Post on 05-Nov-2021
Detección de materias colorantes no
permitidas en vinos por HPLC
Lic. Fanny Prévide
Ing. Daniela Marmili
Lic. Yesica Baldo
Dr. Humberto Manzano
Lic. Raquel Gargantini
Los colorantes si están presentes en los
alimentos se consideran naturales y si por el
contrario se añaden a los alimentos durante
su procesado mediante la intervención
humana, se denominan aditivos.
INTRODUCCIÓN
En la actualidad la industria alimentaria
emplea colorantes de uso en alimentos
con el objeto de restablecer, modificar y
favorecer el color, según las preferencias
del consumidor.
La adición de estos compuestos a los
vinos NO ESTÁ PERMITIDA (Ley 14878,
artículo 20, inciso a)
El Instituto Nacional de Vitivinicultura,
como organismo oficial, se ha visto en la
necesidad de desarrollar un método
analítico para su control.
La determinación, posibilita el control de
la autenticidad de los vinos en relación a
la presencia de aditivos que proporcionan
color a los alimentos.
Desarrollar y poner a punto una técnica
analítica para determinar la adulteración
de vinos tintos con colorante.
OBJETIVO
La determinación del
contenido de colorantes
en vinos se realiza por
Cromatografía Líquida de
Alta Eficiencia (HPLC).
La separación de los colorantes es
realizada por HPLC con una columna de
fase reversa y detección UV-VIS, con una
elución por gradiente de agua/ácido
fórmico/acetonitrilo y con una detección a
una longitud de onda de 518 nm.
PRINCIPIO
Esta técnica se basa en la determinación que
se utiliza actualmente para obtener el perfil de
antocianos en vinos tintos y rosados
(Resolución C.23/2006).
Hasta el momento se han investigado
dos colorantes.
Primer caso de estudio
colorante no identificado Nº 1
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
550
mAU518nm,4nm (1.00)
Cromatograma de un vino testigo
sin adición de colorantes.
Delf
inid
ina-3
-glu
có
sid
o
Cia
nid
ina
-3-g
lucó
sid
o
Petu
inid
ina
-3-g
lucó
sid
o
Peo
nid
ina
-3-g
lucó
sid
o
Malv
idin
a-3
-glu
có
sid
o
Peo
nid
ina
-3-g
lucó
sid
o a
ceti
lad
o
Malv
idin
a-3
-glu
có
sid
o a
ceti
lad
o
Peo
nid
ina
-3-g
lucó
sid
o c
um
ari
lad
o
Malv
idin
a-3
-glu
có
sid
o c
um
ari
lad
o
Cromatograma de un vino testigo con
adición de Colorante no identificado Nº 1
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
550
mAU518nm,4nm (1.00)
Petu
inid
ina
-3-g
lucó
sid
o
Peo
nid
ina
-3-g
lucó
sid
o
Co
lora
nte
Nº
1
Comparativo de cromatogramas
de un vino testigo con y sin adición
de colorante.
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min0
100000
200000
300000
400000
500000
600000uV
Segundo caso de estudio
colorante no identificado Nº 2
Cromatograma de un vino testigo sin
adición de colorante no identificado Nº 2
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min
-5.0
-2.5
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
20.0
22.5
mAU518nm,4nm (1.00)
20.
313/
1955
7
Cromatograma de un vino testigo con
adición de colorante no identificado Nº 2
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min
-2.5
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
20.0
22.5
mAU518nm,4nm (1.00)
20.4
48/1
55131
Co
lora
nte
Nº
2
Comparativo de cromatogramas
con y sin colorante no identificado Nº 2
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min
0
5000
10000
15000
20000
uV
En el vino, se observa un pico que
corresponde a un antociano natural contenido
en los vinos tintos y cuyo tiempo de retención
es muy similar al del colorante Nº 2, pero no
igual.
Tiempo de retención
Antociano natural:
20,31 minutos
Colorante Nº 2:
20,41 minutos
Si bien ambos picos se superponen, el espectro
se modifica profundamente cuando hay
presencia de este colorante presente en la
muestra.
Espectro del vino testigo sin colorante, tiene
un solo máximo de Absorbancia a 520 nm
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min
-5.0
-2.5
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
20.0
22.5
mAU518nm,4nm (1.00)
20.31
3/195
57
400 450 500 550 600 650 700 750 nm
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
mAU 20.99/ 1.00
417
685
520
Espectro del vino con colorante, tiene
Dos máximos de Absorbancia a 525 nm y a
563 nm y un mínimo a 548 nm
400 450 500 550 600 650 700 750 nm
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
20.0
22.5
25.0
27.5
mAU 20.52/ 1.00
548
404
626
525
563
778
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 min
-2.5
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
20.0
22.5
mAU518nm,4nm (1.00)
20.448
/15513
1
Esta técnica también es aplicable
para la determinación de
otros colorantes que se separen o discriminen
por sus espectros de los antocianos naturales
del vino.
Muchas gracias