ESPECIES Y BIOTIPOS DE ESPECIES Y BIOTIPOS DE Brucella sppBrucella spp AISLADAS EN ANIMALES SILVESTRES Y AISLADAS EN ANIMALES SILVESTRES Y

BOVINOS DE CASTILLA Y LEON 2005 - 2008BOVINOS DE CASTILLA Y LEON 2005 - 2008

.

León

Soria

Burgos

Avila

Zamora

Salamanca

Palencia

Segovia

Valladolid

B. abortus. BIOTIPO 3

B. abortus BIOTIPO 1 (cepa de campo)

B. abortus BIOTIPO 1 (cepa vac. rb51)

B. abortus BIOTIPO 1 (cepa de campo, cepa vacunal rb51)

B. abortus. BIOTIPO 1 (cepa vac. B19)

B. abortus. BIOTIPO 1 (cepa vac rb51 y B19)

B. melitensis. BIOTIPO 3

B. abortus-BIOTIPO 3. B. melitensis-BIOTIPO 3

B. abortus-BIOTIPO 3 y 1 (cepa vac. rb51 y B19)

B. abortus-BIOTIPO 3 y 1 (cepa vac. rb51). B. melitensis BIOTIPO 3

CONCLUSIONESCONCLUSIONES

1.No se aisló B. abortus, especie de gran especificidad en el ganado bovino, lo que en principio permitiría descartar la hipótesis de la fauna silvestre como reservorio de gran importancia para B. abortus, al menos en Castilla y León.

2.El aislamiento de B.melitenses biotipo 1 (cepa vacunal Rev-1) en animales silvestres confirmaría la existencia de vías de contagio entre poblaciones silvestres y domésticas. Especialmente importante se revela el papel de jabalí como especie que debe ser objeto de un mayor control.

3.El hallazgo de B.suis biotipo 3 en jabalíes vuelve a poner de manifiesto la importancia del jabalí como agente implicado en la dinámica de transmisión de la brucelosis porcina.

MAPAS DE DISTRIBUCION MAPAS DE DISTRIBUCION DE LOS DIFERENTES DE LOS DIFERENTES

BIOTIPOS DE Brucella sppBIOTIPOS DE Brucella spp

BIOTIPOS DE BRUCELA AISLADOS

INTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓNCastilla y León es una Comunidad Autónoma con una superficie total de

94.225 Km², Posee un censo de 1.226.014 bovinos y 4.492.736 ovinos/caprinos así como una red de treinta y nueve Espacios Naturales Protegidos con gran variedad de especies silvestres.

Castilla y León instauró un plan de vigilancia epidemiológica en la fauna silvestre en el año 2004 con el fin, entre otros, de profundizar en el conocimiento de la epidemiología de diversas enfermedades comunes al ganado domestico y a la fauna silvestre. Entre las enfermedades objeto de vigilancia están incluidas aquellas producidas por especies del genero Brucella.spp.

La importancia de realizar una tipificación de todas los aislamientos de Brucella spp obtenidos en los animales de Castilla y León se resume en:

1. Establecer la identidad de la especie de Brucella spp causante de brotes, elaboración de mapas de sus biotipos en Castilla y León y establecer programas de control en caso necesario.

2. Determinar la importancia de la fauna silvestre como posible reservorio de la enfermedad para el ganado domestico y establecer el posible sentido de la transmisión.

3. Evaluar las especies silvestres que presentan un mayor riesgo para esta enfermedad.

4. Valorar la posible presencia de aislamiento de cepas vacunales vivas.

Biotipos de Brucella Biotipos de Brucella spp. aisladosspp. aislados

León

Burgos

Soria

Avila

Zamora

Salamanca

Palencia

Segovia

Valladolid

B. suis. BIOTIPO 1

1 muestra positiva

B. melitensis. BIOTIPO 3

1 muestra positiva

B. melitensis. BIOTIPO 1 (cepa vacunal REV-1)

2 muestras positivas

3 muestras positivas

Castilla y León

Bandas de PCR para Brucella suis

B1: biotipo1 ; B2: biotipo2 ; B3: biotipo3 ; C: controles

GRAU VILA, A.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, R.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, O.; DÍEZ GALLEGO, M.; GRAU VILA, A.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, R.; MÍNGUEZ GONZÁLEZ, O.; DÍEZ GALLEGO, M.; GONZÁLEZ GONZÁLEZ, Y.; GONZÁLEZ GONZÁLEZ, Y.; MARQUÉS PRENDES, S.MARQUÉS PRENDES, S.

Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS

TOTAL 251 243 8 260 260 0 181 181 0 390 0 0

Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS

TOTAL 97 97 0 100 100 0 41 41 0 66 0 0

Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS

TOTAL 21 21 0 13 13 0 0 0 0 1 0 0

Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS Nº MUESTRAS NEGATI VAS POSITIVAS

TOTAL 19 19 0 1 1 0 4 4 0 1 0 0

JABALÍ

RUMIANTES SILVESTRES

CANIDOS SILVESTRES

2005 2006 2007 2008

2005 2006

LAGOMORFOS SILVESTRES

2005 2006 2007

2007 2008

2008

2005 2006 2007 2008

RESULTADOS FAUNA SILVESTRE 2005-2008

AÑO Nº MUESTRAS NEGATIVOS POSITIVOS

2005 742 380 3602006 1.282 854 4212007 1.091 653 4372008 1.245 1.008 237

TOTAL 4.360 2.895 1.455

RESULTADOS GANADO BOVINO

% MUESTRAS SEGUN GRUPO DE ANIMALES SILVESTRES

75%

21%

2% 2%

JABALÍ

RUMIANTES

CANIDOS

LAGOMORFOS

PORCETAJE DE MUESTRAS SEGÚN GRUPO DE ANIMALES

75%

25%

BOVINOS

FAUNA SILVESTRE

0

200

400

600

800

1.000

1.200

1.400

2005 2006 2007 2008

MUESTRAS RECOGIDAS

MÉTODOS LABORATORIALES:MÉTODOS LABORATORIALES:Las muestras utilizadas para la realización del presente estudio, se remitieron al

Laboratorio Regional de Sanidad Animal (León) para la identificación de Brucella spp y al Laboratorio Nacional de

Referencia Español de Santa Fe (Granada) para la determinación de la especie y biotipo.

La identificación y tipificación de las cepas de Brucella spp. aisladas mediante cultivo fueron realizadas mediante técnicas bacteriológicas standard y técnicas de biología molecular , en concreto esta última mediante PRC-AMOS modificada (PCR múltiple para la diferenciación de las distintas especies y biotipos de Brucella.)

Adicionalmente, las cepas de Brucella suis fueron identificadas molecularmente mediante el método rápido INgene Bruce-ladder suis, que permite la detección de los 5 biotipos existentes a partir de DNA purificado o de colonias aisladas mediante la amplificación por PCR de seis bandas de diferente tamaño cuya combinación proporciona unos perfiles característicos en función del biotipo de B.suis de que se trate.

MUESTREO:MUESTREO:Las determinaciones microbiológicas se realizaron sobre muestras procedentes de:

Abortos y anejos fetales, básicamente de bovinos domésticos. Muestras procedentes de matadero de órganos de animales de la especie

bovina positivos y negativos a serología (Fijación del Complemento y/o ELISA) Muestras de órganos, en animales silvestres, recogidas en cacerías.

0

100

200

300

400

500

2005 2006 2007 2008

MUESTRAS RECOGIDAS

84,31%

0,35%

1,40%

0,21%

0,98%

12,46%0,28%

B.abortus Biotype 3

B.abortus Biotype 1 (field strain)

B.abortus Biotype 1 (vaccine strain rb51)

B.abortus Biotype 1 (vaccine strain B19)

B.suis Biotipo 3

B.mellitensis Biotype 1 (vaccine strain rev-1)

B. melitensis Biotype 3

38%

49%

13%

B. suis biotiype 3

B. mellitensis biotype 1 (vaccine strain rev-1)

B. mellitensis biotype 3

Biotipos de Biotipos de Brucella spp.Brucella spp. en en fauna silvestrefauna silvestre

RESULTADOS:RESULTADOS:

• El porcentaje de aislamientos de Brucella spp. ,considerando todas las muestras analizadas, es del 0,62% en fauna silvestre y 32.54% en ganado bovino.• En los aislamientos de fauna silvestre destaca el jabalí, donde se ha aislado Brucella spp. en el 0.74% de las muestras, seguida del ciervo, con un 0,34%• No se ha aislado B. abortus en fauna salvaje en el periodo 2005-2008. Las especies de Brucella spp. aisladas en jabalíes fueron B. melitensis biotipo 3 ,y B.suis biotipo 3.• Como hallazgo, se aislaron 4 muestras de B.melitenses biotipo 1 (cepa vacunal Rev-1) en jabalíes, circunscritas al norte de la provincia de Palencia.• En bovinos el porcentaje los distintos biotipos en los aislamientos positivos no vacunales fue: B. abortus biotipo 3 (97,33%), B. abortus biotipo 1 (1,13%) y B.melitenses (1,54%)• El porcentaje de aislamientos de biotipos vacunales en bovino es del 12,82%

B.suis biotipo 3

B.melitensis biotipo3

B.melitensis biotipo1 (rev -1)

ESPECIE Nº MUESTRAS BIOTIPADOSB.abortus Biotipo 3

B.abortus Biotipo 1 (cepa

de campo)

B.abortus Biotipo 1

(cepa vacunal rb51)

B.abortus Biotipo 1

(cepa vacunal B19)

B.suis Biotipo 3 (cepa de campo)

B.mellitensis Biotipo 1 (cepa vacunal rev-1)

B. melitensis Biotipo 3

JABALI 1080 8 0 0 0 0 3 4 1RUMIANTES SILVESTRES 304 1 0 0 0 0 0 1 0

CANIDOS SILVESTRES 35 0 0 0 0 0 0 0 0

LAGOMORFOS 25 0 0 0 0 0 0 0 0BOVINO 4360 1419 1204 14 178 4 0 0 19TOTAL 5804 1428 1204 14 178 4 3 5 20