Post on 24-Aug-2020
Búsqueda de aislamientos de CTV promisorios
para “protección cruzada” en naranjas Navel
Rubio, L., Bertalmío, A., Rivas, F., Maeso, D., Colina, R., Benitez, M.J.,
Hernández, L.
CITRUS TRISTEZA VIRUS
• Restringido a floema.
• Transmisible por pulgones e
injerto
• Mezcla de cepas del virus en
una planta CTV-2CTV-1
CTV-3
CTV-4CTV-5
Manejo
Declinamiento
Portainjertos
resistentes
Acanaladuras
Saneamiento
Protección cruzada
Resistencia genética
Síntomas
Situación de CTV en Uruguay
Enfermedad endémica
Presencia de Toxoptera citricida
Se utiliza un portainjerto resistente P. trifoliata
Fuente: Roistacher, Ch.
Reducción del tamaño de los frutos por CTV
Fuente: Navarro, L.
Fuente: Maeso, et al.
pérdidas de productividad en pomelos y variedades de
naranjo dulce, injertados en portainjertos resistentes
Hay reportes de cepas de CTV que quiebran la resistencia de
P. trifoliata
En nuestro país CTV podría estar limitando el potencial productivo
de las plantas cítricas
Pulgones
CTVEn campo….
Planta
saneada
RE-INFESTADA!!
¿Solución?
- Protección cruzada
- RR genética
CTV
CTV
CTV
CTV
PROTECCIÓN CRUZADA = PRE-IMUNIZACIÓN = VACUNA
CTV-3
CTV-4
CTV-2
CTV-1
1-identificar aislados “suaves”
2- estudiar su
comportamiento
3- pre-imunizar
un plantín saneado
La protección cruzada sería una alternativa interesante
de manejo en nuestra situación.
es necesario conocer las características de los aislados
locales.
PROYECTO: “Caracterización molecular y biológica
de aislamientos de campo de CTV de Uruguay y su
potencial en la protección cruzada”
2011-2014
INIA: Diego Maeso, Fernando Rivas, Ana Bertalmío, Leticia Rubio.
UDELAR: Laboratorio de Virología Molecular de la Regional Norte, Salto.
Rodney Colina, María José Benitez
IIFT (Cuba): Lester Hernández
1
• Determinar la severidad de aislamientos locales
2• Seleccionar aislamientos promisorios
3• Obtener subaislados
4• Evaluar la capacidad protectora de los
subaislados seleccionados
Objetivos:
Materiales seleccionados
Quinta Variedad Códigos MuestraAspecto del árbol en campo al momento de la
colecta de muestras
AD1M1 16 Sin vigor ("Chico")
AD3M1 17 Normal ("Sano")
AD6M1 18 H Normal, stem pitting moderado
AD8M1 19 Normal ("Sano")
AD10M1 4 Normal ("Sano")
AD11M1 20 Fruta pequeña, stem pitting severo
Satsuma AD12M1 21 Acentuada ausencia de vigor.
2- SUR
(Canelones) MO15 2 Normal ("Sano")
1- NORTE Valencia AZ1M1 8 Sin vigor ("Chico"), ramas secas
(Paysandú)CAP1 12 Normal ("Sano")
CAP2 5 Normal ("Sano")
CAP3 13 Normal ("Sano")
SASA 1 9 Normal ("Sano")
SAG 4 14 Normal ("Sano")
Ortanique/Lane Late/Trifolio SAG 6 15 Normal ("Sano")
SACH 1 11 Sin vigor ("Chico") sin stem pitting
SACH 2 7 Sin vigor ("Chico"), sin stem pitting
4- NORTE Pomelo Star Ruby MILCH 1 3 Sin vigor ("Chico"), stem pitting suave
(Salto) Satsuma Owari MIL1-2012 22 Árbol destacado por tamaño y producción de fruta.
5-NORTE (Salto) Pomelo Marsh CG 1 6 Normal ("Sano")
2- NORTE (Salto) Valencia
1- SUR ( San José)
Washington Navel
3- NORTE (Paysandú)
Lane Late/Valencia/Trifolio
Lane Late/Valencia/Trifolio
1-Estudio de la severidad de aislados de
CTV
a) Caracterización biológica
b) Análisis molecular
Bioensayos:
Se utilizó el sistema propuesto por Garnsey et al., 1987.
invernadero a prueba de insectos con condiciones de temperatura controlada (18-30ºC).
Plantas indicadoras:
- Lima mejicana
- Naranjo dulce cv. Madame Vinous
- Naranjo Agrio
- Pomelo cv. Duncan
- Naranjo Dulce/Naranjo Agrio.
acanaladuras en
madera
amarillamiento
Evaluación de Síntomas
nervaduras corchosas
aclaramiento de nervaduras
Fuente: Besoain, X., 2008; Bertalmío, 1997
Árboles filogenéticos
Clasificación:
1- López et al., 1998: diferenciar los
aislados en función de su virulencia.
2- Harper, 2013: genotipos VT, T68,
T3, T36, T30, RB.Fuente: Moreno, 2008.
Severos
Suaves
Intermedios
2- Caracterización molecular
Resultados
Aclaramiento de
nervadura
Acanaladura
de la madera
Síntomas en
Lima mexicana
1- Caracterización Biológica
Nervadura corchosa
Lima mexicana
Nervadura corchosa
Hoja “cuchara”
Síntomas en N. Agrio
Enanismo
Amarillamiento del plantín
Nervadura corchosa y
brotes múltiples
Síntomas en N. dulce/N. Agrio
Nervadura clorótica Declinamiento
** Escala de severidad de síntomas: - ausencia, + síntomas leves, ++ moderados, +++ severos.
Testaje Biológico
N.Agrio Pomelo N.dulce
Localidad Variedad Aislamiento Aspecto del árbol en campo* SY SP SP
Salto Valencia CAP1 Normal ₊
Salto Valencia CAP3 Normal
Paysandú Navel SAG4 Normal ₊
Salto Valencia CAP2 Normal ₊₊ ₊
San José Navel AD3 Normal ₊₊₊ ₊ ₊
San José Navel AD8 Normal ₊₊ ₊₊ ₊
San José Navel AD10 Normal ₊₊ ₊₊ ₊
Salto Pomelo CG1 Normal ₊₊ ₊
Canelones Limón MO15 Normal ₊₊₊ ₊
San José Navel AD6 Normal ₊ ₊ ₊₊
Paysandú Navel SASA1 Normal ₊₊ ₊₊ ₊₊
Paysandú Ortanique SAG6 Normal ₊₊ ₊₊ ₊₊
San José Navel AD11 Fruta pequeña ₊₊₊ ₊ ₊
Salto Satsuma MIL Buen porte y producción ₊₊₊ ₊₊ ₊₊₊
San José Satsuma AD12 Ausencia de vigor** ₊ ₊
Salto Pomelo MILCH Ausencia de vigor ₊₊ ₊
Paysandú Navel SACH2 Ausencia de vigor ₊₊ ₊ ₊₊
San José Navel AD1 Ausencia de vigor ₊ ₊₊ ₊₊₊
Paysandú Navel SACH1 Ausencia de vigor ₊₊₊ ₊₊ ₊₊
Paysandú Valencia AZ1 Ausencia de vigor ₊₊₊ ₊₊₊ ₊₊
Síntomas en indicadorasAspecto del árbol en campo y síntomas generados en las
indicadoras
NV_T30_(Florida_EEUU)
NV_T385_Spain
BR-CB22
I_CTV_Isolate_(Mexico)
I_Qaha_Egipto
I_T36_(Florida_EEUU)
UY_521
UY_518
V_VT_(Israel)
V_NUagA_Japon
V_SY568_(California_EEUU)
V_T318A_(Spain)
V_B165_(India)
UY_511
AR-ER_268-2
UY_520
BR-CS1
UY_519
UY_510
UY_509
UY_506
AR-ER_270
UY_504
UY_502
UY_507
UY_522
UY_515
AR-ER_257-2
UY_508
Árbol filogenético
para el gen P25
suaves
Intermedios
severos
2- Caracterización
molecular
UY 15
BZ B
UY 16
V_B165_(India)
V_NUagA_Japon
V_T318A_(Spain)
V_SY568_(California_EEUU)
V_VT_(Israel)
UY 21
UY 19
UY 17
UY 18
UY 11
UY 22
UY 6
BZ CS
UY 10
UY 2
AR 52
BZ R
I_CTV_Isolate_(Mexico)
I_Qaha_Egipto
I_T36_(Florida_EEUU)
AR 50
NV_T30_(Florida_EEUU)
NV_T385_Spain
suaves
Intermedios
severos
Árbol filogenético
para el gen P23
Conclusiones
• El 35% de los aislados presentaron síntomas de SY, ST, DI,
VcK, asociados con aislados severos.
• Los aislados caracterizados molecularmente hasta el
momento se corresponden con aislados severos de referencia
internacional.
• En nuestro país, tanto en el Norte como en el Sur, circularían
en mayor grado aislados severos de CTV.
“Pocos aislados promisorios”
Búsqueda de aislamientos promisorios para “protección cruzada” en naranjas Navel
• Se seleccionaron 15 aislamientos de Navel (W.Navel,
Lane Late, Navelina) procedentes de diferentes sitios del
país
• Se seleccionaron árboles de buen porte y producción
• Inoculaciones:10/4/14
Resultados
Nervadura corchosa en LM
1-Caracterización Biológica
Amarillamiento del plantín
y detención de crecimiento
en NA
SY en PD
Acanaladura
en la madera de PD
NA PD Acumulado
Aislamiento VC HC Vck SP SY SP LM+NA+PD
F 1.7 2.0 0.3 3.0 3 2.2 12.2
ME 2 2 0.7 2.7 2.3 2.3 11.9
DS54 0.7 1.3 2.7 2.7 1.3 2.8 11.4
C. Oro 1.3 1.3 0.0 2.3 2 3 10.0
EK 5.1 1 1.7 1.7 2.7 0.3 2.5 9.8
M 1.3 1.3 0.7 2.0 1.3 2.3 8.9
SL 0.7 1 1 1.7 2 1.8 8.1
Q30 0.9 0.4 0.2 0.7 2 2 6.2
DS ST 1 0.7 0 1 1 2 5.7
FOR** 0 1 0 2 1 1 5.0
Q7 0.7 0 0 0 2 2.3 5.0
I 128 0 0.7 0.7 1 0 2.3 4.6
I 58 0.7 0.7 0 1 0 2.3 4.6
QNNL 0 0.3 0 1 1 2 4.3
SNH 1 0.3 0 1 0.7 1 4.0
Q16 0.7 0 0 0 1 1.7 3.4
TR7** 0.5 0 0 0 1 0 1.5
LM
Síntomas observados en las distintas indicadoras
Código muestra Código A. molecular P20 P23 P25
SNH 3 T3 RB? NC
ME 4 NC xx x
Q30 5 NC xx NC
I 128 6 NC xx NC
I 58 7 T3 T3 NC
DSST 8 NC T68 NC
C.Oro 9 T3 T68 RB
DS 54 10 NC T68 NC
M 11 T3 T3 xx
EK 12 NC? T68 xx
F 13 T3 xx xx
QNNL 14 T3 T68 NC
Q7 15 NC xx x
Q16 16 x T68? RB
SL 17 NC xx NC
Árbol filogenético para el gen P23.
Resumen de los genotipos obtenidos
a partir de árboles filogenéticos para
los genes P20, P23 y P25.
En nuestro país circulan principalmente cepas severas
de CTV y es difícil encontrar aislados promisorios suaves.
Sí bien, hay aislados que dan síntomas leves en la
mayoría de las reacciones esperadas en el test biológico,
luego mostraron SP moderado a severo en PD.
Conociendo el comportamiento biológico y los
genotipos dominantes fue posible seleccionar 4 aislados
para comenzar a trabajar en protección cruzada para
naranjas Navel.
2- Obtención de sub-aislados y evaluación de su
capacidad protectora
CTV 1
CTV 3
CTV 2
SELECCIÓN DE AISLADOS
TRANSMISIÓN POR ÁFIDO
CONFIRMACIÓN DE OBTENCIÓN DE SUB-
AISLADOS
CARACTERIZACIÓN DE SUB-AISLADOS
I58-1, I58-12, SAG4-23 y SNH-
19
SACH-6, SACH-28, SNH-11, SNH-16, SNH-18, SNH-22, SNH-25, I58-5, I58-11, I58-12, I58-22, I58-24, I58-25, I58-26, DSST-1, DSST-13,
DSST-14, DSST-17, DSST-18 y DSST-25
SNH-2, SNH-9, I58-23 y DSST-6, SAG-3, SAG-4, SAG-6, SAG-8, TR7-3,
TR7-18, TR7-25, SACH-9, SNH-7, I58-7, I58-10,
I58-27 y DSST-9
40 subaislados
3- Obtención de subaislados
Próxima etapa:
4- Evaluar la capacidad protectora de los subaislados
seleccionados
Subaislados
seleccionados
CTV-1
Planta saneada
de ND Evaluación en
invernadero y
campo
CTV-1
CTV-2 severo
Protección
S/Protec