E S T R U C T U R A

DE LA

C R O M A T I N A

H1

H2B

H2A

H3

H4

hélice

variable

conservada

La acetilación de histonases una modificación reversiblede los extremos N-terminaldel octámero de histonas.Resultado:• reducción de la unión al ADN• desestabilización de la cromatina

N

Histona Peso molecular Numero de aminoácidos Contenido de aminoácidos básicos

LAS HISTONASson

proteínas básicasaltamente conservadas

El octámero de histonas organiza145 pb de ADN

• Cada núcleo formado por dímeros de histonastiene 6 uniones al ADN que involucran 3vueltas de la doble hélice;

• El octámero de histonas organiza 145 pb de ADN en 1 3/4 vueltas de ADN;

• 48 nm de ADN son empaquetados en un disco de 6 x 11nm

< 6 nm >

<

11

nm

>

ENSAMBLAJE DEL OCTAMERO DE HISTONAS

Tetrámero H3-H4

Octámero Dímero H2A-H2B

Histona H1

Dominio de la proteína globular H1/H5

La histona H1 estabiliza la interacción entre nucleosomas en la cromatina más compacta

Fibras de cromatina

+ extremos N-terminalescargados(unión al ADN sobrenucleosomas vecinos)

Histonas altamenteacetiladas

(especialmente H3 y H4)

Fibra de cromatinade 30 nm

Fibranucleosómicade 11 nm

• ALTO nivel de histonas H1 • Nivel reducido de histona H1

• NO transcripción génica •Posible transcripción génica

solenoide

nucleosoma

ADN

NIVELES DE

ORGANIZACIÓN

DE LA

CROMATINA

E S T R U C T U R A

C R O M O S O M I C A

Compactación nuclear y cromosómica

Compactación mediante el andamiaje cromosómico o la matriz nuclear

Modelo del bucle radialdel cromosoma

1µm

10 µ

m

cromátida cromátida

Cro

mos

oma

mitó

tico

+ 2M NaCl

histonas

+ 2M NaCl

histonas

MitosisBucles de ADN

B A N D A S

C R O M O S O M I C A S

C L A S I F I C A C I O N

TECNICAS DE BANDEO DIFERENCIAL

Bandeo G

Bandeo R

TECNICAS DE BANDEO SELECTIVO

Bandeo C

Bandeo Nor

Bandeo T

QFQ

BANDAS R

BANDAS G

NOMENCLATURA

BANDAS

Bandas G Bandas R

Banda T

IDIOGRAMA DE

CROMOSOMAS

HUMANOS

BANDAS T (REFLEXION)

BANDAS NOR

BANDAS C (CROMOSOMAS CHO – REFLEXION)

BANDAS C

POLIMORFISMO DE LAS BANDAS C

ASIMETRIA LATERAL

BANDEO DE

ALTA

RESOLUCION O

BANDAS

PROFASICAS

BANDEO DINAMICO R

“CHROMOSOME PAINTING”

HIBRIDACION IN SITUFLUORESCENTE

HIBRIDACION

IN SITU

FLUORESCENTE

EN NUCLEOS

INTERFASICOS

HIBRIDACION DE

GENOMAS

COMPARATIVOS

S I G N I F I C A D O

D E L A S

B A N D A S

C R O M O S O M I C A S

B A N D A S C R O M O S O M I C A S• Densidad de genes

• Tiempo de replicación

• Composición de bases

• Secuencias repetidas dispersas

• Organización genómica

• Conformación de la cromatina

GENOMAS DE MAMIFEROS

Secuencias repetidas

SINEs

LINEs

Tiempo de replicación

Composición de bases

Tipo de Subgenoma

Banda cromosómica

Temprana Constitutivo (G-) clarasGC

Tardía Tejido-específico (G-) oscurasAT

Cuerpo del bucle

Fluorescencia

Daunomicina

Topo II

YOYO/MG

YOYO

Tinción selectiva de los buclesTinción

Saitoh y Laemmli, Cell (1994)

Saitoh y Laemmli, Cell (1994)

1

2

Z1

Z3

Z2

Z6Z7

Z5Z9

Z8

Z4

Z10

Z13

Z125

8

8

9

10

7

X

EL C O D I G O

D E

H I S T O N A S

Procesos de modificación covalente

Acetilación

Fosforilación

Metilación

Complejos de proteínas (utilizan la hidrólisis del ATP para alterar la estructura de la cromatina)

Complejos SWI/SNF o ISWI

Las diferentes modificacionescovalentes de las histonas

Modificaciones de residuos en las colas de histonas:* Acetilación*Metilación*Fosforilación

• Acetilación de lisinas y fosforilación de serinas neutraliza la carga neta de las colas (procesos reversibles)

• Metilación de argininas favorece acción de coactivadores(No se describen demetilasas)

• Metilación de lisinas es requisito para meiosis y regula otras modificaciones.

ACETILACION DE HISTONAS

Anticuerpo R5 anti-H4 (FITC) + Hoechst 33258 Imagen digitalizada de la coloración con Hoechst 33258

CHO 9

Cariograma compuesto: a izquierda cromosomas teñidos con Hoechst33258; a derecha los mismos cromosomas marcados con el anticuerpo R5 anti-H4

MECANISMOS PROPUESTOS PARA LOS COMPLEJOS SWI/SNF E ISWI

D O M I N I O S

C R O M O S O M I C O S