Proyecto de Proyecto de Vinculación Vinculación ComunitariaComunitaria

CCaañño Martín Peo Martín Peñña a

MicrobiologíaMicrobiología

BIO 206BIO 206

Proposito del Proyecto:Proposito del Proyecto:

El proyecto de Vinculación Comunitaria, El proyecto de Vinculación Comunitaria, permite al estudiante poner en práctica lo permite al estudiante poner en práctica lo aprendido en el laboratorio y a su vez beneficia aprendido en el laboratorio y a su vez beneficia a los miembros de la comunidad aledaña al a los miembros de la comunidad aledaña al Caño.Caño.

El propósito de este proyecto es cuantificar e El propósito de este proyecto es cuantificar e identificar coliformes fecales en las muestras identificar coliformes fecales en las muestras recolectadas.recolectadas.

Ubicación del Caño Martín Ubicación del Caño Martín PeñaPeña

Comunidad de FocoComunidad de Foco

El estudio fue enfocado en Sector La Marina el El estudio fue enfocado en Sector La Marina el cual esta aledaña al caño.cual esta aledaña al caño.

La escuela elemental Barrio Obrero I, que está La escuela elemental Barrio Obrero I, que está en la comunidad, se encuentra afectada por en la comunidad, se encuentra afectada por las condiciones del caño. las condiciones del caño.

Problema Presentado:Problema Presentado:Señales físicas de contaminación Señales físicas de contaminación en la comunidad cercana al Caen la comunidad cercana al Caññoo

Señales físicas de contaminación Señales físicas de contaminación en la comunidad cercana al caen la comunidad cercana al cañño.o.

Desperdicios encontrados:Desperdicios encontrados:Escombros yEscombros y desechos de desechos de origen animal o humano.origen animal o humano.

Hipótesis planteada:Hipótesis planteada:

Esperamos Esperamos confirmar la confirmar la presencia de presencia de coliformes en las coliformes en las muestras de agua muestras de agua recolectadas en el recolectadas en el Caño. Caño.

Estudio Microbiológico Estudio Microbiológico del Aguadel Agua

La presencia de bacterias coliformes sirven como marcadores de La presencia de bacterias coliformes sirven como marcadores de contaminación fecal en cuerpos de aguascontaminación fecal en cuerpos de aguas

Coliformes fecales son bacterias intestinales las cuales son partes Coliformes fecales son bacterias intestinales las cuales son partes de la flora normal en seres humanos y animalesde la flora normal en seres humanos y animales

Los coliformes se distinguen por :Los coliformes se distinguen por : morfología de bacilos Gram negativosmorfología de bacilos Gram negativos facultativos anaeróbicos facultativos anaeróbicos No forman esporas No forman esporas Fermentan lactosaFermentan lactosa

Enterobacteriaceae

Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Enterobacter spp.

Bacterias entericas Bacterias entericas

Klebsiella pneumoniaeKlebsiella pneumoniae

Escherichia coliEscherichia coli

Enterobacter spp.Enterobacter spp.

Estas bacterias son Estas bacterias son causantes de:causantes de:

E. coli E. coli - diversidad de enfermedades - diversidad de enfermedades gastrointestinales como el síndrome de gastrointestinales como el síndrome de Montézuma e infecciones del tracto urinarioMontézuma e infecciones del tracto urinario

K. pneumoniae - K. pneumoniae - septicemia pediatrica, septicemia pediatrica, pneumonia , infecciones del tracto urinariopneumonia , infecciones del tracto urinario

Enterobacter spp. - Enterobacter spp. - infecciones del tracto infecciones del tracto urinariourinario

Flora NormalFlora Normal

Materiales Necesarios:Materiales Necesarios:

Sombrilla (opcional)Sombrilla (opcional) Bastón con soporte de botella Bastón con soporte de botella

para colectar el aguapara colectar el agua Botellas de cristal estérilesBotellas de cristal estériles Gomas plásticasGomas plásticas Etiquetas Etiquetas

MarcadorMarcador Nevera con hieloNevera con hielo GuantesGuantes Botas de gomaBotas de goma Batas de laboratorioBatas de laboratorio CámaraCámara

FotográficaFotográfica De videoDe video

Colección de muestrasColección de muestras

Colección de muestrasColección de muestras

Proceso de colecciónProceso de colección

Análisis de las muestras Análisis de las muestras de agua.de agua.

I.I. Método de Filtración Método de Filtración II.II. Determinación del número mas probable de Determinación del número mas probable de

bacterias/100 mL de aguabacterias/100 mL de aguaIII.III. Análisis cuantitativos empleando diluciones Análisis cuantitativos empleando diluciones

en serie (# de bacterias/mL)en serie (# de bacterias/mL)IV.IV. Pruebas bioquímicas para identificar Pruebas bioquímicas para identificar

taxonómicamente las bacteriastaxonómicamente las bacteriasV.V. Uso de métodos comerciales para la Uso de métodos comerciales para la

identificación identificación

Realización de Análisis:Realización de Análisis:Trabajo en el laboratorioTrabajo en el laboratorio

Trabajo en el laboratorioTrabajo en el laboratorio

Método de Filtración Método de Filtración

Filtración por membranaFiltración por membrana

Extracción de membranaExtracción de membrana

Medio nutritivo para Medio nutritivo para cultivar bacterias cultivar bacterias

coliformes:coliformes: Agar EMB Agar EMB

selectivo para selectivo para coliformes fecalescoliformes fecales

Suprime crecimiento Suprime crecimiento de otros de otros microorganismos microorganismos

Resultados obtenidos:Resultados obtenidos:

Dos tipos diferentes de colonias:Dos tipos diferentes de colonias: Apariencia mucoide y brillosaApariencia mucoide y brillosa Verde metálicoVerde metálico

Sub-cultivosSub-cultivos

Colonias verde metálicas son características de E. coli

Colonias mucoide son caracteristica de Klebsiella

Número mas probable de Número mas probable de Coliformes presentes en cada Coliformes presentes en cada

muestra: estimación muestra: estimación estadísticaestadística

Fase presuntiva Fase presuntiva Fase confirmatoriaFase confirmatoria Fase completadaFase completada

Resultados Obtenidos:Resultados Obtenidos:

MPN: Número Más MPN: Número Más ProbableProbable

Fase confirmativaFase confirmativa

Caldo Lauryl Sulfato Caldo Lauryl Sulfato es selectivo para es selectivo para bacterias Gram bacterias Gram negativas.negativas.

Resultados:Resultados: PositivoPositivo

Producción de gas Producción de gas

NegativoNegativo No producción de gasNo producción de gas

Fase CompletadaFase Completada

Resultados positivos en Resultados positivos en la fase confirmativala fase confirmativa Inoculados en EMBInoculados en EMB

ConfirmaciónConfirmación

Diluciones en SerieDiluciones en Serie

PropósitoPropósito Cuantificar numero de bacterias/mL de aguaCuantificar numero de bacterias/mL de agua

Resultados obtenidos:Resultados obtenidos:

Se observo crecimiento de una colonia en la Se observo crecimiento de una colonia en la dilucion de 1:10,000dilucion de 1:10,000

# de bacterias/mL = (#colonias)(dilución)# de bacterias/mL = (#colonias)(dilución)

1: 1001: 1001: 10001: 1000

1: 100001: 100001: 1000001: 100000 1: 10000001: 1000000 1: 10000001: 1000000

Aislamiento de Colonias:Aislamiento de Colonias:sub-cultivos de dilución en sub-cultivos de dilución en

serieserie

Pruebas de IMViC:Pruebas de IMViC:

IndolIndol Rojo de MetilRojo de Metil Vogues-ProskauerVogues-Proskauer Citrato Citrato

Resultados de IMViCResultados de IMViC

ResultadosResultados Colonias verde metalicoColonias verde metalico

Indol +Indol + Rojo de Metil +Rojo de Metil + VP –VP – Citrato –Citrato – Movilidad +Movilidad +

Colonias mucoideColonias mucoide Indol –Indol – Rojo de metil +Rojo de metil + VP +VP + Citrato +Citrato + Movil -Movil -

Uso de pruebas Uso de pruebas comerciales: Enterotubocomerciales: Enterotubo

Pruebas bioquímicas para identificar Pruebas bioquímicas para identificar taxonómicamente las bacterias.taxonómicamente las bacterias.

Resultados obtenidos:Resultados obtenidos:

Confirmación del género y especie a través de su Confirmación del género y especie a través de su comportamiento metabólicocomportamiento metabólico

ConclusiónConclusión

Hipótesis confirmadaHipótesis confirmada El agua del Caño está contaminada con: El agua del Caño está contaminada con:

Escherichia coli Escherichia coli Klebsiella pneumoniaeKlebsiella pneumoniae

El # de bacterias/mLEl # de bacterias/mL

= (1 colonia)( 1:10000)= (1 colonia)( 1:10000)

= 10,000 bacterias por cada mL de agua= 10,000 bacterias por cada mL de agua