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SIGNIFICACION CLINICA
La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina
del organismo casi exclusivamente por ltracin renal. Su
determinacin en suero, as como el clearance de creatini-
na endgena constituyen parmetros importantes para el
diagnstico de diversas afecciones renales. Sin embargo,
debido a los problemas prcticos inherentes a la determi-
nacin del clea-rance (recoleccin de orina en nios, etc.),
la determinacin de creatinina srica es ms utilizada como
ndice de funcionalismo renal.
FUNDAMENTOS DEL METODO
La creatinina reacciona con el picrato alcalino en mediotamponado, previa desproteinizacin con cido pcrico,
obtenindose un cromgeno que se mide a 510 nm.
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A:cido pcrico 41,4 mmol/l.
B. Reactivo B:buffer glicina/NaOH 1 mol/l.
S. Standard:solucin de creatinina 20 mg/l.
REACTIVOS NO PROVISTOS
Agua destilada.
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Reactivos Provistos: listos para usar.
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro".
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de trabajo en el laboratorio de anlisis clnicos.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
acuerdo a la normativa local vigente.
Reactivo B:R36/38: irrita los ojos y la piel. S26/28: en caso
de contacto con los ojos y la piel, lvense inmediatamente y
abundantemente con agua y acdase a un mdico. S37/39:
usar guantes adecuados y proteccin para los ojos/la cara.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTO
Los Reactivos Provistos son estables a temperatura am-
biente hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
MUESTRA
Suero u orina
a) Recoleccin: obtener suero de la manera usual. Puede
emplearse tambin orina de 2 o de 24 horas. Su recolec-
cin debe efectuarse en un recipiente perfectamente limpio
mantenido en refrigerador (2-10oC) durante el tiempo d
recoleccin. Medir la diuresis, tomar una alcuota y efec
una dilucin 1:50 de la misma. En caso de que la diu
sea de 2 horas, multiplicar el volumen medido por 12
calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 ho
b) Aditivos: no se requieren. No se recomienda el us
plasma pues se obtienen resultados menores en un
un 15%.
c) Sustancias interferentes conocidas: hemlisis lige
moderada no interere, pero no debe emplearse sangre
ya que aproximadamente el 60% del material Jaffe-rea
de los eritrocitos no es creatinina.
Referirse a la bibliografa de Young para los efectos ddrogas en el presente mtodo.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento
conveniente utilizar el suero recin obtenido. Si esto n
posible puede mantenerse hasta 24 horas en refriger
(2-10oC) sin variaciones de los resultados.
Orinas destinadas a esta determinacin pueden mante
se hasta 4 das en refrigerador (2-10oC) sin agregad
conservantes.
MATERIAL REQUERIDO(no provisto)
- Espectrofotmetro o fotocolormetro.
- Micropipetas y pipetas para medir los volmenes
cados.- Tubos.
- Reloj o timer.
CONDICIONES DE REACCION
- Longitud de onda: 510 nm en espectrofotmetro o
fotocolormetro con ltro verde (500-540 nm).
- Temperatura de reaccin: temperatura ambiente, qu
debe exceder los lmites de 15 y 30oC.
- Tiempo de reaccin: 35 minutos
- Volumen de muestra: 0,7 ml
- Volumen nal de reaccin: 3,5 ml
PROCEDIMIENTO
En caso de que la muestra a utilizar sea suero, de
efectuarse una desproteinizacin de la siguiente mane
a 0,7 ml de suero agregar 3,5 ml de Reactivo A. Mezc
por inversin. Dejar reposar 10 minutos y centrifuga
3000 r.p.m. durante 5 minutos como mnimo.
En tubos marcados B (Blanco), S (Standard), Ds y
(Desconocidos suero y orina), colocar:
CreatininaMtodo colorimtrico con desproteinizacin pa
determinacin de creatinina en suero u o
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B S Ds D
o
Desproteinizado - - 3 ml -
Standard - 0,5 ml - -
Orina diluida (1:50) - - - 0,5 ml
Agua destilada 1 ml 0,5 ml - 0,5 ml
Reactivo A 2 ml 2 ml - 2 ml
Reactivo B 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml
Mezclar por inversin. Incubar 20 minutos a temperatura
ambiente. Luego leer en espectrofotmetro a 510 nm o
en fotocolormetro con ltro verde (500-540 nm), llevando
a cero el aparato con agua destilada.
MICROTECNICA
Si es necesario usar menos cantidad de muestra y el
aparato de lectura lo permite, pueden desproteinizarse
0,4 ml de suero con 2 ml de Reactivo A separando 1,5 ml de
sobrenadante y adicionando a ste 0,25 ml de Reactivo
B. En ambos casos el Standard y Blanco se procesan
de la forma habitual.
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL
El color de la reaccin es estable durante 10 minutos
por lo que la absorbancia debe ser leda dentro de ese
lapso. El Blanco y el Standard pueden leerse hasta los
60 minutos.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
Corregir las lecturas S y D restndoles el Blanco (B).
1) Creatinina en suero (mg/l) = Dsx f
20 mg/l
f = S
Do
2) Creatinina en orina (g/24 hs) = x V S
siendo:
V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 horas.
La frmula surge de: D
o
Creatinina en orina (g/24 hs) = x 0,020 g/l x50 xV
S
donde:
0,020 g/l = concentracin del Standard
50 = factor de dilucin
3) Depuracin de Creatinina Endgena (D.C.E.):
Creatinina en orina (g/24 hs)D.C.E. ml/min
= x694 ml/min
Creatinina en suero (mg/l)
donde: g/24 hs 1.000 mg x 1.000 ml 1.000.000 ml694 ml/min
= = =
mg/l 1 mg x1.440 min 1.440 min
CONVERSION DE UNIDADES
Creatinina (mg/l) = Creatinina (mg/dl) x 10
Creatinina (umol/l) = Creatinina (mg/dl) x 88,4
METODO DE CONTROL DE CALIDAD
Si la muestra a ensayar es suero, procesar 2 niveles d
material de control de calidad (Standatrol S-E 2 nive
con concentraciones conocidas de creatinina, con c
determinacin. En el caso de muestras de orina, utiliza
control con base de orina.
VALORES DE REFERENCIA
Suero: 8 a 14 mg/l
Orina: 0,9 a 1,5 g/24 horas.
D.C.E.: 80 a 140 ml/min (promedio 125 ml/min)
Estos valores de D.C.E. corresponden a adultos hast
aos.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus pro
valores de referencia.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
- Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA
- En caso de haberse comprobado la presencia de aceto
tato en la muestra, una vez agregado el Reactivo A (y a
de centrifugar en el caso de suero), colocar en bao
agua a ebullicin durante 5 minutos, con lo que se elim
casi totalmente esta interferencia. Enfriar y continuar c
se indica en PROCEDIMIENTO.
- Luego de la desproteinizacin del suero con Reactiv
pueden observarse eventualmente escasas partc
en el sobrenadante, las que no intereren en la reac
- El factor colorimtrico puede utilizarse cuando la reac
se efecta entre 20 y 25oC. De no ser as debe proces
simultneamente un standard con cada lote de dete
naciones. De todos modos la temperatura de reacci
debe exceder los lmites de 15 y 30
o
C.
PERFORMANCE
a) Reproducibilidad:procesando replicados de las mis
muestras en un mismo da se obtuvieron los siguie
resultados:
Nivel D.S. C.V.
7,4 mg/l 0,19 mg/l 2,5 %
14,1 mg/l 0,25 mg/l 1,7 %
b) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 40 mg/l, en c
de que los resultados superen este valor, deber diluirs
solucin coloreada nal 1:2 1:4 con el Blanco de React
repetir la lectura y multiplicar el resultado por la diluefectuada.
c) Recuperacin:agregando cantidades conocida
creatinina a distintos sueros se obtuvo una recupera
entre 96 y 101%.
d) Lmite de deteccin:depende del fotocolormetro
pleado y de la longitud de onda utilizada. En espectrofot
tro con cubetas de caras paralelas de 1 cm de espesor,
un cambio de absorbancia de 0,001 D.O., el mnimo cam
de concentracin detectable ser de 0,09 mg/l.
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Wiener la2000 Rosario - Argen
MWiener Laboratorios S.A.I.C.Riobamba 29442000 - Rosario - Argentinahttp://www.wiener-lab.com.arDir. Tc.: Viviana E. CtolaBioqumicaProducto Autorizado A.N.M.A.T.Disp. N: 252/75 - 1211/00
PRESENTACION
Kit para 220 determinaciones (Cd.1260001).
BIBLIOGRAFIA
- Biggs, H.G. & Cooper, J.M. - Clin. Chem. 7/6:655 (1961).
- Martinek, R.G. - Amer. Med. Technol. 32/6:700 (1970).
- Searcy, R.L. - Diagnostic Biochemistry, Mc. Graw - Hill
Book Co. New York (1969).
- Teger-Nilsson, A.C. - Scand. J. Clin. Lab. Invest. 13:326
(1961).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 4thed., 2001.
SIMBOLOS
Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kit
reactivos para diagnstico de Wiener lab.
CEste producto cumple con los requerimientos prevpor la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitpara el diagnstico "in vitro"
P Representante autorizado en la Comunidad EuropeaV Uso diagnstico "in vitro"
X Contenido suciente para ensayos
H Fecha de caducidad
l Lmite de temperatura (conservar a)
No congelar
F Riesgo biolgico
Volumen despus de la reconstitucin
Contenido
g Nmero de lote
M Elaborado por:
NocivoXn
Corrosivo / Castico
IrritanteXi
i Consultar instrucciones de uso
Calibrador
Controlb
b Control Positivo
c Control Negativo
h Nmero de catlogo
Calibr.
Cont.
UR1
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