El antígeno RPR

5/14/2018 El antígeno RPR - slidepdf.com

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El antígeno RPR-carbon es un preparado no treponémico

especialmente diseñado para la detección y semi-cuantificación

por coaglutinación macroscópica en porta o microplaca de

reaginas plasmáticas, un grupo de anticuerpos dirigidos contra

componentes tisulares producidos por los pacientes infectados por T. pallidum.

La determinación rápida de las reaginas plasmáticas se efectúa

ensayando el antígeno –una asociación de lípidos complejos y

carbón- frente a las muestras problema. La presencia o ausencia

de una aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia

de reaginas luéticas en las muestras ensayadas1-4 .

COMPOSICION DE LOS REACTIVOS

Antígeno RPR-carbon. Suspensión estabilizada conteniendo

cardiolipina 0,003%, lecitina 0,020-0,022%, colesterol 0,09%,

cloruro de colina 10%, EDTA 0,0125 mol/L, micropartículas de

carbón 0,01%, en tampón fosfato. Contiene 0,1% de

mertiolato sódico.

CONTROL +

Suero de conejo inmune. Contiene 0,95 g/L de acida sódica.

CONTROL -

Suero animal. Contiene 0,95 g/L de acida sódica

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

Conservar a 2-8ºC. No congelar los componentes del kit ya

que podría verse afectada la funcionalidad del test.

El Antígeno y los Controles son estables hasta la fecha de

caducidad indicada en la etiqueta

PREPARACION DE LOS REACTIVOS

Resuspender el Antígeno con suavidad para asegurar su

homogeneidad, acoplar la aguja dosificadora al vial dispensador y

aspirar la cantidad de antígeno que se considere necesaria.

Los Controles están listos para su uso.

MUESTRAS

Suero o plasma claro, reciente, sin inactivar.

Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8ºC durante 48

horas antes del ensayo, o hasta meses a–20ºC. Los plasmas se

ensayarán dentro de las 48 siguientes a su obtención

EQUIPO ADICIONAL

Pipetas de volumen variable. Solución salina (NaCl 0,9%, para técnica semi-cuantitativa).

Agitador mecánico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.

que circunscriba un círculo de unos 2 cm de diámetro en el

plano horizontal. Cronómetro.



Prueba cualitativa

1.Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente (Mediante una pipeta automática

depositar 50 ìL de cada muestra en un círculo distinto de la tarjeta visualizadora.)

2.Emplear una punta nueva para cada muestra y desecharla tras

su empleo.

3.En dos círculos adicionales, depositar 1 gota de

cada uno de los sueros control.

4.Agitar el vial dispensador del antígeno y manteniéndolo en

posición vertical, presionar ligeramente hasta asegurarse que

la aguja esta libre de aire y que la gota obtenida es correcta.

5.Con el vial dispensador invertido, situar la aguja en posición

vertical perpendicular a la tarjeta visualizadora

6.Oprimir suavemente el vial dispensador, dosificando 1 gota de

antígeno en cada círculo, próximo a la muestra que debe

ensayarse

7.Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable,

extendiéndola de forma que cubra por completo la superficieinterior de cada anillo.

8.Emplear palillos distintos para cada mezcla.

9.Depositar la tarjeta en el agitador rotatorio horizontal,

previamente ajustado a 100 r.p.m., durante 8 minutos.

10.Observar con la ayuda de una lámpara de alta intensidad o

frente a luz diurna fuerte, la aparición de cualquier signo de

aglutinación dentro del minuto siguiente a la retirada de la

tarjeta del agitador.

Lectura

Reacción negativa: Las partículas de carbón permanecen en

suspensión homogénea, sin presencia visible de agregados, tal

como se presenta en el control negativo.

Reacción positiva: Un resultado positivo se manifiesta por una

agregación de las partículas de carbón, que puede variar entre

una ligera pero claramente definida agregación y una marcada

e intensa.

Prueba cuantitativa

Para cada muestra a analizar se utilizan 5 círculos de una

tarjeta pipeteando 50 ìL de solución salina (0,9%) en cada uno

de ellos.

1.Pipetear sobre el diluyente del primer círculo 50 ìL de muestra,

y empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y

expulsiones repetidas, transfiriendo 50 ìL de la mezcla

resultante sobre el diluyente del segundo círculo.

2.Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el quinto

círculo, desechando los 50 ìL provenientes del mismo. Las

diluciones finales obtenidas serán: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32.



3.Ensayar cada una de las diluciones

4. El título de la muestra corresponde a la máxima dilución que presenta reactividad.

La dilución siguiente debe ser negativa.

5.En caso de resultar reactiva la dilución más alta ensayada, repetir el ensayo

comenzando con una dilución preliminar al 1:16.

6.Comodiluyente de esta nueva serie de dobles diluciones se empleará

Control negativo diluido al 1:50 con solución salina, en vez de

la solución salina empleada anteriormente.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Tanto en las infecciones tempranas como en los últimos estadios

de la enfermedad pueden darse reacciones negativas falsas. Se han descrito con antígenos

cardiolipínicos falsas

positividades en enfermedades tales como la mononucleosis

infecciosa, lupus eritematoso y neumonía viral. El embarazo, la

adicción a narcóticos y las enfermedades autoinmunes pueden

asimismo dar reacciones positivas falsas.

No utilizar con líquido cefalorraquídeo.

El FR-Latex Test es una prueba rápida de aglutinación basada en una modificación de la técnica

de Singer1, para la detección directa y la semicuantificación en porta de los factores

reumatoideos (FR) presentes en el suero.

La determinación se efectúa ensayando una suspensión de partículas de látex recubiertos con

gamma globulina humana frente a los sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinación

visible es indicativa de la presencia o ausencia de FR en las muestras ensayadas

COMPOSICION DE LOS REACTIVOSReactivo FR-Latex. Suspensión estabilizada y tamponada de

partículas de látex recubiertas con gamma globulina humana.

Contiene 0,95 g/L de acida sódica.

CONTROL +

Suero humano con una actividad aproximada equivalente a 25

UI/mL. Contiene 0,95 g/L de acida sódica.

CONTROL -

Suero animal con una actividad inferior a 5 UI/mL. Contiene

0,95 g/L de acida sódica.

Precauciones: En la preparación de reactivos de origen humano,

intervienen solamente materiales que, frente a técnicas probadas, han

mostrado su negatividad frente a anticuerpos anti-HIV 1+2, anticuerpos anti-

HCV y HBsAg. Tratarlos, no obstante, como si fueran potencialmente

infecciosos.

Aviso: Los reactivos de este kit contienen acida sódica. Evitar el contacto



con la piel y mucosas.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

Conservar a 2-8ºC. No congelar los componentes del kit ya

que podría verse afectada la funcionalidad del test.

El Reactivo y los Controles son estables hasta la fecha de

caducidad indicada en la etiqueta.

PREPARACION DE LOS REACTIVOS

El Reactivo y los Controles están listos para su uso.

MUESTRAS

Suero claro, reciente.

Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8ºC durante una

semana antes del ensayo, o por un período mayor a –20ºC.

EQUIPO ADICIONAL

Pipetas de volumen variable. Solución salina (NaCl 0,9%, para técnica semi-cuantitativa).Agitador mecánico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.

Cronómetro

TECNICA

Prueba cualitativa

1.Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente (Resuspender el antígeno con suavidad.

2.Aspirar y vaciar varias veces el cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.

3.Depositar 1 gota (50 ìL) de suero problema en uno de los

círculos de la tarjeta visualizadora.

4.En círculos adicionales, depositar 1 gota de control positivo y 1 gota de control negativo.

5.Añadir a cada círculo 1 gota de Reactivo FR-Latex, próxima a la muestra a analizar.

6.Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable,

extendiéndola de forma que cubra por completo la superficie

interior de cada anillo.

7.Emplear palillos distintos para cada mezcla.

8.Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos

9.Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparición de cualquier signo de

aglutinación.

Lectura

Reacción negativa: Suspensión uniforme sin cambio visible

alguno, tal como se presenta en el control negativo.

Reacción positiva: Aglutinación débil o intensa, fácilmentevisible macroscópicamente.

Prueba semi-cuantitativa

1.Para cada muestra a analizar se utilizan 6 círculos de una

tarjeta pipeteando 50 ìL de solución salina (0,9%) en cada uno

de ellos.

2.Pipetear sobre el diluyente del primer círculo 50 ìL de muestra,



y empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y

expulsiones repetidas, transfiriendo 50 ìL de la mezcla

resultante sobre el diluyente del segundo círculo.

3.Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el sexto

círculo, desechando los 50 ìL provenientes del mismo. Las

diluciones finales obtenidas serán: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64.

4.Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en la Prueba cualitativa.

SIGNIFICADO CLINICO

Los factores reumatoideos son un grupo de anticuerpos,

mayoritariamente de la clase IgM, dirigidos contra determinantes

de la porción Fc de la inmunoglobulina IgG del paciente.

Aunquepresentes en diversas enfermedades se hallan elevados

principalmente en pacientes con artritis reumatoidea.

En el diagnóstico clínico, los resultados de la determinación de los

factores reumatoideos deben ser considerados siempre en relación

a los hallazgos clínicos y otras pruebas de laboratorio.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Se han descrito reacciones positivas en condiciones clínicas

distintas a la artritis reumatoidea como la mononucleosis,

hepatitis, sífilis, infecciones diversas y en personas de edad

avanzada. La mayoría de estos casos, cuando se ensayan

cuantitativamente, presentan títulos de FR muy bajos.

Pueden darse reacciones negativas falsas tanto en la fase

temprana como en la fase crónica sub-clínica de la enfermedad.

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