Análisis microbiológico de

aguaRodrigo Pérez Rivera

José Roberto Acono CarbajalGabriel Cordero Martínez

Juanita Tlalmis Corona

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA

Se puede definir el análisis microbiológico como el conjunto de operaciones encaminadas a determinar los microorganismos presentes en una muestra problema de AGUA.

El interés se centra en los microorganismos patógenos, que son los diferentes tipos de bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que transmiten enfermedades

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA

ENFERMEDAD AGENTEORIGEN BACATERIANO

Fiebres tifoideas y paratifoideas

Salmonella typhi, Salmonella Paratyphi A y B

Disentería bacilar

Shigella

cólera Vibrio choleraeGastroenteritis agudas y diarreas

Escherichia coli.CampylobacterYersiniae nterocoliticaSalmonella spShigellas

En el análisis rutinario de aguas no se aíslan patógenos

Podrían no aparecer en muestras de laboratorio pues:◦ Tienen acceso en forma esporádica◦ No sobreviven en el agua por mucho

tiempo Necesitan mucho tiempo para detectarse Si están en número muy pequeño no se

pueden detectar por métodos de laboratorio

Microorganismos indicadores de la calidad del agua

Su presencia en el agua prueba que está polucionada con material fecal de personas o animales de sangre caliente

Se encuentran sólo en aguas polucionadas

Y cuando están presentes en el agua indican que hay patógenos

Se usan microorganismos indicadores:

Las muestras que se tomarán para el análisis deben ser representativas para poder determinar así su calidad microbiológica.

Su análisis debe comenzar antes de que hayan transcurrido 6 horas desde el momento de la toma de muestras.

TOMA DE MUESTRAS PARA ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO

En circunstancias excepcionales, las muestras pueden conservarse a una temperatura de 4ºC durante un periodo máximo de 24 h antes de su análisis.

Para su muestreo debe utilizarse frascos estériles y debe recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml.

Cuando se estime probable que el agua a analizar contenga trazas de cloro, cloramina u ozono, será necesario neutralizar su efecto bactericida en el momento del muestreo.

Se añadirá una cantidad suficiente de tiosulfato sódico. - Para un volumen de 250 ml son suficientes 0,2 ml de una

solución acuosa al 3% de tiosulfato sódico

FUNDAMENTO: Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de morfología bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativa, no esporuladas y que fermentan la lactosa con producción de ácido a 37ºCen 24-48 horas

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS COLIFORMES

El método consiste en desarrollar solo una prueba presuntiva en el que una reacción negativa excluye la presencia del grupo coliforme.

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS COLIFORMES

ColimetríaPrueba Presuntiva

Inoculación en caldo lactosado

Prueba ConfirmativaResiembra a partir de los tubos positivos caldo lactosado

Producción de gas + No producción de gas -Fin de la prueba

Siembra de muestras + en EMBColonias pequeñas, con centro oscuro y brillo metálico + O Siembra en tubos con CLVBBProducción de gas +

Terminación de la pruebaColonias más típicas de siembra por estría EMB Coloración de Gram: Bacilos Gram - no

esporulados

PROCEDIMIENTO. Inocular caldo de peptona con diluciones decimales de la muestra de agua, expresados en 10-1, 10-2, 10-3. Inocular 3 tubos de lactosa bilis verde brillante (a los que se les añade un tubo de Durham invertido) con 1 ml de cada dilución. Incubar a 37ºC (+/-1ºC) durante 24 ó48h.

Número de patógenos

Número de unidades formadoras de colonias totales o de una especie

determinada en un gr o en 1 ml de material investigado bajo condiciones

de cultivo definidas

Método de determinación del número de patógenos

Métodos de determinación del número de gérmenes:

Métodos del número más probable (NMP).

Método de filtro de membrana Método de la placa vertida Método de título

Paralelamente varias series decimales de dilución (mínimo tres) en medio de cultivo líquido.

Número de tubos con crecimiento NMP, tablas de McRady, 100 ml de muestra

Método del número más probable

Filtro estéril sobre unidad de filtración de 0.45

Se filtra cierto volumen de agua: bacterias quedan retenidas

El filtro se coloca sobre soporte absorbente saturado con el medio adecuado. Incubar en cajas de petri especiales que permiten acomodar el soporte y el medio adecuado

Desarrollo de colonias sobre el filtro

Método de filtro de membrana

Ventajas: Examinar grandes volúmenes de

agua Más rápidas que técnicas de tubo Estimación cuantitativa de tipos de

bacterias (coliformes, etc.)

Limitación Aguas con muchos sólidos disueltos o

suspendidos

NMP = #coliformes x 100/ vol filtrado

Manual de ANALISIS BACTERIOLOGICO DEL AGUA, Fuentes de agua y agua potable, Blga. Margarita Aurazo de Zumaeta

http://bvs.per.paho.org/texcom/cd048437/aurazoan.pdf

Análisis microbiológico del agua, Universidad Politécnica de Cartagenahttp://www.upct.es/~minaeees/analisis_microbiologico_aguas.pdf

NOM-127-SSA1-1994, Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano. Límites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilización.

Referencias

CARACTERISTICA LIMITE PERMISIBLE

Organismos coliformes totales

2 NMP/100 ml2 UFC/100 ml

Organismos coliformes fecales

No detectable NMP/100 mlCero UFC/100 ml

Anexos Norma4. Límites permisibles de calidad del agua4.1 Límites permisibles de características bacteriológicasEl contenido de organismos resultante del examen de una muestra simple de agua, debe ajustarse a lo establecido en la Tabla 1.Bajo situaciones de emergencia, las autoridades competentes deben establecer los agentes biológicos nocivos a la salud a investigar.TABLA 1