Propiedades genotóxicas de representantes de alquilindazoles y aminoalquil-indoles que se consumen como cannabinoides sintéticos

Integrantes:Blas Rosales Violeta BelemLuna Barba Alexander KevinMedina Ramirez Marco AntonioMiguel Nava Alexa Fernanda

Introducción

● Los canabinoides sinteticos (SC) se comercializan como un sustituto de la marihuana.

● En 2004, los primeros compuestos de "Spice" se vendieron en mezclas de hierbas como un sustituto de la marihuana.

● Se investigaron las propiedades genotoxicas de 4 CS.

● Los diferentes fármacos se probaron en ensayos SCGE (ensayos de cometas) con linfocitos humanos.

Cannabinoides sintéticos ● Los cannabinoides sintéticos forman parte de un grupo de

drogas llamadas nuevas sustancias psicoactivas (new

psychoactive substances, NPS).

● actúan sobre los mismos receptores de las células del

cerebro que el THC (delta-9-tetrahidrocannabinol), el

ingrediente psicoactivo de la marihuana.

● Estas sustancias se rocían sobre la materia seca y triturada

de una planta o se vaporizan.

Cannabinoides sintéticos

Ensayo Cometa

Ensayo de salmonella

typhimurium

Ensayo de MN

Pruebas a realizar...

linfocitos humanos

SCGE en linfocitos humanos

Materiales

● Compuestos de prueba utilizados

AM-2201 ; UR-144; 5F-AKB-48; AM-2201-IC

● Aislamiento de linfocitos humanos

Sangre periférica de cuatro voluntarios sanos, no fumadores (edad 25-32, peso corporal 80,6 ± 11,2, IMC 25,1 ± 2,9) sin antecedentes de enfermedad reciente o exposición a agentes químicos tóxicos.

Métodos ● Ensayo de electroforesis en gel de células individuales

(SCGE)

5

Tinción y

análisis

Tinción de porta

objetos con yo

duro de

propidio. Porce

ntaje de ADN medido

mediante siste

ma de análisis

de imágenes.

4

Lisis,

tratamiento alca

lino y

electroforesis

Frotis, lis

is en osc

uridad a 4°C

. 30 m

inutos de

reposo en pH>1

3 y electr

oforesis.

3

Incubació

n, centri

fugación y

determinació

n de vitalid

ad

Incubació

n en oscurid

ad durante 3 horas.

Lavado co

n RPMI 1640 y

centrif

ugación.

Determinació

n de vitalid

ad con azu

l tripán.

Tratamiento con ca

nnabinoides

sintétic

os

Se trataron co

n distintas c

oncentra

ciones d

e

CS (50-500 uM). H

2O2 como co

ntrol p

ositivo

.

21

Preparación y

recuento de lin

focitos

LDescongelació

n y ce

ntrifugació

n de

linfocit

os. Vita

lidad determ

inada con

azul tr

ipán y recu

ento con cá

mara

Neubauer.

● Ensayo de micronúcleos con bloqueo de citocinesis (CBMN) con linfocitos humanos

Preparación de linfocitos

Se añadieron linfocitos RPMI 1640 con solución de PHA. Los cultivos se establecieron en viales duplicados y se incubaron a 37 ° C.

Tratamiento con cannabinoides

Los medios se reemplazaron por medios frescos que contenían diferentes concentraciones de los fármacos (25.0, 50.0, 75.0, 100.0 y 150.0 μM). El tratamiento se realizó durante 3 horas.

Lavado, resuspensión y adición de citocalasina-B

Después del tratamiento, las células se lavaron dos veces con RPMI 1640 y los sedimentos se resuspendieron en medio de cultivo. Se añadió citocalasina-B a los cultivos.

Puntos finales

Se puntuaron diferentes puntos finales, a saber, células mononucleadas, binucleadas (BN) y multinucleadas, así como las tasas de micronúcleos (MN) brotes nucleares (Nbuds) y puentes nucleoplásmicos (NPB)

Secado, fijación y tinción

Después de secarse, las células se fijaron y se tiñeron con Diff Quick.

05

01

02 03

04

● Ensayos de Salmonella typhimurium

1

Los compuesto

s se analiz

aron con el

ensayo

de Ames

2

Se utiliza

ron cepas T

A98 de S.

typhim

urium, T

A100, TA1535 y

TA1537.

TA100 y TA1535 detecta

n susti

tuciones d

e

pares de base

s, mientra

s que TA98 y

TA1537 son se

nsibles

a mutágenos que

provoca

n cambios e

n el marco

3

Dosis utili

zadas

ResultadosEnsayos SCGE

Ensayo SCGE

≥

Ensayos de CBMN

≥

Continuación

Discusión

● Los representantes de ambos grupos causan la inducción de MN en linfocitos humanos.

● Las actividades genotóxicas de los diferentes CS fueron similares y en el mismo rango que las observadas con otros CS en células derivadas de humanos.

En particular, UR144 fue notablemente más activo en los experimentos de SCGE y también en ensayos de MN que AM-2201. Ambos compuestos están estrechamente relacionados estructuralmente y las diferencias pueden deberse al hecho de que el último compuesto lleva un sustituyente naftaleno en lugar de un grupo ciclopropilo.

Se encontró en un experimento preliminar que la adición de homogeneizado de enzimas hepáticas no aumenta los efectos genotóxicos de los CS en los linfocitos, pero causa una disminución en la formación del cometa.

Se realizó una observación similar con SC CP-47,497-C8 y con albúmina sérica bovina ,por tanto, se postuló que la reducción de la actividad genotóxica después de la adición de homogenaizado hepático se debe a efectos vinculantes de proteínas.

Se sabe que las tasas de MN en linfocitos son un biomarcador válido para aumentar los riesgos de cáncer en humanos , pero es poco probable que las concentraciones plasmáticas de CS en usuarios alcancen niveles suficientemente altos como para causar efectos en las células sanguíneas.

Conclusiones ● Se obtuvieron resultados negativos en pruebas de mutagenicidad bacteriana.

● Los estudios de biomonitoreo humano demuestran que la exposición laboral crónica a los humos de los CS y las predisposiciones individuales (por ejemplo, debido a mecanismos de reparación del ADN y desintoxicación deteriorados) pueden causar un aumento de los efectos adversos para la salud.

Bibliografia

● Instituto Nacional sobre el Abuso de Drogas; Institutos Nacionales de la Salud;

Departamento de Salud y Servicios Humanos de los Estados Unidos.