«El telescopio

empequeñece el universo

y el microscopio lo

agranda»

*Colorante: Sustancia capaz de teñir las fibras vegetales y animales.

*Mordiente: Favorece la fijación del colorante en las fibras.

*Microscopía :Es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo normal.

COMPONENTES MECÁNICOS

Son aquellos que sirven de

sostén, movimiento.

Base, brazo, platina, tor

nillos, revolver, tubo y

cabezal.

COMPONENTES ÓPTICOS

Son los objetivos, los oculares, el condensador.

Están constituidos por sistemas de lentes.

Sistema de iluminación:

Fuente de luz, filtros y diafragma.

Aplicaciones del Microscopio Óptico

*Se da uso en laboratorio de histología yanatomía patológica, la microscopíapermite determinadas aplicacionesdiagnósticas. Numerosas estructurascristalinas, pigmentos, lípidos, proteínas,depósitos óseos.

Microscopía óptica normal (de campo brillante

coloreado)

El material a observar se colorea con colorantes específicos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera.

El microscopio de contraste de fase permite

observar células sin colorear y resulta

especialmente útil para células vivas.

Cuando la luz pasa a través de una célula viva, la

fase de la onda luminosa varía en relación al índice

de refracción de la célula la luz que pasa a través de

una zona gruesa o densa de la célula (núcleo), se

retrasa y su fase queda desplazada de forma

correspondiente respecto a la de la luz que ha

pasado a través de una región adyacente de

citoplasma, más fina

Microscopía de Campo Oscuro

El microscopio de campo oscuro se encuentra catalogado entre los microscopios

ópticos.

El microscopio óptico se compone de dos partes principalmente:

1.- Parte Mecánica: Sirve de soporte.

2.- Parte Óptica: constituida por tres sistemas de lentes.

*Condensador.

* Objetivo.

* Ocular.

El microscopio de campo oscuro esta constituido por un microscopio óptico al

cual se le acondiciona un condensador especial, este tiene como fin producir

una disfracen de los rayos luminosos enviándolos lateralmente sobre el objeto

en forma de un cono luminosos, y de esta forma tampoco penetran

directamente al objetivo.

Existen dos clases de

condensador de campo oscuro:

* Cardiode

* Paraboloide.

Ambos son utilizados con el mismo

fin, pero el cardiode tiene mayor

aplicabilidad en la investigación con

Treponemas.

Para que el efecto de campo oscuro se logre , la apertura

numérica del condensador debe ser mayor que la de el

objetivo, lo cual ocurre con los objetivos de pequeño y gran

aumento no así con los de inmersión los cuales deberán

adicionarse de un diagrama de suspensión para la reducir

la apertura numérica.

RESOLUCIÓN DE MICROSCOPIA EN

CAMPO OSCURO

Se llama poder de resolución de un sistema óptico a la capacidad

de separar detalles y es expresado por el limite de resolución que

es la menor distancia que existe entre dos puntos para que estos

aparezcan individualizados.

El limite de resolución depende de la apertura numérica (AN) del

objetivo y de la longitud de onda de la luz utilizada.

En la microscopia de campo oscuro la AN no debe ser superior a 1.0 ya

que el condensador debe tener siempre una apertura numérica

superior a este valor.

VENTAJAS

* Permite ver partículas dispersas en un medio

homogéneo.

*Hace posible la observación del movimiento

Browniano de las partículas.

*Se puede utilizar para la observación de

preparaciones sin colorear.

* Visualiza los bordes destacados de las

muestras.

*Técnica valiosa para observar microorganismos

de tipo Treponema pallidum, espiroquetas con

diámetros superior a 0.2 um.

DESVENTAJAS

* Inadecuada preparación de la

muestra.

* Difícil acceso al microscopio que

posea el condensador especial por su

alto costo.

*No deja visualizar estructuras

celulares especificas, solo bordes de

células o partículas.

Tinción simple.

Las tinciones simples son aquellas en las que se utilizan un solo colorante y

tienen como objetivo permitir la observación de la morfología bacteriana; forma

tamaño y tipo de agrupación de los microorganismos.

Fundamento.

La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La

tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. Utiliza un solo

colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina diluida).

La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las

formas y las estructuras celulares básicas.

En las tinciones simples se usa un único reactivo, que preferentemente es de

tipo básico y contiene un cromógeno con carga positiva, ya que la pared celular de

las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el

cromógeno.

Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el

colorante y quedarán teñidas del mismo color.

Técnica.

1) Se seca y fija en un portaobjetos una suspensión de microorganismos.

2) Se vierte una solución diluida del colorante y se mantiene durante uno o dos

minutos.

3) Se lava varias veces con agua y se seca. Debido a que las células son muy

pequeñas, este tipo de preparación suele observarse con aceite de inmersión en

la lente objetivo.

Permiten distinguir entre distintos tipos de microorganismos

Tinción diferencial

Tinción de Gram

• Gram + Gram -

Tinción ZiehlNeelsen

• Parásitos y bacterias

Diferencia entre capas

celulares

Características entre Gram

positivas y Gram negativas

Capa de peptidoglicanos (mureína)

Gram positivas Gram negativas

Medico danés Hans Christian Gram

STAPHYLOCOCUS AUREUS

• Gastroenteritis y Dermatitis estafilocócica .

• Hábitat piel y nariz.

• No hay vacuna, desinfección de manos y objetos.

CLOSTRIDIUM TETANI

• Tétanos

• Hábitat suelo. Entra al cuerpo a través de traumatismos en la piel.

• Penicilina G. Vacuna con el toxoide.

STREPTOCOCUS AGALACTIAE

• Meningitis neonatal y neumonía.

• Hábitat vagina, tracto gastrointestinal.

• Penicilina G. No hay vacunas. Aplica ampicilina antes del nacimiento .

SALMONELLA TYPHI.

• Fiebre tifoidea.

• Hábitat vías entéricas del hombre.

• Ampicilina.

KLEBSIELLA PNEUMONIAE.

• Neumonía e infecciones de vías urinarias.

• Hábitat vías respiratorias. Se transmite por saliva.

• Cefalosporina.

HAEMOPHILUS INFLUENZAE.

• Meningitis, artritis séptica y celulitis.

• Hábitat vías respiratorias.

• Ampicilina o ceftriaxona.

Pared celular (Ácidos grasos

micólicos)

Decoloración ácido – alcohol

resistente

Especies nocardia(color rojo) de los actinomiceos (no

resistentes de color azul)

Nocordia asterides Mycobacterium

Ácidos micólicos de las micobacterias y esporozoariosposeen afinidad con los flourocromos auramina y rodamina.

Pergamanganato de potasio (evita fluorescencia).

El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido nucleico.

Presencia de bacterias en hemocultivos

• Colorante vital: vivo –fluorescencia verde, muerto – rojo.

Colorante blanco de calcoflúor se fija a la pared celular de los hongos.

Hongo aseptado (Rhizopussp)

Incrementan el contraste de las células microbianas y revelan estructuras particulares.

Esporas

Método de

Schaeffer-fulton

Método de Wirtz– Conklin

Método de

Moeller

Clostridium, Sporosarcina

Fijado: ácido crómico.

Colorante carbol fuscina fenicada (rojo -espora) y azul de metileno (azul- bacteria)

Malaquita (verde –esporas) y safranina( bacterias-rojo)

Flagelos

Método de Fontana- Tribondeau

• Mordiente de Tribondeau y solución violeta de cristal.

• Flagelos de color castaño

Método de Leifson

• Colorante rosalina y ácido tánico que engrosa los flagelos para verlos.

• Se fija con formol.

• Flagelos de color rojo y azul negruzco

Método de Rhodes

• Mordiente de Rhodes y el nitrato de plata amoniacal.

Método de Hiss

• Cristal violeta y sulfato de cobre

• Cápsulas de color azul pálido y las bacterias de color purpura.

Método de Tinta china o

nigrosina

• Tinción negativa (ennegrece el medio).

• Fucsina (bacterias –rojo)y nigrosina que revela un halo blanco (cápsula)

Cápsula: capa mucosa que envuelve la pared celular de algunas bacterias.

Gránulos

• Azul de metileno y Loeffler

• Gránulos-azul y fondo azul claro

Loeffler

Corpúsculo

• Lugol y colorante Albert.

• Cospúsculos-oscuro y bacteria-claro.

Albert