coproparasitoscopico
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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
MÉDICO CIRUJANO
MÓDULO V
APARATO DIGESTIVO
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA 19
EXÁMENES COPROPARASITOSCÓPICOS
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OBJETIVOS
Conocer la importancia del diagnóstico de laboratorio de las enfermedades parasitarias.
Identificar las formas parasitarias mediante la observación al microscopio.
Conocer la clasificación de los exámenes coproparasitoscópicos
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Reactivos
- Sacarosa (azúcar común).
1.- Solución de sacarosa con densidad de 1.180.2.- Lugol parasitológico(ver método directo).
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Método cualitativo de concentración por flotación simple
Se usa para la búsqueda e identificación de formas parasitarias
como huevos, quistes y larvas.
La densidad tan elevada de la salmuera distorsiona las formas parasitarias y se
necesita experiencia para la lectura.
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Reactivos
- Cloruro de sodio comercial.
Solución de lugol
parasitológico
Solución saturada de
cloruro de sodio.
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1.- Se hace una suspensión homogénea con 1 a 2 g de materiafecal y 10 ml de agua de la llave.
2.- Se pasa a través de gasa colocada en el embudo y colectandola suspensión directamente en el tubo de ensaye.
3.- Los tubos así preparados, se centrifugan a 2,000 revolucionespor minuto (r.p.m.) durante un minuto.
4.- Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento conagua, agitando con un aplicador.
5.- Se centrifuga nuevamente y se vuelve a decantar elsobrenadante.
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6.- Se agregan 2 a 3 ml de la solución de sulfato de zinc a los tubos yse homogeneizan perfectamente, llenando los tubos hasta 0.5 a 1cm. por abajo de los bordes.
7.- Se centrifuga a 2000 r.p.m. durante un minuto.
8.- Con el asa estéril o flameada, se recoge la muestra de la películasuperficial, que se encuentra en el menisco, durante dos o tresocasiones sucesivas y se deposita en un porta objetos.
9.- Se agregan dos gotas de lugol parasitológico y se homogeneizacon el ángulo de un cubreobjetos y se coloca este sobre lapreparación.
10.- Se observa la preparación al microscopio con objetivos 10X y40X.
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TÉCNICAS CUALITATIVAS
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1.- Suspender 1 a 2 g de materia fecal en 10 ml de " Carles l ",utilizando la cápsula de porcelana para homogeneizar.
2.- Pasar la suspensión a través de la malla o gasa.
3.- Centrifugar a 1,800 r.p.m. durante 1 minuto.
4.- Decantar y agregar al sedimento " Carles II ", hasta llenar dostercios del tubo.
5.- Agitar con fuerza y añadir el éter hasta centímetro y medio delborde.
6.- Tapar el tubo con el tapón de caucho y agitar violentamente hastalograr la homogeneización de las sustancias que contiene.
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8.- Con un palillo de dientes, se rompe el tapón de las heces, grasas y otrosrestos, agitando ligeramente con el palillo.
9.- Se vuelve a centrifugar durante otros 30 seg. a 1,800 r.p.m.
10- Se rompe nuevamente el tapón superior de restos fecales, desprendiéndolode la pared del tubo con cuidado, ayudándose del palillo.
11- Se decanta de una sola vez, procurando que quede una pequeña cantidadde 2 a 4 gotas líquidas junto al sedimento.
12- Agregar al sedimento una gota de lugol y agitar el tubo ligeramente parahomogeneizar.
13- Con la pipeta Pasteur, se toma una gota de la suspensión coloreada delfondo del tubo y se coloca en el portaobjetos, colocando sobre este elcubreobjetos.
14- Se observa en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.
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1.- Se coloca un fragmento de heces fecales del tamaño de un frijol ( 1 gaproximadamente) en un vaso que contenga 5 a 10 ml de ácido clorhídrico al 15%.
2.- Se homogeneiza con el aplicador.
3.- Se pasa la suspensión por dos capas de gasa previamente humedecida,recibiendo el colado en el tubo de centrífuga cónico de 15 ml.
4.- Se añade éter en cantidades iguales y se coloca un tapón de caucho.
5.- Se agita vigorosamente y se afloja el tapón para disminuir la presión y sedestapa.
6.- Se centrifuga a 1,500 r.p.m. durante un minuto.
7.- Se saca de la centrífuga y se observan 4 capas:1a.- Eter. 2a.- Tapón de restos fecales.3a.- Capa de ácido. 4a.- Sedimento inferior que contiene formas parasitarias.
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8.- Se mantiene el tubo horizontal y con un aplicador de madera y conmovimientos circulares, se despega el tapón de restos fecales.
9.- Rápidamente, pero con cuidado, se vierten el éter, tapón de restos fecales yla capa de ácido, de manera que quede el sedimento en el tubo.
10- Se mantiene el tubo en posición horizontal, para evitar que los restos deextracto graso y de tapón fecal bajen por las paredes del sedimento.
11- Se introduce un aplicador con hiposo de algodón y se limpian las paredesdel tubo.
12- Con el tubo vertical, se toma parte del sedimento con una pipeta Pasteur.
13- Se coloca en un portaobjetos y se pone un cubreobjetos por encima de este.
14- Se examina en el microscopio con objetivo seco débil 10X y seco fuerte 40X.
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Técnica permite hacer una buena concentración de huevos, quistes y larvas,
Se han descrito trofozoitos
Se pueden destruir con el éter a pesar de que hayan sido previamente fijados y
conservados con el MIF.
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SOLUCIONES
- Solución de MIF.
REACTIVOS
Éter etílico., Merthiolate., Yodo de
potasio. Formaldehído.
Glicerina. Y agua destilada.
1.-
•Mezclar la muestra fecal con la solución de MIF y pasarla a través de gasa humedecida en MIF a un tubo cónico de centrífuga
•Se agregan 5 ml de éter, se tapa y agita
2.-
•Se retira el tapón con cuidado y se centrifuga a 1,500 r.p.m. durante un minuto.
•Se forman 4 capas:
•1a.- Eter. 2a.- Restos fecales.
•3a.- Solución MIF. 4a.- Sedimento con las formas parasitarias
3.-
•Se desprende el tapón superficial y se decantan las tres capas superiores,
•Con una pipeta Pasteur se toma la muestra de la parte superior del sedimento, se coloca en un portaobjetos y se cubre.
•Se examina en el microscopio con objetivos de seco débil y seco fuerte.
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" EXAMENES COPROPARASITOSCOPICOS CUANTITATIVOS "
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MATERIALES
REACTIVOS
- Hidróxido de sodio Q.P.
- Agua destilada.
SOLUCIONES
- Solución 0.1\N de Hidróxido
de sodio
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El equipo y material que se utiliza no se puede conseguir fácilmente en el comercio.
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1.- Se pesa un frasco de boca ancha con un abatelenguas.
2.- Se pone materia fecal ayudándose con el abatelenguas, hasta que sean 4 g(peso del frasco con el abatelenguas más 4 g de materia fecal).
3.- Se miden 36 ml de solución de formaldehído y se vacían en el frasco.
4.- Se homogeneiza la materia fecal con la solución de formol hasta que quedeuna suspensión.
5.- Se pasa la mezcla por malla o gasa previamente colocada en un embudo yse recibe la suspensión en un tubo colocado en una gradilla.
6.- Se centrifuga durante un minuto a 2,000 r.p.m..
7.- Se decanta el sobrenadante, se suspende el sedimento con agua y se vuelvea centrifugar bajo las mismas condiciones anteriores.
8.- Se decanta nuevamente el sobrenadante y se agregan 2 a 3 ml. de lasolución de sulfato de zinc, se mezcla hasta hacer una nueva suspensión.
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9.- Se introduce la campana de Ferreira, dando un pequeño giro.
10- Se llena el tubo con más solución, procurando que tanto el meniscointerno de la campana, como el externo, vayan subiendo paralelamente.
11- Se centrifuga a 2,000 r.p.m. durante un minuto.
12- Se saca el tubo de la centrífuga y con el pulgar y el índice se comprimefuertemente el trocito de manguera de caucho del extremo anterior de lacampana y de un golpe se saca ésta del tubo.
13.- Se invierte la campana sobre el portaobjetos y se homogeneiza lasuspensión con el ángulo de un cubreobjetos y se coloca sobre elportaobjetos.
Se examina la preparación con el microscopio a seco débil y seco fuerte(10X y 40X respectivamente)
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CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS
DE HUEVOS DE ALGUNOS PARÁSITOS
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Microscopio
Centrifuga
Vaso de precipitados
Tubos con tapón
Embudo de plástico
Pipetas Pasteur
Varilla de vidrio
Abatelenguas
Asa bacteriológica
Gasas
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METODO DE FAUST Y COLS
Poner con un aplicador 1 g de materia fecal en un vaso deprecipitado, agregar 210 ml de solución salina isotónica
Filtrar la suspensión a través de la gasa colocada en unembudo
Centrifugar durante 45-60 seg a 2500 rpm
Tirar el líquido sobrenadante y añadir 2-3 ml de agua alsedimento
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Repetir la maniobra hasta que el líquido que sobrenada sea claro
Agregar 8-9 ml de sulfato de zinc ; una vez tirado elsobrenadante agitar y adicionar solución hasta llenar el tubo
Centrifugar durante 45-60 seg a 2500 rpm
Tomar con el asa la película superficial y colocarlo en elportaobjetos, añadir una gota de lugol para teñir la mezcla,cubrir con una laminilla y observar a seco débil y seco fuerte
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METODO DE RITCHIE
Poner un aplicador 1g de materia fecal en el vaso deprecipitados, agregar 10 ml de solución salina isotónica.
Filtrar la suspensión a través de la gasa colocada en unembudo recibiendo en el tubo.
Centrifugar durante un minuto a 2000 rpm; desechar elsobrenadante, repetir hasta que el sedimento este limpio
Agregar 10 ml de formalina al 10% y dejar en reposo 10 min
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Centrifugar durante 1 min a 1500 rpm; en donde se observarán 4capas:
Eter
Restos fecales
Formol
Sedimento
Introducir una pipeta Pasteur y extraer el sedimento; colocar una gotasobre el portaobjetos, agregar 1 gota de lugol y cubrir con unalaminilla
Observar a seco débil y seco fuerte