UNIVERSIDAD DE CUENCA
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
ESCUELA DE MEDICINA
INMUNOLOGÍA
DOSIFICACIÓN DEL COMPLEMENTO. IMPORTANCIA EN PATOLOGÍA
AUTOINMUNE
Por: Sofía Jaramillo Q.
OBJETIVOS
GENERALES:
• Identificar la relación de las concentraciones plasmáticas de los componentes del sistema del complemento con patologías de etiología autoinmune.
ESPECÍFICOS:
• Conocer los procesos de evaluación sérica del complemento.
• Vincular su papel en la génesis de diversas patologías.
CONOCIMIENTOS PREVIOS
• Sistema del Complemento: concepto, constituyentes, funciones, importancia.
• Concepto y variedades de inmunocomplejos.• Concepto de Patología Autoinmune.
COMPONENTES
Pp. Vía Clásica y del MAC
Pp. Vía Alternativa (Factores)
Pp. Reguladoras Receptores del Complemento
UTILIDAD MÉDICA
Orientación diagnóstica en procesos mediados por
inmunocomplejos
Valoración de la actividad de enfermedades por inmunocomplejos• ↓Inmunocomplejos=Consumo
del complemento
Déficit en los componentes iniciales de la Vía Clásica (C1, C4, C2) en asociación con
Enfermedades Autoinmunes
Interpretación en el contexto de la situación clínica del pcte.
ÍNDICE CATABÓLICO: 2%
CONSIDERACIONES SOBRE LOS RESULTADOS
• Índice Catabólico: 2%• Algunas de las proteínas que conforman el sistema del
complemento fungen como Reactantes de Fase Aguda. • Función diversa en los diferentes compartimentos
corporales.• ↓ del nivel del complemento avala la sospecha de su
participación en daño tisular, mas no lo prueba.• Nivel normal del complemento no excluye su participación en
injuria tisular. • ↓ de los componentes de una vía hacen presumir que ésta se
encuentra activada y media la agresión (no se requiere conocer los niveles de todos los componentes).
MEDICIÓN DE LOS FACTORES DEL COMPLEMENTO
A. Inmunoquímico(Búsqueda como Ag)
RID Nefelometría Características:
Altamente específicos
Fáciles de realizar (suero
o plasma)
Menor costo y tiempo
No determinan funcionalidad
No detectan niveles bajos (desde 10µg/ml)
Valoración Funcional
Vías
Vía Clásica
Vía Alternativa
Procedimientos:
TEST CH50 (Actividad Hemolítica
Total)
Actividad Funcional Aislada
Productos de Degradación
ELISA(10-20ng/ml)
Ac. Monoclonales
NIVELES DE COMPLEMENTO MEDIANTE ENSAYOS ANTIGÉNICOS: VÍA CLÁSICA Y ALTERNATIVA
• Materiales:– Muestra de suero o plasma a <(-20°C)– Suero proteico estándar (estabiliza)– Equipos de RID
• Procesamiento:– RID:
• Tca. Mancini (exceso de Ac., más exacto)• Tca. Fahey (no exceso de Ac.)
VALORACIÓN FUNCIONAL: VÍA CLÁSICA (CH50) Y ACTIVIDAD AISLADA
• Materiales: – Eritrocitos de oveja (sensibles, Ag. Forssman para Ac. De conejo)– Sol. De Alserver– Buffer (barbital)– Ac. Anti Forssman
• Procesamiento:– Extracción aséptica, solución de Alserver.– Conservación hasta 6 semanas a 4°C.– Centrifugación a 4°C, se descarta sobrenadante y capa leucocitaria.– G. rojos en buffer, se lavan y sensibilizan con Ac.– Disoluciones de suero del pcte.– Unir muestra de EA– Incubar a 37°C durante 1h. Agitando c/15’.– Colocar en hielo + Barbital.– Centrifugar 5’ a 800rpm, sobrenadante medir en espectrofotómetro a 540nm.– Elaborar curva.
VALORACIÓN FUNCIONAL: VÍA ALTERNATIVA (AH50)
• Materiales: – Suero humano (dilución 1:5)– Eritrocitos de conejo (EDTA+iones de Mg+2)
Título (CH50/AH50)= dilución final de suero humano que lisa el 50% de los
eritrocitos de oveja/conejo.
INTERPRETACIÓN
CH50: Determinar ausencia de cualquiera de las partes del complemento, excepto C9.
AH50 ineficiente: ↓ o ausencia de la properdina.
PRUEBA DE FIJACIÓN DEL COMPLEMENTO
• Materiales:– Suero del paciente– Antígeno (soluble o particulado)– EA (eritrocitos de oveja sensibilizados)
• Procesamiento:– Incubación de suero con 3-5 unidades CH50
• Positiva: Fijación (complemento es consumido)
– Agregar EA– Incubación a 37°C por 1h. O toda la noche en frío (títulos mayores)
• Positiva: No lisis• Negativa: Lisis
Capacidad del complemento de interaccionar con los complejos Ag-Ac.
CONDICIONES TÉCNICAS
pH
Temperatura
Tiempo
Ionicidad
Concentración de iones Ca+2 y Mg+2
Fragilidad osmótica de los eritrocitos utilizados
VALORES REFERENCIALESVÍA PROTEÍNA µg/ml
VÍA CLÁSICA
C1qC1rC1sC4C2
80505060020
VÍA ALTERNATIVAFactor BFactor DProperdín
250525
VÍA DE LAS LECTINASMBLC4C2
160020
VÍA COMÚN
C3C5C6C7C8C9
13008075555559
VALORES REFERENCIALES
• Nivel total del complemento en sangre: 41 a 90 unidades hemolíticas (CH50).
• Nivel de C1: 16 a 33 mg/dL.• Niveles de C3:
– hombres: 88 a 252 mg/dL.– mujeres: 88 a 206 mg/dL.
• Niveles de C4: – hombres: 12 a 72 mg/dL.– mujeres: 13 a 75 mg/dL.
ACTIVACIÓN (CONSUMO) PATOLÓGICO DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO
Ac. Anormal Complejo Inmune
Material Extraño
Neoantígeno del Sistema del
Complemento (MAC)
DISMINUCIÓN DEL COMPLEMENTO
PRIMARIA O CONGÉNITA
• LES• Angioedema hereditario• Fiebre mediterránea familiar• Vasculitis por urticaria• GMN• Inmunodeficiencia
combinada grave• Hipogammaglobulinemia
ligada al sexo• Infecciones recurrentes
SECUNDARIA O ADQUIRIDA
• Enfermedades asociadas a Artritis
• Enfermedades asociadas a vasculitis
• Enfermedades asociadas a nefritis
DISMINUCIÓN DEL COMPLEMENTO: PUNTUALIZACIONES
↓C1q: Aclaramiento inadecuado de células apoptósicas
↓C4 o CR1/CR2: Fallo en la selección negativa de LB
↓C3 y C4: LES (monitorización)
PATOLOGÍAS CON VINCULACIÓN DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO
↓ Primaria o Congénita
• LES• Angioedema hereditario• Fiebre mediterránea familiar• Vasculitis por urticaria• GMN• Inmunodeficiencia
combinada grave• Hipogammaglobulinemia
ligada al sexo• Infecciones recurrentes
↓Secundaria o Adquirida
• Enfermedades asociadas a artritis
• Enfermedades asociadas a vasculitis
• Enfermedades asociadas a nefritis
AVERIGUAR:
• ¿Qué es el LES?• ¿Qué otros exámenes de laboratorio ayudan en
su diagnóstico?
BIBLIOGRAFÍA
• Balcells, A.; Soriano, M. La Clínica y el Laboratorio. 9na. Edición. Editorial Marín. Barcelona – España. 1973.
• Henry, B.; et all. Laboratorio en el Diagnóstico Clínico. Editorial Marbán Libros. Madrid – España. 2010.
• Kindt, T.; Goldsby, R.; Osborne, B. Inmunología de Kuby. VI Edición. Editorial Mc Graw-Hill. México D.F.-México. 2007.
• Prieto, J. Yuste, J. La Clínica y El Laboratorio Balcells. 21era. Edición. Editorial Elsevier Masson. Barcelona – España. 2010.
• Regueiro J., López C., González S., Martínez E. Inmunología. IV Edición Revisada. Ed. Médica Panamericana. Madrid - España. 2012.
• Rojas, W., Anaya J., Aristizábal B., Cano L., Gómez L., Lopera D. Inmunología de Rojas. XV Edición. Corporación para las Investigaciones Biológicas. Medellín – Colombia. 2010.
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