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Comparación de la Precisión Analítica de la Técnica Directa y Técnica Inversa de pipeteo

en el Procesamiento Manual de la Determinación de Glucosa.

E.A.P. Tecnología Médica

Autores:

Alejandro Santiago Meneses Lazón

Código: a2010100667

e-mail: Alejandro.meneses17@gmail.com

Número telefónico: 949 141 861

Ángel Adolfo Torres Lara

Código: a2010100333

e-mail: angeldelamuerte00@hotmail.com

Número telefónico: 931 708 418

Francesca María del Carmen Delgado Casso

Código: a2010100723

e-mail: francescamdcdc@gmail.com

Número telefónico: 940 194 631

Asesor:

Lic. T.M. Roberto Rojas León.

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Comparación de la Precisión Analítica de la Técnica Directa y de la Técnica Inversa de

Pipeteo en el Procesamiento Manual de la Determinación de Glucosa.

Alejandro Santiago Meneses Lazón. Ángel Adolfo Torres Lara. Francesca María del

Carmen Delgado Casso.

Resumen:

Las determinaciones bioquímicas deben constar de una veracidad y precisión analítica para

el correcto proceder del clínico en la toma de decisiones para con el paciente. Esto crea la

necesidad del control de calidad en el procesamiento de las pruebas bioquímicas, entre estas

las determinaciones de glucosa, que al realizarse de manera manual, produce una

imprecisión muy elevada. Este trabajo de tipo comparativo evalúa la precisión de dos

técnicas de pipeteo al procesar una misma muestra de suero. Se realiza una evaluación de la

técnica directa y de la técnica inversa de pipeteo, determinando la Desviación Estándar

(DS) y el Coeficiente de Variación (C.V.) en cada caso, para poder deducir la precisión

analítica.

Los Resultados arrojaron diferencias mínimas, sin embargo significativas en la veracidad y

precisión analíticas. La técnica inversa (C.V. 3.21%) guarda una precisión mayor que la

técnica directa (C.V. 5.41%). A su vez, la técnica inversa de pipeteo tiene una mayor

cercanía con el valor real (veracidad analítica) mostrando una variación entre 84mg/dL y 94

mg/dL y un promedio de 88 a diferencia de la técnica directa que tiene una variación de

valores entre 88 mg/dL y 106 mg/dL con un valor promedio de 102 mg/dL teniendo en

cuenta el valor referencial determinado por método automatizado de 82 mg/dL. Esto nos

permite concluir que la técnica inversa de pipeteo facilita la precisión analítica en el

procesamiento manual de la determinación de glucosa, y a la vez facilita la veracidad

analítica en la misma.

Palabras clave: Control de Calidad. Glucosa. Precisión. Pipeteo.

Introducción:

La concurrencia de los pacientes a los laboratorios está mediada en la mayoría de casos por

los precios que perfilan, sin embargo, una mayor accesibilidad en los precios indica

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también un procesamiento menos actualizado en cuanto a tecnología con que se realizan los

análisis. Así mismo, en su estudio el año 2012, Sandoval y Colaboradores, indicaron que

los laboratorios con mayor variación en los resultados de las determinaciones de glucosa,

colesterol y triglicéridos fueron los laboratorios que contaban con un procesamiento de tipo

manual (1).

Según los datos de la DISA, entre el año 2010 y 2014 se registraron 252 nuevos

laboratorios de análisis clínico, los cuales aún no cuentan con procesamientos de tipo

automatizado, lo cual según las conclusiones presentadas por el estudio previamente

mencionado, reduce en gran proporción la variación en las determinaciones bioquímicas de

glucosa, colesterol y triglicéridos.

La publicación de la norma técnica NT 072, aprobada por resolución ministerial N°627-

2008 / MINSA establece la necesidad y la obligación de establecer los mecanismos de

control de calidad como un medio en la mejora de la atención asistencial, lo cual promueve

la implementación de un sistema de control de calidad que favorezca notoriamente a los

usuarios, ya sea de forma interna o externa, con la única finalidad de tener un control de los

procedimientos y una mejora de estos para que se pueda establecer la confiabilidad y

exactitud de los resultados.

Las determinaciones bioquímicas en el laboratorio clínico, comprenden valores

cuantitativos que deben contar con la exactitud y precisión posible ya que variaciones en las

determinaciones pueden afectar de forma trascendental las decisiones del clínico. Los

parámetros de control de calidad para laboratorios clínicos como procesos básicos se

definen como precisión y exactitud. La precisión del laboratorio es definida por Fernández

Espinoza (5) como la concordancia entre los replicados obtenidos de un mismo analito en

una misma muestra; es decir la concordancia observada entre los resultados obtenidos al

realizar distintas determinaciones de una misma muestra. Esta precisión, se llega a conocer

mediante pruebas repetidas y se cuantifica mediante la desviación estándar, la cual a su vez

es expresada como Coeficiente de Variación, el cual nos indica el porcentaje de variación

que existe en las distintas determinaciones de una misma muestra (1)(5).

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Sandoval, en su estudio realizado el año 2012, refiere que el CV que se encuentra

solamente en los laboratorios de Lima es de 14,7%, así mismo indica que los laboratorios

automatizados presentan menor variación que los laboratorios que operan con procesos

manuales (1). Esto, se origina en la variación que puedan presentar los operadores, los

instrumentos y los factores ambientales a la hora de realizar las distintas determinaciones.

El procesamiento manual, implica, entre otras cosas, un pipeteo manual constante, lo cual

requiere de una precisión óptima para alterar lo menos posible la exactitud (Veracidad

analítica).

Con la finalidad de contribuir con la implementación y la mejora del control de calidad en

el procesamiento manual de las determinaciones bioquímicas, es que este trabajo opta por

realizar la comparación de la precisión de dos tipos de pipeteo para poder definir cuál es el

más adecuado para la realización manual de las determinaciones de glucosa.

Material y método:

Para esta investigación transversal de tipo comparativo, se realizó la recolección de una

muestra de sangre obtenida por venopunción en la vena basílica del brazo, con ligadura y

sistema de extracción al vacío, sin anticoagulante. Se dejó coagular durante 15 minutos y se

obtuvo el suero por centrifugación a 5000 rpm por 5 minutos. Se colectó el suero en un solo

recipiente y fue nuevamente centrifugado para eliminar posible contaminación hemática

durante la colección del suero. Luego se remitió la muestra a un laboratorio de referencia

para tener una referencia hallada por determinación automatizada de Glucosa, aplicada

también con el método enzimático Glucosa Oxidasa-Peroxidasa. Posteriormente se realizó

la determinación de glucosa de la muestra se realizó por método glucosa oxidasa-

peroxidasa de la casa comercial QCA. Las muestras fueron procesadas con micropipetas de

10-100 ul y de 100-1000 ul ambas de marca Boeco, previamente calibradas según el

manual instructivo de la marca. Las técnicas de pipeteo utilizadas fueron la directa e

inversa tomadas de distintos manuales de uso (6)(7)(8). Se realizaron 20 repeticiones, 10

por cada técnica de pipeteo utilizada. Las reacciones enzimáticas fueron sometidas a lectura

espectrofotométrica a una longitud de onda de 505 nm. Posteriormente, los datos fueron

ingresados al programa Excel y se determinaron: la mediana, la desviación estándar y el

coeficiente de variación. También se realizaron los cuadros de dispersión.

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Resultados:

Los cálculos realizados para la evaluación de los tipos de pipeteo presentaron los siguientes

resultados indicados en la siguiente tabla:

Tabla I

Valores Estadísticos para las Determinaciones Aplicadas con Técnica Directa.

Valor promedio Desviación estándar Coeficiente de Variación %

Técnica Directa 102.5 5.55 5.41

Valor promedio Desviación estándar Coeficiente de Variación %

Técnica Inversa 88 2.82 3.21

Tabla II

Valores Estadísticos para las Determinaciones Aplicadas con Técnica Directa.

En cuanto a los valores, se encuentra la dispersión representada en los siguientes cuadros:

Cuadro I

Dispersión en la Técnica Directa

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Cuadro II

Dispersión en la Técnica Inversa.

El valor referencial determinado por el mismo método pero en equipo automatizado da un

valor de 82 mg/dL.

0 2 4 6 8 10 120

2

4

6

8

10

12

0 2 4 6 8 10 120

2

4

6

8

10

12

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Discusión:

La determinación de glucosa tiene una trascendencia en las decisiones del clínico; estos

factores son los que determinan la importancia de la exactitud y la precisión de las

determinaciones de laboratorio. En la actualidad estas determinaciones no solamente son

realizadas por los laboratorios especializados que utilizan equipos automatizados si no

también por laboratorios que emplean procesos manuales y que implican una variación

mucho mayor. En los últimos 5 años la DISA registró un aproximado de 252 nuevos

laboratorios, los cuales en su posición como emergentes cuentan con procesamientos

manuales. El trabajo de Sandoval y colaboradores registra que la mayoría de laboratorios

con procesamiento manual, cuentan con una variación por fuera de la óptima o aceptable

(1).

En este estudio, la variación con el procesamiento aplicado al pipeteo de tipo I o técnica

directa, indica un coeficiente de variación porcentual de 5.41%, lo que está indicado por

fuera del rango de nivel de calidad.

El valor del coeficiente de variación porcentual de las determinaciones de glucosa aplicadas

con el pipeteo II o técnica inversa, indican un valor de 3.21%, lo cual se encuentra dentro

del rango del nivel de calidad mencionado por Sandoval y colaboradores.

La evaluación de las técnicas de pipeteo nos permiten denotar que la exactitud de la técnica

inversa es mejor que en la aplicación de la técnica directa al haber hallado valores de entre

84mg/dL y 94mg/dL en la técnica inversa, con un valor promedio de 88mg/dL Mientras

que se hallaron valores de entre 89mg/dL y 106 mg/dL en la técnica directa, con un valor

promedio de 102.5 mg/dL teniendo como referencia el valor de la muestra de 82 mg/dL

Conclusión:

La variación de las determinaciones manuales de glucosa en los laboratorios clínicos se ve

menos afectada aplicando la técnica inversa de pipeteo, lo cual reduce la variación y

promueve un mayor acercamiento a la veracidad analítica.

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El estudio nos permite llegar a la conclusión de que el procesamiento manual puede verse

mejorado si es que se procede con una técnica de pipeteo correcta y que permita una

variación menor en las determinaciones de glucosa.

Tenemos también que hacer hincapié en que el volumen aspirado y dispensado por la

micropipeta es relativo al buen uso que se le dé, sin embargo, el presente trabajo indica que

hay una mayor precisión a la hora de dispensar la cantidad programa y no a la hora de

aspirarla (consideraciones funcionales de las técnicas de pipeteo Inversa y Directa

respectivamente).

Referencias Bibliográficas

1. Sandoval Vegas M.H., Barrón Pastor H.J., Loli Ponce R.A., Salazar Criado Y.V.

Precisión en la determinación de glucosa, colesterol y triglicéridos séricos, en

laboratorios clínicos de Lima, Perú. Centro de Investigación de Bioquímica y

Nutrición, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Perú

2012.

2. Nury G. Control y Garantía de Calidad en Laboratorios Analíticos. Disponible en:

http://web.usach.cl/ima/ngras.htm

3. Zhichu C. Allowable limit of error in clinical chemistry quality control. Clin Chem.

1988; 35 (4): 630-1.

4. Peters T. Westgard J. Evaluation of Clinical Chemistry. Philadelphia: W.B.

Saunders Company. 1987:225-37

5. Fernandez Espinoza C. Gestión de la Calidad en el Laboratorio Clínico. 1° ed.

Buenos Aires: Editorial Médica Panamericana. 2005.

6. Guia de Manejo para Micropipetas Manuales. Disponible en:

http://gicuv.univalle.edu.co/07_Laboratorios/01informacion_laboratorios/

02Material-de-consulta/documentos/Gu

%EDa_manejo_micropipetas_agosto_18_2013%20(1).pdf

7. Manual de uso mLine pipette. Sartorius. Disponible en:

www.biohit.com/download.php?id=308

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8. Finnpipette. Focus Multichannel Plus. Guia de Uso. Disponible en:

http://www.pipettesupplies.com/assets/1/7/Finn_Focus_Multichannel_Plus_User_M

anual_2008_(Thermo_Scientific).pdf

9. Comite Europeo de Normalización Medical Laboratorios-Particular requirements

for quality and competence. EN ISO 15189; 2003. Bruselas: CEN.

10. Maroto A, Boqué R, Riu J, Rius X. Incertidumbre y Precisión. Departamento de

Química Analítica y Química Orgánica – Instituto de Estudios Avanzados –

Universitat Rovira i Virgili. España. 2000.

11. ISO 5725 Accuracy (truenes and precision) of measurement methods and results.

ISO, Ginebra, 1994.