UNIVERSIDAD DEL NORESTEREA CIENCIAS QUMICO BIOLGICASBIOLOGA CELULARBILOGA MARISELA MORENO GALDEANOPRCTICA 5 CLULAS SANGUNEASCASTILLO GARCA ANA ESTHERGRADO: 3GRUPO: A15 DE NOVIEMBRE DEL 2014

La sangre es el principal lquido que circula por nuestro organismo y est compuesta en un 45 % por clulas sanguneas (glbulos blancos, glbulos rojos, plaquetas). Posee una matriz extracelular lquida, viscosa y coagulable, que se denomina plasma. En el plasma encontramos las clulas sanguneas o fragmentos celulares llamados plaquetas.La mayora de las clulas sanguneas se producen en la medula sea, que es un tejido en el interior de los huesos como el crneo, las costillas el esternn, las vrtebras los huesos de la cadera y los extremos de los huesos largos.Una vez formadas las clulas sanguneas permanecen en la medula sea y siguen un proceso de maduracin antes de pasar a la circulacin. La hematopoyesis es el proceso de formacin, desarrollo y maduracin de los elementos formes de la sangre (eritrocitos, leucocitos y plaquetas) a partir de un precursor celular comn e indiferenciado conocido como clula madre hematopoytica pluripotencial, Unidad Formadora de Clones, Hemocitoblasto .Las clulas sanguneas son degradadas por el bazo y los macrfagos del hgado. Este ltimo, tambin elimina las protenas y otras sustancias de la sangre

HematopoyesisProceso de Maduracin de las clulas sanguneasFUNCIONES DE LA SANGRE:Es un medio de transporte, llevando oxgeno desde los pulmones al resto de tejidos, transportando el CO2 desde los tejidos a los pulmones, Transportando sustancias nutritivas a tejidos y sustancias de desecho a los riones. Transporta hormonas.Interviene en la regulacin de la temperatura.En el equilibrio cidobase.En el equilibrio osmtico.PLASMA: es una solucin acuosa 90% de agua y un 10% de compuestos inorgnicos como sales minerales (cloruro sdico y cloruro potsico). La funcin de las sales es la de conferir una cierta presin osmtica al plasma.Tambin hay compuestos orgnicos, como glcidos, aminocidos, hormonas, vitaminas y protenas plasmticas. Entre las protenas est la albmina, que es la ms abundante y con mayor peso molecular. La albmina se sintetiza en el hgado continuamenteLas globulinas son otro conjunto de protenas de peso molecular variable. Dentro de ellas se distinguen:Gamma globulinas: forman la inmunoglobulina o anticuerpos, Beta globulinas: protenas encargadas del transporte de hormonas e iones metlicos.Existen unos factores plasmticos de la coagulacin, que son el fibringeno y la protrombina.

Eritrocitos o Glbulos RojosSon las clulas ms abundantes en sangre, en los mamferos han perdido el ncleo, complejo de Golgi, mitocondrias, y centriolos.Presentan forma de disco bicncavo, debido a la ausencia del ncleo.Interviene en el transporte de oxgeno y bixido de carbono La oxigenacin es en pulmones y luego recogen el CO2 del resto de los tejidos Anemia4,5 millones por mm3 en la mujer y de 5,5 millones por mm3 en el hombre, debajo del nivel se produce la enfermedad: la anemia. Cuando hay una baja en la concentracin de hemoglobina .Que puede ser por carencia de eritrocitos o hemoglobinaVida 100 120 das Leucocitos o Glbulos BlancosSon clulas provistas de ncleo, con movimientos ameboides y de abandonar el torrente sanguneo. Los leucocitos emigran continuamente desde la sangre hacia otros tejidos donde realmente realizan su funcinSe clasifican en cinco tipos segn tincin, morfologa nuclear y funcin. Numerosos de 5000 a 9000 por ml3 de sangre. Granulares y no granulares Granulocito neutrfilo: El glbulo blanco es el ms abundante y represente del 50 a 70 % leucocitos sangre perifrica. Tienen funciones bactericidas, fagocitan a las bacterias y luego las degradan con sustancias enzimticas lipoliticas y proteolticas Inflamacin aguda--- bacterias, virus protozoarios o patgenos multicelularesDao fsico por calor o frio, sustancias qumicasCuando existe dao por quemadura astillas sucias Daa tejido conjuntivo, los capilares se inflaman y dejan escapar plasma hacia la zona afectada.Neutrfilos pseudpodos paso aberturas temporales y escapan del vaso (diapdesis) hacia las zonas donde estn proliferando las bacterias y las fagocitan.As los restos de las bacterias y neutrfilos muertos constituyen la pusGranulocitos eosinfilos. Proceden de precursores de la mdula sea. Al madurar son liberados a la sangre, tardan tres a cuatro das en alcanzar los tejidos conjuntivos y all permanecen hasta que mueren al cabo de doce das.Los eosinfilos representan del 1 al 3% de la poblacin de leucocitos en sangre. Pero de cada uno en sangre, hay 300 en el tejido conjuntivo. Son clulas de defensa contra procesos de alergiaGranulocito Basfilo. Clula que se encuentra en muy baja proporcin en el organismo. Nunca se ha observado en algunas especies. Por tanto no se sabe si no tienen o es que no se han visto. En el hombre constituyen el 0,5% de los leucocitos. No se conoce su funcin exacta se cree que intervienen en procesos alrgicosLinfocitos: Representan del 20 al 45%. Son los leucocitos ms pequeos y poseen un ncleo casi esfrico con escaso citoplasma. Vamos a encontrar en la sangre tres tipos de linfocitos:Los linfocitos pequeos, que son los ms abundantes.Linfocitos medianos, los menos abundantes. Y linfocitos grandes, escasos en la sangre pero abundantes en los rganos linfoides. linfocitos Tlinfocitos pequeos, linfocitos BSe diferencian en su origen y funcin, pero morfolgicamente son iguales. Los T se producen en el timo durante el desarrollo embrionario y son capaces de reconocer clulas extraas y reaccionan contra ellas. Los B se originan en diversos rganos dependiendo del grupo de animales. Las aves, se encuentran en las bolsas de Fabrizio (rgano linfoide). En los peces telesteos, en el rin. En los anfibios y reptiles, en el hgado fetal y la mdula sea roja. En los mamferos se encuentra en la mdula sea roja. Los linfocitos B reaccionan frente a un estmulo que libera los anticuerpos. Por ello tambin se les llama clulas de inmunidad hormonal.Monocito: Representan del 2 al 10% de los leucocitos. Son los que poseen mayor tamao. El ncleo del monocito es ovoide en sus formas juveniles y arrionadas en sus formas maduras. Existen unos monocitos que son mviles, emigran al tejido conjuntivo y se convierten all en macrfagos, poniendo as en funcionamiento su funcin fagoctica.OBJETIVOS Realizar la tcnica de extensin o frotis sanguneo. Reconocer las caractersticas de las clulas sanguneas y sus funciones. Practicar la tcnica de tincin mediante el set de tincin rpida para frotis sanguneo Diff-Quik.

INTRODUCCIN

Como todo tejido la sangre se compone de clulas y componentes extracelulares (su matriz celular). Estas dos fracciones tisulares vienen representadas por: Los elementos formes tambin llamados elementos figurados : son elementos semislidos (es decir, mitad lquidos y mitad slidos) y particulados (corpsculos) representados por clulas y componentes derivados de clulas. El plasma sanguneo: un fluido traslcido y amarillento que representa la matriz extracelular lquida en la que estn suspendidos los elementos formes.Los elementos formes constituyen alrededor del 45% de la sangre. Tal magnitud porcentual se conoce con el nombre de hematocrito (fraccin "celular"), adscribible casi en totalidad a la masa eritrocitaria. El otro 55% est representado por el plasma sanguneo (fraccin acelular).Los elementos formes de la sangre son variados en tamao, estructura y funcin, y se agrupan en: las clulas sanguneas, que son los glbulos blancos o leucocitos, clulas que "estn de paso" por la sangre para cumplir su funcin en otros tejidos; los derivados celulares, que no son clulas estrictamente sino fragmentos celulares; estn representados por los eritrocitos y las plaquetas; son los nicos componentes sanguneos que cumplen sus funciones estrictamente dentro del espacio vascular.Las tinciones hematolgicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloracin de las estructuras que componen las clulas sanguneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las clulas sean visual izadas microscpicamente con mayor facilidad.La prctica del frotis sanguneo, tambin llamado extendido, es de gran importancia en hematologa ya que el diagnstico de muchas enfermedades hematolgicas puede realizarse con slo observar las caractersticas morfolgicas de las clulas sanguneas. ANTECEDENTESPaul Ehrlich, es el autor de la tincin que posibilit el mtodo diagnstico de la baciloscopa el cual fundamento en el carcter alcohol-cido resistente a la decoloracin propio del bacilo, para evidenciar utiliz cido ntrico y tio con violeta de genciana o fucsina, en presencia de anilina disuelta en agua. Este genio alemn, naci el 14 de marzo de 1854 en Strehlen. Silesia, fue siempre un gran aficionado a los colorantes y a las tinciones. De hecho su tesis para recibir su ttulo de mdico, vers sobre la teora y la prctica de las tinciones de los tejidos animales. l fue el primero que clasific los colorantes en cidos, bases y neutros, y el mismo que revolucion las tinciones hematolgicas. En 1882 fue la fecha en que comienza la inslita historia de la tincin.Hoy en la actualidad la realizacin de extensiones y tinciones es prctica habitual en el laboratorio. Pese a no realizarse a todas las muestras, al no ser considerado procedimiento de rutina, es necesario en aquellos casos en los que se detecte mediante anlisis previos alguna alteracin.

La correcta realizacin, as como una buena interpretacin de lo observado, permite en muchos casos el diagnstico de hematopatas.OBTENCION Y TINCION DE UN FROTIS DE SANGREIDENTIFICACIN DE LAS CLULAS SANGUNEAS

TIPO CELULARASPECTOTAMAOABUNDANCIA RELATIVAFUNCIONES

ERITROCITOSForma de disco bicncavo, anucleados, dan color rojo a la sangre 7 m

dereferencia

700 por cada leucocito

Transporte de oxgeno 98% y, secundariamente CO2 25%

LEUCOCITOS1 por cada 700 eritrocitos

GRANULOCITOS NEUTRFILOS

Ncleo con 3-5 lbulos unidos por un filamento. Granulacin muy fina, difcilmenteperceptible.

12 m

~1 de cada 2LeucocitosFagocitosis. Pueden abandonar el torrente circulatorio y penetrar en los tejidos para realizar all la fagocitosis.

EOSINFILOS

Ncleo con dos lbulos unidos por un delgado filamento. Las granulaciones acidfilas dan una coloracin rojiza al citoplasma.

9 m

~3 de cada 100Leucocitos

Fagocitan los complejos antgeno-anticuerpo. Su nmero aumentaen las reacciones alrgicasy en las infecciones parasitarias.

BASFILOS

Ncleo voluminoso bilobulado.Los grnulos basfilosson gruesos, tien el citoplasmade color oscuro yfrecuentemente dificultan laobservacin del ncleo.

12 m

~1 de cada 200LeucocitosContienen heparina (anticoagulante)e histamina (vasodilatador).Responsables de los cambiosproducidos en los vasossanguneos durante los procesosinflamatorios.

LINFOCITOS

Ncleo esfrico que ocupala mayor parte de la clula.Citoplasma muy escaso.

6-8 m

~1 de cada 3LeucocitosProducen anticuerpos. Son responsablesdel rechazo de losinjertos y los trasplantes

MONOCITOS

Ncleo ovoide, en forma derin o de herradura. El ncleoes ms claro que el delos linfocitos (cromatinamenos densa)

9-12 m

~1 de cada 15LeucocitosFagocitosis. Se vuelven muyactivos despus de atravesar lapared de los capilares y penetraren el tejido conjuntivo. Fagocitansobre todo virus, hongos y protozoos.

TROMBOCITOSAnucleados. Esfricos, ovaleso alargados. Aparecenen grupos (aglutinados) enlas extensiones.

3 m

Difcil de estimarpor apareceraglutinadosForman un tapn cuando losvasos sanguneos son lesionados.Liberan tromboplastina, queinterviene en la formacin delcogulo, y serotonina , un vasoconstrictor.

Material- Algodn- Alcohol- Lancetas estriles- Portaobjetos- Frascos de tincin- MicroscopioReactivos- Set de coloracin rpida para frotis sanguneos Diff-Quik:

Solucin fijadora(Fast Green en metanol)Evita el deterioro de la estructura celular

Solucin colorante I(Eosina G en tampn fosfato)

Tie de rosa plido el citoplasma y las granulaciones acidfilas(eosinfilas)

Solucin colorante II(Tiazina en tampn fosfato)

Tie de color azul-violeta oscuro los ncleos de las clulas ylas granulaciones basfilas.

Procedimiento Con un algodn empapado en alcohol limpia el dedo que te vayas a pinchar. Coge una lanceta estril por el extremo en el que no est el pincho, para que se mantenga estril y pnchate en la yema del dedo. El pinchazo debe ser profundo, de tal manera que la sangre salga por simple flexin de la falange, sin necesidad de apretar. Una vez recogida la sangre necesaria vuelve a limpiar el dedo con el algodn mojado en alcohol. Deposita una gota de sangre en un extremo del porta. Para realizar el frotis (extensin) se procede como indica el dibujo.

A. Deposita una pequea gota de sangre en un extremo del portaobjetos. Si la cantidad de sangre es excesiva las clulas quedarn apelotonadas en la extensin y ser difcil observarlas.Coloca el segundo portaobjetos formando un ngulo de unos 45 con el primero y asegurndote de que apoya todo el borde.Desliza lentamente el portaobjetos hacia la gota de sangre hasta que entren en contacto. Vers como la sangre se extiende por el borde.

B. Desliza ahora el porta en el sentido contrario en un movimiento rpido y procurando que no pierda el contacto con el otro.C. Todo el procedimiento se debe realizar apoyado en la mesa y sujetando el porta como indica el dibujo.D. Deja secar el frotis al aire antes de comenzar el proceso de tincin.

Sumerge el portaobjetos con la extensin de sangre durante un segundo en la solucin fijadora, djalo escurrir y vuelve a sumergirlo durante otro segundo y repite el procedimiento hasta haber completado diez inmersiones de un segundo. Repite el procedimiento con las soluciones colorantes I y II. Es importante que no se altere el orden de los colorantes, ya que, de otra manera, no se obtendra el resultado esperado. Debes evitar tambin la contaminacin de unos lquidos con otros. Por ltimo debe lavarse el exceso de colorante con abundante agua. El chorro de agua no debe ser fuerte, para evitar que arrastre las clulas sanguneas. La mejor manera es colocar el porta inclinado y dejar caer un pequeo chorro de agua sobre el extremo superior.

ObservacinLas clulas ms abundantes son, con gran diferencia, los eritrocitos. Son clulas anucleadas y quedan teidos de color anaranjado plido. Se puede observar distinta intensidad de coloracin entre el centro y la periferia, debido a su forma caracterstica de disco bicncavo.Si recorremos la extensin lentamente, de vez en cuando nos llamarn la atencin los leucocitos, generalmente ms grandes que los eritrocitos y con sus ncleos intensamente teidos de color azul violeta.Utiliza el cuadro de los elementos formas de la sangre para intentar identificar los distintos tipos de leucocitos; los rasgos que te van a ser ms tiles en la identificacin son: el tamao de las clulas, que podrs determinar por comparacin con los glbulos rojos, la forma del ncleo y la coloracin del citoplasma.Las plaquetas son difciles de identificar porque se confunden con partculas de polvo u otras impurezas que aparecen dispersas por la extensin, pero son bastante abundantes.

DibujosDibuja los tipos celulares que observes, calcula su tamao aproximado utilizando como referencia el de los glbulos rojos e indica el nmero de clulas de cada tipo que has podido ver. Seala qu rasgos te han permitido identificar cada tipo de clula. No olvides poner junto a cada dibujo los aumentos con los que has realizado la observacin.

DIBUJO

ERITROCITOSTamao Aproximado: 7 mObjetivo de 100x

OBSERVACIONES:Se observaron globulos rojos en forma de ficha tambin llamados crenados. Los glbulos rojos tenan una coloracin color salmn,todos tenan el mismo tamao, se apreciaba su concavidad central y su forma circular bien definida,existen en mayor cantidad, en la parte donde se concentr mayor cantidad de sangre los eritrocitos se apelmazaron dando la apariencia de pila de monedas.Algunas plaquetas de tamao muy pequeo en comparacin con el eritrocito y se observan sin ningn ncleo con un color uniforme azul intenso.

DIBUJO

NEUTRFILOSTamao Aproximado:21 mObjetivo de 100x

OBSERVACIONES:Se aprecia semejante al eosinofilo aunque en su citoplasma las granulaciones son menos en comparacin con el eosinofilo, es un color menos intenso, un tono ligero como naranja pardo. Con un ncleo azul dividido en una parte muy delgada o segmento , cuando es segmentado y cuando es banda su ncleo es ms grueso y no presenta esa divisin, la imagen muestra un neutrfilo segmentado

DIBUJO

LINFOCITOSTamao Aproximado: 12 mObjetivo de 100x

OBSERVACIONES:Linfocito presenta un citoplasma con un color azul claro y un ncleo que cubre toda la clula color azul intenso. De un tamao mayor que el eritrocito.

DIBUJO

MONOCITOSTamao Aproximado: 21 mObjetivo de 100 x

OBSERVACIONES:El monocito se ve de gran tamao, presenta un citoplasma de un tono ms claro que el linfocito, color azul celeste, con un ncleo muy grande en forma de rin de un tono color lila o morado claro, sin grnulos en su citoplasma.

DIBUJO

EOSINFILOSTamao Aproximado: 17 mObjetivo de 100 x

OBSERVACIONES:El eosinofilo presenta un color ligeramente anaranjado o salmonado en el citoplasma con abundantes grnulos y un ncleo azulado

DIBUJO

BASFILOSTamao Aproximado: 17 mObjetivo de 100 x

OBSERVACIONES:El basfilo presenta abundantes grnulos en su citoplasma, y ncleo grande color morado ms oscuro que el citoplasma.

Cuestiones Adems de los formes que aparecen en la tabla anterior, qu otros componentes constituyen la sangre? Plaquetas, factores de coagulacin, glcidos, aminocidos, hormonas, vitaminas y protenas plasmticas.

Dnde se forman las clulas sanguneas? En la medula sea (tejido en el interior de los huesos como el crneo, las costillas el esternn, las vrtebras los huesos de la cadera y los extremos de los huesos largos)Conclusiones

Las clulas sanguneas realizan distintas funciones y presentan gran variedad en su morfologa lo que facilita su reconocimiento. Son muy importantes para el organismo, son producidas en la medula sea que se encuentra en el interior de los huesos. Presentan varias etapas de maduracin que dependiendo en la etapa en la que se encuentren ser su morfologa.Bibliografahttp://udlasistemabiologico.blogspot.mx/2010/09/celulas-sanguineas-y-su-funcion.htmlhttp://www.aeal.es/index.php/la-medula-osea/tipos-de-celulas-sanguineas-que-se-generan-en-la-medula-osea