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INMUNIDAD CELULAR

METODOS DE LABORATORIO

Dr. Folch

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SEPARACION DE POBLACIONESCELULARES

CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL

a) Linfocitos

b) Polimorfonucleares neutrófilos

c) Monocitosd) Eosinófilos y basófilos

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ESTUDIO DE SUBPOBLACIONESLINFOCITARIAS

• Leucocitos totales: CD-45• Linfocitos B: CD-19, Igs de membrana• Linfocitos T: CD-3•

Linfo. Helper / hiper.retardada CD-3, CD-4• Linfo. Citotóxico CD-3, CD-8• Célula NK: CD-56, CD-16• Célula NKT: CD-56, CD-3•

Célula madre: CD-34• Macrófagos: CD-14• Otras: CD-4, CD25, FoxP3

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SEPARACION DEPOBLACIONES CELULARES

• SEPARACION INMUNOMAGNÉTICA

• CITOMETRÍA DE FLUJO (SORTING)

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IMMUNOBEADS

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Perlas magnéticas pueden serseparadas

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SEPARACION DEPOBLACIONES CELULARES

• SEPARACION INMUNOMAGNÉTICA

 –CITOMETRÍA DE FLUJO (SORTING) 

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Un esquema de citometría

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citómetro

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Células CD-3, CD-4 positivas

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Medicion de subpoblaciones

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Un ejemplo de citometría de flujo

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¿Qué nos pueden decir lassubpoblaciones celulares?

inmunodeficiencias

capacidad de responder enfermos de Ca

cap. de respuesta inmunosuprimidos

en pacientes con linfomas o leucemias

permite su tipificación

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Pruebas funcionales

Proliferción celular

Citotoxicidad

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Activación de linfocitos:una formade evaluar su capacidad funcional

Proliferación

Medición de citoquinas

Medición de Ca intracelularExpresión de IL 2-R

¿CUANDO SE PIDE?

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Citotoxicidad

• Linfocitos T CD-8

• Células NK y NKT

•

Células macrofagicas y otras (ADCC)

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Apoptosis: una forma de morir

• Fragmentacion del DNA

• Medición de anexina V

•

Determinación de caspasas

Significado biológico de la Apóptosis

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Fragmentación DNA nuclear

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Célula apoptótica

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Producción de citoquinas

•

RT-PCR• Microarrays 

• Elisa

• Ensayo biológico• Tinción intracelular 

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microarray

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Tinción de citoquinasintracitoplasmáticas

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Inmunidad celular natural

• Neutrófilos  Fagocitosis 

Actividad microbicida 

reducción de azul de nitrotetrazolium 

quemiluminiscencia  

• Eosinófilos generación de LTC4,

ensayo de unión superoxido

•

Monocitos fagocitosisactividad microbicida

producción de citoquinas (monoquinas)

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El neutrofilo

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Neutrofilo y mecanismos de ataquea patógenos

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Reacción de azul deNitrotetrazolium

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Emisión de luz