Análisis de polimorfismos en los genes de OPG y LRP5 como

marcadores de riesgo genético para el desarrollo de osteoporosis en

mujeres posmenopáusicas de origen étnico mestizo mexicano.

Alumno: Leticia Cortés EspinosaTutor: Dra. Ileana Patricia Canto Cetina

Marco Teórico

“La osteoporosis es una enfermedad del sistema esquelético caracterizada por una disminución en la densidad mineral ósea y deterioro de la microarquitectura del tejido

óseo”

• Problema de salud por aumento en la expectativa de vida

• La prevalencia varia • Fracturas por osteoporosis es de 35% a 50% • USA 700,000, solo 1/3 es dx• México se estima que 1 millón de mujeres

podrían tener osteoporosis (15%)

• Incidencia: 16% osteoporosis y 57% osteopenia

• Clasificación: • Primaria• Secundaria

Menopausia

• La menopausia es el cese permanente de la menstruación

• La edad promedio de la menopausia en mujeres mexicanas es de 51 años

• Asociado al cese de E2

Factores de Riesgo

• Género • Edad• Deficiencia de estrógenos• Grupo étnico caucásico• IMC bajo• Antecedentes familiares • Tabaquismo • Menarca tardía• Menopausia temprana

• Alcohol• Cafeína• Factores de riesgo genético: 60% al 85% de

las variaciones en DMO• Se han propuesto alrededor de 30 genes que

tienen un rol en la masa ósea y fragilidad

OPG

• Osteoprotegerina• Pertenece a familia de receptores TNF

(TNRSF11B)• Formación, fusión, sobrevida, activación y

apoptosis de los osteoclastos • Gen OPG se localiza en 8q24• Codifica para una proteína de 401 aa

Modelos en animales

• Ratones transgénicos:• Sobreexpresión de OPG, desarrollaron

osteoporosis• Ratones nulos para OPG, desarrollo en forma

temprana de osteoporosis severa• Administración OPG en ratones

ovarectomizados, puede prevenir la pérdida de masa ósea

LRP5

• Proteína 5 relacionada con el receptor de la lipoproteína de baja densidad

• Familia de receptores de superficie celular involucrados en diversos procesos biológicos

• Actúa como receptor de las prpteínas WNT• Localiza 11q13.4• Codifica proteína de 1616 aa • Importante en la regulación de la masa ósea

Modelos animales

• Mutación puede dar osteoporosis severa temprana,como incremento en DMO

• Ratones nulos para LRP5 presentan disminución en la masa ósea , secundaria a una disminución en laproliferación de los osteoblastos, así como a una reducción del depósito de la matriz ósea

Características Clínicas

• Fracturas por compresión de las vértebras• Asintomático• Pérdida de la función • Deformación de la columna• Fractura de cadera• Incapacidad y muerte

• DEXA• Normal: DMO con puntaje de T > -1 desviación estándar

comparado con el promedio para adulto joven.• Osteopenia : DMO con puntaje T entre -1 y -2.5 desviación

estándar comparado con el promedio para adulto joven.• Osteoporosis: DMO con puntaje T > -2.5 desviación

estándar comparado con el promedio para adulto joven. • Osteoporosis severa (osteoporosis establecida): DMO con

puntaje T < -2.5 desviación estándar comparado con el promedio para adulto joven y existen fracturas atribuidas a fragilidad ósea.

Diagnóstico

Justificación

• La osteoporosis es uno de los principales problemas de Salud Pública Mundial, cerca de 1/3 de las mujeres menopáusicas y posmenopáusicas presentan dicha patología y 1/3 desarrollan fracturas

• Las fracturas por osteoporosis son una de las principales causas de incapacidad y el costo por hospitalización es altísimo

México 1 millón de mujeres podría tener osteoporosis la cual se incrementará por aumento en la expectativa de vidaA pesar de la importancia, en nuestro país no tenemos un estudio de mercado relacionado con el costo de hospitalización de las mujeres posmenopáusicas

• Actualmente a nivel mundial se están llevando a cabo diversos estudios

• En México, las poblaciones tienen un acervo genético distinto

• Es prioritario llevar a cabo estudio para establecer si estos polimorfismos, presentan la misma asociación de protección y de esta forma poder ofrecer en un futuro una posible prueba de marcadores genéticos asociados en el desarrollo de osteoporosis

• Tomando en consideración que el estudio DEXA es costoso así como el tratamiento y sus repercusiones importantes en términos de morbi-mortalidad, el llevar a cabo este estudio y de encontrar asociaciones significativas, permitiría establecer un riesgo diferencial en dichas mujeres y así modificar su vigilancia y tener impacto en la economía

Planteamiento del problema

• Debido a los resultados contradictorios de los estudios de asociación de los polimorfismos en los genes de OPG y LRP5 con la presencia de osteoporosis y de que el acervo genético de nuestras poblaciones determinada por el mestizaje es diferente a otras poblaciones del mundo nos planteamos la siguiente pregunta de investigación:

• ¿El polimorfismos K3N del gen OPG, se encuentra asociado con la presencia de osteoporosis en mujeres posmenopáusicas de origen étnico mestizo mexicano de una muestra de la población del DF?

• ¿El polimorfismos A1333V de LRP5, se encuentra asociado con la presencia de osteoporosis en mujeres posmenopáusicas de origen étnico mestizo mexicano de una muestra de la población del DF?

Objetivos General

• Análisis de marcadores genéticos potencialmente asociados con osteoporosis en mujeres posmenopáusicas de origen étnico mestizo-Mexicano de una muestra de la población de mujeres posmenopáusicas de la Ciudad de México, D.F.

Objetivos específicos

• Análisis del polimorfismo K3N del gen de la OPG, en mujeres posmenopáusicas con osteoporosis de origen étnico mestizo-Mexicano de una muestra de la población de mujeres posmenopáusicas de la Ciudad de México, D.F.

• Análisis del polimorfismo A1330V del gen LRP5, en mujeres posmenopáusicas con osteoporosis de origen étnico mestizo-Mexicano de una muestra de la población de mujeres posmenopáusicas de la Ciudad de México, D.F.

Hipótesis

• Las mujeres posmenopáusicas que desarrollan osteoporosis de origen étnico mestizo-Mexicano de una muestra de la población de mujeres posmenopáusicas de la Ciudad de México, D.F., presentan polimorfismos genéticos que predisponen al desarrollo de dicho síndrome

Sujetos

• Mujeres posmenopáusicas • Sin osteoporosis (controles)• Con osteoporosis (casos)• Origen étnico mestizo mexicano

Criterios de inclusión

• Mujeres posmenopáusicas con osteoporosis• Que acepten participar en el estudio y firmen

la carta de consentimiento informado• Que se demuestre con el estudio de DEXA

presencia de osteoporosis• Que sean de origen étnico mestizo-Mexicano• Cese de menstruación de más de12 meses

Criterios de exclusión • Mujeres posmenopáusicas con osteoporosis• Mujeres posmenopáusicas que hayan tomado por largo

tiempo fármacos que pueden afectar el recambio óseo• Mujeres posmenopáusicas con antecedentes de enfermedades

que afecten el metabolismo óseo (relacionadas con alteraciones de la hormona paratiroides, diabetes mellitas, enfermedades hepáticas, falla renal y displasias óseas)

• Mujeres posmenopáusicas con antecedentes de enfermedades relacionadas con alteraciones en el metabolismo de la vitamina D

• Ooforectomia bilateral antes de los 45 años de edad• Histerectomía • Insuficiencia ovárica prematura• Hipogonadismo hipogonadotrópico

Criterios de inclusión

Mujeres posmenopáusicas controles• Que acepten participar en el estudio y firmen

la carta de consentimiento informado• Que sean de origen étnico mestizo-Mexicano• Que se demuestre con el estudio de DEXA

ausencia de osteoporosis• Cese de menstruación de 12 meses o más

Criterios de exclusión • Mujeres posmenopáusicas controles• Mujeres posmenopáusicas que hayan tomado por largo tiempo o

que en la actualidad tomen fármacos que pueden afectar el recambio óseo (corticoesteroides, anticonvulsivantes o heparina)

• Mujeres posmenopáusicas con antecedentes de enfermedades que afecten el metabolismo óseo

• Mujeres posmenopáusicas con antecedentes de enfermedades relacionadas con alteraciones en el metabolismo de la vitamina D

• Ooforectomia bilateral antes de los 45 años de edad• Histerectomía • Insuficiencia ovárica prematura• Hipogonadismo hipogonadotrópico

• Diseño de estudio: observacional, transversal, comparativo

Estudio DEXACuestionario Carta de consentimiento informado 5 ml de sangre periféricaExtracción de DNA

Aspectos éticos

• Cuenta con la aprobación del Comité Nacional de Investigación Científica, así como de los comités de ética del C.M.N. 20 noviembre, ISSSTE y Hospital General Tacuba, ISSSTE

• Las pacientes que acepten participar en este estudio firmarán una carta de consentimiento informado, dicha carta se estructuró acorde a con las disposiciones de la Secretaría de salud en materia de investigación en humanos

Anexo • Nombre:__________________________________________________________________• • Edad:_________________ • Género:__________________ • • Lugar de Residencia:______________________________ • Tiempo _______________________• • • Peso :________kg. Estatura :_________ m. • • Diagnóstico: (diabetes, Hipertensión Arterial; artritis, Histerectomia, Osteoporosis) Especifique tratamiento y tiempo

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

• • Fuma (Si) (No)• Si la respuesta es si ¿cuantos cigarros fuma a la semana?• Desde cuando:____________________________ Marca de Cigarrillos:______________• • Ingiere bebidas alcoholicas mas de una ves por mes (Si) (No)• Si la respuesta es si ¿Cuántas copas o cervezas? ________________________________• Desde cuando:_____________________ Tipo de bebida:__________________________• • Realiza ejercicio físico: (Si) (No) • Si la respuesta es si. ¿De que tipo, cuanto tiempo y con que frecuencia lo realiza?

• Ingiere Café más de una vez por semana: (Si) (No)• Si la respuesta es si ¿Cuántas tazas bebe a la semana o al día?______________________• Desde cuando?_____________________ tipo de café:_____________________________• • Acostumbra beber refresco más de una vez por semana: (Si) (No)• Si la respuesta fue si ¿Cuántos vasos de refresco toma por semana o día?_____________• Desde cuando?______________ Marca de refresco más frecuente?___________________• • Consume leche o derivados lácteos mas de una vez por semana? (Si) (No)• Si la respuesta es si ¿Cuántas veces por semana o por día?__________________________• Desde cando?___________________ De que tipo? ________________________________• • Actualmente ingiere calcio, vitamina D (o algún complemento dietético): (Si) (No)• Si la respuesta es si especifique tipo y dosis: ___________________________________• Desde cuando? ____________________________________________________________• • Edad de la menarca:____________________ • Edad de Menopausia:__________________

• Tiempo transcurrido desde el cese permanente de la última menstruación (año)________• • Utiliza o utilizó tratamiento sustitutivo con estrógenos: (Si) (No)• Si la respuesta es si desde cuando?___________________________________________• • • Utiliza o utilizó tratamiento con glucocorticoides: (Si) (No)• Si la respuesta es si desde cuando?___________________________________________• • Tiene antecedentes de fracturas (vértebras, cadera) en sus familiares antes de los 50 años de edad:

(Si) (No)• Si la respuesta es si, quienes?___________________________________________• • • • Aplico: Nombre_____________________ Fecha___________________________•

Carta de consentimiento • México, D.F., a_______________________________________________________• • Por medio de la presente yo, _____________________________________________________________• • autorizo mi participación en el proyecto de investigación titulado “ANÁLISIS DE POLIMORFISMOS GENÉTICOS ASOCIADOS

A OSTEOPOROSIS EN MUJERES POSMENOPÁUSICAS DE ORIGEN ÉTNICO MESTIZO-MEXICANO”• • El objetivo de este estudio es conocer mediante un estudio realizado en un laboratorio acerca de diversos genes los cuales

tienen el material de la herencia, las alteraciones que pudieran condicionar la presencia de osteoporosis. • • Se me ha explicado que mi participación consistirá en: completar un cuestionario acerca de diversos factores de riesgo

para desarrollar osteoporosis (como dieta, ingesta de alimentos, medicamentos etc), la toma de una muestra única de 5 ml de sangre, así como la realización del estudio que me permitirá saber si tengo o no osteoporosis por medio de un estudio donde medirán mi densitometría ósea con radiografías (estudio llamado DEXA).

• Declaro que se me ha informado ampliamente sobre los posibles riesgos, inconvenientes, molestias y beneficios derivados de mi participación en el estudio, que son los siguientes:

• Riesgos y molestias: • por la toma de sangre: malestar y dolor, formación de hematoma o morete en el sitio del piquete de la vena.• por la extracción de sangre: ninguno• por la prueba de medición de la densitometría ósea (con el método de DEXA): este al ser un procedimiento simple,

rápido y NO invasivo, no requiere preparación especial y se considera que no tiene efectos secundarios y sus riesgos son considerados mínimos.

• Beneficios:• • Las mujeres posmenopáusicas que accedan a participan en el estudio se les llevará a cabo el estudio de la

densitometría ósea (método de DEXA), la cual no se les practica rutinariamente.• El examen de densidad ósea o DEXA es el método disponible más preciso para el diagnóstico de la

osteoporosis, enfermedad que frecuentemente afecta a las mujeres después de la menopausia y también permite estimar el riesgo de fractura en los pacientes, contribuyendo a seleccionar los casos que deben recibir tratamiento médico y de esa forma evitar posibles fracturas.

• Además se generará información para determinar la asociación entre polimorfismos en genes y el desarrollo de osteoporosis en mujeres posmenopáusicas, lo que permitirá hacer prevención y dar tratamiento oportuno.

• • Entiendo que conservo el derecho de retirarme o retirar mi muestra biológica del estudio en cualquier

momento en que lo considere conveniente, sin que ello afecte la atención médica que recibo en el Instituto. Asimismo, se me ha informado que esta muestra además será almacenada a 4°C durante un período de 8 años en la Unidad de Investigación Médica en Biología del Desarrollo, en el Centro Médico Nacional, Siglo XXI, del IMSS, México, D.F., y a partir de la toma de la muestra y pasado este tiempo será desechada.

• • El investigador principal se ha comprometido a darme información oportuna sobre cualquier procedimiento

alternativo adecuado que pudiera ser ventajoso para mi tratamiento, así como a responder cualquier pregunta y aclarar las dudas que le plantee acerca de los procedimientos que se llevarán a cabo, los riesgos, beneficios o cualquier otro asunto relacionado con la investigación o con su tratamiento.

• • Asimismo, se me ha informado que de encontrarme osteoporosis, se me ha asegurado que se me

informará de la presencia de dicha enfermedad, así como que se me dará seguimiento y tratamiento adecuado en la clínica del IMSS que me corresponda.

• •

• El investigador principal ha dado seguridades de que no se me identificará en las presentaciones o publicaciones que deriven de este estudio y que los datos relacionados con mi privacidad serán manejados en forma absolutamente confidencial. Para cumplir la anterior, el investigador utilizará para la creación de la base de datos (que tendrán mi información clínica, así como las respuestas del cuestionario acerca de mis datos que se me aplicará), número de folio (NO empleará mi nombre) para identificarme y de esa forma conservar mi anonimato.

• • Datos de la investigadora principal a los cuales puede comunicarse en caso de dudas o preguntas relacionadas con el

estudio: Dra. Ileana Patricia Canto Cetina, U.I.M. en Biología del Desarrollo, 2do. Piso del edificio de la Coordinación de Salud en el Trabajo, Av. Cuauhtémoc 330, Col. Doctores, Delegación Cuauhtémoc C.P. 06720 Teléfono: 56276900 ext. 21665. correo electrónico: ipcanto@yahoo.com.mx.

• Asimismo, en caso de tener dudas acerca de este protocolo de investigación puede solicitar información al Comité de Ética en Investigación en Salud al correo electrónico: conise@cis.gob.mx

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Investigador Responsable Señora Dra. Ileana Patricia Canto Cetina• • • ________________________ ____________________________• Testigo Testigo