ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA SALIVAL ALIMENTACIN HUMANA Y ANIMAL

ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA SALIVAL ALIMENTACIN HUMANA Y ANIMAL

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA SALIVAL

CURSO: ALIMENTACION HUMANA Y ANIMAL

DOCENTE: CALDERON PEA, ABHEL ARTHUR

ALUMNOS:

MARTINEZ GAMBOA, MERY. MEDINA ZAVALETA, YONEL MAURICIO NARVAEZ, ANNIE OLIVARES ROJAS, RONY GARCIA ROSAS, ARTURO. AO: VI. B

TRUJILLO - PER2013

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LAAMILASA SALIVAL

I. INTRODUCCIN.

Las enzimas son biocatalizadores que actan de manera especfica en los diversos procesos qumicos del metabolismo, disminuyendo la energa de activacin do tos mismos en condiciones celulares (temperatura, pH, etc.). Bajo estas condiciones la actividad enzimtica es ptima, pero si se varan las condiciones del medio de reaccin (pH, temperatura, agentes desnaturalizantes...), la actividad enzimtica tiende a verse modificada. En caso de condiciones extremas, se puede llegar a la desnaturalizacin de la enzima (Barrio Alonso , 1992).

El proceso de digestin que ocurre en nuestro organismo es llevado a cabo por una serie de enzimas que, en su gran mayora, de acuerdo con la clasificacin internacional de las enzimas, se clasifican como bidrolasas, o sea, son enzimas que rompen enlaces por medio de la adicin de agua (Quesada Mora, 2007)

La amilasa es la enzima responsable de la degradacin del almidn y del glucgeno presentes en los alimentos; esta enzima acta sobre los enlaces (1-4) que unen las glucosas {enlaces glicosdicos). La amilasa se encuentra en la saliva (amilasa salival), donde su accin es limitada por el tiempo tan cono que los alimentos pasan en la boca; esta enzima tambin se sintetiza en el pncreas (-amilasa pancretica), pero su accin la tiene en el duodeno, donde llega por medio de la secrecin pancretica. Los productos de su accin son: maltosas, maltotriosas, isomaltosas y dextrinas (Quesada Mora, 2007).La presente prctica tiene como objetivo demostrar la actividad cataltica de la amilasa salival, determinando: la presencia de almidn no transformado (sustrato residual) y de carbohidratos reductores (productos de la reaccin).

MATERIALES Y METODOLOGA.2.1. MATERIALES.PipetasCocina elctricaSolucin de almidn PH 6,0 al 1%Cloruro de sodio 0,1 MAmilasa salival 1%cido clorhdrico 0,05NSolucin yodadaReactivo de Benedict

2.2. METODOLOGA2.2.1 Se arm el siguiente esquema:

Cuadro1. Primer esquema

ComponentesTubo (mL)

III

Solucin de almidn 1% pH 6,055

Solucin de cloruro de sodio 0,1 M11

Agua destilada43

1st. Se coloc los tubos en bao de agua a 37c por 5 minutos2nd. Se agreg 1ml de enzima al tubo II3rd. Se volvi a colocar los tubos a bao de agua a 37C durante 10 minutos

2.2.2. Control de la actividad enzimtica por el sustrato residual:

4th. De cada uno de los tubos de incubacin, transferimos 0.5ml a sus correspondientes tubos (Ib y IIb) del cuadro siguiente, inmediatamente de cumplidos los 10 minutos, sin retirar los tubos de bao de agua se hizo lo siguiente:

Cuadro 2. Esquema para el control de la actividad enzimtica por el sustrato residual.ComponentesTubo (mL)

I AII A

cido clorhdrico 0,05N5,05,0

De los tubos I y II0,50,5

Solucin yodada0,50,5

5th. Se mezcl, se observ y se anot los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad de color resultante.

2.2.3. Control de la actividad enzimtica por los productos formados (Benedict):

Cuadro 3. Esquema para el control de actividad enzimtica por los productos formados.

ComponentesTubo (mL)

I BII B

De los tubos I y II1,01,0

Reactivo Benedict1,01,0

Hervir 10 minutos

6th. Se hirvi por 10 minutos, se mezcl, observ y anot los colores de acuerdo a la intensidad del color resultante.III. RESULTADOS Y DISCUSIONES.

Cuadro 4. Resultado de la determinacin de la actividad enzimtica por el mtodo colorimtricoCOLOR DE SOLUCIN EN TUBOS DE ENSAYO

I(SIN AMILASA)II(CON AMILASA)

Control de la actividad enzimtica por el sustrato residual.AZULAMARILLO(la amilasa desdobl el almidn)

Control de actividad enzimtica por los productos formados.CELESTEVERDE + PRESICPITADO DE COLOR NARANJA(Azcares reductores)

La siguiente figura muestra el tubo I de la etapa B despus de agregar la solucin yodada, en cual se observa un color azul esto nos indica que no hubo hidrlisis, debido a que no hay presencia de la enzima amilasa, el color lo toma en base al lugol, existe el sustrato (almidn), el pH adecuado (6.8), y el activador (HCl). Adems muestra al tubo II de la etapa B despus de agregar la solucin yodada, el cual tiene un color amarillo debido debido a que se dieron las condiciones ptimas, para que ocurra la reaccin, por lo tanto la hidrlisis es total. En este caso s se aadi la amilasa.

Figura 1. Coloraciones presentadas despus de la etapa B, tanto en el tubo I y II.

La Figura 2 nos muestra al tubo I de la etapa C el cual presenta un color celeste, demostrando que no hubo reaccin con la solucin de Benedict, ya que este solo reacciona con azcares reductores, y tomamos muestra del tubo nmero uno en el cual no hubo hidrlisis; en dicha muestra solo hubo almidn, el cual no es un azcar reductor. Mientras que el tubo II de la etapa C tambin mostrado en la Figura 2 presenta un color celeste verdoso con precipitado rojo ladrillo, con lo cual demostramos hidrlisis, debido a que el producto no fueron en su totalidad azcares reductores. An se aprecia el color base de la solucin (azul), pero disminuido.Figura 2. Coloraciones presentadas despus de la etapa C en el tubo I y II.

Por ltimo la figura siguiente mostramos los resultados obtenidos en todas las etapas de la prctica.

Figura 3. Coloraciones presentadas de la actividad enzimtica de la amilasa

Segn Souza, et al. (2005), el almidn en presencia de yodo adquiere una coloracin azulada caracterstica. Esto tiene una explicacin fsica: el iodo se coloca en el interior de la hlice que forma la amilosa (en las regiones hidrofbicas), formando un complejo de color azul. Pero cuando la -amilasa acta, degrada la amilosa, se desintegra la hlice y por tanto en presencia de I2/IK ya no dar una coloracin azul.

Del Cuadro 4 podemos observar que en el caso del control de la actividad enzimtica por el sustrato residual, para el tubo I (sin amilasa) se obtuvo una coloracin azul mientras que para el tubo II (con amilasa) una coloracin amarilla, lo cual nos indica que hay una alta actividad enzimtica, ya que al degradarse la enzima se pierde la coloracin azul, sto se reafirma con lo anteriormente mencionado por (Souza, et al., 2005).

IV. CONCLUSIONES.

V. REFRENCIAS BIBLIOGRAFICAS.Barrio Alonso , C., 1992. El ordenador en el laboratorio. s.l.:Ministerio de educacion.Quesada Mora, S., 2007. Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica. Primera Edicion ed. San Jose: Universidad Estatal a Distancia.Souza, A., Schrank, A., Henning, M. & Mitidieri, S., 2005. Enzymatic detergent formulation containing amylase from Aspergillus niger: A comparative study with commercial detergent formulations. Bioresource technology.

INGENIERA AGROINDUSTRIALPgina 5