5/14/2018 El antígeno RPR - slidepdf.com
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El antígeno RPR-carbon es un preparado no treponémico
especialmente diseñado para la detección y semi-cuantificación
por coaglutinación macroscópica en porta o microplaca de
reaginas plasmáticas, un grupo de anticuerpos dirigidos contra
componentes tisulares producidos por los pacientes infectados por T. pallidum.
La determinación rápida de las reaginas plasmáticas se efectúa
ensayando el antígeno –una asociación de lípidos complejos y
carbón- frente a las muestras problema. La presencia o ausencia
de una aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia
de reaginas luéticas en las muestras ensayadas1-4 .
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS
Antígeno RPR-carbon. Suspensión estabilizada conteniendo
cardiolipina 0,003%, lecitina 0,020-0,022%, colesterol 0,09%,
cloruro de colina 10%, EDTA 0,0125 mol/L, micropartículas de
carbón 0,01%, en tampón fosfato. Contiene 0,1% de
mertiolato sódico.
CONTROL +
Suero de conejo inmune. Contiene 0,95 g/L de acida sódica.
CONTROL -
Suero animal. Contiene 0,95 g/L de acida sódica
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Conservar a 2-8ºC. No congelar los componentes del kit ya
que podría verse afectada la funcionalidad del test.
El Antígeno y los Controles son estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta
PREPARACION DE LOS REACTIVOS
Resuspender el Antígeno con suavidad para asegurar su
homogeneidad, acoplar la aguja dosificadora al vial dispensador y
aspirar la cantidad de antígeno que se considere necesaria.
Los Controles están listos para su uso.
MUESTRAS
Suero o plasma claro, reciente, sin inactivar.
Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8ºC durante 48
horas antes del ensayo, o hasta meses a–20ºC. Los plasmas se
ensayarán dentro de las 48 siguientes a su obtención
EQUIPO ADICIONAL
Pipetas de volumen variable. Solución salina (NaCl 0,9%, para técnica semi-cuantitativa).
Agitador mecánico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.
que circunscriba un círculo de unos 2 cm de diámetro en el
plano horizontal. Cronómetro.
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Prueba cualitativa
1.Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente (Mediante una pipeta automática
depositar 50 ìL de cada muestra en un círculo distinto de la tarjeta visualizadora.)
2.Emplear una punta nueva para cada muestra y desecharla tras
su empleo.
3.En dos círculos adicionales, depositar 1 gota de
cada uno de los sueros control.
4.Agitar el vial dispensador del antígeno y manteniéndolo en
posición vertical, presionar ligeramente hasta asegurarse que
la aguja esta libre de aire y que la gota obtenida es correcta.
5.Con el vial dispensador invertido, situar la aguja en posición
vertical perpendicular a la tarjeta visualizadora
6.Oprimir suavemente el vial dispensador, dosificando 1 gota de
antígeno en cada círculo, próximo a la muestra que debe
ensayarse
7.Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable,
extendiéndola de forma que cubra por completo la superficieinterior de cada anillo.
8.Emplear palillos distintos para cada mezcla.
9.Depositar la tarjeta en el agitador rotatorio horizontal,
previamente ajustado a 100 r.p.m., durante 8 minutos.
10.Observar con la ayuda de una lámpara de alta intensidad o
frente a luz diurna fuerte, la aparición de cualquier signo de
aglutinación dentro del minuto siguiente a la retirada de la
tarjeta del agitador.
Lectura
Reacción negativa: Las partículas de carbón permanecen en
suspensión homogénea, sin presencia visible de agregados, tal
como se presenta en el control negativo.
Reacción positiva: Un resultado positivo se manifiesta por una
agregación de las partículas de carbón, que puede variar entre
una ligera pero claramente definida agregación y una marcada
e intensa.
Prueba cuantitativa
Para cada muestra a analizar se utilizan 5 círculos de una
tarjeta pipeteando 50 ìL de solución salina (0,9%) en cada uno
de ellos.
1.Pipetear sobre el diluyente del primer círculo 50 ìL de muestra,
y empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y
expulsiones repetidas, transfiriendo 50 ìL de la mezcla
resultante sobre el diluyente del segundo círculo.
2.Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el quinto
círculo, desechando los 50 ìL provenientes del mismo. Las
diluciones finales obtenidas serán: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32.
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3.Ensayar cada una de las diluciones
4. El título de la muestra corresponde a la máxima dilución que presenta reactividad.
La dilución siguiente debe ser negativa.
5.En caso de resultar reactiva la dilución más alta ensayada, repetir el ensayo
comenzando con una dilución preliminar al 1:16.
6.Comodiluyente de esta nueva serie de dobles diluciones se empleará
Control negativo diluido al 1:50 con solución salina, en vez de
la solución salina empleada anteriormente.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Tanto en las infecciones tempranas como en los últimos estadios
de la enfermedad pueden darse reacciones negativas falsas. Se han descrito con antígenos
cardiolipínicos falsas
positividades en enfermedades tales como la mononucleosis
infecciosa, lupus eritematoso y neumonía viral. El embarazo, la
adicción a narcóticos y las enfermedades autoinmunes pueden
asimismo dar reacciones positivas falsas.
No utilizar con líquido cefalorraquídeo.
El FR-Latex Test es una prueba rápida de aglutinación basada en una modificación de la técnica
de Singer1, para la detección directa y la semicuantificación en porta de los factores
reumatoideos (FR) presentes en el suero.
La determinación se efectúa ensayando una suspensión de partículas de látex recubiertos con
gamma globulina humana frente a los sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinación
visible es indicativa de la presencia o ausencia de FR en las muestras ensayadas
COMPOSICION DE LOS REACTIVOSReactivo FR-Latex. Suspensión estabilizada y tamponada de
partículas de látex recubiertas con gamma globulina humana.
Contiene 0,95 g/L de acida sódica.
CONTROL +
Suero humano con una actividad aproximada equivalente a 25
UI/mL. Contiene 0,95 g/L de acida sódica.
CONTROL -
Suero animal con una actividad inferior a 5 UI/mL. Contiene
0,95 g/L de acida sódica.
Precauciones: En la preparación de reactivos de origen humano,
intervienen solamente materiales que, frente a técnicas probadas, han
mostrado su negatividad frente a anticuerpos anti-HIV 1+2, anticuerpos anti-
HCV y HBsAg. Tratarlos, no obstante, como si fueran potencialmente
infecciosos.
Aviso: Los reactivos de este kit contienen acida sódica. Evitar el contacto
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con la piel y mucosas.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Conservar a 2-8ºC. No congelar los componentes del kit ya
que podría verse afectada la funcionalidad del test.
El Reactivo y los Controles son estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS
El Reactivo y los Controles están listos para su uso.
MUESTRAS
Suero claro, reciente.
Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8ºC durante una
semana antes del ensayo, o por un período mayor a –20ºC.
EQUIPO ADICIONAL
Pipetas de volumen variable. Solución salina (NaCl 0,9%, para técnica semi-cuantitativa).Agitador mecánico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.
Cronómetro
TECNICA
Prueba cualitativa
1.Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente (Resuspender el antígeno con suavidad.
2.Aspirar y vaciar varias veces el cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.
3.Depositar 1 gota (50 ìL) de suero problema en uno de los
círculos de la tarjeta visualizadora.
4.En círculos adicionales, depositar 1 gota de control positivo y 1 gota de control negativo.
5.Añadir a cada círculo 1 gota de Reactivo FR-Latex, próxima a la muestra a analizar.
6.Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable,
extendiéndola de forma que cubra por completo la superficie
interior de cada anillo.
7.Emplear palillos distintos para cada mezcla.
8.Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos
9.Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparición de cualquier signo de
aglutinación.
Lectura
Reacción negativa: Suspensión uniforme sin cambio visible
alguno, tal como se presenta en el control negativo.
Reacción positiva: Aglutinación débil o intensa, fácilmentevisible macroscópicamente.
Prueba semi-cuantitativa
1.Para cada muestra a analizar se utilizan 6 círculos de una
tarjeta pipeteando 50 ìL de solución salina (0,9%) en cada uno
de ellos.
2.Pipetear sobre el diluyente del primer círculo 50 ìL de muestra,
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y empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y
expulsiones repetidas, transfiriendo 50 ìL de la mezcla
resultante sobre el diluyente del segundo círculo.
3.Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el sexto
círculo, desechando los 50 ìL provenientes del mismo. Las
diluciones finales obtenidas serán: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64.
4.Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en la Prueba cualitativa.
SIGNIFICADO CLINICO
Los factores reumatoideos son un grupo de anticuerpos,
mayoritariamente de la clase IgM, dirigidos contra determinantes
de la porción Fc de la inmunoglobulina IgG del paciente.
Aunquepresentes en diversas enfermedades se hallan elevados
principalmente en pacientes con artritis reumatoidea.
En el diagnóstico clínico, los resultados de la determinación de los
factores reumatoideos deben ser considerados siempre en relación
a los hallazgos clínicos y otras pruebas de laboratorio.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Se han descrito reacciones positivas en condiciones clínicas
distintas a la artritis reumatoidea como la mononucleosis,
hepatitis, sífilis, infecciones diversas y en personas de edad
avanzada. La mayoría de estos casos, cuando se ensayan
cuantitativamente, presentan títulos de FR muy bajos.
Pueden darse reacciones negativas falsas tanto en la fase
temprana como en la fase crónica sub-clínica de la enfermedad.
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