“Digestión de Carbohidratos por

Amilasa Salival”

Bioquímica – Lactancia y Nutrición Biolog.

Elaborado por:

Departamento Ciencias Fisiológicas.

Actualizado por: Dra. Awilda Peña, MD

Agosto 2004

Santiago, Rep. Dominicana Área Ciencias Fisiológicas.

Departamento de Medicina. PUCMM

DIGESTIÓN DE CARBOHIDRATOS POR LA AMILASA SALIVAL INTRODUCCIÓN:

Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran la velocidad de las reacciones metabólicas que ocurren tanto a nivel celular como fuera de ellas, sin sufrir ellas cambios en su estructura y/o función.

Para el proceso de digestión , las biomoléculas ingeridas en la dieta deben ser degradadas a sus componentes más sencillos para ser absorbidas a nivel del tubo digestivo y así llegar al lugar correspondiente a nivel celular donde participarán en diversos procesos metabólicos indispensables para el mantenimiento de una adecuada homeostasis. Entre las principales enzimas que participan en la digestión podemos citar: La Amilasa salival y pancreática para la digestión de carbohidratos; la lipasa y fosfolipasas para la digestión de lípidos; Pepsina y Quimiotripsina para las proteínas.

La digestión de los carbohidratos comienza en la boca, donde los alimentos se mezclan con la Amilasa salival (ptialina) que degrada los enlaces alfa 1,4 del almidón liberándose Maltosa, Glucosa y dextrinas de almidón que poseen todos los enlaces alfa 1, 6 de la amilopectina.

La acción de las enzimas, por sus características físico-químicas, pueden afectarse por la condiciones presentes en el lugar de acción de éstas. Entre los principales factores que pueden modificar la acción enzimática tenemos:

a. La temperatura: Todas las enzimas muestran cierta termolabilidad, aunque para muchas

de ellas el aumento de la temperatura, hasta cierto límite, acelera la velocidad de la reacción. Sin embargo, por que la mayoría de éstas son estructuras proteicas , pueden ser desnaturalizadas a medida que se aumenta la temperatura y así perder su actividad biológica. La temperatura a la cual se observa la máxima actividad enzimática se denomina Temperatura Óptima.

b. El pH:

Por su característica proteica, muchas enzimas por el pH de donde se encuentran pueden cambiar desde un estado ionizado ( Con carga ) a uno no ionizado ( sin carga), afectando así la actividad biológica de las mismas.

Cada enzima posee un pH característico donde puede realizar su función ( pH óptimo), cualquier variación del mismo puede afectar la acción enzimática y así afectar la velocidad de las reacciones químicas.

c. Inductores e inhibidores:

Existen sustancias químicas que pueden afectar la interacción del sustrato y la enzima, ya sea aumentando la actividad enzimática ( Inductores ) o disminuyéndola ( Inhibidores).

Los inhibidores tienen gran utilidad en bioquímica, ya que ayudan a determinar la especificidad de la enzima por el sustrato, la naturaleza de los

grupos funcionales en el mantenimiento de la estructura activa de la enzima. Estos compuestos no son alterados químicamente por la enzima. De acuerdo al tipo de inhibición que ejerzan éstas sustancias, se han clasificado en :

• Inhibidores Reversibles. • Inhibidores Irreversibles.

Otros factores que pueden afectar la acción enzimática: Cantidad de sustrato, hidratación de la enzima, regulación alostérica, regulación por producto, etc. OBJETIVOS: 1. Estudiar el concepto de enzima y los factores que pueden afectar su

actividad biológica. 2. Estudiar el papel de la Amilasa Salival en el proceso de digestión de los

carbohidratos. 3. Introducir otras enzimas que participan en el proceso de digestión de los

carbohidratos.

MATERIALES:

1 Gradilla 18 tubos de ensayo Pipetas ( 5 – 10 ml) 3 Beakers ( 50 o 100ml) Varillas de agitación. Baño termostático Platos petri SOLUCIONES Y REACTIVOS: Solución de almidón al 1 y 2% Reactivo de Benedict. Yodo Solución buffers Agua destilada

Saliva Humana Cloroformo HgCl2 1% Fenol NaF NaCl 0.9%

PROCEDIMIENTO:

a. Obtención de la amilasa salival:

1. Elegir un voluntario que proceda a salivar hasta obtener 4 ml de saliva. 2. Diluir 2 ml de saliva en 18 ml de agua destilada. Esta será la solución

saliva 1: 9 de los experimentos # 1 y 2. 3. Diluir los 2 ml restantes de la saliva obtenida en 8 ml de agua destilada.

Esta será la solución saliva 2:8 del experimento #3.

b. EXPERIMENTACIÓN: EXPERIMENTO #1: Efecto de la temperatura

1. Tome 4 tubos de ensayos. Añada a cada uno 1 ml de solución saliva 1:9 2. Incubar por 5 minutos cada tubo a la temperatura correspondiente:

Tubo #1 0o grados. Tubo #2 Temperatura ambiente. Tubo #3 38o grados. Tubo #4 100o grados.

3. Agregue a cada tubo 5 ml de solución de almidón 1%. 4. Realice la prueba de Yodo cada 3 minutos hasta obtener un resultado

negativo (a los 0, 3, 6, 9 minutos, etc. ). 5. Realice la prueba de Benedict a cada uno de los tubos.

Resultados:

YODO

Tubo Temperatura 0 min 3 min 6 min 9min Benedict 1 0o grados 2 Ambiente 3 38o grados 4 100o grados. Notas:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________.

Experimento #2: Efecto del pH 1. Tome 7 tubos de ensayo y a cada uno agregue 1.5 ml de solución saliva 1:9. 2. Añada a cada tubo 3 ml de la solución buffer correspondiente: Tubo # 1 : Sol. Buffre pH 2.5 Tubo # 2: Sol. Buffer pH 5.4. Tubo #3 : Sol. Buffer pH 6.0 Tubo #4: Sol. Buffer pH 6.8 Tubo #5: Sol. Buffer pH 7.4 Tubo #6: Sol. Buffer pH 8.0 Tubo #7: Sol. Buffer pH 10.0 3. Deje incubar por 5 minutos a una temperatura de 38 grados. 4. Agregue a cada tubo 5ml de almidón al 2 %. 5. Realice la prueba de Yodo cada 3 minutos hasta obtener un resultado

negativo (a los 0, 3, 6, 9 minutos, etc. ). 6. Realice la prueba de Benedict a cada uno de los tubos. RESULTADOS

YODOYO

YODO

Tubo Buffer 0 min 3 min 6 min 9min Benedict 1 2.5 2 5.4 3 6.0 4 6.8 5 7.4 6 8,0 7 10.0 NOTAS_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________.

Experimento # 3: Inhibición e inducción enzimática 1. Tome 6 tubos de ensayo. A cada tubo agregue 1 ml de solución saliva 2:8. 2. Añada a cada tubo 1 ml de la sustancia correspondiente.

Tubo#1 : Cloroformo Tubo #2: HgCl2 1% Tubo #3: Fenol puro Tubo #4: NaF Tubo #5: Agua destilada. Tubo #6: NaCl 0.9%

3. Deje incubar por 5 minutos a 38 grados. 4. Añada a cada tubo de ensayo 5 ml de solución de almidón al 1%. 5. Realice la prueba de Yodo cada 5 minutos hasta obtener un resultado

negativo (a los 0, 5,10, 15 minutos, etc. ). 6. Realice la prueba de Benedict a cada uno de los tubos.

RESULTADOS:

YODOYO

YODO

Tubo Solución 0 min 5 min 10 min 15min Benedict 1 Cloroformo 2 HgCl2 1% 3 Fenol 4 NaF 5 Agua

destilada.

6 NaCl 0.9% NOTAS_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________.