COOMBS DIRECTO E INDIRECTO

Se fundamenta en la separación, a través de un matriz de microsferas, de eritrocitos aglutinados y de eritrocitos libres. Las reacciones se basan en la detección de hematíes sensibilizados con Ig y/o fracciones del Complemento mediante un reactivo de antiglobulina humana polivalente.

COOMBS DIRECTO: Diluímos 1 ml de suero de coombs (suero de conejo con antiglobulina humana,

anti – Rh) con 10 UI de sangre del paciente (tubo de hematimetría). Identificar dos pocillos de una tarjeta de coombs con los datos del paciente. Dispersar en los pocillos 50 UI de la dilución. Centrifugar durante 10 min. Interpretar: Si el tapón de hematíes se encuentra en el fondo del pocillo,

significa que no ha aglutinado, por lo que el Coombs es negativo. Si aglutina (Coombs Directo positivo), el paciente presenta una anemia hemolítica, genera sus propios Ac.

PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

Prueba de Coombs se refiere a dos análisis de sangre clínicos utilizados en inmunohematología e inmunología. Las dos pruebas de Coombs son la prueba de Coombs directa y la prueba de Coombs indirecta.

La prueba de Coombs directa se utiliza para poner a prueba para la anemia hemolítica autoinmune, es decir, una condición de un recuento bajo de glóbulos rojos causado por lisis sistema inmune o ruptura de las membranas de glóbulos rojos que causan destrucción de glóbulos rojos.

En ciertas enfermedades o condiciones de la sangre de un individuo puede contener anticuerpos IgG que pueden unirse específicamente a los antígenos en la membrana de la superficie de glóbulos rojos, y sus glóbulos rojos circulantes puedan cubrirse de aloanticuerpos IgG y/o autoanticuerpos IgG. Las proteínas del complemento pueden posteriormente unirse a los anticuerpos unidos y causar la destrucción de glóbulos rojos. La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar estos anticuerpos o proteínas del complemento que están enlazados a la superficie de las células rojas de la sangre, una muestra de sangre se toma y los glóbulos rojos se lavan y después se incubó con antiglobulina humana. Si esto produce la aglutinación de los glóbulos rojos, la prueba de Coombs directa es positiva, una indicación visual de que los anticuerpos se unen a la superficie de las células rojas de la sangre.

La prueba de Coombs indirecta se utiliza en la prueba prenatal de las mujeres embarazadas y en las pruebas de sangre antes de una transfusión de sangre. Se

detecta anticuerpos contra los glóbulos rojos que son no unido presente en el suero del paciente. En este caso, el suero se extrae de la muestra de sangre tomada del paciente. Entonces, el suero se incuba con los glóbulos rojos de antigenicidad conocida, es decir, los glóbulos rojos con valores de referencia conocidos de otras muestras de sangre de pacientes. Si se produce la aglutinación, la prueba de Coombs indirecta es positiva.

MecanismoLas dos pruebas de Coombs se basan en el hecho de que los anticuerpos anti-humanos, que se producen mediante la inmunización de las especies no humanas con suero humano, se unirán a los anticuerpos humanos, comúnmente IgG o IgM. Anticuerpos anti-humanos en animales también se unirán a los anticuerpos humanos que pueden ser fijados a antígenos en la superficie de las células rojas de la sangre, y en las condiciones de tubos de ensayo apropiados esto puede conducir a la aglutinación de los glóbulos rojos. El fenómeno de la aglutinación de los glóbulos rojos es importante aquí, debido a la aglutinación de los glóbulos rojos resultante puede ser visualizado; formación de grumos cuando se ve la prueba es positiva y cuando la aglutinación no se ve la prueba es negativa.

Aplicaciones clínicas más comunes de la prueba de Coombs incluyen la preparación de la sangre para transfusión en pruebas cruzadas, la detección de anticuerpos atípicos en el plasma de la sangre de las mujeres embarazadas como parte de la atención prenatal y la detección de anticuerpos para el diagnóstico de las anemias hemolíticas autoinmunes.

Prueba de Coombs se realizan en el suero de muestras de sangre venosa, que se han tomado de los pacientes por venopunción. La sangre venosa se lleva a un laboratorio, donde el personal técnico científico capacitado hacer las pruebas de Coombs. La importancia clínica de los resultados es evaluado por el médico que solicitó la prueba de Coombs, tal vez con la ayuda de un hematólogo en laboratorio.

PRUEBA DE COOMBS

Sinonimia: prueba de antiglobulina, PAG.

Método: suero antiglobulina

Muestra:prueba de Coombs directa: sangre entera anticoagulada con EDTA Na2

prueba de Coombs indirecta: suero

Valores de referencia: negativo

Significado clínico:La prueba de antiglobulinas (PAG) se basa en el principio de que los anticuerpos antiglobulina humana inducen la aglutinación de los eritrocitos revestidos con globulina.Cuando la PAG se utiliza para detectar anticuerpos fijados en eritrocitos in vivo, se llama prueba directa de antiglobulinas o de Coombs (PCD). Cuando la PAG se emplea para detectar anticuerpos en el suero por sensibilización de los eritrocitos in vitro, se conoce como prueba indirecta de antiglobulinas o de Coombs (PCI). Los sueros antiglobulinas que se obtienen de conejos inmunizados pueden ser de amplio espectro (con anticuerpos contra inmunoglobulinas humanas y componentes del complemento) o pueden ser monoespecíficos (anti IgG, anti-IgM, anti-IgA, anti- C3+C4, anti C3b, anti-C3d, anti-C4b y anti C4d).Aunque la PAG de una prueba muy sensible, una prueba negativa no excluye la presencia de anticuerpos en los eritrocitos (se calculan en 100 a 500 moléculas de IgG fijadas a los eritrocitos para que sean detectadas).

Prueba directa falsa positiva: algunas drogas incluyendo penicilinas y cefalosporinas pueden causar PDC positiva:  -metildopa, levodopa, quinidina, insulina, ácido mefenámico, sulfonamidas, tetraciclinas. Los anticuerpos contra metildopa son predominantemente IgG.Observación no son estrictamente falsos positivos ya que estas drogas pueden provocar anemias hemolíticas autoinmunes.

Causas de falsos positivos en PCD:1- material mal lavado.2-restos de detergentes.3-muestra conservada en la heladera y no procesada de inmediato (hay activación del complemento.4-exceso de refrigeración.5- lavado inadecuado de los hematíes de sangre de cordón (gelatina de Wharton).

Causas de falsos positivo en PCIídem 1,2,4,5-Solución fisiológica inapropiada, pH, resina de intercambio etc.6-restos de componente monoclonal por lavado insuficiente.

Prueba indirecta falsa positiva: la metildopa provoca aproximadamente el 25% de PIC positivas en pacientes hospitalizados. La levodopa y el ácido mefenámico también causan reacción positiva.

Utilidad clínica:La prueba indirecta de Coombs se utiliza en los siguientes casos:

Screening de anticuerpos desconocidos en el suero usando hematíes conocidos. Se utiliza principalmente para el screening de anticuerpos pre-transfusionales y en el primer trimestre de embarazo.

Evaluación de anemias hemolíticas. Esta prueba se usa en paneles, en titulaciones y en cross-matches.

Evaluación de antígenos: Muchos antígenos eritrocitarios se detectan con esta prueba: Fy, K, k, S, s, como también antígenos poco frecuentes como: Lua, Coa, Kpb o variantes débiles de antigenos : Du, DVI, Cw.

La prueba directa de Coombs se utiliza en los siguientes casos: Diagnóstico de hemólisis autoinmune. Diagnóstico de enfermedad hemolítica del recién nacido. Diagnóstico de hemólisis inducida por drogas. Evaluación de reacción hemolítica aguda y retardada.

Variables por enfermedad:Prueba positiva:PIC: brucelosis, malaria, algunos pacientes con linfoma de Hodgkin, 20% de pacientes con leucemia linfocítica crónica, 33% de pacientes con leucemia mielocítica crónica, púrpura trombocitopénica idiopática con anemia hemolítica, convalecencia de infección por Mycoplasma pneumoniae, lupus eritematoso sistémico, eritroblastosis fetal (debido a anticuerpos Rh, Kel, Kidd, Duffy).PDC: lupus eritematoso sistémico.

Prueba negativa:PIC: mieloma múltiple, eritroleucemia, abetalipoproteinemia, macroglobulinemia de Waldenström, esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria, hemoglobinuria paroxística nocturna, poliarteritis nodosa, enfermedad hemolítica del recién nacido debida a incompatibilidad ABO.Nota: tener en cuenta que de acuerdo a la concentración del componente monoclonal puede haber falsos positivos

Variables por drogas:Prueba positiva:PIC: asparaginasa, carbromal, metildopa, rifampicina.PDC: ácido aminosalícilico, ampicilina, ciclofosfamida, insecticidas, isoniazida, ácido mefenámico, meticilina, metildopa, penicilina G, quinina.