Detección y caracterización de Detección y caracterización de Escherichia coliEscherichia coli productor de toxina Shiga en alimentosproductor de toxina Shiga en alimentos

Epidemiología molecular de las infecciones por STECEpidemiología molecular de las infecciones por STEC

Bioq. Isabel ChinenServicio Fisiopatogenia, Departamento Bacteriología

Instituto Nacional de Enfermedades InfecciosasANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”

DEFINICION DE EHEC / STECDEFINICION DE EHEC / STEC

Cepas de E. coli productor de toxina Shiga (STEC) que producen enfermedades severas en el hombre pertenecen a la categoría de E. coli enterohemorrágico (EHEC)

EHEC es un subgrupo dentro de los STEC Factores de virulencia en cepas EHEC:

• Toxina Shiga (Stx1, Stx2, variantes de Stx1 y Stx2)• Factores de adherencia: Isla de patogenicidad (LEE)• Enterohemolisina (EHEC-Hly)

Humanos: > 150 serotipos; 50 serotipos asociados a SUH Animales, alimentos, otros reservorios: > 200 serotipos

MANIFESTACIONES DE LA INFECCION POR MANIFESTACIONES DE LA INFECCION POR Escherichia coliEscherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA 

Portación asintomática Diarrea acuosa Diarrea sanguinolenta Colitis hemorrágica Síndrome Urémico Hemolítico

Aunque la diarrea se autolimita en 1 semana, 5 – 10% de los pacientes evolucionan a SUH

SINDROME UREMICO HEMOLITICOSINDROME UREMICO HEMOLITICO

Anemia hemolítica microangiopática

Insuficiencia renal aguda

Trombocitopenia

Tasa de letalidad del 2 al 5%

Tipos de EstrategiasTipos de Estrategias Notificación obligatoria, inmediata e individualizada en Planilla C2 al

SNVS. Abril 2000 - Resolución N°346/00

Vigilancia Centinela: Unidades Centinela con SUH como EVENTO TRAZADOR DE ETA:

• 24 UC - 16 Jurisdicciones. Ciudad de Buenos Aires (3), Córdoba, Corrientes, Chaco, Chubut, Entre Ríos, La Pampa, Mendoza, Neuquén, Pcia. de Buenos Aires (5), Río Negro, Salta, San Juan, Santa Fé (3), Tucumán, S. del Estero

Sistema de Vigilancia de Laboratorios (SIVILA)

Vigilancia molecular (PulseNet de América Latina y El Caribe)

Programa de Enfermedades Emergentes – OPS- Países del Conosur y Centroamérica.

VIGILANCIA DE SUH Y DIARREAS ASOCIADAS A STECVIGILANCIA DE SUH Y DIARREAS ASOCIADAS A STEC

7.6

25.7

19.2

14.0

38.0

24.7

38.0

0-5>5-10

>10-20

34.4

9.6

4.1

31.6

22.2

9.7

0.910.2

12.8

3.4

7.6

105.2

2.5

5.0

SUH - ARGENTINA 2007SUH - ARGENTINA 2007

Incidencia

0

20

40

60

80

100

120

Janu

ary

Febru

ary

March

April

MayJu

ne July

Augus

t

Septem

ber

Octobe

r

Novembe

r

Decembe

r

15/100,000 niños <5 años

>20

0

20

40

60

80

100

120

140

160

0-12months

13-24months

25-36months

37-48months

49-60months

≥ 61months

No.

of

No.

of

Cas

esC

ases

No.

of

No.

of

Cas

esC

ases

Male

Female

SUH EN ARGENTINASUH EN ARGENTINA

Alrededor de 300 a 400 casos nuevos por añoTasa de notificación: 15 / 100.000 niños < 5 años, mas de 10.000 desde 1965

Pródromos: Diarrea 90%, sanguinolenta 75%

1ª causa pediátrica de IRA y 2ª causa de IRC

Responsable del 20% de transplantes renales

Evidencia de infección por STEC en el 40% de casos de SUH- O157:H7 el serotipo prevalente- Shigella dysenteriae Tipo 1 no aislada

STEC O157:H7STEC O157:H7

El 11 de mayo de 2004, se incluyó en el Código Alimentario Argentino el art. 156 tris y se modificaron los art. 255 y 302.

Especificaciones microbiológicas Productos preparados a base de carne picada una vez cocidos:ausencia de E. coli/g y ausencia de E. coli O157:H7/NM en 5 muestras de 65 g cada una

Carne picada fresca y chacinados frescos: E. coli máximo 5 x 102 UFC/g, y ausencia de E. coli O157:H7/NM en 5 muestras de 65g cada una.

Metodología recomendada es la validada por USDA/FSIS.

CODIGO ALIMENTARIO ARGENTINOCODIGO ALIMENTARIO ARGENTINO

Características de E. coli O157:H7

Posee la mayoría de las características bioquímicas de la especie, con las siguientes diferencias:

No fermenta el Sorbitol o lo hace lentamente No posee actividad de b-glucuronidasa Temperatura óptima de crecimiento: 30-42ºC Desarrolla pobremente a 44-45ºC No desarrolla a temperaturas superiores a 45ºC No desarrolla a temperaturas de –10ºC pero

sobrevive en productos congelados (-20ºC) sin cambio en el número total de microorganismos por períodos prolongados

Es resistente a los cambios de pH (por Ej. Durante la fermentación de embutidos

CRITERIOS PARA LA DETECCIÓN DE STEC O157

MORFOLOGIA DE LAS COLONIAS EN MEDIO SELECTIVO

DETECCION DEL SEROGRUPO O157

CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS DISTINTIVAS

DETECCION DE LA ENTEROHEMOLISINA

DETECCION DE GENES (DETECCION DE GENES (stxstx))

PRODUCCION DE TOXINA SHIGA (Stx)PRODUCCION DE TOXINA SHIGA (Stx)

TEMPERATURAS DE CRECIMIENTO

BAJO NUMERO DE UFC EN ALIMENTOS

BAJA DOSIS INFECTIVA (< 100 UFC/G)

DETECCION DE STEC O157 EN ALIMENTOSCONSIDERACIONES GENERALES

Detección, aislamiento e identificación de Escherichia coli O157:H7 de productos cárnicos

USDA / FSIS (2008) ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO

AISLAMIENTO TAMIZAJE

- AISLAMIENTOMEDIOS SELECTIVOS SEPARACION INMUNOMAGNETICA

- SEROAGRUPAMIENTO

Positivopotencial

Positivopresuntivo

( - ) ( + )

CONFIRMACIÓNPRODUCCION DE Stx / DETECCIÓN DE GENES stxDETECCIÓN DE fliCH7IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA Positivo

confirmado

ETAPA DE ENRIQUECIMIENTO

CONDICIONES DE INCUBACION

- TEMPERATURA Y TIEMPO 42 ± 0.1ºC / 15-22 h- SIN AGITACION

MEDIOS DE CULTIVO (suplemento antibiótico)- ECm + novobiocina- CTS + acriflavina- CTSm + casaminoácidos + novobiocina - CTS / AP + vancomicina, cefsulodina y cefixima

TECNICA DE TAMIZAJE DE TAMIZAJE O157 O157

De acuerdo a USDA/FSIS deben cumplimentar:

Servicio Fisiopatogenia (LNR) INEI-ANLIS “Dr. C.G. Malbrán”

Sensibilidad: 98% Falsos negativos: 2% Especificidad: 90% Falsos positivos: 10% Eficiencia: 94%

Detección de STEC O157Detección de STEC O157Tamizaje. Métodos RápidosTamizaje. Métodos Rápidos

Premier - MeridianTECRA

Inmunostat Card - MeridianREVEAL - NeogenRapidCheck O157- SDI Singlepath GLISA - MerckLateral Flow System - Dupont

Vidas ICE/ACE - Bio MérieuxPCR Real TimeNucliSens - Bio Mérieux

ELISA

Test de inmunocromatografía

Métodos automatizados

Detección, aislamiento e identificación de Escherichia coli O157:H7 de productos cárnicos

USDA / FSIS (2008) ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO

AISLAMIENTO TAMIZAJE

- AISLAMIENTOMEDIOS SELECTIVOS SEPARACION INMUNOMAGNETICA

- SEROAGRUPAMIENTO

Positivopotencial

Positivopresuntivo

( - ) ( + )

CONFIRMACIÓNPRODUCCION DE Stx / DETECCIÓN DE GENES stxDETECCIÓN DE fliCH7IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA Positivo

confirmado

AISLAMIENTO DE STEC AISLAMIENTO DE STEC

Procedimiento de diagnóstico definitivo

Métodos de cultivoCultivo directo en medios selectivosCultivo con enriquecimiento previo

Métodos de inmunoconcentraciónSeparación inmunomagnética (Dynal, Neogen)Inmunocaptura (TECRA)

miniVIDAS: método automatizado

Selectivos y/o diferenciales SMAC C-SMAC CT-SMAC Agar Sangre Triptosa

CromogénicosAgar O157:H7 IDCHROMAgar O157

FluorogénicosMUG (4-metilumberiferil-β-D-glucurónido)BCIG (5-bromo-4-cloro-3-indonil -β-D-glucurónido)

AISLAMIENTO DE STECAISLAMIENTO DE STECMEDIOS DE CULTIVO - STEC O157:H7/NMMEDIOS DE CULTIVO - STEC O157:H7/NM

SEROAGRUPAMIENTOSEROAGRUPAMIENTO

Aglutinación directa en lámina

- Antisueros anti-O157 (Difco, INPB)

- Reactivos de látex (OXOID)

Detección, aislamiento e identificación de Escherichia coli O157:H7 de productos cárnicos

USDA / FSIS (2008) ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO

AISLAMIENTO TAMIZAJE

- AISLAMIENTOMEDIOS SELECTIVOS SEPARACION INMUNOMAGNETICA

- SEROAGRUPAMIENTO

Positivopotencial

Positivopresuntivo

( - ) ( + )

CONFIRMACIÓNPRODUCCION DE Stx / DETECCIÓN DE GENES stxDETECCIÓN DE fliCH7IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA Positivo

confirmado

CONFIRMACIÓN

• IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA• SEROTIPIFICACIÓN CONFIRMATORIA O157:H7

Al menos uno de los siguientes criterios:• PRODUCCION DE Stx • DETECCIÓN DE GENES stx• DETECCIÓN DE fliCH7

Detección, aislamiento e identificación de Escherichia coli O157:H7 en productos cárnicos

USDA / FSIS (2008)

Detección de STX- Citotoxicidad en células Vero -Métodos inmunológicos

• ELISA Meridian• Test de inmunocromatografía Merck• RPLA Denka Seiken

CONFIRMACION DE STECCONFIRMACION DE STEC

Detección de genes stx- Hibridación- PCR

Detección, aislamiento e identificación de Escherichia coli O157:H7 de productos cárnicos

USDA / FSIS (2008) ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO

AISLAMIENTO TAMIZAJE

- AISLAMIENTOMEDIOS SELECTIVOS SEPARACION INMUNOMAGNETICA

- SEROAGRUPAMIENTO

Positivopotencial

Positivopresuntivo

( - ) ( + )

CONFIRMACIÓNPRODUCCION DE Stx / DETECCIÓN DE GENES stxDETECCIÓN DE fliCH7IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA Positivo

confirmado

STEC no-O157STEC no-O157

PREVALENCIA DE STEC no-O157

EXISTEN > 200 SEROTIPOS DESCRIPTOS

NO PRESENTA CARACTERÍSTICAS DISTINTIVAS

CRITERIO DE DETECCIÓN

DETECCION DE STEC no-O157 EN ALIMENTOSCONSIDERACIONES GENERALES

oDETECCION DE GENES (DETECCION DE GENES (stxstx))

oPRODUCCION DE TOXINA SHIGA (Stx)PRODUCCION DE TOXINA SHIGA (Stx)

Aislamiento e identificación de STEC no-O157 a partir de muestras de alimento

Enriquecimiento de la muestra65g de alimento + 585 ml Caldo Ec

Tratamiento en “Stomacher” durante 3 minutosIncubación a 37ºC - 18 hs

Confirmación - Identificación de la colonia STEC+ por PCR múltiple-Identificación bioquímica -Seroagrupamiento por aglutinación en placa y PCR -Caracterización de los factores de virulencia eae/ehxA/saa por PCR

Tamizaje por PCR MK+IAC

Templado:- 1 ml de caldo enriquecido - 150 ul de tritón/1% TE)

- PCR MK (+)

( -)

Aislamiento - Siembra en placas EMB Levine Incubación a 37ºC – 18 hs.

Primer Secuencia del primer (5’-3’) Nº de nucleótidos Tamañodel fragmento de

amplificación (pb)

MK 1 TTTACGATAGACTTCTCGAC 20 224 o 227

MK 2 CACATATAAATTATTTCGCTC 21

ReactivoConcentración de

trabajo del reactivo

Concentración del reactivo en la mezcla

Volumen del reactivo en la mezcla para una determinación (l)

Buffer 10X 1X 5

Mezcla dNTP 2,5 mM 0,1 mM 2

Cl2Mg 50 mM 1,5 mM 1.5

Primer MK 1 0,1 nmol/l 2 pmol/l 0,5

Primer MK 2 0,1 nmol/l 2 pmol/l 0,5

Taq polimerasa 5 U/l 0,02 U/l 0,2

Templado 2

IAC 0,2UFC/ l 2

Agua Trid. estéril 38,3

Volumen Final 50

Tamizaje PCR MK + IAC

1 2 3 4 5 (+) (-) cs M

100 pb

300 pb200 pb

Leotta y col. Enviado a Int. J. Food Microbiol. 2006

PCR MK + IAC para la detección de stx1 y stx2 de Escherichia coli

PCR MK para la detección de los genes PCR MK para la detección de los genes stxstx1 y 1 y stxstx22

Carne con aditivo Carne con aditivoCarne sin aditivo Carne sin aditivo

Carne con aditivo Carne con aditivoCarne sin aditivo Carne sin aditivo

E. coli O157:NM stx1/stx2 E. coli O145:NM stx2

E. coli ONT:H19 stx1 E. coli O26:H11 stx1

1 10 102 103

0,01 0,1 1 10 0,01 0,1 1 10 0,1 1 10 102

+ - s/t M

+ - s/t M

1 10 102 103 1 10 102 103 1 10 102 103

0,1 1 10 102

STECSTEC O157 y no-O157 DE ORIGEN O157 y no-O157 DE ORIGEN HUMANO. 1999-2007HUMANO. 1999-2007

CEPAS STECORIGEN O157

Nº (%)no-O157Nº (%)

SUH 371 (42,1) 148 (58,3)DS 209 (23,8) 26 (10,2)D 184 (20,9) 51 (20,1)

OTROS 116 (13,2) 29 (11,4)TOTAL 880 254

STEC SEROTIPOSSTEC SEROTIPOS

N = 1134

O157:H7 76% O8:H19 0,3%O145:NM 10% O113:H21 0,3%O26:H11 2% O145:H25 0,3%O111:NM 0,8% O171:H2 0,3%O174:H21 0,8% O8:H16 0,2%O103:H2 0,6% O15:H27 0,2%O91:H21 0,4% O174:H28 0,2%

STECSTEC O157 y no-O157 DE ALIMENTOS O157 y no-O157 DE ALIMENTOS 2003-20072003-2007

STEC O157Nº (%)

STEC no-O157Nº (%)

STEC Totales Nº (%)

49 (42,1) 167 (58,3) 216 (100)

Hamburguesas, carne vacuna, carne picada, carne de cerdo, embutidos.

> 30 serotipos diferentes

Asociados a casos humanos O157:H7 O113:H21 O8:H19 O91:21 O103:H2 O174:H21

01020

30405060

708090

Stx types

Stra

ins%

Human

Non-Human

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

Stx types

Stra

ins%

Human

Non-Human

STEC O157STEC O157 STEC no-O157STEC no-O157

Genotipificación deGenotipificación de StxStx

Food Food

75%

3%

9%

13% Humanos14%

5%

29%

52%

Alimentos

eae eae / / ehxehxAA de cepas STEC aisladas de de cepas STEC aisladas de humanos y alimentoshumanos y alimentos

Fagotipos de STEC O157 Fagotipos de STEC O157

0

5

10

15

20

25

30

35

2 4 8 14 24 26 31 32 39 45 49 47 54 71 73 87 NT

Phage Type

Stra

ins

%

HumansFood

EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR EN TIEMPO REALEPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR EN TIEMPO REAL PFGE

• Protocolos de CDC para PulseNet 24-h • Enzimas : XbaI and AvrII/BlnI • Cepa de referencia: S. Braenderup CDC#H9812 • Programa informático: BioNumerics Ver. 4.6 (Applied Maths) 2007

Bases de Datos 1988-2008STEC O157

Nº de cepas: 1207Nº de patrones XbaI-PFGE: 524Patrones prevalentes XbaI-PFGE (17%)

AREXHX01.0011 (118 cepas)AREXHX01.0022 (83 cepas)

STEC no-O157Nº de cepas: 450Nº de patrones XbaI-PFGE: 315Patrones prevalentes XbaI-PFGE (7%)

AREXSX01.006 (15 strains)AREXSX01.0124 (14 strains)

• Confirmación de brotes

• Detección de “Clusters” Brotes difusos

RELACION CLONAL DE CEPAS DE RELACION CLONAL DE CEPAS DE E. coliE. coli O157 O157 PERTENECIENTESPERTENECIENTES A UN BROTE EN LA COMUNIDAD A UN BROTE EN LA COMUNIDAD

NEUQUEN NEUQUEN

Localidad: San Martín de los Andes

Barrios: El Arenal, Oasis, Centro

Período: 24/02/07 al 03/03/07

Nº Cepa XbaI-PFGE Genotipo Fagotipo Caso Edad Sexo Lugar Código de Brote Stx

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-98.3%]

PFGE-XbaI

100

9590

PFGE-XbaI

247/07

255/07

254/07

246/07

234/07

AREXHX01.0200

AREXHX01.0200

AREXHX01.0200

AREXHX01.0440

AREXHX01.0086

.

.

.

.

.

Stx2only

Stx2only

stx2 only

Stx2only

Stx2-Stx2vh-a

4

4

4

4

2

BD

BD

HUS

BD

HUS

2- 3

3- 11

3- 6

1- 3

1- 8

F

M

M

M

M

SM Andes

SM Andes

SM Andes

SM Andes

Neuquén

07NQEXH-3

07NQEXH-3

07NQEXH-3

07NQEXH-3

N° cepa Origen Fecha de Semana aislamiento epidemiológica

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-98.3%]

100 PFGE-XbaI PFGE-BlnI

106/04 ctrol 1

106/04 ctrol 2

106/04 orig

Contacto

Contacto

Contacto

24/02/04

02/03/04

12/02/04

8/04

9/04

6/04

Brote de E. coli O157 en un Jardín de Infantes Entre Rios, Argentina. 2004

N° cepa Origen Edad Sexo Fecha de aislamiento

Figura 1: confirmación mediante PFGE del Brote E. coli O157:H7 stx2 / stx2c (stx2vh-a) / eae / ehxA

XbaI-PFGE AREXHX01.0243 BlnI-PFGE AREXHA26.0064

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-98.3%]

PFGE-BlnI

100

PFGE-XbaI PFGE-BlnI

63/0464/0465/0499/04

SUHDSDS

Asintomático

27/01/0430/01/0402/02/0412/02/04

3 a 10 m2 a 4 m4 a 7m2 años

MMFM

Figura 2: control de excreción de STEC O26:HNTE. coli O26:NT stx1 / eae / ehxA

XbaI-PFGE AREXSX01.0108 BlnI-PFGE AREXSA26.0069

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-98.3%]

100 PFGE-XbaI PFGE-BlnI

11 2ºM2

33 2ºM1* 3ºM1* 4ºM4

2008-08-252008-08-302008-09-11

2008-09-112008-09-182008-09-082008-09-222008-09-11

HUSHUSContacto/padre

Contacto/madreContacto/madre

asintomáticaContacto/tía

0- 10 0- 10 29

24 24 0- 10 0- 10 20

FFM

FFFFF

Nº TM Origen Edad (a-m) Sexo

BD

Brote Familiar. Neuquén – Agosto/Septiembre 2008E. coli O157:H7 stx2 / stx2c (stx2vh-a) / eae / ehxA

XbaI-PFGE AREXHX01.0331 BlnI-PFGE AREXHA26.0083Investigación del caso:

Caso: Niña de 10 meses SUH (1ºM 25/08/08 y 2ºM 30/08/08)Diarrea Sanguinolenta (3ºM 08/09/08)

Grupo familiar - 3 contactos asintomáticos: padre (1ºM 11/09/08), madre (1ºM 11/09/08) y tía (1ºM 11/09/08).

Seguimiento de la excreción: Caso: niña de 10 meses Asintomática 27 días luego de la 1º M (4ºM 22/09/08) Grupo familiar - 1 contacto asintomático: madre 7 días luego de la 1º M (2ºM 18/09/08).

RELACION CLONAL DE CEPAS DE RELACION CLONAL DE CEPAS DE E. coliE. coli O145 O145 PERTENECIENTES A UN PERTENECIENTES A UN BROTE FAMILIARBROTE FAMILIAR

Dice ( Opt :1.50%) (Tol 1.5% -1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0% -98.3%]

PFGE -XbaI

100

PFGE -XbaI

1104/06

1105/06

1106/06

AREXSX01.0006

AREXSX01.0006

AREXSX01.0006

Contacto/hermana

Contacto/hermana

Contacto/padre

Htal. Prov. Heller

Htal. Prov. Heller

Htal. Prov. Heller

/Neuquén

/Neuquén

/Neuquén

N°Cepa Patrón XbaI-PFGE Origen Procedencia

Caso SUH : Niña 20 meses criterios diagnósticos negativos

Contacto hermana: 13 años

Contacto padre: 38 años

Contacto hermana: 15 años E. coli O145:NM Stx2, Int-, EHEC-Hly

Contacto hermana: 4 meses

• Caso:Caso: niña de 2 años atendida en el Hospital Garrahan el 26 de abril de 2002, con diarrea sanguinolenta que evoluciona a SUH

• Alimento sospechoso:Alimento sospechoso: hamburguesas caseras consumidas 48 horas antes del inicio de la diarrea

• Se aisló del coprocultivo y del alimento:Se aisló del coprocultivo y del alimento: Escherichia coli O157:H7 eae/stx2+stx2vh-a/EHEC-hlyA, PT4 con idéntico patrón de XbaI-PFGE y BlnI-PFGE

Rivas et al. EID 2003, 9: 1184-6

SUH POR CONSUMO DE HAMBURGUESASSUH POR CONSUMO DE HAMBURGUESAS

XbaXbaI pattern EXHX01.0047I pattern EXHX01.0047

ARG = pattern 1 ARG = pattern 1 CDC = pattern CDC = pattern 22

BlnBlnI pattern EXHA26.0015I pattern EXHA26.0015

Comparación de patrones de PFGE de Argentina y USA

Relación genética de cepas STEC O157 por XbaI-PFGE. Comparación de los resultados obtenidos por técnicas de

subtipificación y datos referentes a las muestras (origen, lugar y fecha de toma de muestra)

XbaI Cluster Muestra Genotipo stx PT Origen TM Local1 I 841/01 stx 1+stx 2+stx 2vh-a 4 HP 05/08/01 A1 I 842/01 stx 1+stx 2+stx 2vh-a 4 HP 17/08/01 A1 I 843/01 stx 1+stx 2+stx 2vh-a 4 HP 17/08/01 B1 I 844/01 stx 1+stx 2+stx 2vh-a 4 HP 17/08/01 C1 I 845/01 stx 1+stx 2+stx 2vh-a 4 HP-C 17/08/01 D4 I 511/02 stx 2+stx 2vh-a 4 HC 29/04/02 E4 I 512/02 stx 2+stx 2vh-a 4 HC 30/04/02 F5 NR 514/02 stx 2+stx 2vh-a 8 HC 29/04/02 G6 II 335/02 stx 2vh-a 4-14 HC 25/04/02 H7 II 335/02 D stx 2+stx 2vh-a 2 HC 25/04/02 H8 II 325/02 stx 2+stx 2vh-a 2 HC 11/04/02 I9 NR 470/02 stx 1+stx 2vh-a 14 HC 29/04/02 J2 III 869/01 stx 2+stx 2vh-a 4-16 HC-C 27/08/01 K2 III 872/01 stx 2+stx 2vh-a 4-16 HC 27/08/01 D2 III 888/01 stx 2+stx 2vh-a 4-16 HP 27/08/01 SD3 III 334/02 stx 2+stx 2vh-a 4-16 HP 25/04/02 D3 III 336/02 stx 2+stx 2vh-a 4-16 HC 25/04/02 H3 III 458/02 stx 2+stx 2vh-a rdnc-87 HC 29/04/02 L3 III 870/01 stx 2+stx 2vh-a 4-16 HC-C 27/08/01 B3 III 871/01 stx 2+stx 2vh-a 4-16 HP-C 27/08/01 B

HP: Hamburguesa de pollo HC: Hamburguesa de carneHP-C: Hamburguesa de pollo-Cocida HC-C: Hamburguesa de carne-CocidaTM: Toma de Muestra SD: Sin Dato

CONCLUSIONESCONCLUSIONES

La recuperación de cepas con idéntico patrón XbaI-PFGE, PT y genotipo stx de muestras obtenidas:

En diferentes locales fuente única de contaminación En distintas fechas persistencia en la fuente de origen En muestras crudas y cocidas, falla en el proceso de

y en el mismo local cocción o contaminación cruzada

La recuperación de cepas con diferente patrón XbaI-PFGE, PT y genotipo stx de muestras obtenidas: En el mismo local diferentes cepas circulantes

CONCLUSIONES STEC O157 y no-O157 son detectados en

enfermedad humana, en el reservorio animal y en alimentos

Es importante fortalecer la vigilancia del SUH e infecciones por STEC mediante:

- Integracción de las diferentes áreas- Implementación de metodologías sensibles de diagnóstico tanto en laboratorios clínicos como de bromatología. - Implentación de PFGE en tiempo real- Consolidación de la base de datos

Muchas Gracias!