.66 y 0.98 cm.
Para Mentha piperita se observaron 4 manchas con valores de Rf de 0.27, 0.54, 0.66 y
0.98 cm.
Para Eucaliptus, se observaron 9 manchas con valores de Rf de 0.07, 0.19, 0.27, 0.39,
0.47, 0.54, 0.60, 0.70 y 0.98 cm.
9.5.2 Ensayo cromatográfico con Diclorometano.
En el cromatograma comparativo, de los cuatro extractos concretos con
diclorometano, se obtuvieron las siguientes manchas con los siguientes valores de Rf
(Figura. 19).
Muestras: 1. Salvia officinalis, 2. Melissa officinalis, 3. M. piperita, 4. E. globulus.
Figura 19. Cromatografía en capa delgada para los extractos concretos, con
Diclorometano.
Para Salvia officinalis, se observaron 7 manchas con valores de Rf de 0.03, 0.05, 0.13,
0.20, 0.34, 0.44 y 0.98 cm.
Para Melissa officinalis, se observaron 7 manchas con valores de Rf de 0.03, 0.05,
0.13, 0.20, 0.34, 0.82 y 0.98 cm.
Para Mentha, se observaron 7 manchas con valores de Rf de 0.03, 0.05, 0.13, 0.20,
0.34, 0.82 y 0.98 cm.
81
Para Eucaliptus, se observaron 9 manchas con valores de Rf de 0.03, 0.05, 0.13, 0.20,
0.34, 0.44, 0.67, 0.82 y 0.98 cm.
9.5.3 Ensayo cromatográfico con Diclorometano: Metanol.
Para la cromatografía de capa delgada comparativa, de los cuatro extractos concretos
con diclorometano: metanol (9.5:0.5), se obtuvieron las siguientes manchas con los
siguientes valores de Rf (Fig. 20).
Muestras: 1. Salvia officinalis, 2. Melissa officinalis, 3. Mentha, 4. Eucaliptus.
Figura 20. Cromatografía en capa delgada para los extractos concretos, con
Diclorometano: metanol (9.5:0.5).
Para Salvia officinalis, se observaron 10 manchas con valores de Rf de 0.24, 0.34,
0.38, 0.44, 0.48, 0.68, 0.72, 0.76, 0.86 y 0.96 cm.
Para Melissa officinalis, se observaron 4 manchas con valores de Rf de 0.03, 0.24,
0.34 y 0.68 cm.
Para Mentha, se observaron 4 manchas con valores de Rf de 0.34, 0.38. 0.56 y 0.76
cm.
Para Eucaliptus, se observaron 9 manchas con valores de Rf de 0.04, 0.14, 0.32, 0.38,
0.42, 0.48, 0.56, 0.66 y 0.82 cm.
9.5.4 Relaciones entre los extractos por medio del Rf con Éter de Petróleo:
Acetato de Etilo (8:2).
La principal relación que generaron los extractos, con el primer sistema de solventes
fue dada por el índice con valor de 0.98, que fue el que tuvo total afinidad con el
solvente. Debido a la polaridad que presenta este solvente, posiblemente los
compuestos hallados en este índice, que los contiene los 4 extractos, pertenezcan a
monoterpenos o diterpenos.
82
00,10,20,30,40,50,60,70,80,9
1
Alcance de la
Mancha
0.07 0.52 0.66 0.98Indices Comunes
Relación entre los Extractos por medio del Indice de Movilidad Relativa, con solventes de mayor polariadad.
Salvia officinalisMelissa officinalis
Mentha x piperitaEucaliptus globulus
Figura 21. Relaciones entre los extractos por medio del Rf con solventes de
mayor polaridad.
9.5.5 Relaciones entre los extractos por medio del Rf con Diclorometano.
Nuevamente, el índice con valor de 0.98, que fue el que tuvo total afinidad con el
solvente. Debido a la polaridad que presenta este solvente, posiblemente los
compuestos hallados en este índice, que los contienen los cuatro extractos,
pertenezcan a triterpenos o glicósidos.
83
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1
Alcance de la
mancha
0.03 0.05 0.13 0.20 0.34 0.44 0.82 0.98
Indices comunes(cm)
Relación entre los Extractos por medio del Indice de Movilidad Relativa, con solvente de menor polaridad.
Salvia officinalis
Melissa officinalis
Mentha x piperita
Eucaliptus globulus
Figura 22. Relaciones entre los extractos por medio del Rf con Diclorometano.
9.5.6 Relaciones entre los extractos por medio del Rf con Diclorometano:
Metanol (9.5:0.5).
En este sistema de solventes, el índice con valor de 0.76, que fue el que tuvo
afinidad. Debido a la polaridad que presenta este solvente, posiblemente los
compuestos hallados en este índice, de los extractos de Mentha x piperita y
Eucaliptus globulus, pertenezcan a sustancias polares.
84
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
Alcance de la
Mancha
0.24 0.34 0.38 0.48 0.56 0.68 0.76
Indices comunes(cm)
Relación entre los Extractos por meio del Indice de Moviliadad relativa, con solventes de mayor y menor polaridad
Salvia officinalisMelissa officinalisMentha x piperitaEucaliptus globulus
Figura 23. Relaciones entre los extractos por medio del Rf con solventes de
mayor y menor polaridad.
9.5.7 Resultados del cromatograma bidimensional para Salvia officinalis.
85
Frente del Solvente
( 7 )
( 6 ) ( 5 )
Fre
nte
del
Sol
vent
e
( 4 )
( 3 ) ( 2 ) ( 1 ) ( )
C
H2 C
l 2
EP – ACOET 8 : 2
86
Figura 24. Cromatografía bidimensional de Salvia officinalis.
9.5.8 Resultados del cromatograma bidimensional para Melissa officinalis.
MANCHA EP – ACOETRf 1
CH2 Cl2
Rf 2
COLOR TIPO DE COMPUESTO
1 0.21 0.24 C Diterpeno2 0.24 0.41 C Diterpeno3 0.33 0.35 C Diterpeno4 0.43 0.37 R Diterpeno5 0.53 0.38 C Diterpeno6 0.62 0.4 A Flavonoide7 0.69 0.5 Ca Diterpeno
Frente del Solvente ( 6 )
( 5 )
Fre
nte
del
Sol
vent
e
( 4 ) ( 3 ) ( 2 ) ( 1 )
( )
C
H2 C
l 2
EP – ACOET 8 : 2
87
Figura 25. Cromatografía bidimensional de Melissa officinalis.
9.5.9 Resultados del cromatograma bidimensional para Mentha x piperita.
MANCHA EP – ACOETRf 1
CH2 Cl2
Rf 2
COLOR TIPO DE COMPUESTO
1 0.12 0.14 C Diterpeno2 0.27 0.26 Ca Diterpeno3 0.33 0.35 C Diterpeno4 0.5 0.44 C Diterpeno5 0.6 0.53 C Diterpeno6 0.9 0.53 Ca Diterpeno
88
Frente del Solvente ( 6 ) ( 7 ) ( 5 )
Fre
nte
del
Sol
vent
e
( 4 )
( 3 ) ( 2 ) ( 1 ) ( )
C
H2 C
l 2
EP – ACOET 8 : 2
89
Figura 26. Cromatografía bidimensional para Mentha x piperita.
9.5.10 Resultados del cromatograma bidimensional para Eucaliptus globulus.
MANCHA EP – ACOETRf 1
CH2 Cl2
Rf 2
COLOR TIPO DE COMPUESTO
1 0.07 0.17 C Diterpeno2 0.10 0.49 C Diterpeno3 0.21 0.24 C Diterpeno4 0.5 0.44 Ca Diterpeno5 0.62 0.65 A Flavonoide6 0.9 0.72 Cr Diterpeno7 0.78 0.92 C Diterpeno
Frente del Solvente
( 7 )
( 6 ) ( 5 ) ( 4 )
Fre
nte
del
Sol
vent
e
( 3 )
( 2 )
( 1 )
( )
C
H2 C
l 2
EP – ACOET 8 : 2
90
Figura 27. Cromatografía para Eucaliptus globulus.
9.5.11 Relaciones entre los extractos por cromatografías bidimensionales.
Después de haber realizado las cromatografías bidimensionales, para hacer una mejor
separación entre los compuestos, se buscaron relaciones entre los 4 extractos
concretos, por medio del índice de movilidad. El extracto de Salvia officinalis,
presento una mancha en común con el extracto Mentha x piperita (Tabla 18); El
extracto de Salvia officinalis, presento una mancha en común con el extracto Melissa
officinalis (Tabla 19); El extracto de Melissa officinalis, presento una mancha en
común con el extracto Mentha x piperita (Tabla 20).
Tabla 18.
Extracto Salvia officinalis Mentha x piperitaNúmero de mancha 1 3Número de Rf 0.21 – 0.24 0.21 – 0.24
Tabla 19.
MANCHA EP – ACOETRf 1
CH2 Cl2
Rf 2
COLOR TIPO DE COMPUESTO
1 0.13 0.08 R Diterpeno2 0.31 0.17 C Diterpeno3 0.47 0.22 Cr Diterpeno4 0.65 0.23 C Diterpeno5 0.74 0.32 V Triterpeno6 0.77 0.35 C Diterpeno7 0.95 0.39 A Flavonoide
91
Extracto Salvia officinalis Melissa officinalisNúmero de mancha 3 3Número de Rf 0.33 – 0.35 0.33 – 0.35
Tabla 20.
Extracto Melissa officinalis Mentha x piperitaNúmero de mancha 4 4Número de Rf 0.5 – 0.44 0.5 – 0.44
10. Discusión.
De las 4 plantas estudiadas, el extracto etanólico de Salvia officinalis, fue el que
mayor actividad tóxica exhibió, posiblemente a causa de que el principal componente
del aceite esencial de esta planta es la tuyona; una lactona sesquiterpénica, que es
ampliamente reconocida por presentar actividad tóxica en insectos (Städler 1992).
Los metabolitos secundarios como el α pineno, el β pineno, el limoneno, el mentol, la
tuyona y el eucaliptol, son sustancias que actúan como neurotóxicos en los ganglios
basales del sistema nervioso central en mamíferos y del sistema nervioso periférico
en insectos, artrópodos y crustáceos; por medio de la prolongación de la
permeabilidad al sodio durante la fase de recuperación del potencial de acción de las
neuronas, lo que produce descargas repetitivas (Gershenzon & Croteau 1991).
Además algunos de estos metabolitos afectan la permeabilidad de la membrana al
cloruro, actuando sobre los receptores tipo A del Ácido Gamma Amino Butírico
(http://www.geocities.com/raaaperu/a3.html#piret), que es el mayor inhibidor de
neurotransmisores en el Sistema Nervioso Central en mamíferos y del sistema
nervioso periférico en insectos, artrópodos y crustáceos (Nicholls et al. 1992).
92
En el caso del extracto etanólico de Melissa officinalis, no presentó ninguna actividad
tóxica en contra de Artemia salina, a pesar de que dentro de los componentes de su
aceite esencial se encuentran el α pineno, el β pineno y el limoneno, que son
importantes agentes de toxicidad y repelencia en insectos (Taiz & Zeiger 1998). Estos
resultados llevan a suponer que posiblemente estos metabolitos secundarios no se
encontraban en concentraciones suficientemente altas como para causar letalidad en
las artemias. Por otra parte, el extracto de esta planta fue el único que generó
atracción tanto en áfidos como en pulgas, comportamiento que se produjo
posiblemente, por la presencia, en su aceite esencial, de un metabolito secundario,
que estimula a los insectos, atrayéndolos: luteolin 7 glucósido (Städler 1992).
El extracto de Mentha x piperita, mostró actividad biológica de tipo tóxica en contra
de Artemia salina, posiblemente debido a que su aceite esencial, esta constituido
principalmente por mentol, un monoterpeno reconocido como importante agente
tóxico en insectos (Taiz & Zeiger 1998). Además de presentar este tipo de actividad,
también expresó repelencia en áfidos y en pulgas, posiblemente, debido a la actividad
de una cetona terpénica: la pulegona, ampliamente conocida por producir repelencia
en insectos (Gershenzon & Croteau 1991).
La acción tóxica que evidenció, el extracto etanólico de Eucaliptus globulus, se
produjo posiblemente, debido a que los principales componentes de su extracto son el
eucaliptol y el mentol, monoterpenos de acción tóxica en insectos (Taiz & Zeiger
1998, Gershenzon & Croteau 1991), además, la actividad biológica de tipo repelente
en contra de pulgas y de áfidos, probablemente se debió a la acción del cineol, otro
monoterpeno que se encuentra en el aceite esencial de la planta y que presenta
repelencia en insectos (Gershenzon & Croteau 1991).
Los reportes de Meyer et al. (1982), en trabajos con extractos etanólicos de cuatro
plantas de la familia Euphorbiaceae mostraron los siguientes porcentajes de
mortalidad (%M): en Eremocarpus setigerus (Hook) Benth., existió 100 %M con
93
1000 μg/ml, 78 %M con 100μg/ml y 32 %M con 10μg/ml; en la especie Aleurites
fordii Hemsl., existió 100 %M con 1000 μg/ml, 10 %M con 100 μg/ml y 0 %M con
10 μg/ml; para Euphorbia cyparissias L., existió 72 %M con 1000 μg/ml, 24 %M
con 100 μg/ml y 0 %M con 10 μg/ml; en Trewia nudifloria, existió 56 %M con
1000 μg/ml, 2 %M con 100 μg/ml y 0 %M con 10 μg/ml. Por otra parte en el trabajo
de Arango (1994) en la familia Fabaceae, específicamente en la especie Dalea
caerulea los porcentajes de mortalidad en artemia con el extracto etanólico de la
planta fueron los siguientes: existió 100 %M con 1000 μg/ml, 90 %M con 100 μg/ml
y 85 %M con 10 μg/ml. Al comparar estos resultados con los del presente trabajo
encontramos que los extractos de Salvia officinalis y de Mentha x piperita, que fueron
los que mayor toxicidad presentaron de las cuatro especies estudiadas, mostraron
porcentajes de mortalidad relativamente altos (100 %M con 1000 μg/ml, 31 %M con
100 μg/ml y 15 %M con 10 μg/ml para Salvia officinalis, y 100 %M con 1000 μg/ml,
31 %M con 100 μg/ml y 0 %M con 10 μg/ml para Mentha x piperita), si los
comparamos con el trabajo de Meyer et al., sin embargo si los comparamos con el
trabajo de Arango, los resultados del bioensayo de toxicidad son bajos ya que en la
especie Dalea caerulea existió 85 %M con 10 μg/ml, posiblemente debido a la
presencia de flavonas tóxicas como 7-O-metilglabranin, 5,7-dihidroxi-6-metil-8-
prenilflavanona y 5,7-dihidroxi-6-prenilflavanona.
11. Conclusiones.
El extracto concreto etanólico de Salvia officinalis, fue el que mayor acción letal
presentó en contra Artemia salina.
El aroma del extracto concreto etanólico de Mentha x piperita, fue el que presentó
mayor acción repelente, en contra de Macrosiphum rosae.
94
El aroma del extracto concreto etanólico de Eucaliptus globulus, fue el que presentó
mayor acción repelente, en contra de Ctenocephalides canis.
El aroma del extracto concreto etanólico de Melissa officinalis, mostró ser atractivo
para Macrosiphum rosa y para Ctenocephalides canis.
12. Recomendaciones.
Se sugiere el estudio químico de los compuestos o combinaciones de compuestos
causantes de las actividades biológicas reportadas en este trabajo, para la
optimización de estos, y su uso en el control de plagas.
12. Referencias.
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13. Anexos.
13.1 Anexo 1.
Componentes químicos aislados del toronjil.
TORONJIL - Melissa officinalis L. (Lamiaceae)
Fitoquímicos Parte de la Planta(+)-CITRONELLAL RETOÑO1,2-HUMULENE-EPOXIDE RETOÑO1-OCTEN-3-OL RETOÑO10-(ALPHA)-CADINOL PLANTA2-PHENYLETHANOL PLANTA2Z,4E,6E-ALLOFARNESENE RETOÑO3-OCTANOL RETOÑO3-OCTANONE RETOÑO3E,6E-ALPHA-FARNESENE RETOÑO6-METHYL-5-HEPTEN-2-ONE RETOÑOALPHA-CADINENE RETOÑOALPHA-CADINOL RETOÑOALPHA-COPAENE RETOÑOALPHA-CUBEBENE RETOÑO
102
ALPHA-HUMULENE RETOÑOALPHA-MUUROLENE RETOÑOBENZALDEHYDE PLANTABETA-BOURBONENE RETOÑOBETA-CARYOPHYLLENE RETOÑOBETA-CARYOPHYLLENE-EPOXIDE-I RETOÑOBETA-CARYOPHYLLENE-EPOXIDE-II RETOÑOBETA-CUBEBENE RETOÑOBETA-ELEMENE RETOÑOBETA-GUAIENE RETOÑOBETA-SITOSTEROL RETOÑOBICYCLOGERMACRENE RETOÑOCADINA-1,4-DIENE RETOÑOCAFFEIC-ACID PLANTACAMPESTEROL PLANTACARYOPHYLLENE-OXIDE PLANTACATECHINS PLANTACHLOROGENIC-ACID PLANTACIS-3-HEXEN-1-OL RETOÑOCIS-OCIMENE RETOÑOCIS-ROSENOXIDE RETOÑOCITRAL-A RETOÑOCITRAL-B RETOÑOCITRONELLAL RETOÑOCITRONELLIC-ACID RETOÑOCITRONELLOL RETOÑOCOPAENE PLANTADELTA-CADINENE RETOÑODELTA-CADINOL RETOÑODELTA-OCTALACTONE PLANTAE-BETA-FANESENE PLANTAEUGENYL-ACETATE RETOÑOFURFURAL RETOÑOGAMMA-CADINENE RETOÑOGERANIAL RETOÑOGERANIC-ACID RETOÑOGERANIOL RETOÑOGERANYL-ACETATE RETOÑOGERMACRA-1-(10)E,5E-DIEN-4-OL HOJASGERMACRENE-D RETOÑOHEXANOIC-ACID PLANTAISOGERANIAL RETOÑOISOPULEGOL RETOÑO
103
LIMONENE RETOÑOLINALOL RETOÑOLUTEOLIN-7-GLUCOSIDE RETOÑOMETHYL-CITRONELLATE RETOÑOMETHYL-HEPTENONE RETOÑOMETNYL-GERANIATE RETOÑOMYRCENE RETOÑON-DOCOSANE PLANTAN-EICOSANE PLANTAN-HENEICOSANE PLANTAN-HEPTADECANE PLANTAN-HEXADECANE PLANTAN-NONADECANE PLANTAN-OCTADECANE PLANTAN-PENTADECANE PLANTAN-TETRADECANE PLANTAN-TRIDECANE PLANTANERAL RETOÑONEROL RETOÑOOCTANOIC-ACID PLANTAOCTYL-BENZOATE RETOÑOOLEANOLIC-ACID RETOÑOP-CYMOL RETOÑOPOMOLIC-ACID RETOÑOPROTOCATECHUIC-ACID PLANTARHAMNAZIN PLANTAROSMARINIC-ACID HOJASTACHYOSE PLANTASUCCINIC-ACID PLANTAT-CADINOL RETOÑOT-MUUROLOL RETOÑOTHYMOL PLANTATRANS-OCIMENE PLANTATRANS-ROSENOXIDE RETOÑOURSOLIC-ACID PLANTA
104
13.2 Anexo 2.
Componentes químicos aislados de la Yerbabuena.
YERBABUENA- - Mentha x piperita (Lamiaceae)(+)-ALPHA-PINENE
HOJAS
(+)-ISOMINTLACTONE
HOJAS
(+)-LIMONENE
HOJAS
(+)-PULEGONE
HOJAS
1,3-DIMETHYL-CYCLOHEXANONE
ACEITE ESENCIAL
1,4-DIMETHOXY-BENZENE
HOJAS
1,8-CINEOLE HOJAS1-MENTHYL-BETA-D-GLUCOSIDE PLANTA2,6-DIMETHYL-PYRIDINE HOJAS2-BUTYL-ISOVALERIC-ACID-METHYL-ESTER HOJAS2-ETHYL-HEX-AN-1-OL
HOJAS
2-HYDROXY-BENZALDEHYDE HOJAS2-METHYL-BUT-2-EN-1-AL HOJAS2-METHYL-BUTYRIC-ACID-METHYL-ESTER
HOJAS
105
2-METHYL-CINNAMALDEHYDE
HOJAS
2-PHENYLETHANOL
HOJAS
2-PHENYLETHANOL-ACETATE
HOJAS
2-PHENYLETHANOL-BUTYRATE
HOJAS
2-PHENYLETHANOL-ISOBUTYRATE
HOJAS
2-PHENYLETHANOL-N-VALERATE
HOJAS
2-PROPYL-5-PHENYL-PYRIDINE
HOJAS
3(5',5'-DIMETHYL-TETRAHYDROFURAN-2'-YL)-BUT-CIS-2-EN-1-OL
ACEITE ESENCIAL
3,4-DIMETHOXY-BENZALDEHYDE HOJAS
3,4-DIMETHOXY-SUDACHIUTIN
HOJAS
3,4-DIMETHYL-PSEUDACHITIN
HOJAS
3,4-DIMETHYL-SUDACHITIN HOJAS
3,6-DIMETHYL-6-OXO-OCTANOIC-ACID HOJAS3,6-DIMETHYL-7-OXO-OCTANOIC-ACID
HOJAS
3,6-DIMETHYL-7-OXO-OCTANOIC-ACID-ETHYL-ESTER
HOJAS
3-METHYL-CYCLOHEXANONE
HOJAS
3-PHENYL-4-PROPYL-PYRIDINE
HOJAS
3-PHENYL-PYRIDINE HOJAS4-HYDROXY-4-METHYL-CYCLOHEX-2-EN-1-ONE
HOJAS
4-METHYL-2-PHENYL-PENT-2-EN-1-AL HOJAS
5,6-DIHYDROXY-3',4',7,8-TETRAMETHOXY-FLAVONE
HOJAS
5-ETHYL-2-METHYL-PYRIDINE
HOJAS
5-HYDROXY-3',4',6,7-TETRAMETHOXY-FLAVONE
HOJAS
106
5-METHYL-2-(2'-OXO-3'-BUTYL)-PHENOL HOJAS5-METHYL-2-(3'-OXO-3'-PENTYL)-PHENOL
HOJAS
5-METHYL-2-PHENYL-HEX-2-EN-1-AL
HOJAS
5-METHYL-HEPTAN-3-ONE HOJAS
5-O-DEMETHYL-NOBILETIN
HOJAS
6-METHYL-HEPT-5-EN-2-ONE
HOJAS
6-METHYL-JASMONATE
HOJAS
ACETALDEHYDE
PLANTA
ACETIC-ACID
PLANTA
ALPHA-AMORPHENE
ACEITE ESENCIAL
ALPHA-CADINENE
ACEITE ESENCIAL
ALPHA-CAROTENE
PLANTA
ALPHA-COPAENE
ACEITE ESENCIAL
ALPHA-GURJUNENE
ACEITE ESENCIAL
ALPHA-PINENE
HOJAS
ALPHA-TERPINENE
PLANTA
ALPHA-TERPINEOL
ACEITE ESENCIAL
ALPHA-THUJONE
ACEITE ESENCIAL
ALPHA-TOCOPHEROL PLANTA
AMYL-ALCOHOL
PLANTA
AMYL-VALERATE
HOJAS
ANETHOLE HOJAS
107
AZULENE
PLANTA
BENZOIC-ACID
HOJAS
BENZYL-ALCOHOL
HOJAS
BENZYL-CYANIDE
HOJAS
BETA-BETULENOL HOJAS
BETA-CAROTENE
HOJAS
BETA-CARYOPHYLLENE HOJAS
BETA-COPAENE ACEITE ESENCIAL
BETA-IONONE
HOJAS
BETA-PINENE
HOJAS
BETA-THUJONE
ACEITE ESENCIAL
BETA-YLANGENE ACEITE ESENCIAL
BETAINE HOJAS
BICYCLOELEMENE PLANTA
BISABOLENE ACEITE ESENCIAL
BOVOLIDE
HOJAS
BUTAN-2-ONE
ACEITE ESENCIAL
CADINENE
ACEITE ESENCIAL
CAFFEIC-ACID
RETOÑO
CAMPHENE
HOJAS
CARVACROL
ACEITE ESENCIAL
CARVEOL ACEITE ESENCIAL
108
CARVEOL-ACETATE
ACEITE ESENCIAL
CARVONE
HOJAS
CARYOPHYLLENE-OXIDE
ACEITE ESENCIAL
CEDRENE
ACEITE ESENCIAL
CEDROL ACEITE ESENCIAL
CHLOROGENIC-ACID RETOÑO
CHOLINE
PLANTA
CINEOLE
HOJAS
CINEROL
ACEITE ESENCIAL
CINNAMIC-ACID-METHYL-ESTER
ACEITE ESENCIAL
CIS-PIPERITOL
HOJAS
CIS-ROSE-OXIDE
PLANTA
CIS-SABINOL
HOJAS
CITRONELLIC-ACID
HOJAS
CITRONELLOL
ACEITE ESENCIAL
COSMOSIIN
RETOÑO
COUMARIN
HOJAS
CRYPTONE
HOJAS
CUMIN-ALCOHOL HOJAS
CYCLOPENTANOL
HOJAS
DELTA-DODECALACTONE HOJAS
DELTA-JASMINLACTONE HOJAS
109
DIHYDRO-LIMONENE-10-OL
ACEITE ESENCIAL
DIHYDRO-TERPINEOL-ACETATE
HOJAS
DIHYDROCARVONE
HOJAS
DIMETHYL-SULFOXIDE
ACEITE ESENCIAL
DIOSPHENOL
HOJAS
DIPENTENE
ACEITE ESENCIAL
ERIODICTYOL-7-O-RUTINOSIDE
HOJAS
EUGENOL
ACEITE ESENCIAL
EUPATORIN
ACEITE ESENCIAL
FENCHENE
ACEITE ESENCIAL
GAMMA-DECALACTONE
HOJAS
GAMMA-JASMINLACTONE
HOJAS
GAMMA-TERPINENE
HOJAS
GAMMA-TOCOPHEROL
PLANTA
GARDENIN-B
HOJAS
GARDENIN-D
HOJAS
GERANIAL
HOJAS
GERANIC-ACID HOJAS
GERANIOL-ACETATE
HOJAS
GERMACRENE-D
ACEITE ESENCIAL
GUAIACOL
HOJAS
HEPTAN-2-ONE HOJAS
110
HEPTAN-3-OL HOJAS
HESPERETIN
HOJAS
HEX-TRANS-2-ENOIC-ACID
HOJAS
HYDROXY-BOVOLIDE HOJAS
HYMENOXIN
HOJAS
ISOAMYL-PHENYLACETATE
HOJAS
ISOBUTYRIC-ACID
HOJAS
ISOCHLOROGENIC-ACID
RETOÑO
ISOMENTHOL
HOJAS
ISOMENTHOL-ACETATE
HOJAS
ISOMENTHONE HOJAS
ISOMENTHYL-ACETATE
PLANTA
ISOPULEGOL-ACETATE
HOJAS
ISORHOIFOLIN
HOJAS
ISOVALERALDEHYDE
PLANTA
ISOVALERIC-ACID
PLANTA
ISOVALERIC-ACID-N-OCTYL-ESTER
HOJAS
JASMONE
ACEITE ESENCIAL
LAVANDULOL
HOJAS
LEDOL
PLANTA
LIMONENE HOJAS
LIMONENE-10-OL-ACETATE ACEITE ESENCIAL
111
LINALOL HOJAS
LITHOSPERMIC-ACID
RETOÑO
LUTEOLIN HOJAS
LUTEOLIN-7-O-RUTINOSIDE
HOJAS
MENTHACUBANONE
RETOÑO
MENTHOCUBANONE RETOÑO
MENTHOFURAN
RETOÑO
MENTHOKUBANONE
RETOÑO
MENTHOL
HOJAS
MENTHONE
PLANTA
MENTHOSIDE
HOJAS
MENTHYL-ACETATE
HOJAS
MENTHYL-ISOVALERATE HOJAS
MENTHYL-VALERATE
HOJAS
MINTLACTONE
HOJAS
MYRCENE
HOJAS
MYRTENAL
HOJAS
MYRTENOL
HOJAS
NEO-ISOPULEGOL
ACEITE ESENCIAL
NEOISOMENTHOL-ACETATE
ACEITE ESENCIAL
NEOMENTHOL
HOJAS
NEOMENTHONE HOJAS
112
NEOMENTHYL-ACETATE
HOJAS
NERAL
HOJAS
NEROL
HOJAS
NEROLIDOL
HOJAS
NEVADENSIN
HOJAS
NIACIN
HOJAS
NONAN-1-OL
HOJAS
O-CRESOL
HOJAS
OCIMENE
ACEITE ESENCIAL
OCT-TRANS-2-EN-OL
HOJAS
OCTAN-3-OL
HOJAS
P-COUMARIC-ACID
RETOÑO
P-CRESOL
HOJAS
P-CYMENE
HOJAS
P-CYMOL
HOJAS
P-MENTH-TRANS-2-EN-1-OL
ACEITE ESENCIAL
P-MENTHANE
ACEITE ESENCIAL
P-METHOXY-ACETOPHENONE
HOJAS
PECTIN RETOÑO
PENT-CIS-2-EN-1-OL
HOJAS
PENTAL-1-OL
ACEITE ESENCIAL
PERILLYL-ALCOHOL HOJAS
113
PHELLANDRENE
HOJAS
PHENYLACETIC-ACID
HOJAS
PINENE
HOJAS
PIPERITENONE
ACEITE ESENCIAL
PIPERITONE
HOJAS
PIPERITONE-OXIDE
PLANTA
PULEGONE
HOJAS
PYRIDINE
HOJAS
RIBOFLAVIN
HOJAS
ROSMARINIC-ACID
RETOÑO
RUTIN
PLANTA
SABINENE
ACEITE ESENCIAL
SABINENE-ACETATE
PLANTA
SABINENE-HYDRATE
ACEITE ESENCIAL
SALVIGENIN
PLANTA
SIDERITOFLAVONE
HOJAS
TERPINEN-4-OL
ACEITE ESENCIAL
TERPINOLENE
HOJAS
THIAMIN ACEITE ESENCIAL
THYMOL
HOJAS
TRANS-BETA-FARNESENE
HOJAS
TRANS-PIPERITOL ACEITE ESENCIAL
114
TRANS-ROSE-OXIDE
ACEITE ESENCIAL
VANILLIN
HOJAS
VIRIDIFLOROL PLANTA
XANTHOMICROL
HOJAS
13.3 Anexo 3.
Compuestos químicos aislados del eucalipto.
EUCALYPTO - Eucalyptus globulus LABILL. (Myrtaceae)
Fitoquímicos Parte de la Planta1,8-CINEOLE HOJAS11,12-DEHYDROURSOLACTONE-ACETATE HOJAS3-ISOPROPYLIDEN-1-ACETYL-5-CYCLOPENTENE HOJAS3-OMETHYLELLAGIC-ACID-4'RHAMNOSIDE CORTEZAALLO-AROMADENDRINE PLANTAALPHA-AROMADENDRENE HOJASALPHA-EUDESMOL PLANTAALPHA-PHELLANDRENE HOJASALPHA-PINENE HOJASAROMADENDRENE HOJASBETA-DIKETONE HOJASBETA-EUDESMOL PLANTABETA-PINENE HOJASBUTYRALDEHYDE HOJASCAFFEIC-ACID HOJASCAMPHENE HOJASCAPROALDEHYDE HOJASCARVONE HOJASCHLOROGENIC-ACID CORTEZACITRIODOROL PLANTACUMINALDEHYDE HOJASD-CATECHOL CORTEZAD-LINALOL HOJASD-MYRTENAL HOJASD-MYRTENOL HOJASD-VERBENONE HOJASELLAGIC-ACID HOJAS
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EPIGLOBULOL HOJASETANOL HOJASEUCALYPTIN HOJASEUGLOBAL-IA1 PLANTAEUGLOBAL-IB PLANTAEUGLOBAL-IC PLANTAEUGLOBAL-IIA PLANTAEUGLOBAL-IIB PLANTAEUGLOBAL-IIC PLANTAEUGLOBAL-III HOJASEUGLOBAL-IVB PLANTAEUGLOBAL-VII PLANTAEUGLOBOL-IA2 PLANTAFERULIC-ACID HOJASGALLIC-ACID HOJASGAMMA-TERPINENE HOJASGENTISIC-ACID HOJASGLOBULOL HOJASHYPEROSIDE HOJASI-TERPINEOL HOJASISOAMYL-ALCOHOL HOJASLEEDLO HOJASP-CYMENE HOJASPARAFFIN HOJASPINENE HOJASPINOCARVEOL HOJASPINOCARVONE HOJASPROTOCATECHUIC-ACID HOJASQUERCETIN HOJASQUERCETOL PLANTAQUERCETOL-3-GLUCOSIDE PLANTAQUERCETRIN HOJASQUERCITRIN PLANTARUTIN HOJASTRANS-PINOCARVEOL HOJASTRITRIACONTANE-16,18-DIONE PLANTAVALERALDEHYDE HOJASVIRIDIFLOROL HOJAS
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