D E L I A R O S A H E R R E R A H E R N Á N D E...

PROTOCOLO DE MICROBIOLOGIA

REVISADO POR APROBADO POR

NOMBRE Delia Rosa Herrera Hernández Paulo Andres Gutierrez

CARGO Bacterióloga Representante de la Dirección

FIRMA

FECHA Septiembre de 2010 Septiembre de 2010

D E L I A R O S A H E R R E R A H E R N Á N D E Z

B a c t e r i ó l o g a

B L A N C A L U Z S A L D A R R I A G A G A V I R I A

B a c t e r i ó l o g a


1. CITOQUIMICO DE ORINA_______________________________________________________ 4

2. UROCULTIVO _______________________________________________________________ 5

3. COPROLÓGICO ______________________________________________________________ 6

4. SANGRE OCULTA EN MATERIA FECAL __________________________________________ 7

5. MÉTODO DE GRAHAM PARA EL DIAGNOSTICO DE OXIUROS ________________________ 8

6. GRAM DE CUALQUIER MUESTRA ______________________________________________ 9

7. AZUCARES REDUCTORES ____________________________________________________ 10

8. DETERMINACIÓN DEL PH ____________________________________________________ 11

9. TEST DE AMINAS ___________________________________________________________ 12

10. SECRECIÓN OCULAR _______________________________________________________ 13

11. LIQUIDO CEFALORRAQUÍDEO (LCR) __________________________________________ 14

11.1 ANÁLISIS DEL LCR ______________________________________________________ 15

11.2. EXAMEN CITOQUíMICO DEL LCR __________________________________________ 15

11.3. OTRAS PATOLOGÍAS ___________________________________________________ 19

11.4 SEROLOGIA EN LCR _____________________________________________________ 20

11.5. RECUENTO CELULAR ___________________________________________________ 20

12. DIRECTO HONGOS O KOH ___________________________________________________ 23

13. BK EN ORINA ______________________________________________________________ 24

14. BACILOSCOPIA EN JUGO GASTRICO __________________________________________ 25

14. BACILOSCOPIAS ___________________________________________________________ 26

15. TEST DE TZANCK __________________________________________________________ 27

16. COLORACIÓN DE ALBERT (PARA CORYNEBACTERIAS) __________________________ 28

17. DIRECTO LEISMANIASIS ____________________________________________________ 30

18. FROTIS FARINGEO – GRAM __________________________________________________ 31

19. FLUJO VAGINAL ___________________________________________________________ 32

19.1. MUESTRA DE ENDOCERVIS ______________________________________________ 32

19.2. MUESTRA DE VAGINA ___________________________________________________ 32

20. SECRECIÓN URETRAL ______________________________________________________ 33


21. ESPERMOGRAMA __________________________________________________________ 34

22. CONTROL DE CALIDAD INTERNO _____________________________________________ 35

22.1. CITOQUÍMICO DE ORINA _________________________________________________ 35

22.2. UROCULTIVO __________________________________________________________ 36

22.3. COPROLÓGICOS _______________________________________________________ 37

22.4. PRUEBA DE GRAHAM (OXIUROS) _________________________________________ 38

22.5. SANGRE OCULTA EN HECES______________________________________________ 39

22.6. AZUCARES REDUCTORES _______________________________________________ 40

22.7. PH ___________________________________________________________________ 41

22.8. TEST DE TZANCK _______________________________________________________ 42

22.9. FLUJO VAGINAL ________________________________________________________ 43

22.10. KOH _________________________________________________________________ 44

22.11. DIRECTO PARA LEISHMANIASIS _________________________________________ 45

23. CONTROL EXTERNO DE CALIDAD ____________________________________________ 46

23.1. LABORATORIO DEPARTAMENTAL DE SALUD PÚBLICA _______________________ 46

23.2. NOVALAB _____________________________________________________________ 47

BIBLIOGRAFIA


1. CITOQUIMICO DE ORINA

Para la elaboración de un examen de orina, se debe tener en cuenta tanto en hombre como en

mujeres las condiciones para su recolección, de acuerdo a lo descrito en el FADX35 –

RReeccoommeennddaacciioonneess ppaarraa uunnaa aaddeeccuuaaddaa rreeccoolleecccciióónn ddee mmuueessttrraass ppaarraa llooss eexxáámmeenneess ddee llaabboorraattoorriioo.

Procedimientos

1. Servir la muestra en un tubo de ensayo y colocarle la tirilla, donde se analiza: Leucocitos,

Nitritos, Urobilinogeno, Proteínas, Ph, Eritrocitos, Densidad, Cuerpos Cetónicos, Bilirrubina,

Glucosa, además miramos aspecto y color.

2. Centrífugar por 10 minutos a 2.500 RPM, descartar el sobrenadante, servir 1 gota del

sedimento entra lámina y laminilla, y luego con objetivo de 40x leer la muestra.

La observación del sedimento urinario debe coincidir con la lectura de la tirilla urinaria. En caso

contrario se debe repetir la tirilla o el sedimento.

Nota aclaratoria

Cuando el paciente trae la orina para citoquímico se coloca la muestra directamente en la nevera, con

el fin de conservar la muestra mientras se realiza su respectivo análisis.

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2. UROCULTIVO

Es un procedimiento de microcultivo para confirmar en forma rápida y sencilla un proceso de infección

urinaria; este sistema consta de una paleta plástica de 2 caras:

11.2. Cara 1: Con Agar Cler.

11.3. Cara 2: Con Agar MacConkey.

Procedimiento:

1. Colectar la muestra asépticamente en un recipiente estéril de boca ancha.

2. Agitar la orina para permitir una suspensión uniforme de los microorganismos que pueden

estar presentes.

3. Tomar cuidadosamente un tubo de urobacter e introducir la paleta en la orina, permitiendo una

inmersión completa de esta.

4. Limpiar con un papel absorbente el excedente de orina que queda en la paleta.

5. Colocar inmediatamente la paleta en su recipiente estéril y cerrar herméticamente.

6. Incubar a 37º C por 18 – 24 horas.

7. Revisar el crecimiento obtenido una vez terminado el tiempo de incubación, interpretar los

resultados según el número de colonias.

Interpretación de los resultados:

1. Positivo: Crecimiento de más de 100.000 colonias/ml3. Enviar el microcultivo al laboratorio de

referencia para su identificación bioquímica, determinar especie y realizar pruebas de

sensibilidad antibiótica.

2. Negativo: No se observa crecimiento bacteriano y se procede a descartar el microcultivo.


Nota aclaratoria: los urocultivos negativos no se descartan inmediatamente después de su lectura,

sino que se dejan en incubación 24 horas más antes de ser descartados.

SE ANEXA TÉCNICA DE LA CASA COMERCIAL

3. COPROLÓGICO

Para la elaboración de un examen coprológico, se debe tener en cuenta las condiciones para su

recolección, de acuerdo a lo descrito en el FADX35 – RReeccoommeennddaacciioonneess ppaarraa uunnaa aaddeeccuuaaddaa

rreeccoolleecccciióónn ddee mmuueessttrraass ppaarraa llooss eexxáámmeenneess ddee llaabboorraattoorriioo. Su análisis debe realizar el mismo día de

la recolección.

Procedimiento

1. Revolver bien la muestra con un palillo.

2. Servir utilizando solución salina, 1 gota y Lugol 1 gota.

3. Mezclar primero la muestra con la gota de solución salina y por último con Lugol.

4. Servir entre lámina y laminilla.

5. Observar primero con el objetivo de 10x para determinar huevos y larvas.

6. Pasar luego al objetivo 40x para diferenciar los quistes.

Reportar los huevos: En huevos por gramo (hpg). Para reportar los quistes y trofozoitos se utilizan

cruces de acuerdo a la cantidad presente: +, ++, +++ o ++++.

Además se debe reportar la consistencia de la muestra, presencia de Almidones, Grasa, Moco,

Leucocitos, Eritrocitos y anotar la cantidad: Escasa, Media, Abundante.




4. SANGRE OCULTA EN MATERIA FECAL

1. Destornillar la tapa del tubo colector y clave el palo colector dentro de la materia fecal en al

menos tres sitios diferentes.

2. Enrosque y ajuste la tapa en el tubo colector agitando vigorosamente para mezclar la materia

fecal y el buffer extractor.

3. Saque el dispositivo o casette del sobre sellado y utilícelo tan pronto sea posible.

4. Sostenga el tubo colector hacia arriba y rompa la punta del tubo.

5. Transfiera dos gotas completas del espécimen extraído al pozo del dispositivo o casette

6. Esperar hasta que aparezcan las líneas coloreadas. Los resultados deben leerse a los 5

minutos. No interpretar los resultados después de 10 minutos.

Lectura

Positiva: Dos líneas coloreadas aparecen. Una línea debe estar en la banda de la región de

control C y otra línea debe estar en la banda de la región de la prueba T.

Negativa: Una línea coloreada aparece en la banda de control de la región C. Ningún color

aparente aparece en la banda de la región de la prueba T.



5. MÉTODO DE GRAHAM PARA EL DIAGNOSTICO DE OXIUROS

1. Pegar un pedazo de cinta engomada transparente en una placa con la parte engomada contra el

vidrio. Se puede pegar el extremo de la cinta a un baja lenguas para facilitar la toma de la

muestra.

2. Levantar la cinta en el momento de usarla y voltearla hacia atrás de tal modo que la parte

engomada quede expuesta en la superficie externa.

3. Toca varias veces con la superficie engomada la región peri anal y perineal.

4. Pega de nuevo la cinta en la placa, alisar bien y mirar al microscopio.

Este método da una positividad de 70 - 80%, la cual aumenta con exámenes repetidos en casos de

oxiuriasis, mientras que el examen coprológico corriente solo revela el 5%.


6. GRAM DE CUALQUIER MUESTRA

Las muestra a las cuales se les realiza el Gram son: Orina, Materia Fecal, Esputo, materiales

purulentos, líquido Cefaloraquídeo, Frotis Faríngeo, Etc.

Se realizan los extendidos en una placa porta objetos, rotar el aplicador suavemente, dejar secar a

temperatura ambiente y luego fijar al calor con mechero.


7. AZUCARES REDUCTORES

Muestra: Material fecal y tabletas reactivas (determinación cuantitativa de la glucosa (azúcar) en

materia fecal.

Procedimiento:

1. Colocar en un tubo de ensayo 10 gotas de H2O destilada o 2ml de esta.

2. Adicionar un gramo de materia fecal y mezclar.

3. Colocar una tableta en el tubo. Permitir que se lleve a cabo completamente la reacción, no

agitar el tubo durante la reacción o por los 15 segundos después de haber terminado la

reacción.

4. Al final del periodo de 15 segundos agitar el tubo suavemente para mezclar el contenido.

5. Comparar con la carta de color, el color del líquido contenido en el tubo. Ignorar el sedimento

que puede estar presente en el tubo. Ignorar también el cambio de color después del periodo

de 15 segundos.

6. Anotar el resultado de acuerdo al valor asignado al bloque de color con el que más se acerque

al color del líquido.



8. DETERMINACIÓN DEL PH

Esta prueba permite conocer la acidez o basicidad de determinada muestra.

Es importante conocer el PH en muestras como: L. C. R, esperma, orina, flujo vaginal, materia fecal.

Para determinarlo existe comercialmente una tirilla la cual analiza el PH de 1 a 14 mediante una tabla

clasificadora representada en colores, los cuales corresponden a un número.



9. TEST DE AMINAS

La muestra de flujo vaginal que al directo se le observe cocobacilos, células guía, se le hace el Test

de Aminas.

Procedimiento:

1. Colocar una gota de esta muestra de flujo en un porta objetos

2. Echar una gota de Hidróxido de Potasio al 10%, si expide un olor característico (a pescado) se

dice que es KOH positivo o a su defecto negativo.


10. SECRECIÓN OCULAR

Procedimiento:

1. Tomar con aplicador estéril un poco de la muestra que presente el paciente

2. Extender en un porta objetos en forma circular

3. Deja secar y luego colorear con Gram.

4. Leer con objetivo de 100x de aceite de inmersión.

Es importante reportar la reacción leucocitaria en cantidad y la presencia de bacterias.


11. LIQUIDO CEFALORRAQUÍDEO (LCR)

El líquido cefalorraquídeo (LCR) se ha considerado como un ultra filtrado del plasma, semejante al

líquido intersticial y al líquido glomerular, pero con algunas diferencias importantes.

Aproximadamente 150ml de LCR ocupan la cavidad que rodea el encéfalo y la médula; se encuentra

en los ventrículos cerebrales, cisternas, espacios subaracnoideos del encéfalo y médula espinal.

Todas estas cavidades están conectadas entre sí y la presión del líquido está regulada a un nivel

constante.

Formación

La mayor cantidad de LCR, aproximadamente el 60% es producido por los plexos coroides de los

ventrículos cerebrales; otra parte proviene del plasma, por lo tanto constituye un ultra filtrado de las

sustancias del plasma al espacio extracelular del cerebro y los plexos coroides en mayor proporción

provienen de los vasos sanguíneos del encéfalo y la médula espinal de los meníngeos y los

revestimientos ependimarios de las cámaras cerebroespinales.

Composición

Hay un cambio gradual de la concentración de los componentes a medida que el LCR fluye desde los

ventrículos del cerebro hasta las cisternas que lo rodean y luego al área lumbar de la médula espinal,

donde se obtiene generalmente las muestras de LCR por punción.

Barrera Hemato – Encefálica

Su existencia se refleja en el hecho de que diferentes solutos se difunden en distinta cuantía entre la

sangre y el tejido cerebral.

Aunque en otros lugares del cuerpo muchas sustancias atraviesan las paredes de los capilares de la

sangre a los tejidos, algunos no pueden atravesar las paredes de los capilares a los plexos por la

acción vital de las células de revestimiento; entre estas sustancias se encuentran los pigmentos

biliares y muchos medicamentos.


Algunas sustancias como el alcohol etílico, penetran rápidamente en el tejido cerebral; otras como la

penicilina lo hacen muy lentamente y algunos como la urea, creatinina y glucosa ocupan una posición

intermedia.

En condiciones patológicas especialmente en los procesos infecciosos, desaparece la barrera hemato

– encefálica y la acción vital de las células de revestimiento.

11.1 ANÁLISIS DEL LCR

Recoger la muestra en tres tubos estériles tapa rosca (sobre todo si la muestra va a ser transportada

de un laboratorio a otro) así:

1. Un tubo para estudios bacteriológicos y serológicos (1cc).

2. Un tubo para determinaciones químicas (3cc).

3. Un tubo si se van a hacer estudios citológicos (la muestra debe ser tomada con anticoagulante

para evitar que las células queden atrapadas en el coagulo cuando este se presente (1cc).

Tomar simultáneamente al paciente muestra de sangre para hacer la glicemia en sangre u otra

determinación.

11.2. EXAMEN CITOQUIMICO DEL LCR

Comprende:

1. Estudios Físicos: Aspecto, color, coagulación

2. Estudios Químicos; Glucorraquia, proteinorraquia, clorurorraquia

3. Estudio Microscópico: Recuento de leucócitos, recuento de eritrócitos y placas de

sedimento para Wrigth, Gram, BK

11.2.1 Estudio Físico:

Color: El LCR normal es incoloro. Puede ser hemorrágico debido a punción traumática o a

hemorragia por fracturas óseas, hemorragias cerebrales, medulares, diátesis hemorrágica, ruptura

de aneurisma, hemorragia meníngea.

Aspecto: LCR normalmente es transparente, cristalino como agua de roca. También se puede ser

claro en la meningitis tuberculosa, pero en este caso a menudo es opalescente.


Coagulación: El coagulo en tela de araña es característico de la meningitis tuberculosa; algunos

síndromes como el de Froint, presentan coagulación espontánea. El coágulo se da por presencia

de fibrina en LCR.

11.2.2. Estudio Químico

Las sustancias químicas de interés clínico en el LCR son: La glucosa, las proteínas y los cloruros.

Glucorraquia: Los valores normales en el adulto varían de 50 a 80mg/dl para el LCR obtenido por

punción lumbar; en los niños las cifras son ligeramente superiores 70 a 90mg/dl.

La concentración de la glucosa en LCR guarda estrecha relación con la glicemia, normalmente la

glucorraquia es aproximadamente el 60 al 80% de la glicemia.

Tras un aumento o disminución de la glicemia, la glucorraquia sufre un cambio paralelo en curso de 1

a 3 horas; este intervalo de tiempo refleja el transporte lento de la glucosa a través de la barrera que

existe entre la sangre y el LCR. Por lo anterior se debe tomar muestra de sangre al mismo tiempo que

se toma la muestra de LCR, para hacer las determinaciones de glucosa en ambas.

La hiperglucorraquia fuera de ser discreta, es inconstante, por lo que tiene mayor valor clínico la

hipoglucorraquia.

La glucosa disminuye en la meningitis piógena y tuberculosa, este descenso se debe a las

necesidades metabólicas de los microbios infectantes y de las células inflamatorias, una normal

glucorraquia no excluye una meningitis, pero una cifra baja si la confirma. La glucosa del LCR

disminuye en estados hipoglicémicos, en hemorragias subaracnoideas o en meningo-encefalitis.

En los casos de infecciones por virus la cifra de glucosa es normal o puede aumentar por alteración

de la barrera hemato-cerebral.

Proteinorraquia: Normalmente el LCR obtenido por punción lumbar tiene cifras entre 15 y 45

mg/dl para los adultos.

En prematuros la inmadurez de la barrera hemato-encefálica ocasiona unos valores

considerablemente elevados.

Durante el primer año de vida los niveles están entre 30 y 100 mg/dl.


Las cifras de proteínas aumentan con cualquier enfermedad inflamatoria aguda o crónica, en los

tumores cerebrales dependiendo de su localización, lo mismo que en afecciones vasculares del

sistema nervioso.

El aumento de las proteínas puede obedecer a exudación del suero, anomalía en la barrera hemato-

cerebral o liberación de proteínas por un tumor o por una célula inflamatoria.

Cuando las cifras protéicas aumentan considerablemente se sospecha una meningitis purulenta,

tuberculosa o sifilítica, o en casos de bloqueo espinal exista o no síndrome de compresión medular

como en el síndrome de Froint, donde el cambio principal es el notable aumento de las proteínas

totales, acompañado de xantocromía y coagulación espontánea, aunque no siempre se presente la

tríada completa.

ENFERMEDAD

PROTEINAS

GLUCOSA

CLORURO

CELULAS

OTROS

NORMAL 15 – 40

50 – 30

710 – 750

5 Transparente

Incoloro

MENINGITIS

PIÓGENA 100 – 500

0 – 40

600 – 700 Miles Turbio

MENINGITIS

TUBERCULOSA 50 – 400 10 – 50 500 – 700 Cientos

Coagulo en

forma de

telaraña

MENINGITIS

VIRAL 50 – 100

Normal o

elevada 50 – 500 Variable -

TUMOR

CEREBRAL 15 – 100 Normal Normal Negativa -

OBSTRUCCIÓN

RAQUÍDEA 50 – 2000 Normal Normal Normal

Coagulo

espontáneo

ESCLEROSIS

MÚLTIPLES

15 – 100

Normal Normal 5 – 100 -

SIFILIS (según la

etapa de la

enfermedad

25 – 150

Normal Normal 10 – 500 -

Tabla Nº1 - Composición del LCR en algunas enfermedades

Todos los resultados de la tabla se expresan en mg/dl.


Se presentan también niveles aumentados en el síndrome de Guillan Barré en el que también hay

disociación albuminocitológica; en estos procesos el paciente presenta parálisis flácida y abolición de

reflejos.

Por otro lado se pueden determinar las globulinas en el LCR mediante la prueba de Pandy, reacción

cualitativa cuya positividad es siempre anormal.

Clorurraquia: Su cifra normal es 100 – 130mg/dl. Las variaciones patológicas de interés son los

hipoclorurorraquias.

Se encuentran notablemente disminuidas en las meningitis tuberculosas, en las que un descenso

rápido es los primeros días es signo de gravedad; de mejoría cuando la cifra trata de normalizarse.

Se presenta disminución discreta en la meningitis purulenta y sífilis nerviosa.

El aumento se presenta en procesos donde existe una retención en sangre, como en la nefritis con

insuficiencia renal o hipercloremia, o en las deshidrataciones puras sin pérdida de electrolitos.

11.2.3. Estudio Microscópico

Se debe realizar recuento celular (Leucocitos y Eritrocitos) y recuento diferencial, lo mismo que las

placas para Gram y BK.

Recuento de Leucocitos: El recuento normal de leucocitos en LCR esta generalmente de 0 – 5

leucocitos por mm3, un recuento aumentado de leucocitos en LCR indica generalmente una

irritación meníngea, ya sea aséptica o séptica.

Se presenta pleocitosis (aumento de número de células) ligeramente o moderado en procesos de

meningitis aséptica, tuberculosis, neurosífilis, tumores cerebrales y medulares y en casos de Erpes

Zoster.

Pleocitos con leucocitos inmaduros no es rara, por infiltración leucémica en las meninges.

Recuento de Eritrocitos: Normalmente no hay eritrocitos en el LCR. Los hematíes están

aumentados patológicamente en casos de hemorragia subaracnoidea, hematomas, etc.

Recuento Diferencial: Se realiza en la placa coloreada por Wrigth; la reacción celular neutrófila,

linfocítica o mixta, depende de la naturaleza y duración de la enfermedad.


Cuando existe pleocitosis se debe hacer un recuento diferencial cuyo resultado se puede asociar con

diferentes patologías a saber: Linfocitosis, típica de la meningitis tuberculosa; también es linfocitaria la

pleocitosis que acompaña ciertas infecciones agudas, meningitis linfocitaria benigna, leptospirosis,

fiebre recurrente; igualmente se presenta en casos de meningo - encefalitis vírica, esclerosis múltiple

y meningitis sifilítica.

La polinucleosis Neutrofila se presenta en procesos sépticos agudos como la meningitis purulenta,

meningocócicas, estrepto o neumocóccicas, en abscesos meningoencefalíticos y en la fase inicial de

la meningitis tuberculosa y la poliomielitis.

La polinucleosis Eosinofila se deba a parasitosis; es mucho más escasa que las dos anteriores, pero

tiene gran valor diagnóstico en la cisterciscosis cerebral.

Puede presentarse una reacción mixta de neutrofilos, linfocitos, monocitos en una meningitis

bacteriana subaguda, durante las 2 ó 3 primeras semanas de la meningitis tuberculosa, de la micótica

o durante la primera semana de la meningoencefalitis vírica.

11.3. OTRAS PATOLOGÍAS

La meningitis fúngica debido al criptococo neoformans, puede asociarse a reacción acelular con

respuesta mixta o con eritrocitos y linfocitos.

En las lipidosis cerebrales puede observarse histiocitos cargados de lípidos, pero también se ven

después de la administración intratecal de medios radiográficos de contraste.

Después de una hemorragia subaracnoidea se puede encontrar macrófagos cargados de

hemosiderina.

Un carcinoma primario o metastático con invasión meníngea puede sembrar el LCR de células

malignas; estas infiltraciones neoplásicas pueden asociarse con una disminución de la glucorraquia.

La meningitis tuberculosa es difícil de diagnosticar, pues a menudo los microorganismos están

ausentes en las extensiones teñidas con Ziehl – Neelsen y pueden ser difíciles de demostrar en los

cultivos.

11.3.1. Técnicas de Laboratorio

Es necesario centrifugar la muestra de LDR antes de someterla a estudios químicos.


Glucorraquia: La misma técnica que se esté realizando en sangre.

Proteinorraquia: Los procedimientos más comunes para estimar proteínas consisten en medición

de la turbidez cuando estas reaccionan con reactivos de precipitación, como el ácido sulfosalisílico.

11.4 SEROLOGIA EN LCR

Preparación del antígeno:

1. Depositar en un frasco esmerilado 100λ Buffer - 125λ del antígeno, mezclar poco a poco hasta

agregar 1.25cm del Buffer.

2. Inactivar el líquido problema por 30 minutos a 56º C, luego dejar enfriar para procesarlo.

Procedimiento:

1. Tomar 50λ del LCR o 0.05 mm, agregar 1 gota del antígeno con aguja Nº 18. Agitar por 4

minutos y leer al microscopio por aglutinación.

Si la muestra aglutina se dice que es reactiva se debe hacer la dilución de la siguiente manera.

2. Toman 200 λ del LCR, agregar 200 λ de solución salina (dilución de 1:2).

3. Sacar de la dilución anterior 200 λ y agregar 200 λ de solución salina (dilución 1:4).

4. Sacar de la dilución anterior 200 λ y le agrego 200 λ de solución salina (dilución 1:8).

5. Continuar con las diluciones dependiendo de la aglutinación de la muestra. Luego se toman

50 λ de cada dilución y agregar una gota del antígeno con aguja Nº 18. Agitar por 4 minutos

en el rotador y leer al microscopio hasta donde llega la aglutinación así:

2 Dils o 4 Dils o 8 Dils, etc. Reportar: Reactivo 1 en 4 Dils.

11.5. RECUENTO CELULAR

Debe hacerse durante la primera media hora después de tomada la muestra ya que las células se

lisan con un reposo prolongado y se hace imposible un recuento exacto; debe emplearse para el


recuento celular el último tubo tomado, ya que es menos probable que esté hemorrágico debido a la

punción traumática y además debe contener anticoagulantes.

Según el aspecto de la muestra se lleva el LCR diluido o sin diluir a la cámara de Neubauer para

hacer el recuento total de células.

11.5.1. Recuento de Leucocitos

Si el líquido es transparente, se llena la cámara de recuento con un capilar (sin dejar burbujas), llenar

ambos lados. Se cuentan los cuatro retículos de blancos en ambas cámaras, se promedia el

resultado, se multiplica por 10 y se divide por 4 así:

Total Leucocitos = Leucocitos x 10 = Leucocitos por mm3

2 4

Si el líquido es turbio, se diluye este en pipeta de blancos (igual que en sangre) hasta 0.5 con LCR y

completar a 11 con líquido de blancos o azul de toluidina.

Llenar ambas cámaras, contar los retículos de blancos, se promedia el resultado, se multiplica por 50

así:

Total leucocitos = Leucocitos x 50 = Leucocitos por mm3

2

11.5.2. Recuento de Eritrocitos

Se monta el LCR en cámara. Montar ambas cámaras, contar los 5 retículos de rojo, promediar,

multiplicar el resultado por 10 y dividirlo por 5 así:

Ret A + Ret B = Eritrocitos X 10 = Eritrocitos por mm3

2 5

Se debe especificar si están normales o crenados v/n: 0 eritrocitos por mm3.


11.5.3. Recuento Diferencial

Si existe pleocitosis se debe hacer un recuento diferencial para determinar el tipo de células y su

porcentaje.

La muestra de centrífuga, se conserva el sobrenadante para estudios químicos y del sedimento se

hace un extendido en un porta objetos, se deja secar y se colorea con Wright.

11.5.4. Otras pruebas

Se debe hacer frotis adicionales del sedimento y se tiñe uno con Gram para estudios morfológicos de

bacterias y el otro servirá en casos de sospecha de TBC, para hacer tinción de Ziehl Neelsen (cuando

existe el coagulo en “tela de araña” usar este para la tinción). El resto del líquido se debe congelar

para estudios virológicos u otro análisis posterior.

Los cultivos se realizaran de acuerdo a las técnicas estandarizadas, cubriendo el aislamiento de toda

flora posible, BHI, agar sangre, agar chocolate y medio de Todd. Hewitt (enriquecimiento de

Neumococo).

Las muestras para cultivo de BK pueden sembrarse en la unidad de salud si se tiene el medio de

Lowenstein Jensen ó refrigerarlo y remitirlo. Para cultivo de Neisserias no se puede remitir ni

refrigerar la muestra ya que el Meningococo es muy lábil; la muestra debe sembrarse

inmediatamente.


12. DIRECTO HONGOS O KOH

Esta prueba permite observar microscópicamente la presencia de hongos en una muestra.

La muestra se obtiene haciendo un raspado en la lesión con una lamina porta objetos ya sea en piel o

cuero cabelludo.

Lo ideal es lograr que la lesión descame y a esta muestra se la agrega una gota de una dilución

anteriormente preparada de KOH y tinta china (0.1 tinta china + 0.9 de KOH). Colocar la lamilla y

flamear levemente.

Observar microscópicamente en 40X toda la placa y se reporta lo observado en cantidad o si hay

ausencia decir negativo para hongos.


13. BK EN ORINA

Para la elaboración del examen BK en orina, se debe tener en cuenta las condiciones para su


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Centrifugar toda la orina y del sedimento que se obtiene hacer un extendido, dejar secar para luego

colorearlo como un BK.




14. BACILOSCOPIA EN JUGO GASTRICO

Centrifugar la totalidad de la muestra por un espacio de 10 minutos a 2.500 RPM, se descarta el

sobrenadante y el sedimento se somete a 2 procesos: Extendido y siembra.

14.1. EXTENDIDO

Hacer un extendido del sedimento en una placa porta objetos, la cual es leída posteriormente por la

bacterióloga.

Decontaminar el sedimento con NAOH (hidróxido de Sodio al 4%) durante 2 minutos.

14.2. SIEMBRA

Se siembra el sedimento en dos tubos de Ogawa de la siguiente manera:

Se procede a sembrar este sedimento con un aplicador estéril en 2 tubos de Ogawa y luego se

remiten al laboratorio departamental, donde son leídos.


14. BACILOSCOPIAS

Para la elaboración del examen de Baciloscopias, se debe tener en cuenta las condiciones para su


rreeccoolleecccciióónn ddee mmuueessttrraass ppaarraa llooss eexxáámmeenneess ddee llaabboorraattoorriioo

Procedimiento:

1. Utilizar placa porta objetos, nueva y lavada.

2. Extender la muestra uniforme y que quede esparcida en las 3 cuartas partes de la placa.

3. Secar al aíre y luego fijar al calor.

4. Colorear, según Protocolo de Auxiliar Área de la Salud (Laboratorio)




15. TEST DE TZANCK

Para la realización de esta prueba es aconsejable limpiar la superficie de la lesión y con un bisturí

raspar del fondo de la lesión hasta obtener buena cantidad de células.

En la mujer se ordena además citología vaginal.

La muestra obtenida se extiende en placas, se colorea con Wright; Observar el efecto cito patogénico

y las inclusiones compatibles con herpes.


16. COLORACIÓN DE ALBERT (PARA CORYNEBACTERIAS)

En algunas de las cepas de corynebacterium Difteriae pueden verse al final de cada bacilo, en uno de

sus extremos, unos cuerpos polares compuestos de fosfatos polimerizados que se colorean

metacromáticamente y que se conocen comúnmente como “gránulos metacromáticos”. Toman un

color diferente al del resto del bacilo y se asemejan a un fósforo con el cuerpo azul verdoso o verde y

la cabeza de color rojo, café. Agrupados generalmente en empalizadas.

Procedimiento:

1. Fijar la placa previamente preparada con calor suave a la llama.

2. Cubrir la placa totalmente con colorante de Albert (colorante metal cromático) dejar actuar

durante 10 minutos.

3. Enjuagar con agua corriente.

4. Dejar secar y observar bajo el objeto de 100x.

Existe un método abreviado para hacer la coloración así:

1. Impregnar la placa con colorante hasta cubrirla totalmente.

2. Colocar un mechero bajo la placa y calentar hasta que emita vapores.

3. Retirar la llama y repetir el proceso hasta completar 3 minutos.

4. Enjuagar con agua corriente.

1.6.1. FROTIS PARA INVESTIGAR CORYNEBACTERIAS DIFTERIA

El paciente debe estar sentado con la cabeza un poco inclinada hacia atrás, presionar la lengua hacia

atrás con la ayuda de un baja lenguas.


Procedimiento

1. Levantar la membrana con escobillón y luego tome la muestra por debajo de la membrana, ya

que en esta sola hay detritus celulares, leucocitos y muy escasos bacilos.

2. Evitar en lo posible que sangre al desprender la membrana, para que la toxina no penetre en la

circulación. El bacilo no es invasor.

3. Sembrar en los medios apropiados y hacer el extendido para colorear. Si no es posible hacerlo

ahí mismo, enviar al laboratorio en medio de transporte.


17. DIRECTO LEISMANIASIS

El directo de este parásito puede hacerse en preparación coloreada con Wright.

El cultivo presenta mayores resultados. Uno de los medios más utilizados es el NNN (Novy, MacNeal,

Nicolle)

Procedimiento

1. Preferir las lesiones más jóvenes, que generalmente están menos contaminadas.

2. Raspar el borde del nódulo o de la úlcera después de haber profundizado un poco con el bisturí.

Es preferible tomar la muestra entrando por piel sana del borde de la lesión.

3. Extender en una placa porta objetos.

4. Secar a temperatura ambiente y se colorear por 9 minutos con coloración Wright.


18. FROTIS FARINGEO – GRAM

1. Tomar la muestra con aplicador estéril.

2. Introducir por la boca hasta la nasofaringe.

3. Hacer toser al paciente y luego retirar con cuidado.

4. Extender el material haciendo un pequeño círculo en el centro de la placa, nueva, limpia y

previamente flameada.

5. Dejar secar a temperatura ambiente.

6. Colorear con la coloración Gram.


19. FLUJO VAGINAL

19.1. MUESTRA DE ENDOCERVIX

Tomada con espéculo humedecido en solución salina estéril, no se debe usar ningún tipo de

lubricante

Procedimiento:

1. Tomar la muestra visualizando el cuello uterino

2. Remueve el moco y el exceso de flujo.

3. Introducir el aplicador estéril en el canal endocervical y rotarlo suavemente.

4. Retira el aplicador y hacer el frotis en la placa.

19.2. MUESTRA DE VAGINA

O fondo de saco con otro aplicador, entender en la placa en la parte final.


20. SECRECIÓN URETRAL

Debe tomarse la muestra en el hombre sintomático, preferiblemente sin asearse sus genitales.

Procedimiento:

1. Frotar con un aplicador estéril el conducto urinario que debe ser visualizado al recoger el

prepucio.

2. Frotar suavemente el aplicador sobre el porta objetos.

3. Dejar secar al aire y colorear con Gram.

El Gram por si solo es diagnostico de la uretritis gonocócica en el hombre.


21. ESPERMOGRAMA

El esperma debe ser llevada al laboratorio inmediatamente sea recolectada. Está debe

empezarse a procesar antes de que transcurra 1 hora, porque las células pueden morirse.

Procedimiento:

1. Medir la cantidad en milímetros, luego con tirillas de pH, introducir un pedazo de tirilla en el

semen y se hace lectura en la tabla que trae la cintilla.

2. Para la viscosidad introducir un aplicador en el tubo de la muestra y determinar por la formación

de hilos. Según su consistencia estos hilos puede ser la viscosidad aumentada, normal o

disminuida.

3. Para la movilidad colocar una gota de semen entre lámina y laminilla y mirar al microscopio, allí

se determina el porcentaje de espermatozoides normales unidireccionales, anormales hacia

direcciones diferentes, inmóviles o pendulantes.

4. Para el recuento de espermatozoides, en pipeta de glóbulos blancos llenar con esperma hasta

marcar 0.5 y con agua destilada se llena hasta 1.1; luego llenar la cámara de Neubauer y dejar

está en reposo por 15 minutos, se hace el recuento en la cámara de glóbulos rojos (5 cuadrados)

y multiplicar por 1 millón o también se puede contar en uno solo de los cuadrantes de glóbulos

blancos y multiplicar por 200000 mil.

5. Hacer un extendido de la muestra en un porta objetos, se deja secar y luego colorear con Gram.

6. Al secarse la placa mirar al microscopio donde se cuentan las células normales y las células con

anormalidad de cabeza, de cuello, de cola; en un recuento de 100 células y se dan en porcentaje.


22. CONTROL DE CALIDAD INTERNO

22.1. CITOQUÍMICO DE ORINA

El control de calidad del citoquímico de orina se realiza con soluciones de control positivo y negativo

para Uroanálisis (liquichek). Este control se monta cada ocho días.

Procedimiento:

Se Anexa Técnica De La Casa Comercial


22.2. UROCULTIVO

Se hace control de la esterilidad del medio cada que se inicia un nuevo lote, sometiendo el urotubo al

proceso de incubación de igual manera como se procede con las muestras del día y éste debe dar

negativo, garantizando la esterilidad del medio.


22.3. COPROLÓGICOS

Consiste en repetir el directo de solución salina a todo coprológico negativo. Este control se hace

diariamente.


22.4. PRUEBA DE GRAHAM (OXIUROS)

El control interno de esta prueba se hace de la siguiente manera:

1. Tomar una muestra al paciente.

2. Hacer dos lecturas, las cuales deben coincidir. (las lecturas deben hacerse por dos

bacteriólogas diferentes).


22.5. SANGRE OCULTA EN HECES

1. Hacer control de los casetes de la prueba de sangre oculta fecal en placa cada mes,

sometiéndolas a una dilución de sangre 1:5 (0.1ml de sangre + 0.4ml de solución salina).

2. Observar la positividad de la prueba por la aparición de dos líneas coloreadas (una línea debe

estar en la banda de región de control (C) y otra línea debe estar en la banda de la región de

la prueba (T).


22.6. AZUCARES REDUCTORES

1. Hacer control de la pastilla reveladora cada mes, utilizando orina de un paciente diabético y

sometiéndola a todo el proceso.

2. Observar la positividad en el tubo por cambio de color.


22.7. PH

1. Para controlar esta prueba se utilizan dos soluciones de diferentes PH (ácido – básico),

colocar una gota de cada una de estas soluciones en contacto con un trozo de la cinta

medidora de PH.

2. Comparar cada trozo de la cinta (ácido – básico) con la escala de valores (PH) que trae el Kit

del reactivo.


22.8. TEST DE TZANCK

1. Hacer control realizando una placa de la lesión del paciente, la cual es coloreada.

2. Realizar lectura dos bacteriólogas diferentes.

3. Realizar cada que llegue este tipo de muestra por lo esporádico que es.


22.9. FLUJO VAGINAL

Comparar la concordancia entre el directo y la placa coloreada.


22.10. KOH

1. Montar una placa y comparar los resultados.

2. Hacer doble lectura (2 bacteriólogas) de la muestra de un paciente al azar.


22.11. DIRECTO PARA LEISHMANIASIS

Como este es un examen muy esporádico, se hacen lecturas dobles (2 bacteriólogas) cada que se

presente un caso.


23. CONTROL EXTERNO DE CALIDAD

23.1. LABORATORIO DEPARTAMENTAL DE SALUD PÚBLICA

El Laboratorio Departamental de Salud Pública (LDSP) hace control de calidad de placas de

Baciloscopia, Leishmania, Gram (ETS) y Gram líquidos estériles, así:

Leishmania: Examen directo para Leishmania. Se deben enviar la totalidad de las placas positivas

y el 10% de las negativas; si son menos de 10 placas se deben enviar todas.

Baciloscopia: Examen baciloscopia, coloración para ácido alcohol resistente (Ziehl Neelsen). Se

deben enviar la totalidad de las placas positivas y la siguiente negativa. El 10% de las negativas; si

son menos de 10 placas se deben enviar todas.

Gram de Flujo Vaginal o de Secreción Uretral: Se deben enviar la totalidad de las placas con

diplococos gram negativos intracelulares y 5 placas negativas.

Gram de Líquidos Estériles: Se deben enviar la totalidad de placas positivas y el 10% de las

negativas; si son menos de 10 placas se deben enviar todas.

Las placas de los programas se deben enviar tres veces al año y el Laboratorio Departamental las

recibe los primeros 10 días del mes asignado.

El Laboratorio Departamental de Salud Pública (LDSP) evalúa la concordancia en la lectura y

observaciones técnicas en cuanto al extendido y coloración de las placas.


23.2. NOVALAB

Se hace control de calidad externo a las pruebas de Uroanálisis, y Parasitología. Este programa

funciona con ciclos trimestrales

Procedimiento:

Se Anexa Técnica de La Casa Comercial

Cuando llega el reporte con los resultados del control de calidad externo uroanalisis y

parasitología se hace análisis de cada uno de los parámetros medidos y se toman las medidas

preventivas cuando alguno no entra en el rango establecido por dicho control.


BIBLIOGRAFIA

-Manual de Laboratorio Facultad de Medicina Departamento de Microbiología y Parasitología/ autor.

Liliana Álvarez, Luz Marina Álzate, Gloria Jaramillo, Sofía Pérez, Estela Restrepo, María Elena

Vásquez.

-Programa de evaluación externa de Calidad Qualitest Control Novalab (sección parasitología y

uroanalisis).

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