TÉCNICAS DE TINCIÓN

5/10/2018 TÉCNICAS DE TINCIÓN - slidepdf.com

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TÉCNICAS DE TINCIÓN

Para Micobacterias



Característicasmicroscópicas y de tinción Las micobacterias son bacilos rectos o ligeramente

curvados. Son inmóviles y no esporulados. Con latinciónde Gram no se tiñen o se comportan como Grampositivos débiles. La presencia de ácido micólico ensu pared les

confiere una resistencia a la solución de alcoholácido que los diferencia del resto de las bacterias.Aprovechando esta propiedad se desarrolló unatinción específica para bacterias ácido alcoholresistentes.Con la tinción de Zielh-Neelsen las micobacteriasse observan como bacilos de color rojo. Aparecenindividualmente o formando pequeños grupos.y la tinción fluorocrómica con auramina ambas sebasan en una propiedad peculiar de lasmicobacterias ya que resisten la decoloración conalcohol clorhídrico.



Preparaciones fijadas y teñidas.

Las preparaciones fijadas y teñidasson las más utilizadas enMicrobiología por dos razones:- La tinción facilita la visualización dela bacteria- Con varios colorantes clasificamosla bacteria en distintos grupos.La mayor desventaja es que labacteria ya está muerta.



Tinción de Ziehl-Neelsen :

Este método se basa en que las paredescelulares de ciertos parásitos y bacteriascontienen ácidos grasos (por ejemplo, elácido micólico) que les confieren lapropiedad de resistir la decoloración con

alcohol-ácido, después de la tinción concolorantes básicos. Por esto se denominanbacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR.Las micobacterias como M. tuberculosis yM. marinum y los parásitos coccídeos

como Cryptosporidium se caracterizan porsus propiedades de ácido-alcoholresistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para queel colorante atraviese la pared bacterianaque contiene ceras.



Tinción de Ziehl-Neelsen :

a) Filtre la fucsina fenicada antes de usarla.

b) Cubra la superficie del extendido con fucsina.

c) Pase la llama del mechero (o torunda

empapada en alcohol) por debajo de la lámina,hasta que se produzca la emisión de vaporesblanquecinos. Deje de calentar y repita elprocedimiento dos veces más. La emisión delos vapores blanquecinos debe lograrse tresveces en 5 minutos, que es el tiempo adecuadode contacto entre el extendido y el colorante. Lafucsina no debe hervir sobre la lámina, sidisminuye por evaporación o derrame, hay quereponerla.



d) Elimine la fucsina con agua del tubo abaja presión, de manera que la película nose desprenda.

e) Gire la lámina para lavar su cara inferiory así eliminar la fucsina ahí depositada.

f) Cubra la superficie del extendido conalcohol-ácido al 3% efectuando unmovimiento de vaivén y espere 2 minutosde modo que el alcohol-ácido lo decolore yarrastre suavemente la fucsina. Esta

operación puede repetirse hasta que sobreel extendido se observe un color rosado.



g) Lave la lámina con agua según sedescribe en el punto d.

h) Cubra el extendido durante 1 minutocon solución de azul de metileno.

i) Lave ambas caras de la lámina conagua.

j) Seque las láminas a temperaturaambiente, en posición vertical, con el

extendido hacia el frente. k) Revise la identificación de los frotis yrotúlelos de nuevo si se borraron durantela tinción.



Ziehl-Neelsen :

Hacer un frotis de la muestra deesputo.

Dejar el frotis sobre el puente de

tinción. Aplicar fucsina-fenicada. Calentar con un mechero hasta la

emisión de vapores (3-5 minutos). Decolorar con alcohol-ácido. Aplicar azul de metileno (1 minuto). Enjuagar con agua



Observación microscópica

La observaciónmicroscópica debedeterminar la presencia

de BAAR(concordanciacualitativa) y establecersu número aproximado

por campomicroscópico(concordanciacuantitativa).



Considere campo microscópicoútil aquel en el cual se observanelementos celulares de origen

bronquial (leucocitos, fibrasmucosas y células ciliadas).Los campos en que no

aparezcan dichos elementos nodeben contabilizarse en lalectura.



Observe cada campomicroscópico, en superficie yprofundidad, con objetivo de

inmersión. Establezca una pauta uniforme

de observación.



El número de campos que se debeobservar variará según la cantidad debacilos que contenga la muestra. Si no seencuentran BAAR o se observa menos de

1 bacilo por campo en promedio, debenexaminarse por lo menos 100 campos. Sise encuentran de 1 a 10 BAAR por campoen promedio, es suficiente observar 50campos. Si se encuentran más de 10

BAAR por campo en promedio, basta conobservar 20 campos.



Cuando aparecen grumos debacilos se debe contar comouno. Si el número de grumos

que aparece es significativo, sedebe hacer la observación en elreporte: “hay BAAR en grumos”,

para indicar que el númeroverdadero de BAAR puede sermayor que el que se reporta.



Cuando el frotis es de otro tipode muestra, que no sea esputoo del sedimento de un esputo,

solamente se reportacualitativamente.



Reporte de resultados

Negativo (-): °No seencuentran BAAR en 100campos observados (c.o.). o si

se encuentran menos de 3BAAR en 300 campos ópticosobservados.



Número exacto: de 1-9 BAARen 100 campos observados.

Positivo (+): Promedio demenos de 1 BAAR por campo,en 100 campos observados. Loque es lo mismo, de 10 a 99

BAAR en 100 campos



Positivo (++): Promedio deentre 1 a 10 BAAR por campo,en 50 campos observados.

Positivo (+++): Promedio demás de 10 BAAR por campo, en20 campos observados.



Ejemplos:

Si observa 24 BAAR en 100 camposópticos: 24/100=0,24 Lo que implicamenos de 1 y corresponde reportar:

BAAR positivo (+). Si observa 5 BAAR en 100 campos

ópticos: Lo que implica de 1-9 en100 campos observados y

corresponde reportar: Positivo (5)BAAR en 100 campos.



Bacilos Ácido AlcoholResistentes.



Tinción de Auramina

Consiste en teñircon Auramina

(Colorantefluorocrómico),

decolorar conácido alcohol,

contracolorear conpermanganato

potásico, lavar conagua abundante ydejar secar.



Al observar lapreparación almicroscopio de

Fluorescencia conobjetivo de 25

X losmicroorganismosácido alcoholresistentes

(Micobacterias)aparecen confluorescencia

amarillo-naranja



La tinción fluorescentees mas rápida ya que

la observación se

realiza sin objetivo deinmersión, utilizándosepor tanto campos de

observación mas

amplios con lo que segana tiempo, por loque su utilización estaplenamente justificada

en aquelloslaboratorios que deben

realizar mas de 10exámenes al día



El examen microscópicodebe realizarserastreando la

preparación observardoaproximadamente 100

campos microscópicosy contando los BAARobservados, ya que esnecesario informar del

nº de BAAR presentes



G R A C I AS

M E S A N. 3

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