Cromatografía de Líquidos

M. en C. Elba Rojas Escudero.

Separación

◼ Para separar se emplean básicamente tres

alternativas:

◼ Separaciones mecánicas

◼ Procesos cinéticos y electrocinéticos

◼ Equilibrios de distribución entre dos fases

Elba Rojas E.

Cromatografía

Sólido Líquido Sólido Líquido

Gas Líquido

CGS CGL CLS CLL

Elba Rojas E.

Gas Líquido

Columna Plano

CLS CLL CFE CII CE

CPG CFG

CCF CP

Cromatografía

Elba Rojas E.

Proceso Cromatográfico

◼ La fase móvil fluye, arrastrando consigo los

solutos

◼ Los solutos se reparten entre ambas fases

MuestraFase móvil Fase estacionaria

Elba Rojas E.

Muestra

Elba Rojas E.

Objetivos

SeparaciónMezcla de

compuestos

Cuantitativo

Purificación

Cualitativo

Elba Rojas E.

Cromatografía

◼ Fase Normal

◼ FE → Polar

◼ FM → No polar

◼ Fase Inversa

◼ FE → No polar

◼ FM → Polar

Elba Rojas E.

Elución

◼ La muestra se aplica al principio de la

columna como una banda fina

◼ El eluyente tiene menor afinidad por la fase

estacionaria que los solutos

◼ Los solutos avanzan por el sistema a

velocidades diferentes, menores a la de la

fase móvil

◼ Los solutos se separan en bandas que eluyen

al final de la columna

Elb

a R

oja

s E

.

Requisitos de la muestra

◼ Presión de vapor baja

◼ Compuestos iónicos

◼ Compuestos de peso molecular elevado

◼ Termolábil

Elba Rojas E.

Instrumentación

Fase móvilBomba de

alta presión

Inyector

Columna

Detector

Muestra

Control de

temperatura

Gradiente

de elución

Registrador

Elb

a R

oja

s E

.

Fase móvil

Disolvente o

Hexano 0.00

Isoctano 0.01

Éter isopropílico 0.22

Cloruro de metileno 0.32

Acetonitrilo 0.50

Metanol 0.73

Elba Rojas E.

Fase móvil

◼ Disolventes grado cromatográfico

◼ Agua de 18 m

◼ Baja viscosidad

◼ No volátil

◼ Miscibilidad

◼ Filtrada

◼ Sin oxígeno disuelto (degasificada)

◼ Solubilidad de los analitos

◼ Compatible con el detectorElba Rojas E.

Cromatografía Fase Inversa

◼ F E

◼ Sílica químicamente modificada con

grupos no-polares: hidrocarburos

saturados: C2 dimetil, C4 tetrametil,

C8 octil, C18 octadecil

◼ F M

◼ Mezclas: acuosos / orgánicos

H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)

Elb

a R

oja

s E

.

Fase estacionaria (columna)

◼ Empaque

◼ Sílica gel, C8, C18, Ciano, Amino,

Resinas, Polímeros

◼ Carga de Carbón 5-20 % w/w

◼ Intervalo de pH = f (FE)

◼ Límite de presión de trabajo

◼ Compatible con la fase móvil

Elba Rojas E.

Cromatografía Fase Inversa

◼ Efecto solvofóbico fuerte:

◼ Parte apolar de la molécula del soluto es mayor

◼ % C en la FE es mayor

◼ Polaridad de la FM es alta (mayor % de H2O)

Elba Rojas E.

Cromatografía Fase Inversa

◼ Ventajas

◼ Reproducibilidad en las separaciones

◼ Estabilidad de la FE (pH 7)

◼ Mezclas: acuosos/orgánicos

H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)

Elba Rojas E.

Gradiente de Elución

Elba Rojas E.

Problema general de la

elución

Elba Rojas E.

Elución

Elba Rojas E.

Instrumentación

Fase móvilBomba de

alta presión

Inyector

Columna

Detector

Muestra

Control de

temperatura

Gradiente

de elución

Registrador

Elb

a R

oja

s E

.

Proceso Cromatográfico

◼ El lecho cromatográfico puede ser abierto

(placa) o cerrado (columna)

◼ La fase móvil fluye a lo largo del lecho

cromatográfico en contacto con la fase

estacionaria

Elb

a R

oja

s E

.

Separación de los solutos

Elb

a R

oja

s E

.

Ventajas

◼ Análisis de compuestos iónicos, de alto

peso molecular

◼ Diversidad de columnas y detectores

◼ Formación de derivados pre-columna y

post-columna

◼ Separaciones con control de pH

◼ Separaciones preparativas

Elba Rojas E.

Limitantes

◼ Muestras “relativamente” limpias

◼ Solubilidad de la muestra en la fase móvil

◼ Viscosidad de la fase móvil

◼ Dimensiones de la columna

◼ Presión de trabajo

◼ Intervalo de pH

◼ Utilizar un filtro (pre-columna)

Elba Rojas E.

Equipo para la

formación de derivados

FMFE

Inyector Reactor Detector

FMFE

Inyector Reactor Detector

Elb

a R

oja

s E

.