Transcript of Ross Histologia
- 1. Ross Pawlina Histologa Texto y Atlas color con Biologa
Celular y Molecular 6a EDICIN
- 2. Michael H. Ross (1930-2009)
- 3. Histologa Texto y Atlas color con Biologa Celular y
Molecular
- 4. HistologaTexto y Atlas color con Biologa Celular y Molecular
6a E D IC I N Michael H. Ross, PhD* Profesor Titular Emrito
Departamento de Anatoma y Biologa Celular University of Florida
College of Medicine Gainesville, Florida, Estados Unidos Wojciech
Pawlina, MD Profesor Titular Departamento de Anatoma Departamento
de Obstetricia y Ginecologa Decano Asistente para Innovacin y
Desarrollo Curricular College of Medicine, Mayo Clinic Rochester,
Minnesota, Estados Unidos BUENOS AIRES - BOGOT - CARACAS - MADRID -
MXICO - PORTO ALEGRE e-mail: info@medicapanamericana.com
www.medicapanamericana.com
- 5. Rin (Cont.) - - aparato de filtracin, 705, 705f, 707f, 709f,
710f, 71 lf - - aparato yuxtaglomerular, 705f, 710, 713 - - cpsula,
698, 699f - - corteza, 699,699f - - lbulos y lobulillos renales,
701, 703f, 704f - - mdula, 699,702f - - mesangio, 710,713f - -
nefrona, 701, 701f, 704f, 705f - - tbulos y conductos colectores,
702, 702f, 704f - fetal, 701, 703f - funcin tubular, 714 - -
segmento delgado del asa de Henle, 717, 718f - - tbulo contorneado
distal, 717, 719f - - tbulo recto distal, 718, 719f - - tbulo recto
proximal, 716 - - tbulos y conductos colectores, 719, 719f - -
tbulos contorneados proximales, 715, 715f, 716f - funciones, 698 -
histofisiologfa, 720 - inervacin, 723 - irrigacin sangunea, 721 -
vasos linfticos, 723 Ritmo metacrnico de los cilios, 118 RNA
ribosmico (rRNA), 24, 46 Rodopsina, 911 Roodetina, 117 rRNA, Vase
RNA ribosmico (rRNA) RT-PCR, Vase PCR con transcriptasa inversa
(RT-PCR) Rugae, 574, 574f s Saciedad, 255 Sacos alveolares, 665,
678, 678f, 6961 Sales biliares, 643 Saliva, 550, 551, 553c
Sarafotoxina, 413 Sarcolema, 311 Sarcmero, 315 Sarcoplasma, 310
Schmidt-Lanterman, incisuras de, 366 Secrecin - apocrina en la
produccin de leche, 866 - endocrina, 362 - holocrina, 5201 -
merocrina en la produccin de leche, 866 Secretina, 594, 649
Secuencia de exportacin nuclear (NES), 83 Secuencias de seal
(pptidos de seal), 47 Segmentacin, 597 Segmento(s) -
broncopulmonares, 676 - canalicular de las glndulas sudorparas
ecri- nas, 507 - delgado del asa de Henle, 717, 718f - inferior del
folculo piloso, 504 - inicial, 358 - internodal, 366 - secretor de
las glndulas sudorparas ecrinas, 507 - tubulares de la nefrona, 702
Segundos mensajeros, 741 Seleccin negativa, 469 Seleccin positiva,
469 Selectina P, 415 Selectinas, 128, 275 Semen, 812 Semilunas,
149, 546 - serosas, 546 Seal de localizacin nuclear (NLS), 83 -
anales, 603, 603f - ganglios linfticos, 460, 462f, 464 - medulares
en los ganglios linfticos, 462, 463, 4781 - paranasales, 664, 670 -
trabeculares en los ganglios linfticos, 463, 4781 - venosos
durales, 384, 426 Sensibilidad gustativa, 533, 533r Serina
proteasas, 186 Serosa(s), 150r, 568, 568f, 570 - esfago, estmago e
intestino, 571 - gstrica, 585 - intestino delgado, 597 - intestino
grueso, 600, 6221 Serotonina, 287, 362 Sexo gentico, 785 Sexo
gonadal, 785 Sexo hormonal, 786 Sharpey, fibrasa de, 221, 539, 543f
Shunt de las pentosas, 279 Sialoprotenas, 219 Silla turca, 743
Sinapsis, 101, 358, 358f, 359f, 361f - axoaxnicas, 359, 359f -
axodendrticas, 358, 358f - axosomticas, 359, 359f - elctricas, 359
- enfermedad de Parkinson, 358r - excitadoras, 362 - inhibidoras,
362 - neurotransmisores, 361 - qumicas, 358, 360f - sistema de
transporte axnico, 356, 358, 363 - transmisin sinptica, 361
Sincitio, 311 Sincoilina, 64 Sindecano, 177 Sndrome(s) - de Alport,
705 - carcinoide, 58Ir - de los cilios inmviles, 119 - de
Goodpasture, 712r - - caracterstica clnica, 712r - de
Guillain-Barr, 366r - de Hunter (MPS II), 42r - de Hurler (MPS I),
42r - de inmunodeficiencia adquirida (sida), 455r - de Kartagener,
68r, 120r - de Marfn, 140, 172 - nefrtico congnito, 707 - de
Prader-Willi, 258 - de secrecin inadecuada de hormona anti
diurtica, 753r - de Stein-Leventhal, 839 - de Young, 120r - de
Zellweger, 56 - de Zollinger-Ellison, 580 Sinemina, 64 Sntesis de
insulina, 655r Sinusoides - esplnicos, 471, 473f - marginales del
bazo, 472 - mdula sea, 297, 299f Sistema(s) - canalicular abierto
(OCS), 287 - de canalculos intracelulares, 578 - cardiovascular,
400 - - arterias. Vase Arterias - - capilares, Vase Capilares - -
corazn, Vase Corazn - - generalidades, 400 - - venas, Vase Venas -
del complemento, 451 - de conduccin de los impulsos del corazn,
402, 402f - de conductos excretores, 648, 648f - digestivo, 526,
568, Vanse tambin los tejidos y rganos especficos - - apndice, 601,
60lf, 603, 6241 - - - mucosa, 568 - - - muscular externa, 570 - - -
serosa o adventicia, 571 - - - submucosa, 570 - - cavidad bucal,
526, 526f, 528f, 5561 - - ciego, 601 - - conducto anal, 603, 603f,
604f, 6261 - - consideraciones funcionales - - - funciones
inmunolgicas del tubo digestivo, 595r - - - sistema endocrino
gastrointestinal, 581r - - correlacin clnica - - - anemia
perniciosa y enfermedad ulcerosa pptica, 578r - - - caries
dentales, 547r - - - fundamento genrico del gusto, 533r - - -
sndrome de Zollinger-Ellison, 580r - - - tumores de las glndulas
salivares, 555r - - dientes y sus tejidos de sostn, 534, 534r, 535,
535r, 537f, 538f, 539, 541, 54lf - - esfago, 568, 571f, 573f, 6061
- - estmago, 568, 573, 581r, 583c, 584c - - generalidades, 526 - -
glndulas salivares, 545, 548f, 553f, 555r, 5641 - - estmago, 6081 -
- intestino grueso, 589f, 596f, 597, 598f, 603f, 6141, 6221 - -
lmina propia, 599, 6221 - - lengua, 529, 529f, 530f, 531f, 533f,
5581 - - mucosa, 599, 599f, 600f, 6221 - - muscular externa, 598f,
601, 6221 - - pncreas, Vase Pncreas - - recto, 603,603f - -
renovacin celular epitelial, 600 - - serosa, 601,6221 968
- 6. Ttulo del original en ingls HISTOLOGY. A Text and Atlas.
With Correlated Cell and Molecular Biology. Sixth Edition Published
by arrangement with Lippincott & Wilkins, Inc., EE.UU.
Copyright 2011, 2006, 2003,1995, 1989,1985 by Lippincott Williams
& Wilkins, a Wolters Kluwer business. All rights reserved
Gestora de Derechos Autorales, S.L. Madrid, Espaa Traduccin de
EDITORIAL MDICA PANAMERICANA, S.A.C.E Efectuada por el Dr. JORGE
HORACIO NEGRETE Diploma de Honor de la Universidad del Salvador,
Buenos Aires, Argentina ProfesorAsociado Adjunto en el Departamento
de Anatoma y Biologa Regenerativa de la Facultad de Medicina y
Ciencias de la Salud de la George Washington University,Washington
D.C., Estados Unidos ProfesorTitular de la Ctedra de Histologa y
Embriologa de la Facultad de Ciencias Mdicas de la Universidad
Catlica de Cuyo,San Juan, Argentina ProfesorTitular de la Ctedra de
Biologa Molecular de la Facultad de Ciencias Mdicas de la
Universidad Catlica de Cuyo, San Juan,Argentina Loseditores han
hechotodoslos esfuerzosparalocalizara los poseedoresdel
copyrightdel materialfuente utilizado.
Siinadvertidamentehubieranomitido alguno,congus to harn
losarreglosnecesariosen la primeraoportunidad que se
lespresenteparatal fin. Gracias por comprar el original. Este libro
es producto del esfuerzo de profesionales como usted, o de sus
profesores, si usted es estudiante. Tenga en cuenta que
fotocopiarlo es una falta de respeto hacia ellosy un robo de sus
derechos intelectuales. nistrarpara cerciorarse de que la
informacin contenida en este libro sea correcta y que no se hayan
producido cambios en las dosis sugeridas o en las
contraindicaciones para su administracin. Esta recomendacincobra
especial importanciacon relacin a frmacos nuevoso de uso
infrecuente. - EDITORIAL M F n m a - ^ p an am e rica n a
http://www.medicapanamericana.com ARGENTINA MarceloT. deAlvear 2145
(C1122AAG) BuenosAires,Argentina Tel.: (54-11)4821-5520 / 2066/ Fax
(54-11)4821-1214 e-mail: info@medicapanamericana.com COLOMBIA
Carrera7aA N69-19- BogotD.C.,Colombia Tel.: (57-1) 345-4508/
314-5014/ Fax: (57-1) 314-5015/ 345-0019 e-mail:
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Planta4a(28050) - Madrid,Espaa Tel.: (34-91) 1317800/ Fax: (34-91)
4570919 MXICO Hegel N 141,2 piso ColoniaChapultepecMorales
DelegacinMiguel Hidalgo-C.P. 11570-MxicoD.F. Tel.:
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UrbanizacinLos Caobos, Parroquia ElRecreo, Municipio
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(58-212)793-2857/6906/5985/1666Fax: (58-212)793-5885 e-mail:
info@medicapanamericana.com,ve ISBN: 978-950-06-0322-5 Ross,
Michael H. Histologa: textoy atlas colorcon biologacelular y
molecular/ Michael H. Ross y Wojciech Pawlina. - 6a ed. -
BuenosAires: Mdica Panamericana, 2012. 992p.; 21 x 27 cm. Traducido
por: JorgeHoracio Negrete ISBN978-950-06-0322-5 1. Histologa. I.
Pawlina, Wojciech II.Jorge Horacio Negrete, trad. CDD 611.018
IMPRESO EN CHINA Hecho el depsito que dispone la ley 11.723. Todos
los derechos reservados. Este libro o cualquiera de sus partes no
podrn ser reproducidos ni archivados en sistemas recuperables, ni
transmitidos en ninguna forma o por ningn medio, ya sean mecnicos o
electrnicos, fotocopiadoras, grabaciones o cualquier otro, sin el
permiso previo de Editorial Mdica Panamericana S.A.C.F. 2012.
EDITORIAL MDICA PANAMERICANA S.A.C.F. Marcelo T. de Alvear 2145 -
Buenos Aires - Argentina Impreso en China, agosto de 2012
- 7. Esta edicin est dedicada a mi esposa, Teresa Pawlina, que
con amor, paciencia y tolerancia supo brindarme el refugio tan
anhelado mientras trabajaba en este proyecto; y a mis hijos, Conrad
Pawlina y Stephanie Pawlina, cuyo estmulo y entusiasmo siempre
mantuvieron altos mis niveles de catecolaminas.
- 8. Prefacio Esta sexta edicin de Histologa: Textoy Atlas color
con Biologa Celulary Molecularcontinacon su tradicin de
proporcionara los estudiantes de medicina, odontologa y otras
ciencias de la salud una introduccin textual y visual de la
histologa correlacionada con labiologa celular. Como en
lasediciones anteriores, el libro es una combinacin de texto-atlas,
dado que contiene una descrip cin textual estndar de los principios
histolgicos complementada con ilustraciones y fotografas. Adems,
secciones separadas de un adas siguen a cada captulo y contienen
lminas de formato grande compuestas por microfotografas rotuladas y
epgrafes detallados que hacen hincapi en los conceptos de la
anatoma microscpica. Histologa: textoy atlascolores, por ende, dos
libros en uno. En estaedicin sehan realizadovarioscambios
importantes para tener una descripcin an ms til y alcanzar una
exposicin ms comprensible del tema. Biologa celular y molecular
actualizada. El material introducido en la quinta edicin se ha
actualizado para incluir los avances ms recientes en biologa
celular y molecular. La sexta edi cin seenfocaen
informacinseleccionadaparaayudar alestudian te a comprender los
temas de manera global. Para aplicar las suge rencias de los
revisores, esta sexta edicin tambin integra la nueva informacin de
biologacelular envarios captulos. Por ejemplo, en el anlisis sobre
el sistema cardiovascular se ha aadido la biologa celular de las
clulas endoteliales; el captulo que se ocupa del teji do epitelial
ahora cuenta con una seccinsobrelos ciliosprimarios, en la
cualsedescribentanto suestructura como su funcin; el cap tulo que
trata sobre el tejido sanguneo se ha complementado con una nueva
nomenclaturapara lasclulasqueparticipan enlahema topoyesisy una
descripcin detallada de lareaccinde estallido res piratorio en
losneutrfilos; en elcaptulo dedicado altejido nervio so se han
aadido nueva informacin y nuevos diagramas de la regeneracin de las
fibras nerviosas y en uno de los captulos que describen la
histologa del sistema digestivo se ha incorporado la biologa
celular de los receptores del gusto. Innovaciones amenas para el
lector. El libro se ha redise ado intentando proporcionar un acceso
ms fcil a los conceptos importantesylainformacin esencial. En
elcuerpo del texto seuti liza una fuente en color adicional. Los
conceptos importantes se presentan destacados en oraciones que
aparecen como encabezados introductorios. Las caractersticas de las
clulas, los tejidos y los rganos y sus funciones, ubicacionesy
otras referencias breves rele vantes aparecen en laforma de listas
bien diseadas que se identifi can fcilmente entre los prrafosdel
texto gracias a puntos grandes y color morado que preceden a cada
elemento de la lista. Los tr minos esenciales de cada seccin
especfica la primera vez que apa recen en el texto se presentan en
una fuente ms grande, realzada en rojo y muy llamativa que se
destaca claramente del resto del texto en negro. Eltexto que
contieneinformacin mdicaoloslti mos hallazgos de la investigacin se
presenta en azul, con la termi nologa referida a las enfermedades,
los trastornos, los sntomas o losmecanismos patognicosen una
fuentemsgrande, tambin de color azul. As, las secciones del texto
que se ocupan de la clnica pueden encontrarse fcilmente dentro de
cadacaptulo. nfasis en ciertas caractersticas. Se han refinado
muchos de losaspectospedaggicos de la edicin anterior yse han
aadido algunos nuevos: Se ha incluido una cantidad mayor de cuadros
para permitir que el estudiante aprenda y repaseel tema sin
necesidad de una memorizacin estricta de datos. Entre los cuadros
hay uno que resea lasespecializaciones de la regin apical de las
clulas epi telialesy otro que presenta lascaractersticas del tejido
adiposo. Muchos cuadros se han actualizado y modificado. Sehan
aadido nuevos recuadrosde correlacionesclnicasy con sideraciones
funcionales a cada captulo y los preexistentes se han rediseado,
actualizado, mejorado e ilustrado con nuevos diagramas y nuevas
imgenes de casos clnicos. Los recuadros nuevos contienen informacin
clnica relacionada con lossnto mas, microfotografasde tejidos u
rganosenfermos, breves des cripciones histopatolgicas y conceptos
sobre el tratamiento de las enfermedades especficas. Los trminos
importantes se han destacado en negrita ms grande. Aunque podra
considerarse que estos recuadros contienen informacin accesoria,
sta demuestra el impacto funcional y la importancia clnica de la
histologa. En la seccin de atlas que aparece al final de cada
captulo se han aadido ms lminas. Varios de los recuadros de resea
de la seccin de atlas ahora cuentan con microfotografas de
orientacin. Las lminas del atlas correspondientes al captulo sobre
tejido sanguneo se han rediseado totalmente para que muestren tanto
las formas maduras de las clulas de la sangre como las etapas por
las cuales pasan durante la hematopoyesis. Muchas lminas se han
remplazado con otras provistas de vibrantes imgenes digitales.
Tambin se han aadido ms figuras e ilustraciones nuevas y alrededor
de un tercio de todas las figuras antiguas se han redi- bujado para
conseguir una claridad mayor y para mejorar la VII
- 9. presentacin conceptual. Esta sexta edicin incorpora muchas
microfotografas e imgenes clnicas nuevas para ilustrar la
informacin comentada en los recuadros de correlacionesclni cas.
Adems, en el texto de cada uno de los captulos se han integrado
muchas microfotografas digitales de alta resolucin. Diseo nuevo. Un
diseo textual claro y vigoroso hace resaltar lasilustracionesy las
fotografas nuevasy facilita el recorrido del texto an ms que en las
ediciones anteriores. Al igual que las ltimas 5 ediciones, todos
los cambios se realiza ron teniendo en cuenta las necesidades de
los estudiantes, a saberla comprensin del temaen
cuestin,elaprendizajede material actua lizado y la capacidad de
aplicar prcticamente los nuevos conoci mientos adquiridos. Wojciech
Pawlina VIII
- 10. Agradecimientos Esta sextaedicin de Histologa: Textoy Atlas
Color, conBiologa Celulary Molecular es un reflejo de las mejoras
incesantes que han sufrido las ediciones anteriores. Las
modificaciones realiza das son, en su mayora, elproducto de los
comentarios ylassuge rencias de los estudiantes que se han tomado
la molestia y el tiempo para decirnos qu les gustaba del libro y
sobre todo cmo se poda mejorar para ayudarlos a entender con ms
facilidad el tema. La mayora de sus comentarios y sus sugerencias
se han tenido en cuenta en esta nueva edicin. Del mismo modo,
muchos de nuestros colegas que dictan cur sos de histologa y
biologa celular han sido de gran ayuda para producir esta nueva
edicin. Varios sugirieron aumentar los comentarios clnicos, a lo
que hemos respondido de la mejor manera posible dentro de las
limitaciones de tamao el libro. Otros fueron de suma ayuda al
contribuir con microfotografasy sugerencias para cuadros sinpticos
nuevos o para la reelabora cin de los diagramas y los esquemas
antiguos. Para ser especficos, le debemos nuestra gratitud a los
revisores siguientes, tanto estudiantes como profesores, que
dedicaron mucho tiempo y esfuerzo con el fin de proveernos
correcciones y sugerencias para el mejoramiento de la obra. Sus
comentarios fueron una fuente informativa valiosa para la
planificacin de esta sexta edicin. Irwin Beitch, PhD Quinnipiac
University Hamden, Connecdcut, Estados Unidos Paul B. Bell,Jr., PhD
UniversityofOklahoma Norman, Oklahoma, Estados Unidos David E.
Birk, PhD UniversityofSouth Florida, CollegeofMedicine Tampa,
Florida, Estados Unidos Christy Bridges, PhD Mercer
UniversitySchool ofMedicine Macn, Georgia, Estados Unidos Benjamn
S. Bryner, MD UniversityofMichiganMedical School AnnArbor,
Michigan, Estados Unidos CraigA. Canby, PhD Des Moines University
Des Moines, Iowa, Estados Unidos StephenW. Carmichael, PhD College
ofMedicine, Mayo Clinc Rochester, Minnesota, Estados Unidos John
Clancyjr., PhD Loyola University Medical Cerner Maywood, Illinois,
Estados Unidos Rita Collela, PhD University of LouisvilleSchool
ofMedicine Louisville, Kentucky, Estados Unidos Iris M. Cook, PhD
State UniversityofNewYorkWestchesterCommunity College Valhalla,New
York, Estados Unidos Jolanta Durski, MD College ofMedicine, Mayo
Clinic Rochester, Minnesota, Estados Unidos William D. Edwards, MD
College ofMedicine, Mayo Clinc Rochester, Minnesota, Estados Unidos
BruceE. Felgenhauer, PhD UniversityofLouisiana at Lafayette
Lafayette, Louisiana, Estados Unidos Amos Gona, PhD
UniversityofMedicine & Dentistry ofNewJersey Newark, NewJersey,
Estados Unidos Ervin M. Gore, PhD MiddleTennesseeState University
Murfreesboro,Tennessee, Estados Unidos Joseph P. Grande, MD, PhD
College ofMedicine, Mayo Clinic Rochester, Minnesota, Estados
Unidos IX
- 11. Joseph A. Grasso, PhD UniversityofConnecticut Health Center
Farmington, Connecticut, Estados Unidos Jeremy K. Gregory, MD
CollegeofMedicine, Mayo Clinic Rochester, Minnesota, Estados Unidos
Brian H. Hallas, PhD NewYorkInstitute ofTechnology Od Westbury,
NewYork, Estados Unidos Charlene Hoegler, PhD Pace University
Pleasantville, NewYork, Estados Unidos CynthiaJ. M. Kane, PhD
UniversityofArkansas for Medical Sciences Litde Rock, Arkansas,
Estados Unidos Thomas S. King, PhD UniversityofTexas Health
ScienceCenter at SanAntonio SanAntonio,Texas, Estados Unidos
PenprapaS. Klinkhachorn, PhD West Virginia University Morgantown,
WestVirginia, Estados Unidos Bruce M. Koeppen, MD, PhD
UniversityofConnecticut Health Center Farmington, Connecticut,
Estados Unidos Beverly Kramer, PhD Universityofthe Witwatersrand
Johannesburg, Sudfrica Craig Kuehn, PhD Western UniversityofHealth
Sciences Pomona, California, Estados Unidos Nirusha Lachman, PhD
College ofMedicine, Mayo Clinic Rochester, Minnesota, Estados
Unidos Priri S.Lacy, PhD Des Moines University, College
ofOsteopathic Medicine Des Moines, Iowa, Estados Unidos H. Wayne
Lamben, PhD WestVirginia University Morgantown, WestVirginia,
Estados Unidos Gavin R. Lawson, PhD Western UniversityofHealth
Sciences Bridgewater, Virginia, Estados Unidos Susan LeDoux, PhD
UniversityofSouth Alabama Mobile,Alabama, Estados Unidos Karen
Leong, MD Drexel UniversityCollegeofMedicine Philadelphia,
Pennsylvania, Estados Unidos A. Malia Lewis, PhD Loma Linda
University Loma Linda, California, Estados Unidos Wilma L. Lingle,
PhD CollegeofMedicine, Mayo Clinic Rochester, Minnesota, Estados
Unidos Frank Liuzzi, PhD Lake Erie College ofOsteopathic Medicine
Bradenton, Florida, Estados Unidos DonaldJ. Lowrie,Jr., PhD
UniversityofCincinnati College ofMedicine Cincinnati, Ohio, Estados
Unidos AndrewT. Mariassy, PhD Nova Southeastem University College
of Medical Sciences Fort Lauderdale, Florida, Estados Unidos
GeoffreyW. McAuliffe, PhD Robert WoodJohnson Medical School
Piscataway, NewJersey, Estados Unidos KevinJ. McCarthy, PhD
Louisiana State University Health SciencesCenter Shreveport,
Louisiana, Estados Unidos David L. McWhorter, PhD Philadelphia
College ofOsteopathic Medicine GeorgiaCampus Suwanee, Georgia,
Estados Unidos JosephJ. Maleszewski, PhD College ofMedicine, Mayo
Clinic Rochester, Minnesota, Estados Unidos FabiolaMedeiros, MD
College ofMedicine, Mayo Clinic Rochester, Minnesota, Estados
Unidos William D. Meek, PhD Oklahoma State University, College
ofOsteopathic Medicine Tulsa, Oklahoma, Estados Unidos
KarunaMunjal, MD BaylorCollege ofMedicine Houston,Texas, Estados
Unidos LilyJ. Ning, MD UniversityofMedicine &
DentistryofNewJersey, NewJersey Medical School Newark, NewJersey,
Estados Unidos Diego F. Nio, PhD LouisianaState UniversityHealth
SciencesCenter, Delgado Community College New Orleans, Louisiana,
Estados Unidos X
- 12. SashaN. Noe, DO, PhD Saint Leo University Saint Leo,
Florida, Estados Unidos Joanne Orth, PhD Temple UniversitySchool
ofMedicine Downingtown, Pennsylvania, Estados Unidos Nalini Pather,
PhD UniversityofNew South Wales Sidney,Australia Tom P Phillips,
PhD UniversityofMissouri Columbia, Missouri, Estados Unidos Stephen
R. Planck, PhD Oregn Health and ScienceUniversity Portland, Oregon,
Estados Unidos Dennifield W. Player, BS University ofFlorida
Gainesville, Florida, Estados Unidos Harry H. Plymale, PhD San
Diego State University San Diego, California, Estados Unidos
Rebecca L. Pratt, PhD WestVirginia School ofOsteopathic Medicine
Lewisburg, WestVirginia, Estados Unidos Margaret Pratten, PhD The
UniversityofNottingham, MedicalSchool Nottingham, Reino Unido
Rongsun Pu, PhD Kean University East Brunswick, NewJersey, Estados
Unidos Romano Regazzi, PhD Universidad de Lausanne, Facultad de
Biologay Medicina Laussane, Suiza Mary Rheuben, PhD Michigan State
University East Lansing, Michigan, Estados Unidos JeffreyL.
Salisbury, PhD CollegeofMedicine, Mayo Clinic Rochester, Minnesota,
Estados Unidos Young-JinSon, PhD Drexel University Philadelphia,
Pennsylvania, Estados Unidos David K. Saunders, PhD University
ofNorthern Iowa Cedar Falls, Iowa, Estados Unidos John T. Soley,
DVM, PhD UniversityofPretoria Pretoria, Sudfrica Anca M. Stefan, MD
Touro UniversityCollegeofMedicine Hackensack, NewJersey, Estados
Unidos AlvinTelser, PhD Northwestern University Medical School
Chicago, Illinois, Estados Unidos BarryTimms, PhD Sanford School
ofMedicine, UniversityofSouth Dakota Vermillion, South Dakota,
Estados Unidos JamesJ.Tomasek, PhD University ofOklahoma Health
Science Center Oklahoma City, Oklahoma, Estados Unidos John Matthew
Velkey, PhD UniversityofMichigan Ann Arbor, Michigan, Estados
Unidos Daniel W. Visscher, MD University ofMichigan Medical School
Ann Arbor, Michigan, Estados Unidos Anne-MarieWilliams, PhD
UniversityofTasmania, School of Medical Sciences Hobart,Tasmania,
Australia Joan W. Witkin, PhD Columbia University,
CollegeofPhysicians and Surgeons NewYork, New York, Estados Unidos
Alexandra P Wolanskyj, MD College ofMedicine, Mayo Clinic
Rochester, Minnesota, Estados Unidos RobertW. Zajdel, PhD State
UniversityofNewYorkUpstate Medical University Syracuse,New ork,
Estados Unidos RenzoA. Zaldivar, MD AestheticFacial & Ocular
Plstic SurgeryCenter Chapel Hill, North Carolina, Estados Unidos
Algunos colegashan realizadocontribuciones a estetexto queson
dignas de ser destacadas. Leestamos muy agradecidos al Dr. Renzo
Zaldivar del Aesthetic Facial & Ocular Plstic Surgery Center en
Chapel Hill,North Carolina, Estados Unidos por proporcionarnos
imgenes clnicas y contenido para varios recuadros de correlacio
nesclnicasparaelcaptulo sobreelojo.Agradecemos tambin alos Dres.
Fabiola Medeiros de la Mayo Clinic y Donald Lowrie,Jr.,de
laUniversity ofCincinnati College ofMedicinepor suministrarnos
preparados histolgicos originales de la ms alta calidad de varios
rganos. Adems, Todd Barnach, de la University of Florida, con
tribuy de manera inestimable con el texto, las figuras y las micro-
fotografas digitalizadas. Asimismo le agradecemos a Denny Player
porsu magnficapericia tcnicaen lo referidoa lamicroscopa elec
trnica. XI
- 13. Todo elarte nuevo de esta edicin fue creado por Rob
Duckwall y su esposa, Caitlin Duckwall, de la empresa Dragonfly
Media Group Inc. (Baltimore, Maryland, Estados Unidos). Les damos
nuestras ms sincerasgraciaspor haber utilizado su gran destrezaen
la creacin de un arte innovador y estticamente agradable. Tambin
queremos expresar nuestra especial gratitud a Jennifer Verbiar,
nuestra editora de desarrollo en jefe, y a su antecesora Kathleen
Scogna, que contribuyeron con su habilidad durante la mayor parte
del procesode desarrollo. Sucapacidad para solucionar problemas y
su pericia tcnica fueron indispensables para llevar a buen trmino
esta edicin y sus contribuciones a la sexta edicin han sido
invalorables. Le damos lasgraciasaArijit Biswas, el direc tor del
proyecto en MPS Limited, A Macmillan Company en Nueva Delhi, India,
y a su plantel de armadores por la excelente tarea realizada en la
composicin de esta obra compleja y llena de desafos. Por ltimo, un
agradecimiento especial a Crystal Taylor por su apoyo durante todo
el desarrollo del libro. Le agradecemos mucho su diligencia.
XII
- 14. ndice Prefacio I vii A g radecim ientos I ix 1. T C N IC A
H IS T O L G IC A Y M IC R O S C O P IA 11 Generalidades de las
tcnicas utilizadas en histologa 11 Preparacin del te jid o I 2 H
istoqum ica y citoq um ica I 3 M icroscopa 114 Recuadro 1.1
Correlacin clnica: biopsias por congelacin I 4 Recuadro 1.2
Consideraciones funcionales: microespectrofotometra de Feulgen I 7
Recuadro 1.3 Correlacin clnica: anticuerpos monoclonales en
medicina I 9 Recuadro 1.4 Uso correcto del microscopio ptico 111 2
. C IT O P L A S M A C E L U L A R I 2 2 G eneralidades de la clula
y del citop lasm a I 22 O rgnulos m em branosos l 25 O rgnulos no m
em branosos l 57 Inclusiones 171 M atriz citoplasm tica I 73
Recuadro 2.1 Correlacin clnica: enfermedades por ^ almacenamiento
lisosmico I 42 Recuadro 2.2 Correlacin clnica: anomalas de
microtbulos y filamentos I 68 Recuadro 2.3 Correlacin clnica:
duplicacin anormal de los centrolos y el cncer I 72 3 . E L N C L E
O C E L U L A R I 7 5 G eneralidades del ncleo l 75 C om ponentes
del ncleo 175 R enovacin celu lar i 84 C iclo celu lar i 86 M uerte
celu lar l 93 Recuadro 3.1 Correlacin clnica: pruebas citogentlcas
I 80 Recuadro 3.2 Correlacin clnica: regulacin del ciclo celular y
tratamiento del cncer I 81 4 . T E J ID O S : C O N C E P T O Y C L
A S IF IC A C I N I 9 8 G eneralidades de los te jid o s I 98
Tejido epitelial l 99 Tejido con jun tivo I 99 Tejido m uscular
1100 Tejido ne rvioso 1101 H istognesis 1102 Id en tificacin de los
te jid o s 1102 Recuadro 4.1 Correlacin clnica: teratomas ovricos
1103 5 . E L T E J ID O E P IT E L IA L I 1 0 5 G eneralidades de
la estru ctu ra y de la funcin epitelial 1105 C lasificacin de los
ep itelio s 1106 Polaridad celu lar 1107 La regin apical y sus m od
ifica cion es 1109 La regin lateral y sus especializaciones en la
adhesin clula-clula 1121 La regin basal y sus especializaciones en
la adhesin clula-m atriz e xtracelular 1133 G lndulas 1146 R
enovacin de las clulas epiteliales l 148 Recuadro 5.1 Correlacin
clnica: metaplasia epitelial 1109 Recuadro 5.2 Correlacin clnica:
discinesia ciliar primaria (sndrome de los cilios inmviles) 1120
Recuadro 5.3 Correlacin clnica: los complejos de unin como diana de
los agentes patgenos 1128 XIII
- 15. Recuadro 5.4 Consideraciones funcionales: terminologa de
membrana basal y lmina basal 1138 Recuadro 5.5 Consideraciones
funcionales: membranas mucosas y serosas I 150 Alias color Lmina 1
Epitelios simple plano y simple cbico 1152 Lmina 2 Epitelios
simples y estratificados 1154 Lmina 3 Epitelios estratificados y
glandulares endocrinos 1156 6 . E L T E J ID O C O N J U N T IV O I
1 5 8 Estructura y fu ncin generales del te jid o con jun tivo 1158
Tejido con jun tivo e m brio na rio 1159 Tejido con jun tivo del a
d ulto 1160 Fibras del te jid o con jun tivo 1161 La m atriz e
xtracelular 1173 Clulas del te jid o co n ju n tivo 1178 Recuadro
6.1 Correlacin clnica: colagenopatas 1170 Recuadro 6.2 Correlacin
clnica: exposicin al sol y alteraciones moleculares en la piel
fotoenvejecida 1173 Recuadro 6.3 Correlacin clnica: funcin de los
miofibroblastos en la reparacin de las heridas 1183 Recuadro 6.4
Consideraciones funcionales: el sistema fagoctico mononuclear 1185
Recuadro 6.5 Correlacin clnica: la funcin de los mastocitos y de
los basfilos en las reacciones alrgicas 1188 Atlas color Lmina 4
Tejidos conjuntivos laxo y denso no modelado I 192 Lmina 5 Tejido
conjuntivo denso modelado, tendones y ligamentos 1194 Lmina 6
Fibras elsticas y lminas (membranas) elsticas I 196 7. TE JID O C A
R T ILA G IN O S O I 198 G eneralidades del te jid o cartilag ino
so I 198 C artlago hia lin o I 199 C artlago el stico I 204 C
artlago fibro so I 204 C ondrognesis y crecim iento del cartlago I
205 Reparacin del cartlago h ia lin o 1207 Recuadro 7.1 Correlacin
clnica: osteoartritis 1199 Recuadro 7.2 Correlacin clnica: tumores
malignos del cartlago; condrosarcomas I 208 Atlas color Lmina 7
Cartlago hialino I 210 Lmina 8 Cartlago y esqueleto en desarrollo I
212 Lmina 9 Cartlago elstico I 214 Lmina 10 Cartlago fibroso
(fibrocartlago) I 216 8. T E JID O O SEO 1218 G eneralidades del te
jid o seo I 218 H uesos y te jid o seo I 219 E structura general de
los huesos 1220 C lulas del te jid o seo I 223 O sificacin I 232 M
ineralizacin bio lg ica y vesculas m atriciales 1241 A spectos
fisio l g ico s del te jid o seo I 242 Recuadro 8.1 Correlacin
clnica: enfermedades de las articulaciones I 221 Recuadro 8.2
Correlacin clnica: osteoporosis I 233 Recuadro 8.3 Correlacin
clnica: factores nutricionales en la osificacin I 234 Recuadro 8.4
Consideraciones funcionales: regulacin hormonal del crecimiento seo
1242 Atlas color Lmina 11 Hueso, mtodo de desgaste I 244 Lmina 12
Tejido seo y huesos I 246 Lmina 13 Osificacin endocondral I I 248
Lmina 14 Osificacin endocondral II I 250 Lmina 15 Osificacin
intramembranosa I 252 9. T E JID O A D IP O S O I 254 G
eneralidades del te jid o adiposo 1254 Tejido adiposo u n ilocu la
r I 254 Tejido adiposo m ultilocu la r I 260 Recuadro 9.1
Correlacin clnica: obesidad I 261 Recuadro 9.2 Correlacin clnica:
tumores del tejido adiposo I 262 Recuadro 9.3 Correlacin clnica:
tomografa de emisin de positrones (PET) e interferencia del tejido
adiposo multilocular I 264 Atlas color Lmina 16 Tejido adiposo I
266 10. T E JID O S A N G U N E O I 268 G eneralidades de la sangre
I 268 Plasma 1269 E ritrocito s 1270 Le uco citos 1274 Trom bocitos
I 286 F orm acin de las clulas de la sangre (hem atopoyesis) I 289
M dula sea I 298 Recuadro 10.1 Correlacin clnica: sistemas de
grupos sanguneos ABO y Rh I 273 Recuadro 10.2 Correlacin clnica:
hemoglobina en pacientes con diabetes I 274
- 16. Recuadro 10.3 Correlacin clnica: trastornos de la
hemoglobina I 276 Recuadro 10.4 Correlacin clnica: trastornos
hereditarios de los neutrfilos; enfermedad granulomatosa crnica
(CGD) I 281 Recuadro 10.5 Correlacin clnica: degradacin de la
hemoglobina e ictericia I 281 Recuadro 10.6 Correlacin clnica:
celularidad de la mdula sea I 300 Atlas color Lmina 17 Lmina 18
Lmina 19 Lmina 20 Eritrocitos y granulocitos I 302 Agranulocitos y
mdula sea roja I 304 Eritropoyesis I 306 Granulopoyesis I 308 11. T
E JID O M U S C U LA R I 310 Generalidades y clasifica ci n del te
jid o m uscular I 310 M sculo e sq ue ltico I 311 M sculo cardaco I
327 M sculo lis o I 331 Recuadro 11.1 Consideraciones funcionales:
metabolismo muscular e isquemia I 316 Recuadro 11.2 Correlacin
clnica: distrofia muscular - distrofina y protenas asociadas I 319
Recuadro 11.3 Consideraciones funcionales: modelo del deslizamiento
de los filamentos i 323 Recuadro 12.1 Correlacin clnica: enfermedad
de Parkinson I 358 Recuadro 12.2 Correlacin clnica: enfermedades
desmielinizantes I 366 Recuadro 12.3 Correlacin clnica: gliosis
reactiva: formacin de cicatrices en el SNC I 389 Atlas color Lmina
27 Lmina 28 Lmina 29 Lmina 30 Lmina 31 Ganglios simpticos y
espinales I 390 Nervio perifrico I 392 Cerebro I 394 Cerebelo I 396
Mdula espinal I 398 Recuadro 11.4 Correlacin clnica: miastenia
grave I 325 Recuadro 11.5 Consideraciones funcionales: comparacin
de los tres tipos musculares I 337 Atlas color Lmina 21 Tejido
muscular esqueltico I I 340 Lmina 22 Tejido muscular esqueltico II
microscopias ptica y electrnica I 342 Lmina 23 Unin
musculotendinosa I 344 Lmina 24 Tejido muscular cardaco I 346 Lmina
25 Tejido muscular cardaco, fibras de Purkinje I 348 Lmina 26
Tejido muscular liso I 350 12. T E JID O N ER VIO SO I 352 G
eneralidades del sistem a ne rvioso I 352 C om po sici n del te jid
o ne rvio so 1353 La neurona I 353 C lulas de sostn del tejido
nervioso; la neuroglia 1363 O rigen de las clulas del te jid o ne
rvio so I 373 O rganizacin del sistem a ne rvio so pe rifrico I 375
O rganizacin del sistem a ne rvio so a u t no m o I 378 O
rganizacin del sistem a ne rvio so central 1381 Respuesta de las
neuronas a la agresin I 386 13. S IS T E M A C A R D IO V A S C U
LA R I 400 G eneralidades del sistem a cardiovascular 1400 C orazn
I 402 C aractersticas generales de arterias y venas I 408 Arterias
I 414 C apilares I 421 A n astom osis arteriovenosas I 423 Venas I
424 Vasos sanguneos atpicos I 426 Vasos linf ticos I 427 Recuadro
13.1 Correlacin clnica: aterosclerosis I 411 Recuadro 13.2
Correlacin clnica: hipertensin I 416 Recuadro 13.3 Correlacin
clnica: enfermedad cardaca isqumica I 429 Atlas color Lmina 32
Lmina 33 Lmina 34 Lmina 35 Corazn I 432 Aorta I 434 Arterias
musculares y venas medianas I 436 Arteriolas, vnulas y vasos
linfticos I 438 14. S IS T E M A L IN F A T IC O I 440 G
eneralidades del sistem a lin f tico I 440 C lulas del sistem a lin
f tico I 441 T ejidos y rganos linf ticos I 453 Recuadro 14.1
Consideraciones funcionales: origen de las designaciones linfocito
T y linfocito B I 447 Recuadro 14.2 Correlacin clnica: reacciones
de hipersensibilidad I 447 Recuadro 14.3 Correlacin clnica: virus
de la inmunodeficiencia humana (HIV) y sndrome de inmunodeficiencia
adquirida (sida) i 455 Recuadro 14.4 Correlacin clnica:
linfadenitis reactiva (inflamatoria) I 466 Atlas color Lmina 36
Amgdala palatina I 476 XV
- 17. Lmina 37 Lmina 38 Lmina 39 Lmina 40 Lmina 41 Ganglio
linftico 11478 Ganglio linftico II I 480 Bazo I I 482 Bazo II I 484
Timo I 486 15. S IS T E M A TE G U M E N T A R IO I 488 G
eneralidades del sistem a te gum entario 1488 E stratos de ia piel
I 489 C lulas de la ep ide rm is 1493 Estructuras de la piel I 501
Recuadro 15.1 Correlacin clnica: cnceres de origen epidrmico I 492
Recuadro 15.2 Consideraciones funcionales: color de la piel I 499
Recuadro 15.3 Consideraciones funcionales: crecimiento y
caractersticas del pelo I 504 Recuadro 15.4 Consideraciones
funcionales: la funcin del unto sebceo I 505 Recuadro 15.5
Correlacin clnica: sudoracin y enfermedad I 507 Recuadro 15.6
Correlacin clnica: reparacin cutnea I 512 Recuadro 17.5 Atlas color
Lmina 42 Piel 11 514 Recuadro 17.6 Lmina 43 Piel II I 516 Lmina 44
Glndulas sudorparas apocrinas y ecrinas I 518 Atlas color Lmina 54
Lmina 45 Glndulas sudorparas y sebceas I 520 Lmina 55 Lmina 46 Piel
y receptores sensoriales I 522 Lmina 56 Lmina 47 Folculo piloso y
ua I 524 Lmina 57 Lmina 50 Lengua II, papilas foliadas y corpsculos
gustativos I 560 Lmina 51 Glndula submandibular I 562 Lmina 52
Glndula partida I 564 Lmina 53 Glndula sublingual I 566 17. S IS T
E M A D IG E S TIV O II: ES FAG O , ES T M A G O E IN TE S TIN O I
568 G eneralidades del tu b o dig estivo l 568 Esfago I 571 E stm
ago l 573 Intestino delgado l 586 Intestino grueso I 597 Recuadro
17.1 Correlacin clnica: anemia perniciosa y enfermedad ulcerosa
pptica I 578 Recuadro 17.2 Correlacin clnica: sndrome de
Zolliger-Ellison I 580 Recuadro 17.3 Consideraciones funcionales:
el sistema endocrino gastrointestinal I 581 Recuadro 17.4
Consideraciones funcionales: funciones digestivas y absortivas de
los enterocltos I 587 Consideraciones funcionales: funciones
inmunolgicas del tubo digestivo I 595 16. S IS T E M A D IG E S TIV
O I: C A V ID A D B U C A L Y E S TR U C TU R A S A S O C IA D A S
I 526 G eneralidades del sistem a digestivo I 526 Cavidad bucal
1527 Lengua I 529 D ientes y s u s te jid o s de sostn I 534 G
lndulas salivales I 545 Recuadro 16.1 Correlacin clnica: el
fundamento gentico del gusto I 533 Recuadro 16.2 Correlacin clnica:
clasificacin de las denticiones permanente (secundaria) y decidua
(primaria) I 534 Recuadro 16.3 Correlacin clnica: caries dentales I
547 Atlas color Lmina 48 Labio, transicin cutaneomucosa I 556 Lmina
49 Lengua I I 558 los vasos linfticos y enfermedades del intestino
grueso I 602 Esfago I 606 Esfago y estmago, regin del cardias I 608
Lmina 58 Transicin gastroduodenal I 614 Lmina 59 Duodeno I 616
Lmina 60 Yeyuno I 618 Lmina 61 leon I 620 Lmina 62 Colon I 622
Lmina 63 Apndice I 624 Lmina 64 Conducto anal I 626 18. S IS T E M
A D IG E S TIV O III: H G AD O , V E S C U L A B IL IA R Y P N C R
E A S I 628 Hgado 1628 V escula biliar | 644 Pncreas I 647 Recuadro
18.1 Correlacin clnica: lipoprotenas I 630 Recuadro 18.2 Correlacin
clnica: insuficiencia cardaca congestiva y necrosis heptica I 635
Recuadro 18.3 Produccin de Insulina y enfermedad de Alzheimer I 655
XVI
- 18. Recuadro 18.4 Consideraciones funcionales: sntesis de
insulina, un ejemplo de procesamiento postraduccional I 655 Atlas
color Lmina 65 Lmina 66 Lmina 67 Lmina 68 Hgado I I 656 Hgado II I
658 Vescula biliar I 660 Pncreas I 662 19. S IS T E M A R E S P IR
A TO R IO I 664 Generalidades del sistem a resp ira torio l 664 C
avidades nasales l 665 Faringe l 670 Laringe 1670 Trquea I 670 B
ron qu ios I 675 B ronquolos I 677 A lv olos I 678 Irrigacin
sangunea I 681 Vasos linf ticos I 687 Inervacin I 687 Recuadro 19.1
Correlacin clnica: metaplasia escamosa en las vas respiratorias I
672 Recuadro 19.2 Correlacin clnica: fibrosis qustica I 685
Recuadro 19.3 Correlacin clnica: enfisema y neumona I 686 Atlas
color Mucosa olfatoria I 688Lmina 69 Lmina 70 Lmina 71 Lmina 72
Lmina 73 Laringe I 690 . Trquea I 692 Bronquolos y vas areas
terminales I 694 20. S IS T E M A U R IN A R IO I 698 G
eneralidades del sistem a urina rio i 698 E structura general del
rin | 699 F uncin tu b u la r renal I 714 C lulas inte rsticia les
I 720 H istofisio lo ga del ri n l 720 Irrigacin sangunea 1721
Vasos lin f tico s l 723 Inervacin i 723 Urter, vejiga urinaria y
uretra l 723 Recuadro 20.1 Consideraciones funcionales: rin y
vitamina D I 699 Recuadro 20.2 Correlacin clnica: glomerulonefritis
inducida por anticuerpos antimembrana basal glomerular; sndrome de
Goodpasture I 712 Recuadro 20.3 Correlacin clnica: anlisis de orina
I 714 Recuadro 20.4 Correlacin clnica: sistema renina-
angiotensina-aldosterona e hipertensin I 714 Recuadro 20.5
Consideraciones funcionales: estructura y funcin de los canales
acuosos de acuaporina I 717 Recuadro 20.6 Consideraciones
funcionales: regulacin hormonal de la funcin de los conductos
colectores I 721 Atlas color Lmina 74 Rin I I 728 Lmina 75 Rin II I
730 Lmina 76 Rin III I 732 Lmina 77 Rin IV I 734 Lmina 78 Urter I
736 Lmina 79 Vejiga urinaria 21. S IS T E M A E N D O C R IN O I
740 G eneralidades del sistem a en do crin o I 740 H ip fisis
(glndula pituitaria) l 742 H ipotlam o I 751 G lndula pineal I 752
G lndula tiroide s l 755 G lndulas paratiroides l 760 G lndulas
suprarrenales i 762 Recuadro 21.1 Consideraciones funcionales:
regulacin de la secrecin hipofisaria I 743 Recuadro 21.2 Correlacin
clnica: principios de endocrlnopatas I 750 Recuadro 21.3 Recuadro
21.4 Recuadro 21.5 Recuadro 21.6 Atlas color Lmina 80 Lmina 81
Lmina 82 Lmina 83 Lmina 84 Lmina 85 Correlacin clnica: patologas
asociadas con la secrecin de ADH I 753 Consideraciones funcionales:
biosntesis de la hormonas suprarrenales I 769 Hipfisis 11 772
Hipfisis II I 774 Glndula pineal I 776 Glndulas paratiroides y
tiroides I 778 Glndula suprarrenal I I 780 Glndula suprarrenal II I
782 22. SIS T E M A G E N IT A L M A S C U LIN O I 784 G
eneralidades del sistem a genital m ascu lin o l 784 Testculo l 784
Esperm atognesis 1790
- 19. T bulos sem inferos I 798 C onductos intra testicu lares I
802 Vas esperm ticas I 803 G lndulas sexuales accesorias I 808
Prstata I 808 Semen I 812 Pene I 813 Recuadro 22.1 Consideraciones
funcionales: regulacin hormonal de la espermatognesis I 788
Recuadro 22.2 Correlacin clnica: factores que afectan la
espermatognesis I 789 Recuadro 22.3 Correlacin clnica: antgenos
especficos de espermatozoides y la respuesta inmunitaria I 803
Recuadro 22.4 Correlacin clnica: hipertrofia prosttica benigna y
cncer de prstata I 811 Recuadro 22.5 Correlacin clnica: mecanismo
de la ereccin y disfuncin erctil I 815 Atlas color Lmina 86
Testculo I 1818 Lmina 87 Testculo III 820 Lmina 88 Conductillos
eferentes y epiddimo I 822 Lmina 89 Cordn espermtico y conducto
deferente I 824 Lmina 90 Prstata I 826 Lmina 91 Vescula seminal I
828 2 3.S IS T E M A G E N IT A L FEM EN IN O I 830 G eneralidades
del sistem a genital fem enino I 830 O vario 1831 Trom pas uterinas
I 845 tero I 848 Placenta I 854 Vagina I 860 G enitales externos I
861 G lndulas m am arias 1863 Recuadro 23.1 Correlacin clnica:
poliquistosis ovrica I 839 Recuadro 23.2 Correlacin clnica:
fecundacin in vitro I 844 Recuadro 23.3 Consideraciones
funcionales: resumen de la regulacin hormonal del ciclo ovrico I
846 Recuadro 23.4 Correlacin clnica: destino de la placenta madura
en el parto I 860 Recuadro 23.5 Correlacin clnica: citologa
exfoliativa (Pap) I 862 Recuadro 23.6 Correlacin clnica: cuello
uterino e infecciones por papiloma humano (HPV) I 868 Recuadro 23.7
Consideraciones funcionales: lactacin e infertilidad I 870 Atlas
color Lmina 92 Ovario I I 872 Lmina 93 Ovario II I 874 Lmina 94
Cuerpo lteo I 876 Lmina 95 Trompa uterina I 878 Lmina 96 tero I I
880 Lmina 97 tero II I 882 Lmina 98 Cuello uterino (crvix) I 884
Lmina 99 Placenta I I 886 Lmina 100 Placenta II I 888 Lmina 101
Vagina I 890 Lmina 102 Glndula mamaria, inactiva (en reposo) I 892
Lmina 103 Glndula mamaria, en etapa proliferativa avanzada y en la
lactacin I 894 .E L O JO I 89l6 Generalidades del ojo I 896
Estructura general del ojo I 896 Estructura microscpica del ojo I
899 Recuadro 24.1 Correlacin clnica: glaucoma I 905 Recuadro 24.2
Correlacin clnica: desprendimiento de la retina I 908 Recuadro 24.3
Correlacin clnica: degeneracin macular relacionada con la edad
(ARMD) I 909 Recuadro 24.4 Correlacin clnica: conjuntivitis I 917
Atlas color Lmina 104 Ojo 11920 Lmina 105 Ojo II: retina I 922
Lmina 106 Ojo III: segmento anterior I 924 Lmina 107 Ojo IV:
esclera, crnea y cristalino I 926 2 5 .E L O ID O I 928 G
eneralidades del odo I 928 Odo externo I 928 Odo m edio I 929 Odo
inte rno I 932 Recuadro 25.1 Correlacin clnica: otosclerosis I 933
Recuadro 25.2 Correlacin clnica: hipoacuslas-disfuncin vestibular I
934 Recuadro 25.3 Correlacin clnica: vrtigo I 937 Atlas color Lmina
108 Odo I 946 Lmina 109 Cclea y rgano de Corti I 948 ndice analtico
I 950 XVIII
- 20. captulo Tcnica histolgica y microscopa GENERALIDADES DE LAS
TECNICAS UTILIZADAS EN HISTOLOGA / 1 PREPARACIN DEL TEJIDO / 2
Tincin con hematoxilina y eosina de muestras fijadas en formalina /
2 Otros fijadores / 2 Otras tcnicas de tincin / 3 HISTOQUMICA Y
CITOQUMICA / 3 Composicin qumica de las muestras histolgicas / 3
Fundamentos qumicos de la coloracin / 5 Digestin enzimtica / 7
Histoqumica enzimtica / 7 Inmunocitoqumica / 7 Tcnicas de
hibridacin /1 0 Radioautografa / 13 MICROSCOPIA/14 Microscopa ptica
/1 4 Examen de un preparado histolgico con el microscopio ptico /1
4 Otros sistemas pticos /1 5 Microscopa electrnica /1 8 Microscopa
de fuerza atmica / 20 R ecuadro 1.1 Correlacin clnica: biopsias por
congelacin / 4 R ecuadro 1.2 Consideraciones funcionales:
microespectrofotometra de Feulgen / 7 R ecuadro 1.3 Correlacin
clnica: anticuerpos monoclonales en medicina / 9 Recuadro 1.4 Uso
correcto del microscopio ptico /11 G E N E R A L ID A D E S D E L A
S T C N IC A S U T IL IZ A D A S E N H IS T O L O G A El objetivo
de un curso de histologa es conducir al estudian te a comprender la
microanatoma de las clulas, los tejidos y los rganos y a
correlacionar la estructura con la funcin. Las tcnicas utilizadas
porloshistlogos son diversasen extremo. La mayor parte de los
contenidos de un curso de histologa se puede formular en los
trminos de la microscopa ptica. En la actualidad,en los
trabajosprcticosdelaboratorio de histologa,los estudiantes utilizan
microscopios pticos o, cada vez con ms frecuencia, sevalen de la
microscopa virtual, que consiste en un mtodo para
examinarespecmenes microscpicos digitalizados en una pantalla de
ordenador. Antes, la interpretacin ms detallada de la
microanatomase fundamentaba en la microscopa electr nica (ME),
tanto con el microscopio electrnico de transmi sin (MET) como con
el microscopio electrnico de barrido (MEB). Hoy, el microscopio de
fuerza atmica (MFA) tam bin puede proveer imgenes de alta resolucin
comparables con las obtenidas mediante elTEM. Tanto la ME como la
MFA, dado su aumento ms til y su resolucin mayor, suelen ser el
ltimo paso en la adquisicin de datos al que se recurre entre las
muchas tcnicas auxiliaresde la biologacelular y molecular. Estas
tcnicas auxiliares incluyen: histoqumica e histoqumica,
inmunocitoqumica y tcnicas de hibridacin, radioautografa, cultivo
de tejidos y rganos, separacin de clulas y orgnulos por
centrifugacin diferencial y microscopios y tcnicas microscpicas
especializadas. Es posible que los estudiantesse sientan distantes
de estas tcni casyprocedimientos experimentalesporque no
sueleestarcontem pladaunaexperienciadirectacon ellosen
losprogramasactualesde la asignatura. Sin embargo, es importante
saber algo acerca de los procedimientos especializadosy de los
datosque proporcionan. En estecaptulo sepresenta un panorama
generalde estas tcnicasy una explicacin de cmo los datos
aportadospor ellaspueden ayudar al estudiantea
comprendermejorlaestructuray lajuncin de lasclulas, delostejidosy
de losrganos. Uno de los problemas que enfrentan los estudiantes en
histolo ga escomprenderla ndolede la imagen bidimensional de un pre
1
- 21. parado histolgico o de una microfotografa electrnica y cmo
esta imagense relacionacon la estructura tridimensional de la cual
proviene. Para salvaresta brecha conceptual, primero tenemosque
presentar una breve descripcin de las tcnicas utilizadas para pre
parar los cortes histolgicos tanto de la microscopa ptica como de
la microscopia electrnica. PREPARACIN DEL TEJIDO Tincin con
hematoxilina y eosina de muestras fijadas en formalina El corte de
rutina teido con hematoxilina y eosina es la muestra que ms
frecuentemente se estudia. La caja de preparados que se entregaa
cada estudiante para que examine bajo el microscopio ptico
contiene, principalmente, especmenes fijados en formalina,
incluidos en parafina y colorea dos con hematoxilinay eosina (H-E).
Casi todas las microfotogra- faspticasen lassecciones del atlasde
este libro son de preparados de estasmismas cajas. Adems, lamayor
parte de las microfotogra- fiasutilizadas parailustrar tejidosy
rganosen lasclases tericas de histologa y en conferencias se
obtienen de estos preparados. A veces se usan otras tcnicas para
demostrar componentes especfi cos de las clulas y los tejidos;
varias de estas tcnicas se describen ms adelante. El primer paso en
la preparacin de una muestra de tejido u rgano es la fijacin para
conservar la estructura. La fijacin, en general obtenida mediante
el empleo de sustan ciasqumicas individualeso mezclasde
estassustancias, conservala estructura del tejido de forma
permanente para permitir el trata miento ulterior. Las muestras
tienen que sumergirse en el fijador inmediatamente despus de
extraerse del organismo. La fijacin se udliza para: abolir el
metabolismo celular, impedir la degradacin enzimtica de las clulas
y de los tejidos por autlisis (autodigestin), destruir los
microorganismos patgenos, como las bacterias, los hongos o
losvirusy endurecer el tejido como consecuenciade la formacin de
enla cescruzados o de ladesnaturalizacinde las molculasproteicas.
El fijador de uso ms comn es la formalina: una solucin acuosa de
formaldehdo al 37%, en diluciones variadas y en combinacin con
otras sustancias qumicas y amortiguadores (bujfers). El formaldehdo
preserva la estructura general de la clula y de los componentes
extracelulares al reaccionar con los grupos amino de las protenas
(con mucha frecuencia forma enlaces cruzados entre residuos de
lisina). Dado que el formal dehdo no altera significativamente su
estructura tridimensional, las protenas mantienen su capacidad de
reaccionar con anti cuerpos especficos. Esta propiedad es
importante en los mto dos de tincin inmunocitoqumica (vase la p.
7). La solucin comercial estndar de formaldehdo amortiguado con
fosfatos (pH 7) acta con bastante lentitud, pero penetra bien en el
teji do. Sin embargo, el formaldehdo no reacciona con los lpidos y,
por consiguiente, es un mal fijador de las membranas. En el segundo
paso, la muestra se dispone para su inclusin en parafina con el fin
de permitir su corte. CUADRO 1 .1 Equivalencias en las medidas de
longitud 1 picmetro (pm) = 0,01 angstroms () 1 angstrom = 0,1
nanmetro (nm) 10 angstroms = 1,0 nanmetro 1 nanmetro = 1.000
picmetros 1.000 nanmetros = 1,0 micrmetro (|xm) 1.000 micrmetros =
1,0 milmetro (mm) Para poder examinar la muestra hay que
infiltrarla con un medio de inclusin que permita realizar cortes
muy delgados, de 5 a 15 |Xm (1 micrmetro [Jim] equivale a una
milsima parte de un milmetro; vase el Cuadro 1.1). Luego de la fija
cin, la muestra se lava y se deshidrata en una serie de solucio
nesalcohlicas de concentracin creciente hasta alcanzar alcohol al
100%. En el paso siguiente, el aclarado, se utilizan solventes
orgnicos como xileno o tolueno, que son miscibles tanto en alcohol
como en parafina, para extraer el alcohol al 100% antes de la
infiltracin de la muestra con parafina fundida. Cuando la parafina
fundida se ha enfriado y endurecido, se empareja para formar un
bloque de tamao adecuado. Este blo que, llamado taco, se coloca
entonces en una mquina corta dora especial, el micrtomo, que lo
corta en rebanadas finas con una cuchilla de acero. Luego, los
cortes obtenidos se montan sobre portaobjetos devidrio a losque
antesse lesha aadido una pequea cantidad de medio de montaje
(albmina, pineno o resinas acrlicas) para que sirva de adhesivo. En
el tercer paso, la muestra se tie para permitir su examen. Dado que
los cortes en parafina son incoloros, la muestra todava no est
lista para su examen bajo el microscopio ptico. Para colorear o
teir los cortes histolgicos, la parafina debe disolverse y
extraerse, de nuevo con xileno o tolueno, y los teji dos deben
rehidratarse mediante el uso de una serie de alcoholes de
concentracin decreciente. Luego, el tejido sobrelos portaob jetos
se tie con hematoxilina en agua. Como el colorante de contraste, la
eosina, es ms soluble en alcohol que en agua, se vuelve a
deshidratar la muestra en solucionesalcohlicas de con centracin
creciente y despusse tie con eosina en alcohol. Los resultados de
la tincin con hematoxilina sola, con eosina sola y con ambos
colorantes se muestran en la Figura 1.1. Luego de la coloracin, la
muestra se hace pasar por xileno o tolueno y se le coloca un medio
de montaje no acuoso antes de cubrirla con un cubreobjetos para
lograr un preparado permanente. Otros fijadores La formalina no
preserva todos los componentes de las clu las y los tejidos. Aunque
los cortes teidos con H-E de muestras fijadas en for malina son
convenientes porque dejan ver bien las caractersticas
estructuralesgenerales, no son especficos paradilucidar la compo
sicin qumica de los elementos constitutivos celulares. Adems,
muchos componentes se pierden durante la preparacin de la muestra.
Pararetener estos componentes y estructuras hay que uti lizar otros
mtodos de fijacin. Estos mtodos se fundamentan en un conocimiento
slido de la qumica. Por ejemplo, los alcoholes 2
- 22. FIGURA 1 .1 Coloracin con hematoxilina y eosina (H-E). Las
tres imgenes que se presentan aqu corresponden a cortes de pn creas
seriados (contiguos) para demostrar el efecto de la hematoxilina y
de la eosina utilizadas solas o combinadas, a. En esta microfo-
tografa se ve una coloracin con hematoxilina sola. Si bien hay una
tincin general de la muestra, aquellos componentes y aquellas
estructuras con gran afinidad por el colorante se tien con una
intensidad mucho mayor, por ejemplo, el DNA nuclear y el RNA
citoplas- mtico. b. De manera similar, la eosina (colorante de
contraste), al usarse sola, consigue una tincin general de los
tejidos, como puede verse en esta microfotografa. Obsrvese, sin
embargo, que los ncleos son menos conspicuos que en la muestra
teida slo con hema toxilina. Despus de que la muestra se colorea
con hematoxilina, y luego de que se la prepara para su tincin con
eosina en solucin alcohlica, la hematoxilina que no estaba unida
con firmeza se lava, y entonces la eosina tie aquellos componentes
para los que tiene gran afinidad, c. En esta microfotografa pueden
verse los efectos tintoriales combinados de ambos colorantes (H-E).
480 x. y los solventes orgnicos que se usan en las preparaciones de
ruti na diluyen loslpidos neutros. Para conservar los lpidos
neutros, como los de las clulas adi posas, deben utilizarse cortes
por congelacin de tejido fijado en formalina y colorantes que se
disuelvan en las grasas; para con servar estructuras de la membrana
hay que usar fijadores espe ciales con metales pesados, como
permanganato y osmio, que se unan a los fosfolpidos (Recuadro 1.1).
El empleo de rutina de tetrxido de osmio como fijador en la
microscopa electrnica es la razn principal del excelente estado de
conservacin de las membranas en las microfotografas electrnicas.
Otras tcnicas de tincin La hematoxilina y la eosina se utilizan en
histologa principal mente para poner en evidencia las
caractersticas estructurales. A pesar de los mritos de la tincin
con H-E, este procedimien to no permite ver adecuadamente
ciertoscomponentes estructura les de los cortes histolgicos, a
saber, elastina, fibras reticulares, membranas basales y lpidos.
Cuando se desea estudiar estos com ponentes pueden utilizarse otros
mtodos de tincin, en su mayo ra selectivos, que incluyen la
coloracin con orcena y fucsina- resorcinapara el material elsticoy
la impregnacin argntica para las fibras reticulares y las membranas
basales. Pese a que el funda mento qumico de muchos no siempre
secomprende, estosproce dimientos sirven. En cualquier caso, es ms
importante saber lo que elmtodo permite observarque conocersu
mecanismo ntimo de accin. HISTOQUMICA Y CITOQUMICA Los
procedimientos qumicos especficos pueden proveer informacin
detallada acerca de la funcin de las clulas y de los componentes
extracelulares de los tejidos. Los mtodos histoqumicos y
citoqumicos pueden tener su fundamento en la unin especfica de un
colorante, en el uso de anticuerpos marcados con un colorante
fluorescente diri gidos contra un componente celular en particular
o en la activi dad enzimtica inherente de un elemento constitutivo
de las clulas. Adems, muchas macromolculas presentes en las clu las
pueden detectarse por medio de la radioautografa, en la cual
precursores moleculares marcados radiactivamente se incor poran en
las clulas y en los tejidos antes de la fijacin. Muchos de estos
procedimientos pueden usarse en preparados tanto para la microscopa
ptica como para la microscopa electrnica. Antes de comentar la
qumica de las tinciones de rutina y de las tcnicas histoqumicas y
citoqumicas, convendr describir breve mente la ndole de un corte
histolgico comn. Composicin qumica de las muestras histolgicas La
composicin qumica de un tejido listo para una colora cin de rutina
es muy diferente de la del tejido vivo. Los componentes que
perduran luego de la fijacin son princi palmente molculas grandes
que no se disuelven con facilidad, en especial despus de aplicar el
fijador. Estas molculas grandes, en particular las que reaccionan
con otras molculas semejantes para formar complejos
macromoleculares, son lasque suelen conservar seen un corte
histolgico. Los siguientes son ejemplos de estos complejos
macromolecula resgrandes: nucleoprotenas, formadas por cidos
nucleicos unidos a pro tenas; protenas intracelulares del
citoesqueleto, en complejo con otras protenas; protenas
extracelulares en grandes aglomeraciones insolu- bles, en las
cuales molculas vecinas semejantes se unen a travs 3
- 23. RECUADRO 1.1 Correlacin clnica: biopsias por congelacin A
veces el patlogo necesita evaluar de inmediato el tejido obtenido
durante el acto quirrgico; en especial cuando el diagnstico
patolgico instantneo puede determinar el paso siguiente en la
ciruga. Hay varias indicaciones para realizar este tipo de
evaluacin, que se conoce como bio psia p o r congelacin. Con m ucha
frecuencia, un cirujano en el quir fano solicita una biopsia por
congelacin cuando se carece de un diagnstico preoperatorio o cuando
hay que identificar hallazgos intraoperatorios inesperados. Adems,
el cirujano puede querer saber si se ha extirpado toda la masa
patolgi ca dentro del lmite del tejido sano y si el borde de la
resec cin quirrgica est libre de tejido enfermo. Las biopsias por
congelacin tambin se realizan en combinacin con otros
procedimientos, como la endoscopia o la biopsia con aguja fina,
para confirmar si el material bipsico obtenido ser til en estudios
patolgicos adicionales. Para realizar una biopsia por congelacin se
siguen tres pasos principales: Congelacin de la muestra de tejido.
Se congelan muestras de tejido de tamao pequeo mediante el uso de
anhdrido carbnico comprimido o mediante la inmersin en un lquido
fro (isopentano) a una temperatura de -50 C. El enfriamien to puede
lograrse en una cmara refrigeradora muy eficien te. La congelacin
endurece el tejido y permite el corte con un micrtomo. Corte del
tejido congelado. El corte suele realizarse dentro de un cristato
(una cmara refrigerada que contiene un micrto mo). Dado que el
tejido est congelado y duro, puede cortar se en rebanadas muy finas
(5 a 10 mm). Luego, los cortes se montan sobre portaobjetos de
vidrio. Tincin de los cortes. La tincin se realiza para diferenciar
los ncleos celulares del resto de las estructuras del teji do. Las
tinciones de uso ms frecuente para las biopsias por congelacin son
H-E, azul de metileno (Fig. F1.1.1) y PAS. Todo el proceso de
preparacin y evaluacin de las biopsias por congelacin puede tardar
en completarse en un mnimo de 10 minutos. El tiempo total que
transcurre hasta obtener resultados depende sobre todo del tiempo
de transporte del tejido desde el quirfano hasta el laboratorio de
patologa, de la tcnica histopatolgica utilizada y de la experiencia
del patlogo. Los hallazgos se comunican directamente al ciruja no
que est esperando en el quirfano. FIGURA R1.1.1 Evaluacin de una
muestra obtenida durante el acto quirr gico y preparada mediante la
tcnica de congelacin, a. En esta microfotografa se ve una muestra
obtenida del intestino grue so que se prepar mediante la tcnica de
congelacin y se ti con azul de metileno (biopsia por congelacin).
160 x. b. Parte de la muestra se fij en formalina y se proces con
una tcnica de rutina que comprende la coloracin con H-E (biopsia
diferida). El examen de la biopsia por conge lacin permiti
comprobar que el tejido era normal. El diagnstico se confirm despus
mediante del examen del preparado de ruti na teido con H-E. 180 x.
(Gentileza del doctor Daniel W. Visscher.) de enlaces cruzados,
como ocurre en la formacin de las fibras colgenas; y complejos de
fosfolpidos y protenas (o hidratos de car bono) en las membranas.
En su mayor parte, estas molculas constituyen la estructura de
lasclulasyde los tejidos, dado que son loselementos morfgenos
hsticos. Son la base de la organizacin de los tejidos visiblecon el
microscopio. En muchos casos, un elemento estructural es al mismo
tiempo una unidad funcional. Por ejemplo, en el caso de lasprotenas
que forman los filamentos contrctiles de las clulas musculares,
ellos son los componentes estructurales visibles y adems participan
en el proceso de contraccin. El RNA del citoplasma aparece como
parte de un componente estructural (ergastoplasma de las clulas
secretoras, sustancia de Nissl de las neuronas) y al mismo tiempo
es un participante activo en lasntesis de las protenas. Muchos
componentes de los tejidos desaparecen durante la preparacin de los
cortes teidos con H-E. A pesarde que los cidos nucleicos, las
protenas y los fosfolpi dos en su mayora seconservan en loscortes
histolgicos, tambin muchos se pierden. Las protenas pequeas y los
cidos nucleicos pequeos (como los RNA de transferencia) en general
se pierden 4
- 24. CUADRO 1 . 2 Algunos colorantes bsicos y cidos durante la
preparacindel tejido. Como semencion antes, lossol ventes orgnicos
utilizados durante la tcnica histolgica suelen disolver los lpidos
neutros. Tambin pueden perderse molculas grandes,
porejemplo,alserhidrolizadascomo consecuenciadel pH desfavorable de
las soluciones fijadoras. Los que siguen son ejemplos de
macromolculas que se pierden durante la fijacin de rutina en
fijadores acuosos: glucgeno (-hidratode carbono de almacenamiento
intracelular comn en el hgado y en las clulas musculares) y
proteoglucanos y giucosaminoglucanos (hidratos de carbono complejos
extracelulares hallados en el tejido conjuntivo). Estas molculas,
sin embargo, pueden conservarse si se utilizan fijadores no acuosos
para el glucgeno o si a la solucin fijadora se le aaden agentes
ligadores especiales que preserven las molculas extracelulares con
hidratos de carbono abundantes. Los componentes solubles, iones y
molculas pequeas tam bin desaparecen durante la preparacin de las
muestras incluidas en parafina. Metabolitos intermedios, glucosa,
sodio, cloroy sustancias simi laressepierden durante lapreparacin
delasmuestrasde rutina que se incluyen en parafina y luego que se
tien con H-E. Muchas de estassustancias pueden estudiarse en
preparados especiales, en oca siones con una prdida considerable de
la integridad estructural. Estos iones y pequeas molculas solubles
no constituyen elemen tos morfgenos hsticos, sino que participan en
los procesos de sn tesis o en las reacciones celulares. Cuando se
conservan y pueden detectarsepor mtodos especficosaportan
informacin valiossima sobreelmetabolismo,eltransporte activoyotros
procesosvitalesde las clulas. El agua, una molcula muy verstil,
participa en estas reacciones y en estos procesos, y contribuye a
estabilizar la estruc tura macromolecular a travs de enlaces de
hidrgeno. Fundamentos qumicos de la coloracin Colorantes cidos y
bsicos La hematoxilina y la eosina son los colorantes de uso ms fre
cuente en la histologa. Un colorante cido, como la eosina, tiene
una carganeta nega tivaen su parte coloreada yse describe con
lafrmula general [Na* anilina-]. Un colorante bsico, tiene una
carga netapositiva en su parte coloreada yse describe con la frmula
general [anilina*Cl-]. La hematoxilina no es estructuralmente un
colorante bsico, pero tiene propiedades tintorialesmuy semejantesa
las de lasanili nas bsicas. Elcolor de unaanilina no est
relacionadocon elhecho de que sea cida o bsica, como lo demuestran
losejemplos que se presentan en el Cuadro 1.2. Los colorantes
bsicos reaccionan con los componentes am nicos de las clulas y de
los tejidos (componentes que tienen una carga neta negativa) Entre
loscomponentes amnicos seencuentran losgruposfos fato de los cidos
nucleicos, los grupos sulfato de losglucosamino- glucanos y los
grupos carboxilo de las protenas. La capacidad de estos grupos
amnicos de reaccionar con una anilina o colorante bsico se denomina
basofxlia [gr. basis + philein, amar; es decir que tiene afinidad
por lo bsico]. Los componentes del tejido que se tien con la
hematoxilina tambin exhiben basofilia. C olorante C olor C
olorantes bsicos Verde de metilo Verde Azul de metileno Azul
Pironina G Rojo Azul de toluidina Azul C olorantes cidos Fucsina
cida Rojo Azul de anilina Azul Eosina Rojo Naranja G Naranja La
reaccin de los grupos amnicosvara segn el pH. As: Con unpH
alto(cercade 10) lostresgruposse ionizan y quedan
disponiblesparalareaccinconelcolorante bsicopormedio de uniones
electrostticas. Con un pH ligeramentecidoa neutro (5 a 7) se
ionizan los gru pos fosfatoy sulfato, y quedan disponibles para
reaccionar con la anilina bsicaa travs de uniones electrostticas.
Con un pH bajo (inferior a 4) slo se mantienen ionizados los
grupossulfato para reaccionar con los colorantes bsicos. En
consecuencia, la tincin con colorantes bsicos en un pH determinado
puede utilizarse para centrar el estudio en grupos amnicos
especficosy,dado queestosaniones especficospredomi nan en ciertas
macromolculas, la tincin sirve entonces como un indicador de estas
macromolculas. Como yase mencion, lahematoxilina no esun colorante
bsi co en sentido estricto. Se usa con un mordiente (esdecir, un
inter mediario entre el componente del tejido y la anilina). Es por
la accin del mordiente que la coloracin con hematoxilina se parece
a la tincin que produce un colorante bsico. La unin en el com plejo
tejido-mordiente-hematoxilina no consiste en un simple enlace
electrosttico y cuando la hematoxilina secolocaen aguano se
disociadel tejido. La hematoxilina sepresta paraaquellos proce
dimientos tintoriales en los que a ella le siguen soluciones
acuosas de colorantescidos. Loscolorantes bsicosverdaderos,
adiferencia de la hematoxilina, no suelen usarseen secuenciasen
lasque laani lina bsica es seguida por una anilina cida. La anilina
bsica tien de entonces a disociarsedel tejido durante los lavadosen
soluciones acuosasquese realizanentre laaplicacinde
ambassolucionescolo rantes. Los colorantes cidos reaccionan con los
grupos catinicos de las clulas y de los tejidos; en particular, con
los grupos aminoionizados de las protenas. La reaccin de los grupos
catinicos con un colorante cido recibe el nombrede acidofilia [lat.
acidus+gr.philein, amar;o sea, que tiene afinidad por lo cido]. Las
reacciones de los componen tescelularese hsticoscon los colorantes
cidos no son tan especfi cas ni tan precisascomo las reacciones con
los colorantes bsicos. Aunque el enlace electrosttico es el factor
principal en la a 5
- 25. unin primaria de un colorante cido con el tejido, no es el
nico; debido a ello, los colorantes cidosa vecesse utilizan com
binados para teir selectivamente distintos componentes de los
tejidos. Por ejemplo, en la tcnica tricrmica de Mallory, se usan
trescolorantes cidos: azul de anilina, fucsina cida y naran ja G.
Estos colorantes tien con selectividad el colgeno, el cito plasma
en general y los eritrocitos, respectivamente. La fucsina cida
tambin tie los ncleos. En otrastcnicascon anilinascidas
mltiplesseemplealahema toxilina para teir primero los ncleos y
luego se aplican los colo rantes cidos con el fin de teir
selectivamente el citoplasma y las fibras extracelulares. La tincin
selectivade los componentes de los tejidos por los colorantes cidos
se debe a factores relativos, como el tamao y el grado de
acumulacin de las molculas del coloran te y la permeabilidad y la
densidad del tejido. Los colorantes bsicos tambin pueden utilizarse
combinados o secuencialmente (p. ej., verdede metilo y pironina
para estudiar la sntesis y secrecin de las protenas), pero estas
combinaciones no son de uso tan difundido como lasde los colorantes
cidos. Una cantidad limitada de sustancias dentro de las clulas y
en la matriz extracelular presenta basofilia. Entre estas
sustancias se incluyen: heterocromatina y nuclolos del ncleo
(principalmente por los grupos fosfato ionizados en los cidos
nucleicos de ambos), componentes citoplasmticos como el
ergastoplasma (tam bin por los grupos fosfato ionizados en el RNA
ribosmico) y material extracelular como los hidratos de carbono
complejos de la matriz cartilaginosa (por los grupos sulfato
ionizados). La tincin con colorantes cidos es menos especfica, pero
ms sustancias dentro de las clulas y en la matriz extracelu lar
presentan acidofilia. Estas sustancias comprenden: la mayor parte
de los filamentos citoplasmticos, en especial losde las clulas
musculares, la mayora de los componentes membranosos intracelulares
y una gran parte del citoplasma no especializado de otro modo y la
mayor parte de las fibras extracelulares (principalmente por los
grupos amino ionizados). Metacromasia Ciertos colorantes bsicos
reaccionan con componentes hs ticos que hacen cambiar su color
normal del azul al rojo o al prpura; esta modificacin de la
absorbancia se denomina metacromasia. El mecanismo subyacente para
la metacromasia es la presencia de polianiones en el tejido. Cuando
estos tejidos se tien con una solucin colorante bsica concentrada,
como la de azul de tolui- dina, las molculas de la anilina estn
suficientemente cerca como para formar aglomeraciones dimricasy
polimricas. Las propieda des deabsorcin de estasaglomeraciones son
diferentes de lasde las molculas de colorante individuales no
aglomeradas. Las estructuras de lasclulasyde los tejidos con una
altaconcen tracindegrupossulfato yfosfatoionizados,como
lasustanciafun damental del cartlago, losgrnulos de heparina de los
mastocitosy el retculo endoplasmtico rugoso de los plasmocitos,
exhiben metacromasia. En consecuencia, el azul de toluidina sever
prpu ra o rojo cuando tia estos componentes. Grupos aldehido y el
reactivo de Schiff La capacidad de la fucsina bsica decolorada
(reactivo de Schiff) para reaccionar con los grupos aldehido trae
como consecuencia la aparicin de un color rojo distintivo, que es
la base de las reacciones de PAS (cido perydico-reactivo de Schiff)
y de Feulgen. La reaccin de PAS (cido perydico-reactivo de Schiff)
tie hidratos de carbono y macromolculas con abundancia de hidratos
de carbono. Se usa para detectar glucgeno en las clulas, moco en
varios tipos de clulasy tejidos, la membrana basal subya cente a
los epitelios y las fibras reticulares del tejido conjuntivo. La
reaccin de Feulgen, que comprende la hidrlisiscida dbil con HC1, se
utiliza para teir DNA. La reaccin de PAS tiene como fundamento lo
siguiente: Losanillosde lashexosas (hidratos de carbono) poseen
carbonos contiguos, cada uno de ellos con un grupo hidroxilo (OH).
Las hexosaminas de los glucosaminoglucanos tambin poseen carbonos
contiguos, pero con alternancia de grupos hidroxilo (OH) y grupos
amino (NH2). El cido perydico rompe la unin entre estos tomos de
carbo no contiguosy forma grupos aldehido. Estos grupos aldehido
reaccionan con el reactivo de Schiffpara dar un color prpura
intenso distintivo. La tincin con PAS de la membrana basal (Fig.
1.2) y las fibras reticulares tiene su fundamento en el contenido o
la asociacin de proteoglucanos (hidratos de carbono complejos
asociados con un centro de protena). Esta tincin es una alternativa
a las tcnicasde impregnacin argntica, que tambin tienen como base
la reaccin con lasmolculas de sacridos de los proteoglucanos. La
reaccinde Feulgenseparalas purinasde lasdesoxirribosasdel DNA por
medio de una hidrlisis cidadbil; losanillosde mono-
sacridoentoncesseabren yse forman grupos aldehido. De nuevo, FIGURA
1 .2 Microfotografa de tejido renal teido con la tc nica de PAS.
Esta tcnica histoqumica sirve para demostrar y localizar hidratos
de carbono y macromolculas con hidratos de carbono abundantes. Las
membranas basales son PAS positivas, segn es obvio por su coloracin
rojo prpura intensa. Los tbulos renales (7) se encuentran bien
delineados por la membrana basal teida que los rodea. Los capilares
glomerulares (C) y el epitelio de la cpsula de Bowman (BQ tambin
poseen membranas basales PAS positivas. 360 x.
- 26. RECUADRO 1.2 Consideraciones funcionales:
microespectrofotometra de Feulgen La m icroespectrofotom etra de
Feulgen es una tcnica que fue ideada para el estudio de los
aumentos del DNA en las clulas en desarrollo y para analizar la
ploida, es decir, la can tidad de veces que est multiplicado el
contenido normal del DNA en una clula (se dice que una clula
somtica normal que no se est dividiendo es diploide-, en cambio,
los esper matozoides o los vulos son haploides). Dos tcnicas, la
cito- m etra esttica para cortes de tejido y la citom etra de flujo
para clulas aisladas, se utilizan para cuantificar el DNA nuclear.
La tcnica de la citometra esttica de cortes de tumores tei dos con
el mtodo de Feulgen se vale de la microespectrofo tometra acoplada
a un sistema de visualizacin digital para cuantificar la absorcin
de luz con una longitud de onda de 560 nm por parte de las clulas y
de las aglomeraciones celu lares. En cambio, la tcnica de la
citometra de flujo utiliza ins trumentos capaces de rastrear slo
clulas individuales que fluyen ante un detector en un medio lquido.
Esta tcnica per mite el anlisis cuantitativo rpido de una clula
individual sobre la base de la medicin de la luz fluorescente
emitida. En la actualidad, la microespectrofotometra de Feulgen se
utiliza para estudiar cambios en el contenido del DNA de las clulas
en divisin que se estn diferenciando. Tambin se usa en clnica para
analizar la cantidad cromosmica anormal (es decir, los patrones de
ploida) en las clulas neoplsicas malig nas. Se dice que las clulas
malignas que exhiben mayoritaria- mente un patrn diploide estn bien
diferenciadas y que los tumores con estos tipos de clulas tienen un
pronstico mejor que los mismos cnceres con clulas aneuploides (con
mlti plos no enteros de la cantidad haploide de DNA) o
tetraploides. La microespectrofotometra de Feulgen ha sido de
particular utilidad en estudios de adenocarcinomas (tumores del
epitelio glandular) especficos, cncer mamario, cncer de rin, cn
ceres colnicos y de otras partes del tubo digestivo, cncer del
endometrio (mucosa del tero) y cncer ovrico. Es una de las
herramientas ms valiosas que los patlo gos utilizan para evaluar la
potencialidad metastsica de estos tumores y para tomar decisiones
pronsticas o tera puticas. son los grupos aldehido de formacin
reciente los que reaccionan con el reactivo de Schiffpara dar el
color rojo prpura caractersti co. La reaccindel reactivo de
Schiffcon el DNA es estequiom- trica, lo que significa que el
producto de esta reaccin puede medirse y es proporcional a la
cantidad de DNA. Por consiguien te, esta reaccin puede usarse en
mtodos espectrofotomtricos para cuantificar el DNA en el ncleo de
una clula. El RNA no se tie con el reactivo de Schiffporque no
tiene desoxirribosa. Digestin enzimtica La digestin enzimtica de un
corte adyacente a otro teido para identificar un componente
especfico (como glucgeno, DNA o RNA) puede ser til para confirmar
la identidad del material que se tie. El material intracelularque
setie con-la reaccinde PAS puede identificarse como glucgeno
mediante el tratamiento previo de los cortes con diastasao amilasa.
La faltade tincin despus deeste tratamiento identificacon
positividadque elmaterialteido esglu cgeno. De un modo similar, el
pretratamiento de loscortes histolgicos con
desoxirribonucleasa(DNAsa)evitar latincin con Feulgenen esos
cortes, y el tratamiento de muestras de epitelios secretores de
protenascon ribonucleasa (RNAsa) impedir la tincin del ergas-
toplasma con los colorantes bsicos. Histoqumica enzimtica Las
tcnicas histoqumicas tambin se utilizan para identifi car y
localizar enzimas en clulas y tejidos. Para localizar enzimas en
los cortes histolgicos debe tenerse especial cuidado durante la
fijacin para que se preserve la activi dad enzimtica. La fijacin
aldehdica dbil suele ser el mtodo preferido. En estos
procedimientos se detecta el producto de reac cin de laactividad
enzimtica y no la enzima propiamente dicha. En general se usa un
reactivo de captura, que puede ser un colo rante o un metal pesado,
para atrapar o fijar el producto de reac cin de laenzimamediante
precipitacin en el sitio de la reaccin. En una reaccin tpica para
detectar una enzima hidroltica, el corte histolgicosecoloca en una
solucin que contiene un sustra to (AB) y un agente de atrapamiento
(T) que precipitar uno de los productos como sigue: A B + T - * AT
+ B donde AT es el producto final atrapado y B es el sustrato
hidroli- zado. Medianteelusodeestetipo de tcnicassepudoequipararel
liso- soma, identificado por primera vezen estudios celulares de
centri fugacin diferencial con un componente vacuolar visible en
las microfotografas electrnicas. En los tejidos sometidos a una
fija cin dbil lashidrolasascidasy lasesterasascontenidas en
losliso- somas reaccionan con un sustrato adecuado. La mezcla
reactiva tambin contieneionesde plomo paraprecipitar,por ejemplo,
fos fato de plomo derivado de la accin de la fosfatasacida. Luego
el producto de reaccin precipitado puede verse tanto con microsco
pa ptica como con microscopa electrnica. Sehan desarrollado
procedimientoshistoqumicossimilarespara microscopa ptica y
electrnica con el fin de demostrar fosfatasa alcalina, adenosina
trifosfatasas (ATPasas) de varios tipos (incluida la Na*/K*-ATPasa,
que es el fundamento enzimtico de la bomba de sodio en clulas y
tejidos), diversas esterasas y muchas enzimas respiratorias (Fig.
1.3). Inmunocitoqumica La especificidad de la reaccin entre el
antgeno y el anti cuerpo es el fundamento de la inmunocitoqumica.
Los anticuerpos (tambin llamados inmunoglobulinas) son
glucoprotenasproducidas porclulasespecficasdel sistemainmu- nitario
en respuesta a una protena extraa o antgeno. En ellabo ratorio, los
anticuerpos pueden purificarsede lasangrey conjugar- 7
- 27. FIGURA 1 .3 Procedimiento histoqumico para la localizacin
de la ATPasa en la membrana de las clulas epiteliales de la vescula
biliar de un conejo en la microscopa electrnica. Las regiones
oscuras que se ven en la microfotografa electrnica sea lan la
localizacin de la enzima ATPasa. Esta enzima se detecta en la
membrana plasmtica de las regiones laterales de las clulas epi
teliales, lo cual concuerda con la ubicacin de las bombas de sodio.
Estas clulas epiteliales realizan un transporte activo de molculas
a travs de la membrana plasmtica. 26.000 x. se (asociarse) con un
colorante fluorescente. En general, los colo rantes fluorescentes
(fluorocromos) son sustancias qumicas que absorben luz de
longitudes de onda diferentes (p. ej., luz ultra violeta) y luego
emiten luz visible de una longitud de onda espec fica (p. ej.,
verde, amarillo, rojo). La fluorescena (el colorante de uso ms
frecuente) absorbe la luz ultravioleta y emite luz verde. Los
anticuerpos conjugados con fluorescenapueden aplicarsea cortesde
tejido (tanto losobtenidos por congelacin como provenientes de
muestras sometidas a una fijacin leve) sobre portaobjetos de vidrio
para localizar un antge no en las clulas y en los tejidos. La
reaccin del anticuerpo con el antgeno luego puede exami narsey
fotografiarse con un microscopio de fluorescencia o con un
microscopioconfocalque produce una reconstruccin tridimensio nal
del tejido examinado (Fig. 1.4). En la inmunocitoqumica se utilizan
dos tipos de anticuer pos: anticuerpos policlonales (producidos por
animales inmunizados) y anticuerpos monoclonales (producidos por
lneas celulares productoras de anticuerpos inmortalizadas de
duplicacin continua). En un procedimiento tpico, una protena
especfica, como la actina, se asla a partir de las clulas
musculares de una especie (p. ej., rata) y se inyecta en la
circulacin de otra especie (p. ej., conejo). En el conejo
inmunizado, el sistema inmunitario recono ce como antgenos extraos
las molculas de actina de la rata. Este reconocimiento desencadena
una cascada de reacciones inmunol- gicasque comprende muchos grupos
(clones) de clulas inmunita- rias llamadas linfocitos B. La
clonacin de loslinfocitos B condu- 8 FIGURA 1 .4 Imagen de
microscopa confocal de una clula m uscular cardaca de rata. Esta
imagen se obtuvo con el micros copio confocal mediante el uso de la
tcnica de inmunofluorescen- cia indirecta. Se utilizaron dos
anticuerpos primarios. El primer anti cuerpo primario reconoce un
transportador de lactato especfico (MCT1) y se detecta con un
anticuerpo secundario conjugado con rodamina (rojo). El segundo
anticuerpo primario est dirigido con tra la protena transmembrana
CD147, que tiene una asociacin estrecha con el MCT1. Este
anticuerpo se detect mediante un anticuerpo secundario marcado con
fluorescena (verde). El color amarillo aparece en los sitios en los
que los dos anticuerpos secun darios marcados tienen exactamente la
misma localizacin (es decir, colocalizan) dentro de la clula
muscular cardaca. Esta ima gen tridimensional muestra que ambas
protenas estn distribuidas en la superficie de la clula muscular,
mientras que el transporta dor de lactato solo aparece profundo con
respecto a la membrana plasmtica. (Gentileza de los doctores Andrew
P. Halestrap y Catherine Heddle.) ce finalmente a la produccin de
anticuerpos antiactina. En con junto, estos anticuerpos
policlonales son mezclasde anticuerpos diferentes producidos por
muchos clones de linfocitos B, donde cada clon reconoce una regin
diferente de la molcula de actina. Luego, estos anticuerpos se
extraen de la sangre, se purifican y se conjugan con un colorante
fluorescente. En laactualidad,pueden usarsepara ladeteccinde
molculasde actina en los tejidos o las clulas de la rata. Si hay
actina en una clulao en un tejido, como un fibroblasto del tejido
conjuntivo, el anticuerpo marcado con fluorescena se le une y la
reaccin puede verse con el microscopio de fluorescencia. Los
anticuerpos monoclonales (Recuadro 1.3) son los sinte tizados por
una lnea celular productora de anticuerpos com puesta por un solo
grupo (clon) de linfocitos B idnticos. El clon individual que se
convierte en una lnea celular se obtiene de un sujeto con mieloma
mltiple, un tumor derivado de un solo plasmocito productor de
anticuerpos. Los sujetos con mie loma mltiple producen una poblacin
grande de anticuerpos homogneos idnticos con una especificidad
idntica contra un antgeno. Para producir anticuerpos monoclonales
contra un antgeno especfico,seinmuniza un ratn o una rata con
eseantgeno. Luego se aslan del tejido linftico (bazo o ganglios
linfticos) del animal los linfocitos B activadosy se fusionan con
la lnea celular de mi-
- 28. RECUADRO 1.3 Correlacin clnica: anticuerpos monoclonales en
medicina En la actualidad, los anticuerpos m onoclonales son de uso
muy difundido en las tcnicas de inmunocitoqumica y tambin tienen
muchas aplicaciones clnicas. Los anticuerpos monoclo nales
conjugados con compuestos radiactivos se utilizan para detectar y
diagnosticar metstasis tumorales en patologa, para diferenciar
subtipos de tumores y sus etapas de diferenciacin y, en el
diagnstico de las enfermedades infecciosas, para iden tificar los
microorganismos en la sangre y en los lquidos hsti cos. En estudios
clnicos recientes, se han usado anticuerpos monoclonales conjugados
con inmunotoxinas, agentes quimio- terpicos y radioistopos para
entregar agentes teraputicos a clulas tumorales especficas del
organismo. loma. Esta fusin produce un hibridoma: una lnea celular
secre tora de un anticuerpo individual inmortalizada. Para obtener
anticuerpos monoclonales contra molculas de actina de rata, por
ejemplo, los linfocitos B de los rganos linfti cos de conejos
inmunizados tienen que fusionarse con clulas de mieloma. Para
localizar un antgeno diana o blanco en clulas y teji dos, se
utilizan mtodos inmunocitoqumicos tanto directos como indirectos.
Latcnicadeinmunocitoqumica msantiguaqueseutilizapara identificar
ladistribucin de un antgeno dentro de lasclulasy de los tejidos se
conoce como inmunofluorescencia directa. Esta tcnica sevalede un
anticuerpo primario (policlonalo monoclo- nal) marcado con
fluorocromo, que reaccionacon elantgeno den tro de la muestra (Fig.
1.5a). Es un procedimiento de un solo paso y comprende un solo
anticuerpo marcado. La visualizacin de las estructuras no es ideal
a causa de la poca intensidad de la emisin de laseal. Dada la
sensibilidad subptima, los mtodos de inmu nofluorescencia directa
estn siendo reemplazados cada vez ms por los mtodos indirectos. La
inmunofluorescencia indirecta provee una sensibilidad mucho mayor
que los mtodos directos y con frecuencia recibe el nombrede
tcnicadel emparedadoo de lacapadoble.En lugar de conjugar un
fluorocromo con un anticuerpo (primario) espec fico dirigido contra
el antgeno de inters (p. ej., una molcula de actina de rata), el
fluorocromo se conjuga con un anticuerpo secundario dirigidocontra
el anticuerpo primario (p. ej., un anti cuerpo de cabra antirrata;
Fig. 1.5b). Por consiguiente, cuando la fluorescena se conjuga
directamente con el anticuerpo primario especfico, el mtodo es
directo; cuando la fluorescenase conjuga con un anticuerpo
secundario, el mtodo es indirecto. El mtodo indirecto aumenta
considerablemente la seal fluo rescenteemitidaporeltejido.
Unaventaja adicionaldel mtodo de mareaje indirecto es que un solo
anticuerpo secundario puede usarse para localizar la unin
histoespecfica de varios anticuerpos primarios diferentes (Fig.
1.6). Para los estudios microscpicos, el anticuerpo secundario
puedeconjugarsecon colorantesfluorescen INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
Anticuerpo INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA Anticuerpo secundario b
FIGURA 1 .5 Inmunofluorescencia directa e indirecta, a. En la
inmunofluorescencia directa, un anticuerpo primario marcado con un
fluorocromo reacciona con un antgeno especfico dentro de la muestra
de tejido. Luego, las estructuras marcadas se examinan con el
microscopio de fluorescencia, en el cual una longitud de onda
excitadora (por lo general, luz ultravioleta) desencadena la emisin
de otra longitud de onda. La longitud de onda depende de la ndole
del fluorocromo utilizado para marcar el anticuerpo, b. El mtodo
indirecto comprende dos procesos. Primero, los anticuerpos
primarios especficos reaccionan con el antgeno de inters. Segundo,
los anticuerpos secundarios, que estn marcados con fluorocromo,
reaccionan con los anticuerpos primarios. La apariencia de las
estructuras marcadas dentro del tejido es la misma en ambos mtodos
y para verlas se necesita un microscopio de fluorescencia. 9
captulo1Tcnicahistolgicaymicroscopia0HISTOQUMICAYCITOQUMICA
- 29. tes distintos de modo que, en el mismo corte de tejido,
aparezcan marcas mltiples (vasela Fig. 1.4). Las desventajas de la
inmunofluorescencia indirecta son que es cara, que requiere mucho
trabajo y que no se adapta con facilidad a los procedimientos
automatizados. Tambin es posible conjugar anticuerpos policlonales
o mono clonales con otras sustancias, como enzimas (p. ej.,
peroxidasa de rbano), que convierten sustratosincoloros en un
producto insolu- ble de un color especfico que se precipita en el
sitio de la reaccin enzimtica. La tincin resultante de este mtodo
de inmunope- roxidasa puedeverse en el microscopio ptico (Recuadro
1.4) con tcnicas inmunocitoqumicas directas o indirectas. En otra
variante,con lamolculadeanticuerpo,puede conjugar seoro coloidal o
ferritina (una molculaquecontiene hierro). Estos marcadores pueden
versedirectamente con el microscopio electr nico. Tcnicas de
hibridacin La hibridacin es un mtodo para localizar RNA mensajero
(mRNA) o DNA mediante la hibridacin de la secuencia de inters con
una sonda de nudetidos de secuencia comple mentaria. En general, el
trmino hibridacin describe la capacidad de las
molculasmonocatenarias de DNA o RNA de interaccionar(hibri- darse)
con secuencias complementarias. En el laboratorio la hibri dacin
necesita el aislamiento del DNA o del RNA, que luego se mezclacon
una secuencia de nucletidos complementaria, llamada sonda de
nucletidos. Con mucha frecuencia, los hbridos se detectan mediante
el uso de una marca radiactiva adherida a uno de los componentes
del hbrido. La unin de la sonda y la secuencia puede ocurrir en una
solu cin o en una membrana de nitrocelulosa. En la hibridacin in
situ, la unin de la sonda de nucletidos a la secuencia de DNA o RNA
de inters se realiza dentro de las clulas o los tejidos, como
clulasde cultivoo embrionesenteros. Esta tcnica permite laloca
lizacin de secuencias de nucletidos especficas tan pequeas como 10
o 20 copias de mRNA o DNA por clula. En lahibridacin in situ se
utilizanvariassondas de nucletidos. Las sondas de oligonucletidos
pueden tener entre 20 y 40 nucletidos como mnimo. Las sondas de DNA
monocatenario o bicatenario son mucho ms largas y pueden contener
hasta 1.000 nucletidos. Para la localizacin especfica de mRNA se
utilizan sondas de RNA complementarias. Estas sondas se marcan con
istopos radiactivos (p. ej., 32P,35S, 3H), un nucletido modificado
especfi camente (digoxigenina) o biotina (un marcador multipropsito
covalente usado con mucha frecuencia). Lassondas radiactivaspue den
detectarsey visualizarsemediante laradioautografa. Ladigoxi genina
y la biotina se detectan por medio de mtodos inmunocito- qumicosy
citoqumicos, respectivamente. La fuerza de los enlaces entre la
sonda y la secu