Aislamiento e Identificación Del Clostridium Botulinum

7/21/2019 Aislamiento e Identificacin Del Clostridium Botulinum

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AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DEL CLOSTRIDIUM BOTULINUM

I. INTRODUCCIN.

Clostridium botulinum es una bacteria Gram positiva, anaerobia, que seencuentra por lo general en la tierra y es productora de la toxina botulnica, el

agente causal del botulismo. Estos microorganismos que tienen forma de varillas

y se desarrollan mejor en condiciones de poco oxgeno. Las bacterias forman

esporas que les permiten sobrevivir en un estado latente hasta ser expuestas a

condiciones que puedan sostener su crecimiento. La espora es ovalada

subterminal y deformante. Es mvil por flagelos eritricos, no produce c!psula y

es proteolco y lipoltico. "on miembros del g#nero $lostridium, uno de los

grupos m!s numerosos entre las formas Gram positivas. $. botulinum. %uedescubierto y aislada en &'() por Emile van Ermengem. *ay siete tipos de

toxinas botulnicas designadas por las letras + hasta la G slo los tipos +, -, E y

% pueden causar enfermedad botulismo/ en los seres humanos. Esta enfermedad

es muy com0n en muchas partes del planeta. Las esporas de $. botulinumpueden sobrevivir en la mayora de los ambientes y son difciles de matar.

ueden sobrevivir temperaturas de ebullicin del agua a nivel del mar, de modo

que muchos enlatados son hervidos a altas presiones para obtener una mayor

temperatura, suficiente para destruir las esporas. El botulismo es una enfermedad

de declaracin obligatoria. uede aparecer en cualquier alimento de origen

animal y vegetal. En carnes y alimentos proteicos de baja acide1 provoca, a

veces, gas y olor desagradable. $on los ahumados y las especias se puede

enmascarar el buen olor por el olor propio de dichos alimentos. El crecimiento

de la bacteria puede ser prevenida con acide1, una alta concentracin de a10cardisuelto, altos niveles de oxgeno o poca humedad. or ejemplo, en baja acide1,

vegetales, enlatados como los atunes que no hayan sido calentadas lo suficiente

para destruir las esporas, puede proveer un medio libre de oxgeno que le

permita a las esporas crecer y producir la toxina. or otro lado, los tomates que

sean suficientemente !cidas para prevenir crecimientos, a0n si las esporas

estuviesen presentes, no presentan peligros para los consumidores. La miel, el

jarabe de ma1 y otros aditivos dulces pueden contener las esporas de $.

botulinum, pero las esporas no pueden crecer en soluciones con tan altas

concentraciones de a10cares sin embargo, cuando el dulce es diluido en el

ambiente de bajo oxgeno y baja concentracin del jugo g!strico de un infante,las esporas pueden desarrollarse y producir la toxina. 2an pronto como los reci#n

nacidos comiencen a consumir alimentos slidos, el !cido g!strico se vuelve

suficiente para permitir el crecimiento de la bacteria. En neonatos, la

enfermedad puede ser secundaria a la coloni1acin del colon por $lostridium

botulinum. La neurotoxina del $. botulinum es una protena de &34.444 daltons

con una sub unidad + cadena ligera o +/ con actividad neurotxica y una

subunidad - cadena pesada o -/ que protege a la neurotoxina de la accin de

los !cidos g!stricos. La toxina es ingerida junto con los alimentos, son

absorbidas a nivel duodenal y act0an a nivel de las vesculas sin!pticas

colin#rgicas impidiendo la liberacin de acetil colina. $omo resultado de esta


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accin el paciente desarrolla par!lisis fl!ccida, pudiendo morir por par!lisis

respiratoria.

II. OBJETIVOS.

5eterminar la presencia de la toxina botulnica en muestras de conserva

de at0n.

%amiliari1arse con los m#todos reali1ados para la seguridad alimentaria y

conocer los peligros de la toxina en alimentos.

$onocer las diferentes enfermedades y los medios de contaminacin por

esta bacteria $lostridium botulinum.

III. MARCO TERICO.


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1. ATN EN CONSERVA

El at0n es un alimento saludable y nutritivo, alto en protenas y bajo en grasas y

caloras.

Entre los nutrientes esenciales que contiene est!n6 calcio, niacina, vitaminas +,- y 5, y !cidos 7mega 8.

Las protenas del at0n, como las de otros peces, se digieren con facilidad y se

metaboli1an con gran eficacia. 9na lata de ) on1as de at0n puede aportar un

tercio de la porcin diaria recomendada de protenas y un :4; de la dosis diaria

recomendada de vitamina -&


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2emperaturas entre 8o $ y :3=34> $, sobreviviendo en la congelacin.

Etiolo'(&.

Las especies m!s importantes asociadas al consumo de alimentos contaminados

y mayormente causantes de toxiinfecciones alimentarias son6 $lostridiumbotulinum cuya toxina afecta al sistema nervioso, causando la toxiinfeccin

llamada botulismo y $lostridium perfringens cuya enterotoxina afecta al

sistema digestivo.

). V*AS DE TRANSMISIN.

Las toxinas de la bacteria $lostridium se pueden transmitir a las personas a trav#s

del consumo de alimentos contaminados por falta de higiene e inadecuadamanipulacin de los alimentos.

Co#t&mi#&$i+# ,!$&l. En las explotaciones ganaderas por contacto con losalimentos derivados de los animales.

Co#t&mi#&$i+# $ru-&d&.En las fases posteriores de transformacin de losalimentos, y en la preparacin y cocinado de los alimentos en el hogar.

!rso#&s. Los manipuladores de alimentos pueden ser portadores de$lostridium, de forma que al manipular los alimentos, sin tener en cuenta

unas buenas pr!cticas de higiene, contaminan los alimentos.

A'u&. El agua de riego puede estar contaminada con $lostridiumtransmiti#ndose a las frutas y verduras frescas regadas con dicho agua.

/. CLOSTRIDIUM botulinum.

Es un bacilo Gram positivo largo, anaerobio, que forma esporas subterminales.

Las esporas son altamente resistentes pudiendo sobrevivir en alimentos

incorrectamente procesados.

Est! ampliamente distribuidos en la naturale1a, suelos, agua, vsceras de

cangrejos y bivalvos y en el tracto intestinal de mamferos.roduce una potente neurotoxina de la que existen siete tipos6 +, -, $, alfa,

5, E, % y G. Es posible dividir a los organismos en cuatro tipos ? a ?@/ seg0n la

toxina que producen y su actividad proteoltica.

Los tipos +, -, E y raramente el % son los que causan enfermedad en los

humanos, mientras que los tipos $ y 5 causan botulismo en animales, como los

mamferos, p!jaros y peces. El tipo G identificado en el aAo &(B4 no ha sido

relacionado como causa de enfermedad en humanos y animales.

Los pertenecientes al grupo ? producen toxinas +, - o % y son proteolticas en

los cultivos. Los del grupo ?? producen toxinas -, E o % y no son proteolticos.

La enfermedad humana est! vinculada a los tipos ? y ?? y a la toxina +principalmente.


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).1 CLASIFICACIN

"e reconocen 8 formas cl!sicas de botulismo dependiendo de la forma de

adquisicin de la toxina6

&. El 0otulismo &lim!#t&rio. "e produce por ingestin de toxinapreformada presente en los alimentos que no hayan sido envasados o

conservados apropiadamente.

0. El 0otulismo %or !rid&s. $ausado por diseminacin sist#mica de latoxina producida por el microorganismo que se multiplica y la produce

en las misma, se asocia con traumatismos, ciruga, inoculacin

subcut!nea de herona, y sinusitis por abuso intranasal de cocana.

$. El 0otulismo i#,til. es el resultado de la coloni1acin intestinal delmicroorganismo en niAos menores de un aAo de vida. En este grupo

etario, la flora normal intestinal no se ha desarrollado al grado queprevenga la coloni1acin por estas bacterias, como ocurre en los adultos

sanos.

d. Botulismo i#t!sti#&l d!l &dulto, producido por la coloni1acin digestivaen adultos mayores por $lostridium botulinum, seguida de la absorcin

de la toxina. Estos pacientes pueden tener anticuerpos frente a la toxina.

En cualquiera de las formas clnicas de botulismo humano, e igual en el

botulismo animal, la toxina penetra en la sangre desde el tubo digestivo

cuando se ha ingerido preformada con un alimento, o cuando se ha

producido por la bacteria que coloni1a el tubo digestivo niAos pequeAos

o adultos/, o en casos excepcionales desde una herida infectada por la

bacteria. La toxina absorbida se fija irreversiblemente a las uniones

neuromusculares de las neuronas motoras, impidiendo la liberacin de

acetilcolina, y provocando la par!lisis fl!ccida o la atona muscular.

La clnica se caracteri1a por una par!lisis aguda fl!ccida, que suele

comen1ar con afectacin bilateral de los pares craneales afect!ndose los

m0sculos de la cara, cabe1a y faringe, y luego desciende sim#tricamente

para afectar a los m0sculos del trax y de las extremidades. La muerte,

cuando ocurre, es debida al fracaso respiratorio por la par!lisis de la

lengua y m0sculos farngeos que ocluyen las vas a#reas superiores, o

bien por par!lisis del diafragma y de los m0sculos intercostales. or esta

ra1n, los pacientes deben recibir antitoxina botulnica y los cuidados

intensivos respiratorios necesarios.

!. C!s recientemente, se ha identificado una cuarta forma de botulismo,denominada botulismo por coloni1acin intestinal en el adulto. 5e

patog#nesis similar al botulismo infantil, se produce en los niAos

mayores de un aAo y adultos en presencia de colitis, con una historia

reciente de ciruga intestinal o en asociacin con otras condiciones que

puedan ocasionar un desequilibrio local o extendido en la flora intestinal

normal.


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). ATO23NESIS$lostridium botulinum est! ampliamente distribuido en el medio=ambiente y

puede encontrarse en la tierra, en sedimentos de agua dulce y salada, en el

polvillo de los hogares y en la superficie de muchos alimentos. Las toxinas

producidas son protenas citoplasm!ticas &34 D5a/ que se liberan por lisis de

las c#lulas.Cientras las esporas sobreviven < h a &44>$ pero se destruyen r!pidamente a

&$/, la exotoxina es termol!bil. "e inactiva luego de un minuto a '3>$ o

despu#s de cinco minutos a '4>$.

+unque el modo de entrada de la toxina puede diferir entre las diferentes formas

de botulismo, una ve1 que la toxina ingresa en el torrente sanguneo, act0a de

una manera similar para producir los sntomas clnicos. La toxina llega a los

receptores en las terminales presin!pticas colin#rgicas, es internali1ada en

vesculas y luego es translocada al citosol. En el citosol, la toxina promueve la

protelisis del sistema de exocitosis inducido por calcio para interferir con la

liberacin de acetilcolina. El bloqueo en la liberacin del neurotransmisor en laterminal es permanente y la recuperacin slo ocurre cuando el axn produce

una nueva terminal para reempla1ar a la daAada por la toxina.

Los efectos de la toxina se limitan al bloqueo de las terminales nerviosas

colin#rgicas perif#ricas, incluyendo las uniones neuromusculares, terminales

nerviosas parasimp!ticas post=ganglionares y ganglios perif#ricos. Este bloqueo

produce una par!lisis bilateral descendente caracterstica de los m0sculos

inervados por los nervios autnomos colin#rgicos craneales y espinales, pero no

involucra los nervios adren#rgicos o sensoriales. 5iagnstico de -otulismo en

muestras clnicas y de alimentos

).) MORTALIDAD

Las muertes que ocurren dentro de las primeras < semanas son generalmente

debidas a la incapacidad para reconocer la severidad de la enfermedad o

infecciones pulmonares o sist#micas como complicaciones secundarias. La

duracin media de la asistencia respiratoria para aquellos que la requieren es de

) a ' semanas, pero puede prolongarse hasta B meses.

E# !l 0otulismo &lim!#t&rio, la severidad de la enfermedad se asocia con eltipo de toxina. La intubacin se requiere en el )B; de los pacientes con

botulismo tipo +, 3


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La proporcin de caso=mortalidad infantil &.8;/ es menor en comparacin al

botulismo alimentario, pero hay una proporcin del 3; de recadas asociadas

con el botulismo infantil luego de la resolucin de los sntomas clnicos.

L& %ro%or$i+# d! $&so4mort&lid&d %&r& !l 0otulismo d! !rid&s. Es del &4;

y los sobrevivientes pueden tener una morbilidad tan significativa que requieracuidado m#dico prolongado. La ocurrencia de un episodio de botulismo no

necesariamente confiere inmunidad hacia los episodios subsiguientes. La

inmuni1acin con un toxoide pentavalente est! disponible, pero slo se utili1a en

!reas de alto riesgo como personal de laboratorio y determinado personal militar.

)./ TRATAMIENTOS DE INACTIVACIN.

Los fabricantes de alimentos envasados deben someter a sus productos a una

temperatura elevada durante un periodo de tiempo determinado para garanti1arque se inactivan las esporas de $lostridium.

Las toxinas de $lostridium botulinum son relativamente sensibles al calor y se

inactivan por calentamiento a '4 4 $ durante &4 minutos o un proceso

equivalente.

+simismo, es necesario mantener la cadena de fro durante el transporte,

almacenamiento y distribucin de los alimentos crudos susceptibles de ser

contaminados con $lostridium.

IV. MATERIALES.

Cedios de cultivo.

Cuestra.

5ilucin

Latas de at0n.

-alan1a

2ubos de ensayo con tapa rosca

Cechero

ipetas

%rascos est#riles

Gradillas

$ampana de anaerobiosis

$entrifuga

+lcohol

V. ROCEDIMIENTO.

1 10-310-210-1


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rueba exploratoria de presencia de la toxina6

1 ml1 mlHomogenizar

9 ml

H2O SP

9 ml

H2O SP

1 ml1 ml

1 ml

25g de muestra en 225ml de agua salina

peptonada 0,1% (H2O p)

25g de muestra en

225 ml de agua

salina peptonada a

doble concentracin

gar !S"

"on

Sobre#amada2

$nlatado en la in#ubadora luego seino#ula en agar nutritio&

". 'O!*+ -OO

". P$-/-*$S $-O

34# +elo de

tiogli#olato 16720 8

$-O'*OS*S

Sele##ionar

aproimadamente

10 #olonias tipos

+elo de #arne

#o#ida ("++) +elo de tiogli#olato

(!"+)

"ultio

!S" #on gema

de oo

"ultio

!S" #on gema de

oo

37c/ 24h

PRUEBAS BIOQUIMIAS

+elo de

la#tosa

elatina

gar nitrato

+otilidade

+elo de leite:erro

34# 328

$-O'*OS*S ESTUFA

!est de

:er.la#tosa (;)

8idrol.elatina

(;)

!est de nitrato(;)

motilidade

(7)

!est de

#oagulado

tempestuosa

;

*n8ibi#i


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2riturar u homogeni1ar el alimento muestra/.

oner en el tubo de dilucin con tapa rosca muestra a igual al peso de la solucin salina a

utili1ar dilucin &F&/.

$entrifugar el homogeni1ado a alta velocidad, preferentemente en centrfuga refrigerada se

tendr!n dos tubos, o sea, dos muestras/.

$ogemos uno de los tubos centrifugados y lo sometemos a baAo Cara por &4 min. agua

hervida/.

5el contenido, inyectamos 4.3 mL al ratn de prueba, esto con aguja detuberculina


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En la pr!ctica reali1ada los resultados salieron positivos .en el at0n haba

la presencia de $lostridium botulinum

VII. DISCUSIONES.

El botulismo es una enfermedad grave, en ocasiones mortal producido

por un germen de amplia difusin en la naturale1a y que puede

encontrarse sobre todo en la tierra y tambi#n en el intestino de las

personas y de los animales u otros lugares. Lo produce una bacteria

llamada $lostridium botulinum, capa1 de elaborar la toxina botulnica,

que es uno de los venenos m!s activos que se conocen y que permanece

en el alimento sin alterarlo a simple vista. El botulismo aparece por la

ingestin de esta toxina

La dosis letal de esta bacteria para un humano de B4 Dg de peso, sera de4,4(=4,&3 picogramos de toxina por va intravenosa o intramuscular,

4,B4=4,(4 picogramos por inhalacin y B4 microgramos por va oral ten

en cuenta que un picogramo equivale a &4=&< gramos, es decir

4,44444444444& gramos y un microgramo equivale a &4=) gramos, es

decir, 4,44444& gramos/.

!eben basarse en un control e"ica# de la preparacin $ procesamiento

de los alimentos comerciales en conser%a &a$ algunos alimentos 'ue

son m(s propensos 'ue otros a contener to)ina botul*nica El botulismo

transmitido por alimentos es causado generalmente cuando se consumenalimentos enlatados con ba+o contenido en (cido

,os alimentos con p& in"erior a -.5 es m(s di"*cil 'ue sean causa de

botulismo $a 'ue a este p& / botulinum es incapa# de multiplicarse $

elaborar la to)ina 0este es el caso de los #umos de "rutas. alimentos

marinados en %inagre. etc/1/ Por el contrario los alimentos con p& igual

o superior a -.5 pueden causar botulismo. $a 'ue en ellos es posible la

multiplicacin $ produccin de to)ina 0este es el caso de carnes.

pescados. legumbres. platos preparados. etc/1/

Son e+emplo de alimentos peligrosos +amn curado o a3umado.

conser%as de pescado o %egetales 0sometidas a un tratamiento t4rmicoinsu"iciente para destruir las esporas1. etc/ ,as latas de conser%as

contaminadas con / botulinum suelen estar abombadas. aun'ue esto no

suele ocurrir con el tipo E/

,a principal medida de pre%encin es la correcta manipulacin de los

alimentos $ preparacin/ Al ser una bacteria termol(bil. 3er%ir los

alimentos la inacti%ar(

o debemos de consumir alimentos en%asados 'ue tengan alterado el

en%ase 0abombado1 o el aspecto 0cambio de coloracin6consistencia1 o

el olor 0rancio1 Promo%er medidas de 3igiene domiciliaria $peridomiciliaria para e%itar o minimi#ar la contaminacin con tierra o


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I5. BIBLIO2RAF*A. -acterial ?nfections *umans6 Epidemiology and $ontrol. Ed. +.".Evans and

.".-rachman. lenum ublishing $orporation. &((&.

Kebber I2, *atheJay $L, "t. Louis CE. -otulisme. ?n6 *oeprich 5, Iordan

C$, Honald +H. ?nfectious diseases6 a treatise of infectious processes. 3th ed.

hiladelphia6 I- Lippincott $o., &((:6&&'3=(:.

PRINCIPALES MEDIDAS DE PREVENCIN

En la cadena alimentaria

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