Post on 07-Aug-2015
ANÁLISIS DE INTERACCIÓN DEL PÉPTIDO IT9302 CON EL RECEPTOR DE INTERLEUQUINA 10 HUMANA
T.M. Antonio Serrano
Inmunoterapia
• Inmunoterapia del Cáncer• Patología Autoinmune• Alergias• Trasplantes
• Terapia celular• Anticuerpos• Citoquinas
IT9302
• Nonapéptido homólogo al Dominio C terminal de hIL-10
• Conserva varias propiedades funcionales de IL-10 in vitro
Hipótesis
• IT9302 homólogo al dominio funcional de la interleuquina 10 humana interacciona con el receptor soluble IL-10R1 directamente en forma similar tal como lo realiza la porción C terminal de la citoquina nativa permitiendo el diseño de modificaciones químicas que mejoren la interacción.
Objetivo General
• Determinar interacción molecular entre el receptor soluble de interleuquina 10 de tipo 1 con el nonapéptido IT9302 homólogo al dominio funcional de la IL.10
Objetivos Específicos
Biosíntesis sIL-10R1
1
NMR IT9302
2
Cristalografía Rayos x IL10R/IT9302
3
Diseño y Síntesis Péptidos
4
Anisotropía IL-10R/Péptidos
5
Ensayos Resistencia
6
1.- Expresar y purificar la proteína soluble receptor de Interlequina 10 humana de tipo 1 en forma
recombinante
• Fracción Soluble de IL-10R
• Células de Mieloma
• Purificación• Ensayo
competencia
2.- Analizar la configuración espacial de IT9302 mediante resonancia magnética nuclear
• Síntesis química en fase sólida de IT9302
• NOE de IT9302
• Análisis computacional de estructura 3D
3.- Estudiar mediante cristalografía de rayos X la configuración espacial de interacción entre IT9302 y
sIL-10R1:
• Cristalización de IT9302/sIL-10R1
• Análisis de rayos x en Sincrotron
• Modelamiento 3D con softwares
4.- Diseñar y sintetizar modificaciones aminoacídicas no naturales de IT9302 que mejoren su afinidad y actividad específica que emulen las propiedades de IL-10 nativa
• Conocimiento de interaccion IL-10/IL-10r• Conocimiento de interracción IT9302/sIL10R1
• Modelamiento • Síntesis
5.- Evaluar afinidad del los diferentes péptidos con aminoácidos no naturales por IL-10R1, en comparación
con IT9302, por de anisotropía de fluorescencia
• Marcación con Alexa Fluor © de sIL10R1
• Incubaciones de Péptidos modificados con el receptor
• Medir anisotropía de fluorescencia
6.- Evaluar resistencia a proteasas de péptidos con aminoácidos no naturales en comparación con IT9302:
• Ensayo Funcional• Resistencia a
Proteasas del suero