CROMOSOMAS

Dra. Fedra N. Prieto M.

Un examen de la historia de la Genética y su relación con los fenómenos sociales, aporta varias lecciones, entre ellas que los planteamientos de los genetistas son rápidamente asimilados por el público y pueden ser trasladados a la vida social, a veces con consecuencias negativas; sobre todo si los genetistas, atrapados por el entusiasmo de los éxitos de la Biología Molecular, contribuyen a dar un punto de vista no balanceado sobre el rol de la Genética en la aparición de las enfermedades. Los genetistas tienen un papel clave y una responsabilidad, en asegurar que los progresos en este campo, no sean usados para hacer daño, sino para el beneficio del hombre.

CROMOSOMAS

• Son estructuras filamentosas situadas en el nucleo celular.

• Etimologia chroma= color y Soma=cuerpo.• Estan constituidos por genes• Son los vehiculos que facilitan la reproduccion

y la perpetuacion de la especie.

ESTRUCTURA

CLASIFICACION

• MORFOLOGIA• Metacentrico• Submetacentrico• Acrocentrico (satelites nucleolo)• LONGITUD• Grandes• Medianos• Pequenos

CLASIFICACION

• Por la posición del centromero

SUBDIVISION

• A = 1 – 3• B = 4 – 5• C = 6 – 12 + X• D = 13 – 15• E = 16 – 18• F = 19 – 20• G = 21 – 22 + Y

NUMERO

• El numero de cromosomas se relaciona con la especie. Asi por ejemplo:

• Gusano intestinal = 2 cromosomas• Crustaceo = 1500 – 1600 cromosomas• Mono Titi = 46 cromosomas• Chimpance = 48 cromosomas• Hombre = 46 cromosomas

NUMERO• 46 Cromosomas en su totalidad• 44 cromosomas autologos• 2 cromosomas sexuales• Los Gametos (0vulo y espermatozoide)• 23 Cromosomas en su totalidad• 22 cromosomas autologos• 1 cromosoma sexual• En 1956 Tijo y Levan determinaron 46

cromosomas el numero de cromosomas para la especie humana.

CROMOSOMAS SEXUALES

• Son los cromosomas X - Y que juegan un papel crucial en la determinacion del sexo.

• CROMOSOMA X.- Se lo denomino asi por la incertidumbre respecto a su funcion.

• CROMOSOMA Y.- Es mucho mas pequeno que el cromosoma X y contiene unicamente unos cuantos genes de importancia funcional

METODOS PARA EL ANALISIS CROMOSOMICO

• Objetivo: Se busca analizar la constitucion cromosomica de un individuo.

• CARIOTIPO.- fotomicrografia de los cromosomas individualizados y ordenados en forma estandarizada. O tambien constitucion cromosomica de un individuo.

CARIOTIPO

PREPARACION DE LOS CROMOSOMAS

• Se requieren celulas vivas nucleadas, por lo general se utilizan linfocitos de circulacion periferica. O bien celulas de la piel, medula osea, vellosidades corionicas o amniocitos.

PREPARACION DE CROMOSOMAS

1.- Aislar linfocitos.

2.- Cultivo con fitohemaglutinina. 37⁰C 3 dias.

3.- Colchicina.

4.- Solucion Hipotonica.

5.- Montar, fijar y secar.

BANDEO CROMOSOMICO

• Bandeo G.- Giemsa.

BANDEO CROMOSOMICO

- Bandeo Q – Quinacrina

BANDEO CROMOSOMICO

- Bandeo R – Reverso

BANDEO CROMOSOMICO

- Bandeo C – Heterocromatina Centromerica

BANDEO CROMOSOMICO

- Bandeo de alta resolución

ANALISIS CROMOSOMICO

- Contar numero de cromosomas en un numero especifico de células (extensiones de metafases). 10 a 15 células.

- Análisis del Patrón de Bandas de cada cromosoma individual en esas células.3 a 5 extensiones de metafases.

- Mosaicismos, 30 o mas células.

ANALISIS CROMOSOMICO

- IDIOGRAMA = cariotipo ideal estilizado . Muestra los cromosomas ordenados en pares y en orden descendente según el tamaño.

IDIOGRAMA

CITOGENETICA MOLECULAR

• HIBRIDACION IN SITU FLUORESCENTE (FISH)Fluorescent in situ hibridization Es una técnica de marcaje de cromosomas

mediante la cual los cromosomas son hibridados con sondas que emiten fluorescencia y que gracias a ello permiten la visualización, distinción y estudio de los cromosomas así como de las anomalías que puedan presentar.

FISH

• Usa segmentos de una única hebra de ADN que son tintados, o etiquetados, con una sustancia fluorescente que puede ligarse a un cromosoma específico; estos segmentos de ADN son llamados sondas.

• Los cromosomas que son usualmente utilizados con FISH son los 13, 18, 21, X e Y; sin embargo, como son posibles marcados adicionales del cromosoma, otros cromosomas pueden ser visualizados con esta técnica.

FISH

TECNICA FISH

• Desnaturalización del DNA para separar la doble hélice.

• Añadir la sonda de interés (fragmento de ADN marcado fluorescentemente).

• Las sondas hibridan a regiones específicas.• Se tiñen los núcleos con un color de contraste

inespecífico.• Las sondas de DNA pueden marcarse con

moléculas fluorescentes (método directo) o no fluorescentes que se detectan con anticuerpos fluorescentes (método indirecto).

TECNICA FISH

TECNICA FISH

• La técnica FISH puede realizarse a los cromosomas en metafase o en interfase.

• En metafase se utiliza para detectar microdeleciones específicas, translocaciones o para identificar material extra de origen desconocido. Los tipos de sondas usadas son cósmidos, satélites alfas y sondas completas (painting probes).

• En interfase se emplea sobre todo para la detección de aneuploidias o grandes delecciones, duplicaciones o translocaciones en células fetales o tumorales.

FISH EN METAFASE

• Los cósmidos son secuencias únicas que hibridan con fragmentos pequeños. Se emplean en estudios de microdeleciones.

• Las sondas satélites están formadas por secuencias altamente repetidas que se encuentran cerca de lo centrómeros. En la mayoría de los casos son específicas de cada cromosoma. Se usan para determinar aneuploidias o para identificar el origen de cromosomas marcadores.

• Las sondas completas consisten en la suma de varias sondas que hibridan en distintas zonas del cromosoma

OTRAS TECNICAS FISH

• FISH múltiple, FISH en hebra y FISH inverso.• FISH multiple (pintar cromosomas) Mezcla de

sondas de diferentes partes de un cromosoma, el cromosoma entero fluorece.

• FISH inverso (pintar a la inversa) Este tipo tendrá la peculiaridad de ser el ADN problema el que se marque.

FISH MULTIPLE

CITOMETRIA DE FLUJO

• La citometría de flujo es una técnica de análisis celular que implica medir las características de dispersión de luz y fluorescencia que poseen las células conforme se las hace pasar a través de un rayo de luz.

CITOMETRIA DE FLUJO

• Debido a las diferencias en tamaño y composición del ADN, los cromosomas se unen a diversas cantidades de colorantes fluorescentes, algunas de las cuales son especificas para secuencias G-C (gen rico) y otras para secuencias A-T (gen pobre).

• Esta propiedad de uniones diferentes permite que los cromosomas se puedan separar mediante el proceso de citometria de flujo o separacion celular activada por fluorescencia (FACS)

FACS

• Fluorescent activated cell sorting • Consiste en teñir los cromosomas metafasicos

con un colorante de ADN fluorescente.• Los cromosomas se proyectan como finas gotas a

través de un haz de laser que los excitan hasta que fluorescen.

• Un fotomultiplicador mide la intensidad de la fluorescencia y un ordenador analiza los resultados, elaborando un histograma con el tamaño cromosómico: CARIOTIPO DE FLUJO

CITOMETRIA DE FLUJO