2014 Mus musculus como modelo animal para estudio de leucemias_FACEN Biotecnología.pdf
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Mus musculus como
modelo animal para
estudio de leucemiasSilvia Elena Snchez Mendoza
Estudiante de Doctorado
Programa de Oncologia Clinica, Celulas-Tronco e Terapia Celular
Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto-Universidade de So Paulo
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Clasificacin de las leucemias
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Clasificacin de las lecucemias
Leucemia
Linaje CelularPorcentaje de
Blastos
LinfoideMieloide Crnica Aguda
http://www.cancer.gov/espanol/tipos/necesita-saber/leucemia/page3
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Clasificacin de la OMG
Informacin
Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica
y gentica se conjugan com las
caractersticas clnicas del paciente para
definir el dignstico.
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Clasificacin de la OMG
Informacin
Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica
y gentica se conjugan com las
caractersticas clnicas del paciente para
definir el dignstico.
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Clasificacin de la OMG
Informacin
Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica
y gentica se conjugan com las
caractersticas clnicas del paciente para
definir el dignstico.
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Clasificacin de la OMG
Informacin
Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica
y gentica se conjugan com las
caractersticas clnicas del paciente para
definir el dignstico.
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Clasificacin de la OMG
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Clasificacin de la OMG
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Clasificacin de la OMG
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Desarrollo de modelos animales
transgnicos a partir de Mus musculus
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Algunas definiciones
Animal transgnico
Todo animal que posee genoma de otra especie o de la misma especie por
medio de la tecnologia de ADN recombinante.
Inbred
Individuos de una espcie en particular que son casi idnticos desde el punto
de vista gentico. Apareamiento por 20 generaciones.
C57BL/6J 129/SvImJ BALB/cJ
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Datos interesantes
Ratones y humanos comparten 95% de sus genes por lo cual los ratones son
modelos eficientes para el estudio de enfermedades humanas.
En 1929, Clarence Cook Little funda el Laboratorio Roscoe B. Jackson
Memorial en Bar Harbor, Maine.
Em 1933, ratones del Jackson Laboratory son vendidos por
primera vez a otras instituciones.
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Tcnicas para produccin de animales
transgnicos
Inyeccin en proncleos.
Vectores virales.
Transferencia de DNA exgeno mediada por esperma durante la fertilizacin
(SMGT, sperm mediated gene transfer).
Inyeccin, en la cavidad de blastocistos, de clulas madre embrionarias
previamente modificadas genticamente mediante la tcnica de gene
targeting.
Transferencia nuclear.
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Inyeccin en proncleos
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Vectores virales
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Sperm mediated gene transfer
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Gene targeting
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Gene targeting
http://ki.mit.edu/sbc/escell/services/details
129S1/SvIm
J
C57BL/6J
BALB/cJ
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Gene targeting
http://www.addgene.org/13442/
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Gene targeting: Knock-in
http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno
ck
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Gene targeting: Knock-out
http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno
ck
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Gene targeting: condiotional Knock-out
http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno
ck
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Transferencia nuclear
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Modelo doble knock-in de leucemia
mieloide aguda
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Mutacin Mll PTD
Mll -> Mixed lineage leukemia
Es uma duplicacin parcial em tandem (Partial Tandem Duplication)
dentro del marco de lectura de los exones 5 a 11.
La insercin puede producirse antes del exon 11 o 12 12.
Nature Reviews Cancer 7, 823-833 (November 2007)
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Mutacin Mll PTD
Presente em 4-7% de los pacientes com leucemia mieloide aguda y cariotipo
normal.
Considerada de mal pronstico.
El gen Mll codifica uma protena de unin al ADN.
En modelo in-vitro, regula la expresin de algunos genes HOX mediante
modificaciones de regiones cis regulatorias:
Acetilacin de histonas H3/H4.
Metilacin de lisina 4 en H3.
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Mutacin Flt3 ITD
La mutacin es una duplicacin interna en tandem (3-400 pb) en el dominio
juxtamembrana del receptor Flt3.
http://asheducationbook.hematologylibrary.org/content/2006/1/178/F1.expansion
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Ratn knock-in Mll PTD
15 clulas madre embrionarias fueron inyectadas en blastocistos de 3,5 das
de edad en hembras C57BL/6.
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Ratn knock-in Flt3 ITD
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Ratn doble knock-in Mll PTD y Flt3 ITD
Fmeas
C57BL/6J
Flt3 WT:ITD
Machos BALB/cJ
Flt3 WT:ITD
Mll WT:PTD
Mll WT:PTD Flt3 WT:ITD
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Mutacin Mll PTD
Ratones con mutacin Mll PTD presentan:
Alteracin de los lmites normales de expresin de genes homeobox
(Hoxa9) durante la embriognesis.
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Mutacin Mll PTD
Ratones con mutacin Mll PTD presentan:
Defectos del esqueleto axial.
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Mutacin Mll PTD
Ratones con mutacin Mll PTD presentan:
Nmero aumentado de clulas hematopoyticas progenitoras.
BFU-E:
burst forming unit-erythroid
GEMM-CFU:
granulocyte, erythroid cell,
monocyte, and megakaryocyte
colony forming unit
GM-CFU:
granulocyte/macrophage
colony forming unit
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Mutacin Mll PTD
Ratones con mutacin Mll PTD presentan:
Aumento de la expresin de genes Hoxa7, Hoxa9 e Hoxa10 en mdula
sea, bazo y sangre perifrica.
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Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Una enfermedad mieloproliferativa parecida a Leucemia Mielomonoctica
Crnica.
Mac-1: monocitos y granulocitos. Gr-1: granulocitos.
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Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras (LSK Lin-
Sca1+ckit+).
GMP: granulocyte-
monocyte progenitors
MEP:
megakaryocyteerythroid
progenitors
CMP: Common myeloid
progenitor
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Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras
(LSK Lin-Sca1+ckit+).
GMP: granulocyte-
monocyte progenitors
MEP:
megakaryocyteerythroid
progenitors
CMP: Common myeloid
progenitor
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Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras
(LSK Lin-Sca1+ckit+).
GMP: granulocyte-
monocyte progenitors
MEP:
megakaryocyteerythroid
progenitors
CMP: Common myeloid
progenitor
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Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Aumento de proporcin de clulas LSK em fase S/G2/M.
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Mutacin Flt3 ITD
Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan:
Disminucin de la apoptosis en clulas LSK y clulas progenitoras.
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:WT
1. DNA de camundongos de 4 semanas
de idade extrado da cauda para
genotipagem.
2. DNA extrado do MO antes do
sacrifcio (50-80 semanas de
idade).
3. Blastos AML de transplante
secundrio.
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:ITD
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:ITD
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Modelo MllPTD:WTFlt3ITD:ITD
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Gracias por la atencin